培养基配制和灭菌方法验证(DOC)

培养基的配制及灭菌一．实验目的1.三角瓶，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒等仪器的清洗。

2.三角瓶棉塞的制作，三角瓶，吸管，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒的包装与灭菌。

3.高温蒸汽灭菌原理的学习。

4.LB和MacConkey培养基的制作与灭菌。

二．实验原理1.高温灭菌的原理：由于培养基配置过程中并非是无菌操作，所以要通过立即灭菌来防止配制过程中混入的杂菌利用培养基中的营养物质进行繁殖从而破坏培养基的性能。

高压蒸汽灭菌是生物试验应用最广，效果最好的一种湿热灭菌法。

在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。

在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。

在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

注意：①使用高压蒸汽灭菌前一定要完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。

否则在同一压力下，锅内实际温度和理想温度就会有差距，不能达到最好灭菌效果。

②在使用灭菌锅前切勿忘记加水，水加至与三角搁架相平，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。

③使用完后要等到压力降为零再打开锅盖，否则会因为锅内外压力不平衡而导致棉塞蹦出造成污染，也容易伤害到操作者。

2.培养基的配置原理：微生物的生长依赖于可利用的营养物质和适宜的生长环境。

培养基是用于培养，转移，贮存微生物的固体，半固体或液体的营养物质。

培养基中含有微生物所需的全部营养物质，包括碳源、氮源、能源、无机盐、水分和生长因子。

适宜的pH对微生物的生长是必不可少的。

培养基的物理状态有三种：液体、半固体和固体。

这些培养基的主要区别是在固体和半固体培养基里面加了固化剂------琼脂。

当将琼脂加入溶液中时，在98℃能融化成有一定粘性的液体。

并在42℃凝固。

琼脂具有的特性有：不易被微生物降解；接近无色等。

对于固体培养基需要加入琼脂量约为 1.4%~1.6%，半固体培养基加入约0.6%~0.8%。

培养基在配制过程中容易受到污染，因此必须进行灭菌，同时不能将培养基中的营养物质破坏。

实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。

4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。

二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。

培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。

为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。

基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。

在配制母液时应注意防止沉淀产生。

绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。

各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。

通常使用的浓度单位是mg/L。

配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。

灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。

培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。

培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。

灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。

（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

实验一培养基的配制与灭菌一、目的掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。

二、方法步骤1、母液配制一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液，使用时按比例稀释即可。

配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中，定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用。

2、植物激素配制植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液，贮存在2～4℃下备用。

由于多数激素难溶于水，所以配制时应按下面步骤进行：IAA：先用少量95%乙醇使之充分溶解，再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。

NAA：可溶于热水中，也可采用与IAA同样的方法配制。

2,4-D：先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解，然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。

细胞分裂素类：KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸，应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。

赤霉素：赤霉素的水溶液稳定性较差，一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存，使用时再稀释。

3、培养基配制按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中，再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化。

用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8，以0.6%—0.8%的比例加入琼脂，并搅拌加热使琼脂完全溶化，用蒸馏水定容至终体积，混合均匀后分装于培养器皿中，然后进行高压灭菌。

4、培养基灭菌分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.105MPa，灭菌时间与培养基容量的关系如下表所示。

