蛋白质的沉淀和变性实验.

实验五蛋白质的沉淀和变性实验一、实验目的1.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。

2.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。

3.了解蛋白质变性与沉淀的关系。

二、实验原理在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。

蛋白质的沉淀反应可分为两类。

1.可逆的沉淀反应。

此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解在原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。

如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。

提纯蛋白质时，常利用此类反应。

2.不可逆沉淀反应。

此时蛋白质分子内部结构发生大改变，蛋白质常因变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。

如加热引起的蛋白质沉淀于凝固，蛋白质于重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类反应。

蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷）并不析出。

因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。

三、实验材料、器材与试剂1. 材料鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清：水=1：9）。

2. 器材（1）试管及试管架；（2）吸量管；（3）滴灌；（4）小烧杯；（5）容量瓶。

3. 试剂（1）3%硝酸银溶液；（2）5%三氯乙酸溶液（3）95%乙醇；（4）饱和硫酸铵溶液；（5）硫酸铵结晶粉末。

四、实验方法1.蛋白质的盐析中性无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。

盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。

如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。

由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析是可逆的过程。

加蛋清溶液5mL于试管中，再加入等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。

倒出少量浑浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。

蛋白质沉淀反应实验集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-蛋白质的沉淀反应一、目的和要求1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识2、掌握几种沉淀蛋白质的方法3、了解蛋白质变性与沉淀的关系二、沉淀反应（一）原理在水溶液中，蛋白质分子的表面上由于有水化层和同性电荷的作用，所以成为稳定的胶体颗粒。

但这种稳定的状态是有条件的。

在某些理化因素的作用下，蛋白质分子表面带电性质发生变化、脱水甚至变性，则会以固态形式从溶液中析出，这个过程就称为蛋白质的沉淀反应。

蛋白质的沉淀反应可分为以下两种类型：1、可逆沉淀反应沉淀反应发生后，蛋白质分子内部结构并没有发生大的或者显着变化。

在沉淀因素去除后，又可恢复其亲水性，这种沉淀反应就是可逆沉淀反应，也叫做不变性沉淀反应。

属于这类沉淀反应的有盐析作用、等电点沉淀以及在低温下短时间的有机溶剂沉淀法等。

2、不可逆沉淀反应蛋白质在沉淀的同时，其空间结构发生大的改变，许多副键发生断裂，即使除去沉淀因素，蛋白质也不会恢复其亲水性，并丧失生物活性，这种沉淀反应就是不可逆沉淀反应。

重金属盐、生物碱试剂、强酸、强碱、加热、强烈震荡、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。

（二）盐析1、材料与试剂（1）10%的卵清蛋白溶液（要求新鲜配制）、浓蛋白溶液（2）饱和硫酸铵溶液（3）固体硫酸铵（4）滤纸、玻棒2、操作方法（1）取试管一支，加入浓蛋白溶液2ml，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置10分钟将出现沉淀。

此沉淀物为球蛋白。

（2）取上清液于另一支试管。

（3）向上清液液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻棒搅拌，直至粉末不再溶解为止。

静置数分钟后，沉淀析出的是清蛋白。

（4）向两支试管中分别加水，观察其沉淀是否溶解。

（三）重金属盐沉淀重金属离子如Pb2+、Cu2+、Hg2+、Ag2+等可与蛋白质分子上的羟基结合生成不溶性金属盐而沉淀：重金属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全，特别是在碱金属盐类存在时。

实验一蛋白质的沉淀及变性发布时间：2010-12-23 浏览次数：850一、实验目的1．熟悉蛋白质的沉淀反应。

2．进一步掌握蛋白质的有关性质。

二、实验原理蛋白质因受某些物理或化学因素的影响，分子的空间构象被破坏，从而导致其理化性质发生改变并失去原有的生物学活性的现象称为蛋白质的变性作用。

变性作用并不引起蛋白质一级结构的破坏，而是二级结构以上的高级结构的破坏，变性后的蛋白质称为变性蛋白。

引起蛋白质变性的因素很多，物理因素有高温、紫外线、X-射线、超声波、高压、剧烈的搅拌、震荡等。

化学因素有强酸、强碱、尿素、胍盐、去污剂、重金属盐（如Hg2+、Ag+、Pb2+等）三氯乙酸，浓乙醇等。

不同蛋白质对各种因素的敏感程度不同。

用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。

蛋白质是亲水胶体，在高浓度的中性盐影响下脱去水化层，同时，蛋白质分子所带的电荷被中和，结果蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀析出。

经透析或用水稀释时又可溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。

盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及pH 有关。

分子量大的蛋白质(如球蛋白)比分子量小的(如白蛋白)易于析出。

改变盐浓度，使不同分子量的蛋白质分别析出。

三、实验材料1．新鲜蛋清或血清，蛋白质溶液。

2．固体硫酸铵及饱和硫酸铵溶液。

3．95％乙醇，1％CuSO4，饱和苦味酸，0.1mol/LHAC，NaCl,4．试管，三角漏斗、玻棒，滤纸，试管架酒精灯，移液管。

四、操作方法1．卵清蛋白的分离(1)、取卵清约2 ml于试管中，加等体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀，蛋白质析出，静置，用滤纸过滤致滤液澄清，沉淀为卵球蛋白，将此沉淀用2 ml半饱和硫酸铵洗涤一次。

