血细胞仪白细胞五分类法原理和散点图特征

五分类血细胞分析仪的原理及使用五分类血细胞分析仪是一种用于检测和分析血液成分的仪器。

它可以通过血细胞图像和数值结果，对白细胞、红细胞和血小板等不同血细胞的形态和数量进行评估。

这种分析仪是临床检验中常用的重要工具之一，它可以为医生提供诊断和治疗血液相关疾病的依据。

1.光散射技术：血细胞通过细胞流的方式，单独流经流式细胞仪的光学系统。

当细胞经过时，被激光器产生的细胞射线所照射，部分光线会被细胞吸收，同时细胞会发生散射。

根据细胞对光的吸收、散射情况，可以区分不同种类的血细胞。

2.染色：血细胞分析仪会在细胞流过时，对其进行染色。

常用的染色剂有双峰染色剂，如吉姆萨染色剂。

染色剂可以使红细胞、血管壁和嗜酸性和嗜碱性粒细胞成为红色，而淋巴细胞和单核细胞成为蓝色。

通过这种染色，可以更好地区分不同细胞类型。

3.细胞计数：血细胞分析仪中的传感器会对流过的细胞进行计数。

根据流速和激光器的射线强度，感应器可以检测每个细胞的通过时间和数量。

根据这些信息，可以得到各种血细胞的数量。

4.数据分析：细胞计数和各种血细胞的数量数据会被仪器收集并保存。

然后，这些数据会被传送到计算机上进行后续的数据处理和分析。

计算机会根据事先设定的参数和阈值，对细胞进行分类，并生成血细胞分布和数量的图表和报告。

1.准备样本：从受测者的体内采集合适的血液样本，使用抗凝剂进行抗凝，以保持血液的流动性。

2.装载样本：将采集的血液样本注入到血细胞分析仪的装载仓中。

确保样本装载正确，避免气泡和污染。

3.开始测试：启动血细胞分析仪，设定所需的分析参数和样本标识。

确保仪器正常运行，并按照提示进行操作。

4.分析结果：待测试完成后，血细胞分析仪会自动生成血细胞分布和数量的图表和报告。

用户可以在计算机上查看和保存这些数据。

需要注意的是，使用血细胞分析仪前需要了解仪器的操作规则和安全注意事项。

此外，样本的质量会对结果产生重要影响，因此应确保样本采集和保存的正确性。

总之，五分类血细胞分析仪是一种常用的临床工具，它通过光散射技术和染色等原理，可以对血细胞进行分析和计数。

【小结】常见血细胞分析仪的检测原理与直方图散点图小编将以国内占有率排在前两位的希森美康（SYSMEX）和迈瑞（MINDRAY）的仪器为例来进行说明，这两个品牌的血细胞分析仪加起来占据了国内市场的一大半。

考虑到现在五分群仪器已经十分普及，本文不涉及白细胞直方图的有关内容。

血细胞分析仪检验图形：根据检测原理不同，分为直方图和散射图两种细胞分布图形。

【第一部分】血细胞直方图(Histogram)希森美康/迈瑞血细胞分析仪常规检测红细胞/血小板的技术为电阻抗原理，又称库尔特原理）：如上图所示，悬浮在电解质溶液中的血细胞相对于电解质溶液是非导电的颗粒，当体积不同的血细胞（或类似颗粒）通过计数小孔时，可引起小孔内外电流或电压的变化，形成与血细胞数量相当、体积大小相应的脉冲电压，从而间接区分出血细胞群，并分别进行计数。

血细胞直方图，其横坐标为血细胞体积大小，纵坐标为不同体积细胞的相对频率，是表示细胞群体分布情况的统计图形。

它可以显示出某一特定细胞群的平均细胞容积、细胞分布情况及有无明显异常细胞群的存在。

直方图观察的内容：①峰的位置，反映主细胞群的位置有无异常。

②峰的高低，大致反映主细胞群数量的多少。

③峰底的宽度，反映细胞群容积大小的不均一性或离散程度大小，如RDW、PDW等。

④有无异常峰出现，和正常直方图相比有异常峰出现，多提示血液中有异常细胞群或干扰因素存在。

⑤峰的起始处或结尾处有无异常，若有多提示有干扰因素。

（一）红细胞直方图正常红细胞直方图是一条近似正态分布的单峰曲线，通常位于36~360 fl 范围内，横坐标表示RBC体积，纵坐标表示不同体积红细胞出现的频率。

正常红细胞集中在50～200 fl 范围内，可见两个细胞群体：一个是红细胞主群，从50～125 fl ，为一个两侧基本对称、较狭窄，呈现倒扣钟状的正态分布曲线；另一群是大细胞群，位于主群右侧不与X 轴重合拖尾部分，分布在125 fl ～200 fl 区域，又称“足趾部”，是一些大红细胞、网织红细胞、红细胞的二聚体、多聚体及白细胞的混合物。

