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急性淋巴细胞白血病流式免疫分型探讨

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在现实社会中，注意问题比文化素质低更为严重，

ADHD大约有50%~80%病例可一直持续到青春期，有

30%~50%ADHD病例可持续到成人期，因此，人们认识

到ADHD不仅仅是一种儿童障碍，也是一种成人障碍，它

可以使人致残。

从临床表现分析，ADHD在儿童期表现为以多动常

见，而在青少年期表现为叛逆性常见。在成人期多动行

为可能减少而注意力问题表现更为突出。注意缺陷会造

成学习困难，将直接影响成年后的就业问题。

ADHD如不治疗，可持续到成人期，其后果十分严

重，可发展为人格障碍，其表现为冲动、反社会行为、偷窃

行为、说谎行为、物质滥用等成瘾行为危害性更大，而治

疗十分困难，它将给家族和社会带来极大的危害性，必须引起精神卫生工作者的重视。因而必须及早对儿童进行

矫正治疗，培养儿童健全的人格，使他们成为国家建设的

合格人材。

参考文献

1王惠梅，张惠清，梁英仪，等.太原市儿童注意多动障碍流行病学调查.中国心理卫生杂志，1997，11（1）：472汪向东，王希林，马弘.心理卫生评定量表手册.北京：中国心理卫生杂志社，1999.553张静萍，于爱萍.合肥市6~11岁儿童多动症患病情况调查.预防医学文献信息，2000，6（4）：3094李元真，景梅菊，赵东霞，等.山西省6~12岁小学生“儿童多动症”患病率调查.中华心身医学杂志，2002，2（2）：905王丽敏，应长青，李德安，等.哈尔滨动力区7~10岁儿童多动症流行病学调查.中国行为医学科学，1997，6（4）：284（收稿日期：2002-09-06）

