蛋白斑点杂交

斑点杂交原理

斑点杂交原理是分子生物学中用于检测DNA、RNA或蛋白质的一种技术。该技术利用了DNA的特异性结合来进行M1细胞的筛选，进而寻找某个特定的蛋白质。下面，我们就来一步步阐述斑点杂交原理。

首先，杂交是让不同的DNA序列相互结合，从而获得对DNA的详细信息。斑点杂交是DNA杂交 实验的一种，它利用基因间lncRNA单核苷酸多态性进行筛选，筛选出含有所需DNA序列的细胞，称为斑点。

其次，斑点杂交首先需要一些基本的杂交技术。将待检测的DNA序列标记上放射性同位素、荧光素等示踪剂。然后将它与不同来源的DNA（如cDNA、RNA等）杂交。这些待测DNA和别的宿主DNA会一起被固定在膜上，形成一个密集的斑点区域，称为DNA杂交酶C（DHFR）'s

R1和R2区域。

然后，进行斑点筛选。接下来在膜上滴上一些含有相同蛋白质的细胞进行杂交。这个过程中，与蛋白质结合的杂交物会被保留下 来，再通过对应的探针来筛选。这就找到了所需要的蛋白质。

最后，进行鉴定。通过斑点上的探测物互相配对得知其配对，就可以识别DNA序列的特点。例如，假设一个蛋白质与该探测物结合，则相应的位置将发光或放射性。通过这种方法，我们可以精确和准确地鉴定出待测DNA种类和数量，并为后续的工作做好准备。

综上所述，斑点杂交原理是在DNA杂交的基础上，利用特异性结合和探测物筛选出需要的DNA序列，并进行鉴定。该技术被广泛应用在基因工程、分子遗传学等领域，对深入理解生物学、解析基因功能等具有重要作用。

黑龙江农业科学２０１５（６）：５～８　Ｈｅｉｌｏｎｇｊ　ｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　嘴　

玉米杂交种一年多点丰产性和稳产性分析　

孙艳杰，南元涛，魏国才，金振国，高　利，石运强，张维耀　

（黑龙江省农业科学院绥化分院，黑龙江绥化１５２Ｏ５２）　

摘要：为筛选出适宜东北区生态条件的广适、高产、稳产玉米新品种，国家玉米产业技术体系在东北不同生态　

区设置４个试验点、５４个参试组合，进行早熟玉米新组合一年多点筛选试验。结果表明：其农艺性状、适应性　

和产量等性状在各试验点均表现优良的组合有赤科９５３、佳试３１２、嫩１０２２、通化１２２、名佳４１７、通化ｌｌ０１、内　

通试２、龙１３１４、中试６ｌ１２、龙５０８共１Ｏ个杂交组合，可进入下年度区组试验，以进一步鉴定玉米新组合的优　

良特性，筛选出抗逆性强，产量潜力高的玉米新品种。　

关键词：品种；丰产・ｆｔ．；极差；变异系数　中图分类号：Ｓ５１３文献标识码：Ａ文章编号：１００２—２７６７（２０１５）０６—０００５—０４　Ｄ（）Ｉ：１Ｏ．１１９４２／ｊ．ｉｓｓｎｌ００２—２７６７．２０１５．０６．０００５　

随着我国种子市场的开放和跨国公司的进　

入，使得国内玉米种子产业生存危机凸显，并在一　

定程度上危及到我国粮食安全。国外选育玉米品　

种的单位主要有美国先锋公司，其品种主要为先　

玉３３５，其单粒播种，节省人力物力财力，后期脱　

水快，在吉林和黑龙江省种植面积不断扩大，但其　

抗大斑病和抗倒能力差，给生产带来极大风险。　

德国ＫｗＳ公司选育的早熟玉米品种多为耐密植　

硬质型，由于德美亚系列品种特有耐密和抗倒适　

合机械化收获等优点，已成为黑龙江省早熟地区　

的主导品种，但在抗叶病性方面表现差，目前早熟　

玉米品种少，且类型单一，也给玉米生产带来潜在　

的危险＿１　］。　

国家玉米产业技术体系东北区根据玉米主产　

区的生态特点和生产需要，联合各试验站和种业　

公司进行优良组合适应性鉴定，通过多种生态条　

中国真菌学杂志２０１１年１０月第６卷第５期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｍｙｃｏｌ，Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１１，Ｖｏｌ　６，Ｎｏ．５　