培养基体积与灭菌时间的关系三、结果与分析1、培养基的母液配制情况。

2、培养基配制时的注意事项。

四、提交实验报告附：MS培养基配方。

竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。

2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。

三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。

（2）n源：包括无机氮和有机氮。

（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。

微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。

有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。

2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。

培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。

3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。

（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。

若是含糖培养基，110℃、30min。

（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。

因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。

（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。

（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。

除病菌需更小。

五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。

培养基的配制与灭菌实验报告一、实验目的1、掌握培养基的配制方法和原理。

2、学习并掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法和操作要点。

3、了解灭菌在微生物实验中的重要性。

二、实验原理（一）培养基的配制培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。

不同的微生物对营养物质的需求不同，因此需要根据培养的微生物种类和实验目的来选择合适的培养基配方。

培养基通常包含碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等成分。

在配制培养基时，需要按照一定的比例准确称量各种成分，并将其溶解在水中，调节 pH 值至合适范围，最后定容至所需体积。

（二）灭菌灭菌是指杀灭或去除物体上所有微生物（包括芽孢和孢子）的方法。

在微生物实验中，为了防止杂菌污染，必须对培养基、实验器具等进行灭菌处理。

高压蒸汽灭菌是一种常用的灭菌方法，其原理是利用高温高压使微生物的蛋白质和核酸变性失活，从而达到灭菌的目的。

一般在 121℃、1034 kPa 的条件下灭菌 15 20 分钟，可以杀灭包括芽孢在内的所有微生物。

三、实验材料和仪器1、材料牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、NaOH 溶液、HCl 溶液、蒸馏水等。

2、仪器电子天平、药匙、玻璃棒、烧杯、量筒、pH 试纸、三角瓶、移液管、高压蒸汽灭菌锅、培养皿等。

四、实验步骤（一）培养基的配制1、计算根据培养基配方，计算所需各种成分的用量。

例如，配制 1000 mL 牛肉膏蛋白胨培养基，需要牛肉膏 3 g、蛋白胨 10 g、氯化钠 5 g、琼脂 15 20 g。

2、称量用电子天平准确称量各种成分。

先称取琼脂，放入三角瓶中，然后分别称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，放入另一个烧杯中。

3、溶解在烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使各种成分溶解。

将溶解后的溶液倒入三角瓶中，用少量蒸馏水冲洗烧杯，冲洗液也倒入三角瓶中。

4、调节 pH 值用 pH 试纸测定培养基的初始 pH 值，然后用 1 mol/L 的 NaOH 溶液或 1 mol/L 的 HCl 溶液调节 pH 值至 72 74。

培养基的配制与灭菌实验报告培养基的配制与灭菌实验报告引言：细菌培养是微生物学实验中常见的一项技术，而培养基的配制和灭菌则是细菌培养的基础。

本实验旨在探究培养基的配制方法和灭菌技术对细菌培养的影响，为后续的微生物实验打下坚实的基础。

一、培养基的配制培养基是细菌生长和繁殖所需的营养物质，其配制需要考虑细菌的营养需求和生长环境。

本实验选取了常用的液体培养基和固体培养基进行配制。

1. 液体培养基的配制液体培养基的配制相对简单，主要包括基础成分和营养物质的添加。

首先，按照配方中的要求称取所需的基础成分，如蛋白胨、肉汤等。

然后，将基础成分溶解在适量的蒸馏水中，加热至沸腾，搅拌均匀。

待溶液冷却至室温后，再添加适量的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等。

最后，用蒸馏水将溶液稀释至所需的体积，调节pH值至适宜范围。

2. 固体培养基的配制固体培养基的配制相对复杂，需要考虑到培养基的凝固和固化。

首先，按照液体培养基的配制方法，将基础成分和营养物质溶解在蒸馏水中。

然后，将溶液加热至沸腾，搅拌均匀。

接着，将溶液倒入试管或培养皿中，待溶液冷却至40-50℃时，添加适量的琼脂或琼脂糖，充分搅拌均匀。

最后，将试管或培养皿密封，放置于室温下，待培养基凝固后，进行灭菌处理。

二、灭菌实验灭菌是为了避免培养基受到外界细菌污染，保证实验的准确性和可靠性。

常用的灭菌方法包括高温灭菌、滤过灭菌和化学灭菌。

1. 高温灭菌高温灭菌是最常见的灭菌方法之一，通过加热培养基使其中的细菌被杀灭。

将配制好的培养基装入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高压锅或高温灭菌器中。

加热至121℃，保持15-20分钟，使培养基充分灭菌。

待培养基冷却后，即可进行细菌接种。

2. 滤过灭菌滤过灭菌是一种物理灭菌方法，通过滤器将培养基中的细菌过滤掉。

将配制好的培养基装入滤器中，选择合适的孔径和材质的滤膜。

然后，将滤器连接到真空泵或压力泵上，启动泵进行过滤。

待培养基完全通过滤器后，即可得到无菌的培养基。

培养基的制备与灭菌实验报告一、引言在微生物学研究中，培养基的制备与灭菌是非常重要的步骤。

培养基是供养微生物生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了消除其中的有害微生物，保证培养基的纯净度。