急性淋巴细胞白血病流式免疫分型探讨

吴铭孙雄飞陈晓琳

暨南大学医学院第二附属医院，广东省深圳市人民医院血液科（518020）

【摘要】目的对28例急性淋巴细胞白血病（ALL）进行流式免疫分型研究，探讨CD19，CyCD79a，CD7，CyCD3等白

细胞分化抗原在急性淋巴细胞白血病临床免疫分型中的意义。方法应用双色流式细胞术，对28例经细胞形态学、细

胞组织化学和临床表现确诊的急性淋巴细胞白血病患者初诊骨髓或静脉血标本进行免疫分型，采用CD45/SSC设门，

MPO以阳性细胞数!3%为该表型表达阳性，其他白细胞分化抗原以阳性细胞数!20%为该表型表达阳性。结果14

例B细胞系列急性淋巴细胞白血病（B-ALL）高敏感性和高特异性抗原分别为CD19（100%）和CyCD79a（93%）；14例T

细胞系列急性淋巴细胞白血病（T-ALL）高敏感性和高特异性抗原分别为CD7（100%）和CyCD3（100%）；CD10，CD34，

HLA-DR，CD38等非系列相关性早期分化抗原在急性淋巴细胞白血病均有较高的表达频率。结论在ALL已经明确

的情况下，CD19和CD79a是确定B-ALL最重要的单抗；CyCD22是B系列最特异性单抗，但敏感性过低；CD7和CyCD3

是确定T-ALL最重要的单抗。

【关键词】免疫分型双色流式细胞术白血病，淋巴细胞，急性

急性淋巴细胞白血病（ALL）免疫分型可以判定白血

病细胞的系列来源及所处的分化阶段，对白血病的诊断、

治疗方案的选择、预后的判断都有重要意义。近年来，流

式细胞仪（FCM）为白血病的分型开辟了一条新途径，尤

其是FCM具有灵敏度高、信息量大等特点，能更快速、更

准确地反映白血病细胞的来源和生物学特性。为进一步

提高白血病的免疫分型诊断、指导治疗和判断预后的水

平，我们对28例急性淋巴细胞白血病流式细胞免疫表型

特点进行研究，现报告如下。

1资料与方法

1.1病例来源28例初诊患者均经骨髓涂片、细胞组织

化学染色及临床表现确诊为ALL，分类按FAB诊断标准，

所有病例的细胞化学过氧化酶染色（POX）均阴性。其中

B细胞系列ALL（B-ALL）14例，T细胞系列ALL

（T-ALL）14例；男18例，女10例；年龄0.6~76岁，中位

年龄22岁。

1.2标本采集取肝素抗凝骨髓液或静脉血3~5mi，要求被检测标本中原始幼稚细胞占全部有核细胞的

80%以上。

1.3仪器和试剂本研究采用COULTEREPICS（Couiter

公司）流式细胞仪，溶血剂FACS（B-D公司），透膜剂

IitraPrep（Couiter公司）。荧光标记单克隆抗体（单抗）包

括髓系相关的CD13-PE，CD33-PE，CD14-PE，MPO-

FITC；T系列相关的CD3-FITC，CD5-FITC，CD7-FITC，

CyCD3-PE；B系列相关的CD19-FITC，CD22-FITC，Cy-

CD79a-PE。系列非相关性CD34-PE，CD38-FITC，HLA

-DR-FITC，CD10-PE，CD45-Cy-Chrome；同型对照为

IG1-FITC/IG1-PE/IG2a-FITC，上述荧光标记抗体均购

自B-D公司。

1.4方法肝素抗凝骨髓或静脉血经淋巴细胞分离液分

离获单个核细胞，用磷酸盐缓冲液（PBS）调整细胞浓度为

（1~5）X106/L，双色直接免疫荧光法标记后上机分析，其

中FITC，PE，Cy-Chrome荧光分别设在PMT2，PMT3，PMT5

通道上，测定前以标准荧光微球校正仪器，以CD45/SSC·003·GuangdongMedicalJournalMar.2003，Voi.24，No.3

设门，每测定管收集10000个细胞，测定结果采用EXPO2

软件分析。结果判断：MPO以阳性细胞数!3%为该表型

表达阳性，其他抗原阳性细胞!20%为阳性标准。

2结果

2.1急性淋巴细胞白血病系列相关性抗原表达情况

见表1。

表1急性淋巴细胞白血病系列相关性抗原表达情况例（%）

白血病类型例数白血病细胞表面抗原单克隆抗体检出率

CD19CD22CD3CD5CD7CD13CD33

B细胞系列ALL1414（100）5（36）1（7）0（0）0（0）6（43）5（36）

T细胞系列ALL141（7）0（0）9（64）12（86）14（100）2（14）3（21）

2.2急性淋巴细胞白血病胞浆内抗原表达情况见表2。

表2急性淋巴细胞白血病胞浆内抗原表达情况例（%）

白血病类型例数白血病细胞胞浆抗原单克隆抗体检出率

CyCD79aCyCD22CyCD3MPO

B细胞系列ALL1413（93）2（14）0（0）0（0）

T细胞系列ALL141（7）0（0）14（100）2（14）"