【小结】白细胞五分群原理与散点图一、VCS技术这是贝克曼/库尔特（Beckman/Coulter）血细胞分析仪的专利技术。

VCS分别是体积（volume）、传导性（conductivity）和光散射（scatter）的缩写，是五分群血细胞分析仪采用的技术之一VCS计数检测内容见表3-2它采用三个独立的能量来源在流动池内检测白细胞，将这三者结合，可以将白细胞分为五群（三种粒细胞和淋巴、单核细胞），见表3-3。

以下是VCS细胞检测立体散点图：以下是仪器给出的散点图（数字是异常成分出现的位置）：你发现了吗？血细胞分析仪给出的散点图看似是二维的，其实是三维的【注释】（一）正常细胞L：淋巴细胞M：单核细胞N：中性粒细胞E：嗜酸性粒细胞（二）异常成分1、幼稚单核细胞2、幼稚粒细胞3、未成熟粒细胞4、中性杆状核粒细胞增多5、幼稚淋巴细胞6、异型淋巴细胞7、小淋巴细胞增多8、有核红细胞/血小板簇9、大血小板10、红细胞内寄生虫（如疟原虫）二、电阻抗、射频、流式细胞术和核酸荧光染色方法这是希森美康（Sysmex）血细胞分析仪采用的技术，国货迈瑞（Mindray）血细胞分析仪采用的技术/散点图与之相似。

（一）4 DIFF（四分群）通道利用半导体激光流式细胞术、核酸荧光染色技术，采用溶血剂完全溶解红细胞和血小板，白细胞膜仅部分溶解。

聚亚甲基蓝核酸荧光染料进入白细胞内，使DNA、RNA和细胞器着色。

因为荧光强度与细胞内核酸含量成比例，所以未成熟粒细胞、异常细胞荧光染色深，成熟白细胞荧光染色浅，从而得到4DIFF（四分群）白细胞散点图（如下）。

（二）WBC/BASO通道在碱性溶血剂作用下，除嗜碱性粒细胞外的其他所有细胞均被溶解或萎缩，经流式细胞术计数，可得到WBC/BASO百分率和绝对值及WBC/BASO散点图（如下）。

（三）未成熟髓细胞信息通道采用射频、电阻抗和特殊试剂结合法。

在细胞悬液中加硫化氨基酸，幼稚细胞膜脂质含量高，结合硫化氨基酸的量多于较成熟的细胞，对溶血剂有抵抗作用。

五分类法血细胞分析仪测定原理和散点图特征
张时民
【期刊名称】《中国医疗器械信息》
【年(卷),期】2008(014)012
【摘要】血液细胞分析仪是临床检验工作中最常使用的检验仪器,而具有白细胞五分类功能的仪器目前也已经非常普及.目前各厂家所生产的此类血细胞分析仪在检测原理上各不相同,在白细胞分类上更是使用了完全不同的检测方法和不同的试剂,所形成的白细胞分类散点图也完全不同,使用者在应用上和对散点图的解读上仍有一定困惑.本文介绍了目前世界上几个著名的厂商设计和生产的高端血细胞分析仪,根据他们的测定原理,配合其特定的散点图进行详细介绍,期望对使用此类仪器的用户有所帮助.
【总页数】10页(P1-9,44)
【作者】张时民
【作者单位】北京协和医院检验科,北京,100730
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11
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1.血细胞分析仪异常散点图对血液病的辅助诊断价值 [J], 张培瑜
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4.经人工显微镜、MICM分型技术检查确诊的6例APL患者血细胞分析仪异常散点图特点 [J], 王肖静;欧歌;黄媛;陈建魁
5.关于五分类法血细胞分析仪测定原理和散点图特征分析 [J], 南鹏翔
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血细胞分析仪五分类检测技术及原理血细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一，随着科学技术日新月异的发展，血细胞分析的技术也从几年前的三分类转向现在的五分类，从二维空间进而转向三维空间，同时现代血细胞分析仪的五分类技术许多采用了先进的技术，如鞘流技术、激光技术等。

下面就五分类血细胞分析仪器的检测方法及其应用加以说明。

1 采用阻抗、激光散射和荧光染色技术检测法直流电阻抗法（DC）用于测量细胞体积大小。

激光散射产生的前向散射光、侧向散射光和侧向荧光可用于探测白细胞体积大小、细胞内含物的情况（细胞核以及颗粒情况），侧向荧光则可以反映细胞内脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的含量，特有的嗜酸性粒细胞检测溶血剂Str-matolyzer-EO可将除了嗜酸细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜酸细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。

在嗜碱细胞通道中，使用特殊溶血剂Strmatolyzer-BA可将除了嗜碱细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜碱细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。

幼稚细胞检查通道（IMI）可以根据幼稚细胞膜比成熟细胞膜表面含有脂质较少的现象，在细胞稀释悬液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，结合在幼稚细胞表面的氨基酸较多，对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂后成熟细胞易被溶解，而幼稚细胞不易被破坏，可通过电阻法检测出来。