本实验旨在探讨培养基的制备与灭菌的方法与步骤，以及其对微生物培养的影响。

二、培养基的制备2.1 选择培养基成分培养基的成分根据所需培养的微生物种类和目的而定，常见的成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。

在制备培养基之前，需要明确所需微生物的营养需求，选择合适的成分。

2.2 配制培养基根据所选的成分和配方，按照一定比例将各种成分溶解在适当的溶剂中，常见的溶剂包括蒸馏水和生理盐水。

注意溶解顺序和温度，保证各种成分充分溶解。

2.3 调节pH值微生物对pH值的要求各不相同，因此在制备培养基时需要调节pH值。

使用酸碱溶液逐滴加入培养基中，同时使用pH试纸或pH计检测pH值，直到达到所需的范围。

2.4 灭菌前的处理在灭菌之前，需要对培养基进行一些处理，包括过滤、加热和冷却等。

过滤可以去除其中的固体杂质和大颗粒微生物。

加热可以杀灭其中的有害微生物，常用的方法包括高温灭菌和压力灭菌。

冷却后的培养基可以用于微生物的培养。

三、灭菌实验3.1 高温灭菌高温灭菌是常用的灭菌方法之一，其原理是利用高温杀灭微生物。

将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高温灭菌器中。

设置合适的温度和时间，一般为121℃，15-20分钟。

高温灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。

3.2 压力灭菌压力灭菌是一种利用高温和高压杀灭微生物的方法。

将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入压力灭菌器中。

设置合适的温度和压力，一般为121℃，15-20分钟。

压力灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。

3.3 灭菌效果验证灭菌后的培养基需要进行灭菌效果验证，以确保其中没有活菌存在。

常用的方法包括接种试验和平板计数法。

接种试验是将灭菌后的培养基接种到无菌平板上，观察是否有菌落生长。

★★★★★实验二植物组织培养培养基的配制与灭菌一、实验目的1.培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。

植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。

2.学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。

二、实验用具和药品1. 实验用具：电子天平（1/10、1/1000）、烧杯（100ml、1000ml）、量筒（50ml、100ml）三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。

2. 药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、 0.1mol/L HCl、各种培养基母液、激素母液三、实验内容与步骤（一）分组配制培养基。