"2例MPO阳性均为带有髓性标记的ALL，详见正文

2.3急性淋巴细胞白血病非系列相关性抗原表达情况

见表3。

表3急性淋巴细胞白血病非系列相关抗原表达情况例（%）

白血病类型例数白血病细胞非系列相关抗原单克隆抗体检出率

CD10HLA-DRCD14CD34CD38

B细胞系列ALL1414（100）14（100）0（0）9（64）13（93）

T细胞系列ALL145（36）8（57）1（7）7（50）14（100）

3讨论

在本研究中，我们以StJude研究医院的免疫分型方

案作为选择单克隆抗体的基础［1］，筛选出16种抗体，基

本涵盖目前用于急性白血病免疫分型的所有抗体，这些

抗体分别与CD45双标记，然后采用CD45/SSC设门，对

28例ALL患者进行了双色流式细胞术免疫分型。

本研究结果表明，在ALL已经明确的情况下，CD19

和CD79a是确定B-ALL最重要的单抗。两者在区分

ALL的系列特征时的敏感性和特异性均在90%以上（表1

和表2）。现在认为CD10不是B细胞系列相关抗体［2］，

因为在T-ALL中CD10阳性率并不低，本研究达到

36%。过去研究曾认为CyCD22是非常重要的B系列特

异性单抗，本研究也证实在T-ALL没有假阳性，但是敏

感性过低（14%），刘艳荣等［3］报道CD79a敏感性及特异

性均高于CyCD22；而胞膜CD22也同样具有高特异性和

低敏感性的特点，适用于排除T细胞肿瘤的场合（如果

CyCD22和CD22阳性，是T细胞肿瘤的可能性很小）［4］。

另外，CD22现认为是较晚分化阶段的急性淋巴白血病的

标志，可作为急性淋巴白血病免疫分型中阶段划分的参考［5］。

本研究结果表明，CD7和CyCD3是确定T-ALL最重

要的单抗。在B-ALL中两者均无假阳性，但是文献已

经广泛报告CD7在AML有相当的阳性率，所以在StJude

研究医院的急性白血病免疫分型方案中，CD7被认为是

高敏感性单抗，而CyCD3是高特异性单抗［1］。近来研究

发现CyCD3仅出现在胸腺中发育的早期T细胞中，而不

存在于骨髓或外周血淋巴细胞中，因此有学者提出外周

血或骨髓中T淋巴细胞CyCD3和TdT同时表达阳性即表

明白血病细胞的存在［6］。

CD13及CD33作为急性髓细胞白血病（AML）的系列

相关抗体已被广泛接受。本组病例中CD13及CD33在

ALL中的表达率为20%~43%，高于国外报道，在该组病

例中CD13和CD33的敏感性及特异性均不高，可初步区

分AML和ALL，但需结合其他分化抗原做进一步的分型

（AML资料未给出）［7］；现认为MPO是AML系列特异性胞

浆内抗原，本组病例中MPO在B-ALL的阳性表达频率

为0，而在T-ALL中的阳性表达频率为14%，这与本组

T-ALL病例中有2例髓性标志阳性的T-ALL（My+ALL）

有关，其特异性是否比POX高需要更多的病例证实，本

研究中这2例My+ALL的POX均阴性。

CD34，HLA-DR，CD38是造血细胞早期分化阶段的

表面分化抗原，在本组病例中均有较高的表达频率。

CD14为粒-单核细胞表面抗原，在本组ALL中的阳性率

非常低，但在我们的AMLM4和M5的患者中阳性率也很

低（AML资料未给出），不能很好的区分ALL和AML。

参考文献

1PuiCH，EvansWE.AcuteIymphobIasticIeukemia.EngIJMed，1998，339（9）：605

2ThaIhammer-ScherrerR，MitterbauerG，SimonitschI，etaI.Theim-

munophenotypeof325aduItacuteIeukemias：reIationshiptomorphoIogicand

moIecuIarcIassificationandproposaIforaminimaIscreeningprogramhighIy

predictiveforIineagediscrimination.AmJCIinPathoI，2002，117（3）：380

3刘艳荣，于弘，常艳，等.探讨流式细胞术检测胞浆抗原的方法

及其在白血病免疫分型中的意义.中国实验血液学杂志，2002，10（1）：17

4LoCocoF，FoaR.Diagnosticandprognosticadvancesintheimmunopheno-

typicandgeneticcharacterizationofacuteIeukaemia.EurJHaematoI，1995，

55（1）：1

5HuhYO，IbrahimS.ImmunophenotypesinaduItacuteIymphocyticIeukemi-

a.RoIeoffIowcytometryindiagnosisandmonitoringofdisease.HematoIOn-

coICIinNorthAm，2000，14（6）：1251

6Paredes-AguiIeraR，Romero-GuzmanL，Lopez-SantiagoN，etaI.FIow

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儿童与成人急性B淋巴细胞白血病的免疫分型特点

儿童与成人急性B淋巴细胞白血病的免疫分型特点

・　９５４　・　国际检验医学杂志２０１０年９月第３１卷第９期ｌｎｔ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　２０１０，Ｖｏ１．３１，Ｎｏ．９　