综合各个测量方法，得到白细胞五分类的图形和数据。

这种技术主要应用在Sysmex研制和开发的SE-9000、SE-9500、XE-2100、XT-1800等系列血液分析仪中。

2 电阻抗和射频电导联合检测法这种方法是分别采用四个检测系统来检测不同类型的细胞:（1）淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统:在细胞悬浮液中加入溶血剂使红细胞溶解，而使白细胞保持完整，细胞浆及核形态近似于生理状态，当这些细胞通过检测系统时，对白细胞进行电阻抗法（测量细胞体积）和射频电导法（检测细胞核和颗粒密度）的联合检测，结果将细胞分成淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞三个群体。

MEK7222/8222 白细胞分类的测定原理MEK-7222/8222，计数原理是wbc/rbc/plt电阻法，分类是使白细胞通过鞘流进入鞘流池内，然后通过检测对白细胞照射时发生的散射光，对白细胞进行分类。

这些散射光，根据血细胞的容积、血细胞的复杂性（有无颗粒、核的构造等）的不同，光的强度和方向有所不同，因此，通过以激光直进方向和同方向小角度的散射光（以下称为Size）、激光直进方向和同方向大角度的散射光（以下成为Complexity）、与激光直进方向相对垂直的方向的散射光（以下称为Granularity）为参数的散点图，可以对淋巴细胞、单核细胞、嗜中性白细胞、嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞进行分类。

另外，Size表示血细胞的大小、Complexity表示血细胞的复杂度、Granularity表示血细胞的颗粒的程度。

这种方法提供了三个散射图，MAIN散点图NE-EO散点图MO-BA散点图Neutrophil Count(嗜中性白细胞) NECLymphocyto Count（淋巴细胞）LYCMonocyto Count（单核细胞）MOCEosinophil Count（嗜酸性白细胞）EOCBasophil Count（嗜碱性白细胞）BAC散点图有下列三种。

纵轴是Size、横轴是Complexity的散点图（以下称为S-C散点图）；纵轴是Size、横轴是Granularity的单核细胞/嗜碱性白细胞分类用散点图（以下称为MO-BA分类用散点图）；纵轴是Size、横轴是Granularity的嗜中性白细胞/嗜酸性白细胞分类用散点图（以下称为NE-EO分类用散点图）。

淋巴细胞分布在S-C散点图的LY区域。

单核细胞及嗜碱性白细胞分布在S-C散点图的MO-BA区域。

进一步展开到MO-BA分类用散点图时，则单核细胞分布在MO区域，嗜碱性白细胞分布在BA区域。

嗜中性白细胞及嗜酸性白细胞分布在S-C散点图的NE-EO区域，进一步展开到NE-EO分类用散点图时，嗜中性白细胞分布在NE区域，而嗜酸性白细胞分布在EO区域。

那么这五个类型的白细胞是根据什么原理来分类的呢？目前主要是根据细胞的如下几个特性来分类：细胞的大小、核浆比例、细胞内细胞器的复杂程度、细胞核所含核酸的多少以及对某些化学试剂（或/和）荧光染液的敏感程度来区分之。

根据白细胞的以上特性，不同厂家、不同型号的五份类血细胞分析仪其检测分析的原理是不同的。

但其最基本的原理目前无非就以下几种情况：1、利用这五类细胞对不同化学试剂（溶血剂或叫溶血素）的溶解性质不同（如嗜酸细胞试剂和嗜碱细胞试剂）以及结合白细胞直方图细胞三分群的库尔特（电阻抗法）检测原理将白细胞分为五类。

例如:早期的Abcus Junior5仪器,（行业内常称为假五分类），当然比起三分群的仪器分类精准了不少，但还是存在很大偏差，因为有些细胞是采用大小分群（即脉冲的大小）和计算出来的。

2、四角度照射法：90°角区分分叶核细胞和单核细胞得到两类：中性粒细胞和嗜酸性粒细胞（分叶核细胞）；单核细胞和淋巴细胞及嗜碱性粒细胞（单核的嗜碱性粒细胞）。

用90°偏振区分：嗜酸性粒细胞和中性粒细胞。

用0°和10°通过核质比及细胞大小，将嗜碱性粒细胞从淋巴和单核细胞中群中分开。

用0°根据大小区分单核细胞和淋巴细胞。

此类仪器以优利特生产的URIT5160五分类为代表。

3、细胞化学-体积法：化学性溶血剂一方面作用于红细胞使红细胞破坏释放血红蛋白，另一方面还作用于白细胞，使白细胞膜表面产生小孔，细胞内浆质外溢，细胞失水皱缩，细胞膜紧贴于核上。

测定时细胞的体积大小是核、颗粒和膜成分的总和，白细胞种类不同、分化程度不同所含的胞浆颗粒、核结构以及大小也不同。

运用V.C.S三种探针，在流式通道的某一位点，对通过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检测，以及三维分析，以确定其亚群性质。

V-低频波（Volume）: 采用低频电流准确分析细胞体积；C-高频波(Conductivity): 采样高频电流分析细胞核型；S-激光（Scatter）: 该激光束可穿透细胞，探测细胞内核分叶状况和胞浆中颗粒情况，分析细胞的颗粒特性。