各类培养基组成如下：1. 水琼培养基。

2. MS0培养基。

3. 1/2MS培养基。

4. MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。

5. MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L。

6. MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 2.0mg/L。

7. MS+KT 0.5mg/L+6-BA0.5mg/L。

8. MS+NAA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L。

（二）湿热灭菌培养基1.称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。

2.根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。

3.用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。

4.分装培养基，包好或盖好，标明编号。

5.121℃(103kPa)灭菌15-20min。

（三）作好植物组织培养的各项准备工作1. 制备无菌水：121℃(103kPa)灭菌40min 。

2. 配制 0.1%HgCl2溶液（放置棕色瓶中）。

3. 准备接种用培养皿、金属器械等用具。

四、注意事项1. 实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。

2. 用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。

实验五培养基的制作及灭菌实验目的：1.学习培养基的制作方法。

2.掌握培养基的灭菌技术。

实验步骤：1.准备所需材料和设备，包括琼脂、蒸馏水、酵母粉、葡萄糖、盐以及烧杯、量筒、试管等。

2.称取所需的琼脂，按照所需制作的培养基的浓度要求，将琼脂加入一个烧杯中。

3.加入适量的蒸馏水，并用玻璃转子搅拌均匀，直到琼脂完全溶解。

4.将琼脂溶液转移到一个大容器中，继续搅拌一段时间，以使溶液均匀充分。

5.在此过程中，可以将所需添加的其他成分进行称量，如酵母粉、葡萄糖和盐。

根据配方要求逐一加入琼脂溶液中。

6.继续用玻璃转子搅拌溶液，直到所有成分完全溶解。

7.将培养基溶液倒入装有文化管的试管中，每个试管约装满一半。

8.置于培养基外表面有菌或细菌孢子的地方，将试管口用针灼烧，使培养基杀菌。

9.将装有培养基溶液的试管加入至高温高压灭菌锅中，进行高温高压灭菌。

10.灭菌完成后，将试管从高温高压灭菌锅中取出，放置在室温下冷却。

11.等试管冷却至室温后，将试管翻转，使培养基均匀附着在试管内壁。

实验结果：制作好的培养基溶液应呈均匀透明的状态，无沉淀物和杂质。

实验注意事项：1.在称取琼脂时要小心，避免粉尘飞扬和吸入。

2.加入蒸馏水时要慢慢倒入，避免烧伤。

3.加入其他成分时要保持适当的温度，避免成分无法溶解。

4.灭菌时应注意安全，避免受烫伤。

5.使用高温高压灭菌锅时要严格按照使用说明操作，避免安全事故发生。

实验讨论：在制作培养基的过程中，要严格控制各种成分的比例，以确保培养基的浓度和配比符合要求。

另外，灭菌步骤也是非常重要的，只有有效灭菌才能确保培养基无菌。

培养基的制作与灭菌是微生物学实验中常用的操作，它是为了提供细胞生长所必需的营养物质和环境，并排除外界的其他微生物干扰。

通过制作培养基，可以为后续的微生物培养提供基础设施，为微生物的生物学研究提供必要的条件。

总结：本实验主要介绍了培养基的制作方法和灭菌技术。

通过制作培养基和灭菌步骤，可以为后续的微生物培养提供必要的条件，确保培养基无菌和符合要求。

培养基的配制与灭菌实验报告一、实验目的1.掌握培养基的配制方法；2.掌握培养基的灭菌方法；3.了解常用的培养基配方和用途。

二、实验仪器和试剂仪器：称量器、自动调pH计、恒温培养箱、高压灭菌器等。

试剂：各种常用的培养基配方、蒸馏水、紫外灯、酒精等。

三、实验步骤1.准备工作首先准备好需要的试剂和仪器，经过试剂和仪器的消毒处理后，将其放置在试验台上，以备使用。

2.培养基的配制培养基的配制是实验的关键步骤之一。

在实验过程中，我们使用锥形试管来制备试验的培养基。

首先需要称量出所需的重量并将其加到试管中，之后按照规定的比例加入蒸馏水、糖和其他的试剂，搅拌均匀。

最后使用自动调pH计来调节培养基的pH，确保在制备培养基过程中能够准确地保持pH值在标准范围内。

3.培养基的灭菌在实验中，我们使用高压灭菌器对制备好的培养基进行灭菌处理，以确保在培养试验过程中，培养基中不会出现杂菌和异物的干扰。

在灭菌过程中，我们需要将培养基放入高压灭菌器中，通过高压和高温来杀死细菌和其他微生物。

同时，也需要不断监测培养基的温度和压力，确保灭菌过程的正常进行。

四、实验结果根据实验的结果可以发现，在正确地配制和灭菌培养基的情况下，我们可以得到符合规定标准的培养基样品。

通过实验，我们也可以更加深入地理解常见的培养基配方和用途，为今后的实验研究提供更加可靠和高质量的实验基础。

五、实验思考在实验过程中，我们还需要注意以下几个问题：1.实验时需要仔细操作，避免粗心大意和疏忽带来的不好的影响。

2.在配制和灭菌时，需要严格遵守规定的操作流程和步骤，以免影响前后实验结果的统一性和准确性。

3.值得注意的是，在配制和灭菌过程中，需要注意卫生和消毒处理，以避免细菌和其他微生物的污染和繁殖。

4.在实验过程中，还需要对实验结果进行仔细的分析和讲解，以便更好的理解和掌握实验原理和方法。

综上所述，在实验培养基的配制和灭菌实验中，需要做好多方面的考虑和准备，以确保实验能够顺利进行，并能获得稳定、高质量和高准确度的结果。