・Ｉ临ｒ－Ａ＜研究・　

儿童与成人急性Ｂ淋巴细胞白血病的免疫分型特点　

王雪华，林少微，焦晓阳，程盼盼，林静华　

（汕头大学医学院附属第一医院，广东汕头５１５０４１）　

【摘要】　目的探讨儿童与成人急性Ｂ淋巴细胞白血病免疫分型的特点。方法　分别选取儿童与成人急性Ｂ淋巴细胞自　

血病患者各１００例，采用流式细胞术进行自血病免疫分型检测。结果　１）表达率最高的淋系抗原为ＣＤ１９（儿童和成人均为　

１００．０　）和ＣＤ７９ａ（ＪＬ童为９３．０　；成人为９０．０　）；儿童和成人组中，伴髓系抗原表达率分别为３２．０　和４２．０　，均以ＣＤ３３表　

达率最高，ＣＤ１３次之，ＣＤ１１７最低。２）大多数抗原的表达率在两组间并无差别，但下列除外：Ｐｒｏ—Ｂ－ＡＩ　Ｉ　的ＣＤ２２（儿童＞成人）　

和ＣＤ３８（儿童＜成人）、Ｇ　ＡＬＩ　的ＣＤ２０和ＣＤ２２（儿童＞成人）及ＣＤ３４（儿童＜成人）、Ｐｒｅ－Ｂ－ＡＩ　Ｉ　的ＣＤ３４和ＣＤ３８（儿童＜成　

人）。结论１）ＣＤ１９和ＣＤ７９ａ为淋系最敏感的抗原，伴髓系抗原的表达率在两组间并无差别。２）成人组ＣＤ３４和ＣＤ３８的高表　

达可能是预后不良因素，儿童组ＣＤ２０和ＣＤ２２的高表达可能有利于预后。　

【关键词】儿童；　成年人；　白血病，Ｂ细胞，急性；　免疫分型　

ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１０．０９．０２０　

中图分类号：Ｒ７３３．７１　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３—４ｌ３Ｏ（２０１０）０９—０９５４　０３　

Ｔｈｅ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｌｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ　ｉｎ　Ｂ　Ｃｅｌｌ　Ａｃｕｔｅ　Ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ　Ｌｅｕｋｅｍｉａ　ａｍｏｎｇ　Ｃｈｉｌｄｒｅｎ　ａｎｄ　Ａｄｕｌｔｓ　ＷＡＮＧ　Ｘｕｅ　ｈｕａ，ＬＪＮ　Ｓｈａｏ—ｚｖｅｉ，Ｊ　ＪＡ０　Ｘｉａｏ　ｙａｎｇ，ｅｔ　ａ１．　

白血病细胞的免疫分型

白血病细胞的免疫分型

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精选doc 白血病细胞的免疫分型

正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。由于白血病细胞具有肿瘤细胞的特征，其抗原表达又不完全同于正常血细胞，常可出现某些抗原缺乏、过度表达、系列交叉表达某一系列或阶段不应有的抗原，这又增加了白血病免疫分型的复杂性。

近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM），此外还有免疫组化法，电镜和荧光显微镜也可以帮助诊断。其中流式细胞术（FCM）和免疫组化法较为常用。

流式细胞术中，白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。因为FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜，浆，核的抗原表达。另一个重要理由是至今尚未发现白血病的特异抗原。所以能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。抗原表达与其相应系列/阶段的血细胞无明显差异。与形态学检查相似仅能根据数量的差异来判断病变细胞的属性。单参数免疫标志测定易将正常细胞包括在内。因此，近年来主张用设门（gating）方法。即用CD45与侧向角（side scatter,SSC），对数取样后可将骨髓细胞清晰地分出淋巴细胞，单核细胞，成熟粒细胞，幼稚细胞和红细胞群，其理论依据是CD45是所有白细胞的抗原。其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（blasts）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞，成熟红细胞）不表达CD45。SSC反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞SSC最高，依次为单核细胞，淋巴细胞，blasts，红细胞。以CD45/SSC双参数，对数取样时即可把各细胞群区分出来。若同时加上一个，二个甚或三个荧光标记的单抗，则很容易识别非正常细胞群所表达的抗原。这样可以排除正常细胞的干扰。在幼稚细胞％低的情况下或检测残存白血病时尤为必要 。FCM分析白血病免疫表型时，测量细胞数量一般在10000～50000细胞之间，而且快速、特异、准确，重复性好，能区分细胞起源、划分其分化发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机理研究等有重要价值。