应用反向线点杂交技术鉴定临床常见　

曲霉属和毛霉目真菌　

赵作涛　李丽丽　王晓阳　万苗　陈伟　李若瑜　

（北京大学第一医院皮肤性病科，北京大学真菌和真菌病研究中心，北京１０００３４）　・２６１・　

・论著・　

【摘要】　目的应用反向线点杂交技术（ｒｅｖｅｒｓｅ　ｌｉｎｅ　ｂｌｏｔ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＲＬＢ）快速鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌。　方法收集我院真菌和真菌病研究中心保存的５种曲霉菌（烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉、构巢曲霉）和７种毛霉目真菌　（冻土毛霉菌、总状毛霉菌、卷枝毛霉菌、少根根霉、小孢根霉、微小根毛霉、伞状犁头霉），共计９８株菌株。利用真菌通用引　物ＩＴＳ１和ＩＴＳ４对菌株进行ＰＣＲ扩增，用１２个真菌种特异性探针与扩增后产物进行反向线点杂交。将ＲＬＢ结果与真菌传　统形态学鉴定结果、ＩＴＳ区ＤＮＡ测序结果进行比较。结果ＲＬＢ可以正确鉴定９８株实验菌株，与形态学方法和ＩＴＳ区测序　方法鉴定结果１００％一致，种特异性探针之间未见交叉杂交，显示出该方法的高度敏感性和特异性。８株阴性对照菌株（白　念珠菌、茄病镰刀菌、尖端赛多孢、马尔尼菲青霉、疣状瓶霉、棒曲霉、日本曲霉以及雅致小克银汉霉），使用ＲＬＢ方法无法鉴　定。通过烟曲霉基因组ＤＮＡ浓度ｌ０倍倍比稀释法验证ＲＬＢ的敏感性为１．８×１０。ｎｇ／　。结论ＲＬＢ技术为实验室早期　快速诊断、鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌提供参考。　【关键词】　曲霉；毛霉；ＰＣＲ；反向线点杂交　【中图分类号】　Ｒ　３７９．６　Ｒ　３７９．９　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１６７３—３８２７（２０１１）０５－０２６１－０６　

Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ａｎｄ　Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｂｙ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｌｉｎｅ　ｂｌｏｔ（ＲＬＢ）　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ａｓｓａｙ　

核酸分子杂交

摘要：核酸分子杂交技术是基因工程中重要的研究手段，是目前生物化学、分子生物学、和细胞生物学研究中应用最广泛的技术之一。也是现阶段定性、定量和定位检测DNA与RNA序列片段必须掌握的基本技术和方法。本文主要介绍了核酸分子的原理，分类以及它的相关应用。

关键词：核酸分子；分类；应用；

1.核酸杂交技术的原理

核酸分子（DNA、RNA）是由许多单核苷酸分子通过3，5磷酸二酯键相互连接所形成的生物大分子。DNA分子双链的形成，DNA的复制，以及RNA的转录等都遵循碱基互补配对原则。DNA是由两条互补配对的单核苷酸链通过氢键连接的双链分子。双链结构的核酸分子在加热、偏碱环境或受尿素、甲酰胺等氢键解离剂的作用，则形成单链分子，称为核酸“变性”。两条单链核甘酸若有同源顺序，则在一定条件下，他们的碱基互补配对，从而形成双链分子，称为核酸“复性”或核酸“杂交”[1]。核酸分子杂交是用核酸分子的变性，复性等理化性质而设计的一种常用技术。通常利用一种顺序已知，并被放射性同位素标记的核酸片段看作为探针，与未知样品的核酸进行分子杂交，如果样品中的核酸与探针有碱基互补顺序就能形成杂交分子。此时标有同位素或生物素的探针则固定在标本上，用放射性自显影法或免疫组化法可显示出探针[2]。

核酸分子杂交可分为液相杂交、固相杂交和原位杂交[3]。

2.固相分子杂交：

将待测的靶核甘酸链预先固定在固体支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，而标记的探针则游离在溶液中，进行杂交反应后，使杂交分子留在支持物上，然后再进行检测和计算。

固相分子杂交又可分为：Southern印迹杂交、Northern印迹杂交、Western印迹杂交、斑点杂交、菌落原位杂交等。

2.1 Southern印迹杂交

1975年建立的一种DNA转移方法。该法利用硝酸纤维素膜(或经特殊处理的滤纸或尼龙膜)具有吸附DNA的功能。首先用酚提法从待检测组织中提取DNA，然后以限制性内切酶消化待测的DNA片段，接着进行琼脂糖凝胶电泳使DNA按分子量大小分离，电泳完毕后，将凝胶放入碱性溶液中使DNA变性，解离为两条单链。再在凝胶上贴上硝酸纤维素膜，使凝胶上的单链DNA区带按原来的位置吸印到膜上。然后直接在膜上进行核酸探针（已被同位素标记）与被测样品之间的杂交，再通过放射自显影对杂交结果进行检测[4]。