(2)、将析出卵清球蛋白后的滤液放人试管中，再加人固体硫酸铵使之达饱和，观察有无沉淀产生，若有沉淀，则过滤之，滤出的沉淀却为卵清白蛋白。

2．乙醇沉淀蛋白质（乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质的水化层而使其沉淀析出）。

蛋白质的沉淀反应实验报告
实验目的，通过对蛋白质的沉淀反应进行实验，掌握蛋白质的沉淀方法和技巧，了解蛋白质的性质和特点。

实验原理，蛋白质的沉淀反应是利用蛋白质与醋酸和酒精混合后在酸性条件下
沉淀出来的特性进行实验。

醋酸和酒精可以使蛋白质变性并沉淀出来，酸性条件有利于蛋白质的沉淀。

实验步骤：
1. 取少量蛋白质溶液放入试管中；
2. 加入少量醋酸，并充分混合；
3. 加入适量酒精，再次充分混合；
4. 观察蛋白质的沉淀情况。

实验结果，经过以上步骤，观察到蛋白质在酸性条件下与醋酸和酒精混合后发
生了沉淀反应，沉淀物呈现白色。

实验分析，蛋白质的沉淀反应是由于醋酸和酒精的作用下，蛋白质发生变性并
沉淀出来。

酸性条件有利于蛋白质的沉淀，而酒精可以加速蛋白质的沉淀过程。

因此，通过本实验可以初步了解蛋白质的性质和特点。

实验结论，蛋白质的沉淀反应是一种常见的实验方法，通过本实验可以掌握蛋
白质的沉淀技巧，并了解蛋白质的性质和特点。

在实际应用中，蛋白质的沉淀反应可以用于蛋白质的提取和分离，具有一定的应用价值。

实验注意事项：
1. 实验操作要注意安全，避免醋酸和酒精的接触；
2. 实验过程中要注意观察蛋白质的沉淀情况，及时记录实验结果；
3. 实验结束后要及时清理实验器材，保持实验环境整洁。

通过本实验，我对蛋白质的沉淀反应有了更深入的了解，掌握了蛋白质的沉淀
方法和技巧，对蛋白质的性质和特点有了更清晰的认识。

希望通过今后的实验实践，能够进一步提高自己的实验技能，为科学研究和实际应用做出更多的贡献。

蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质是生物体内非常重要的一类有机化合物，它们在细胞的结构、功能和代谢中发挥着关键的作用。

为了研究蛋白质的性质和功能，科学家们经常进行各种实验。

本实验旨在探究蛋白质的沉淀与变性过程。

实验首先进行的是蛋白质的沉淀实验。

我们选取了鸡蛋清作为实验样品，因为鸡蛋清中含有丰富的蛋白质。

我们将鸡蛋清倒入试管中，并加入适量的乙醇。

乙醇可以与蛋白质发生相互作用，使其沉淀下来。

实验中我们使用了不同浓度的乙醇溶液，观察其对蛋白质沉淀的影响。

实验结果显示，随着乙醇浓度的增加，蛋白质的沉淀量逐渐增加。

这是因为乙醇能够与蛋白质中的水分子发生氢键作用，导致蛋白质分子间的相互作用力增强，从而使蛋白质变得不溶于水而沉淀下来。

当乙醇浓度达到一定程度时，蛋白质的沉淀量达到最大值，此后再增加乙醇浓度并不会引起更多的蛋白质沉淀。

这是因为乙醇的浓度过高会导致蛋白质分子间的相互作用力过强，使其聚集成大块而不是沉淀下来。

在进行蛋白质的变性实验时，我们选取了鸡蛋清中的卵清蛋白作为实验样品。

卵清蛋白是一种具有稳定的三维结构的蛋白质，通过变性处理可以使其失去原有的结构和功能。

我们采用了两种方法对卵清蛋白进行变性处理：热变性和酸变性。

首先进行的是热变性实验。

我们将卵清蛋白溶液加热至80摄氏度，并保持一段时间。

实验结果显示，随着加热时间的增加，卵清蛋白的结构逐渐破坏，失去了原有的透明度，变得浑浊。

这是因为高温可以破坏蛋白质分子内部的氢键、疏水作用力和范德华力等相互作用，使蛋白质分子失去稳定的三维结构。

接下来进行的是酸变性实验。

我们将卵清蛋白溶液加入适量的盐酸，使其呈酸性。

实验结果显示，随着酸性溶液的加入，卵清蛋白的结构发生了明显的改变，透明的溶液变得浑浊。

这是因为酸性条件下，蛋白质分子中的氨基酸残基带正电荷，导致蛋白质分子间的相互排斥增强，结构发生变化。

通过这两个实验，我们可以看到蛋白质在不同条件下的沉淀和变性过程。

蛋白质的沉淀与变性实验报告一、实验目的1、掌握蛋白质沉淀和变性的原理及方法。

2、观察蛋白质沉淀和变性的现象，区分二者的不同。

3、了解影响蛋白质沉淀和变性的因素。

二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物，其分子表面带有许多可解离的基团，如氨基、羧基等，在一定的溶液 pH 值条件下，这些基团会解离而使蛋白质带电。