急性淋巴细胞白血病形态学与免疫学分型结果分析

急性淋巴细胞白血病形态学与免疫学分型结果分析

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急性淋巴细胞白血病形态学与免疫学分型结果分析

作者：林江 赵华

来源：《医学信息》2014年第18期

摘要：目的探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）形态学与免疫学分型的关系，以提高对白血病的诊断水平。方法对我院2012年1月~2013年3月的24例ALL采用骨髓细胞形态学、骨髓细胞化学染色及免疫分型检测,比较两者在ALL分型上的异同。结果24例ALL患者,按照FAB分型15例L1、7例L2、2例L3，按照WHO免疫分型7例T-ALL、17例B-ALL。结论免疫学分型是诊断ALL的必要手段，是对形态学分型的补充和修正，它对诊断、治疗和判断预后具有重要的指导意义。

关键词：急性淋巴细胞白血病；FAB分型；免疫学分型

Acute Lymphoblastic Leukemia Morphology and Immunophenotyping Results Analysis

LIN Jiang,ZHAO Hua

（Department of Clinical Laboratory,Affiliated Hospital of Luzhou Medical College,Luzhou

646000,Sichuan,China)

Abstract：ObjectiveTo explore the relationship between morphology and immunophenotyping

of ALL and improve the level of diagnosis of leukemia. MethodsChoosing 24 cases of ALL in

Affiliated Hospital of Luzhou Medical College from 2012 January to 2013 March ,and then taking

我国急性白血病免疫分型的四色方案

我国急性白血病免疫分型的四色方案

我国急性⽩⾎病免疫分型的四⾊⽅案

中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案

由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点，免疫表型已成为诊断急性⽩⾎病的重要依据之⼀。因准确的诊断需要选择⼀定数量的抗体，涉及多个造⾎系列的抗原。但⽬前国内甚⾄国际上没有规范化的⽅案可以借鉴。⽽国内不同的医疗单位所⽤的抗体数量和种类均有较⼤的异质性，有些单位由于应⽤的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。鉴于国内的实际情况，中国免疫学会⾎液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论，提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性⽩⾎病免疫分型四⾊⽅案，供参考。本⽅案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性⽩⾎病的诊断标准，这些对免疫分型同样重要，可参考相应的指南。1．适应范围：

1.1急性淋巴细胞⽩⾎病(ALL):

z B系：早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进⾏鉴别

z T系：早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),⽪质-T-ALL和髓质-T-ALL.

1.2急性早幼粒细胞⽩⾎病（APL）

1.3急性髓细胞⽩⾎病（AML）

z AML微分化型（AML-M0）

z AML伴粒系和单核细胞分化型（AML-M1/2和AML-M4/5）

z急性红⽩⾎病（AML-M6）

z急性巨核细胞⽩⾎病（AML-M7）

1.4前体树突细胞肿瘤

1.5急性嗜碱性粒细胞和肥⼤细胞⽩⾎病

1.6 混合表型⽩⾎病

1.7 对上诉急性⽩⾎病治疗后检测MRD的标志进⾏筛查

2.抗体的选择：根据检测的⽬的，需要检测不同的抗体：

2.1 鉴别急性、慢性⽩⾎病:对于急性髓细胞⽩⾎病，可以根据CD45/SSC图型进

⾏初步判断。髓系⽩⾎病细胞CD45的表达较弱，往往位于正常淋巴细胞下⽅，且多数⽩⾎病细胞SSC较低（除去⼤颗粒APL患者）。再根据CD34、CD117、CD38、HLA-DR、CD123的表达进⾏判断。急性髓系⽩⾎病细胞多数表达这些标志或只表达这些标志中的部分标志。对于淋系⽩⾎病细胞的鉴别，可以根据CD34、TDT、CD10，cu 、K/L、cCD3、CD1a（CD99）的表达进⾏判断。如果B 淋巴细胞表达CD34和或TDT,则说明为幼稚B细胞。CD10在B-ALL中表达较普遍在部分T-ALL中也为阳性，但在Burkitt淋巴瘤,滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫⼤B淋巴瘤(DLBCL)和B细胞淋巴瘤未分类型（BCLU）经常为阳性，这些均为周围型淋巴瘤，不表达CD34和TDT。因此，在CD10+及CD34和或TDT阴性时，则需要检测cu 、K/L鉴别成熟或幼稚B细胞，成熟B细胞应该表达膜免疫球蛋⽩（Ig及膜轻链Kappa和lambdaL）。2.2鉴别⽩⾎病细胞的系列来源：髓系及淋系（B、T 和NK）。可参考2008年WHO