此外，蛋白质分子还具有亲水基团，能够与水分子形成氢键，从而使其溶解于水溶液中。

当溶液的条件发生改变时，如加入某些试剂、改变溶液的 pH 值、温度等，蛋白质的性质会发生改变，可能会出现沉淀或变性的现象。

蛋白质沉淀是指蛋白质分子从溶液中析出的过程，其原因可能是由于蛋白质分子表面电荷被中和、水化膜被破坏等。

蛋白质沉淀后，如果去除引起沉淀的因素，蛋白质可以重新溶解，恢复其原有的性质。

蛋白质变性是指蛋白质在某些物理或化学因素的作用下，其空间结构被破坏，从而导致其生物活性丧失的现象。

蛋白质变性后，通常不能再恢复其原有的结构和功能。

三、实验材料与仪器1、材料鸡蛋清溶液牛奶饱和硫酸铵溶液乙醇硝酸银溶液硫酸铜溶液氢氧化钠溶液盐酸溶液乙酸铅溶液2、仪器试管滴管玻璃棒酒精灯恒温水浴锅四、实验步骤（一）蛋白质的沉淀实验1、盐析沉淀取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。

向其中一支试管中逐滴加入饱和硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀。

静置一段时间，观察沉淀现象。

2、有机溶剂沉淀取两支试管，分别加入 2ml 牛奶。

向其中一支试管中逐滴加入乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀。

静置一段时间，观察沉淀现象。

3、重金属盐沉淀取三支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。

向第一支试管中滴加几滴硝酸银溶液，向第二支试管中滴加几滴硫酸铜溶液，向第三支试管中滴加几滴乙酸铅溶液。

观察沉淀现象。

4、生物碱试剂沉淀取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。

向其中一支试管中滴加几滴氢氧化钠溶液，向另一支试管中滴加几滴盐酸溶液。

观察沉淀现象。

一、实验目的1. 掌握蛋白质沉淀的基本原理和实验方法。

2. 了解不同沉淀剂对蛋白质沉淀效果的影响。

3. 探究蛋白质沉淀的最佳条件。

二、实验原理蛋白质在特定条件下，如pH、温度、离子强度等，会发生沉淀现象。

蛋白质沉淀的原理主要有以下几种：1. 盐析：中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。

2. 等电点沉淀：蛋白质在等电点时溶解度最低，此时加入少量电解质即可使蛋白质沉淀。

3. 重金属盐沉淀：重金属离子与蛋白质中的巯基、羧基等官能团结合，使蛋白质变性沉淀。

4. 酶促反应：某些酶可以催化蛋白质变性，使其沉淀。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、硫酸铵、氯化钠、硝酸银、氢氧化钠、盐酸、氢氧化铵、蒸馏水等。

2. 实验仪器：离心机、烧杯、玻璃棒、移液器、pH计、电子天平等。

四、实验方法1. 盐析实验：将鸡蛋清溶液与不同浓度的硫酸铵溶液混合，观察蛋白质沉淀现象。

2. 等电点沉淀实验：将鸡蛋清溶液调至不同pH值，观察蛋白质沉淀现象。

3. 重金属盐沉淀实验：将鸡蛋清溶液与不同浓度的硝酸银溶液混合，观察蛋白质沉淀现象。

4. 酶促反应实验：将鸡蛋清溶液与不同浓度的氢氧化钠溶液混合，观察蛋白质沉淀现象。

五、实验结果与分析1. 盐析实验：随着硫酸铵浓度的升高，蛋白质沉淀现象逐渐明显。

当硫酸铵浓度达到0.8 mol/L时，蛋白质基本完全沉淀。

2. 等电点沉淀实验：当鸡蛋清溶液的pH值为4.7时，蛋白质沉淀现象最为明显。

3. 重金属盐沉淀实验：随着硝酸银浓度的升高，蛋白质沉淀现象逐渐明显。

当硝酸银浓度达到0.1 mol/L时，蛋白质基本完全沉淀。

4. 酶促反应实验：随着氢氧化钠浓度的升高，蛋白质沉淀现象逐渐明显。

当氢氧化钠浓度达到0.5 mol/L时，蛋白质基本完全沉淀。

六、实验结论1. 盐析是蛋白质沉淀的有效方法，随着盐浓度的升高，蛋白质沉淀效果逐渐增强。