下载文档原格式
牛奶和奶粉中呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮代谢物残留量的测定（二）5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。
5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g。
5.3 液体混匀器。
5.4 固相萃取装置。
5.5 氮气吹干仪。
5.6 恒温振荡水浴。
5.7 真空泵：真空度应达到80 kPa。
5.8 微量注射器：25uL，100uL。
5.9 棕色具塞离心管：25 mL,50 mL。
5.10 pH计：测量精度±0.02pH单位。
5.11 贮液器：50 mL。
5.12 高速离心机：转速10000 r/min以上。
6 试样的制备与保存 6.1 试样的制备试验室样品混合匀称，分出0.5kg作为试样。
6.2 试样保存试样置于-18℃冰柜，避光保存。
7 测定步骤 7.1 待测样品溶液的制备7.1.1 牛奶样品脱蛋白、水解和衍生化称取牛奶样品8g(精确到0.01g)，置于50 mL棕色离心管中，加入15 mL溶液(4.15)向上述离心管中加入0.2 mL衍生剂(4.16)，再加入适量混合内标溶液(4.23)，使四种代谢物内标物终于定容浓度均为2.0ng/mL。
用液体混匀器混匀，置于37℃恒温振荡水浴中避光反应16h。
离心管取出后放置至室温，在10000r/min下离心10 min，上清液倒入另一棕色离心管中。
7.1.2 奶粉样品脱蛋白、水解和衍生化称取奶粉样品1g(精确到0.01g)，置于50 mL棕色离心管中，加入8 mL水，涡旋混合后，再加入15 mL溶液(4.15)。
向上述离心管中加入0.2 mL衍生剂(4.16)，再加入适量混合内标溶液(4.23)，使四种代谢物内标物终于定容浓度均为2.0ng/mL。
用液体混匀器混匀，置于37℃恒温振荡水浴中避光反应16h。
离心管取出后放置至室温，在10000 r/min下离心10 min，上清液倒入另一棕色离心管中。
7.1.3 样品溶液净化上述衍生溶液加入5 mL 0.1 mol/L溶液(4.12)，用4 mol/L溶液(4.14)调整溶液pH约为7.4，在10000r/min下离心10 min，上清液倒入下接Oasis HLB固相萃取柱(4.24)的贮液器中，在固相萃取装置上使样液以小于2 mL/min的流速通过Oasis HLB固相萃取柱(4.24)，待样液所有通过固相萃取柱后用20mL 20％水淋洗固相萃取柱，弃去所有流出液。
呋喃唑酮片检验操作规程1. 目的建立呋喃唑酮片成品检验标准操作规程，使氨咖黄敏胶囊成品检验操作规范化。
2. 范围适用于呋喃唑酮片成品的质量检验。
3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。
5. 程序5.1 检验依据5.1.1 国家食品药品监督管理局国家药品标准WS-10001-（HD-0276）-2002-2006；5.1.2 呋喃唑酮片质量标准（质量标准编号：）5.1.3 《中国药典》2020年版二部（574页）5.2 性状：本品为黄色片或糖衣片，除去包衣后显黄色。
5.3 鉴别5.3.1 试药与试液【鉴别1】乙醇、氢氧化钠溶液(1→10)【鉴别2】二甲基甲酰胺、亚硝基铁氰化钠试液、氢氧化钠试液5.3.2 仪器及用具【鉴别1】电子天平（精度1mg）、电热恒温水浴锅、试管、漏斗、滤纸、刻度吸管（5ml）【鉴别2】电热恒温水浴锅、蒸发皿、刻度吸管（0.2ml、1ml、5ml）【鉴别3】紫外可见分光光度计5.3.3 操作方法5.3.3.1 薄层鉴别：取本品的细粉适量（约相当于呋喃唑酮30mg），加乙醇10ml，置水浴中加热5分钟，放冷，滤过。
取滤液5ml，加氢氧化钠溶液(1→10)3ml，即显红色。
5.3.3.2 化学反应：取2.1.3项下剩余的滤液1ml，在水浴上蒸去乙醇，残渣加二甲基甲酰胺0.1ml使溶解，加水5ml、亚硝基铁氰化钠试液1ml与氢氧化钠试液1ml，摇匀，放置2分钟，溶液初显橄榄绿色，渐变为墨绿色。
5.3.3.3取含量测定项下的供试品溶液，照紫外-可见分光光度法操作规程测定，供试品在367nm 的波长处有最大吸收，在302 nm 的波长处有最小吸收。
5.4 检查5.4.1溶出度 避光操作。
5.4.1.1试药与试液1.3%十二烷基硫酸钠溶液、二甲基甲酰胺5.4.1.2仪器与用具智能药物溶出仪、紫外-可见分光光度计量筒（1000ml ）、取样器、过滤器、移液管（5ml 、10ml ）、刻度吸管（20ml ）、容量瓶（25ml 、50ml 、200ml ）5.4.1.3操作方法取本品，照溶出度测定检验操作规程第二法（浆法），以1.3%十二烷基硫酸钠溶液1000ml 为溶出介质，转速为每分钟120转，依法操作，经60分钟时，取溶液滤过，精密量取续滤液10ml ，用水定量稀释至25ml ，作为供试品溶液。
动物源食品中呋喃酮残留检测方法———高效液相色谱法[文献标识码]E [文章编号]100221280(2002)022******* [中图分类号]S859184农业部于2001年11月1日发布农牧发[2001]38号文,发布10种动物源食品中兽药残留检测方法。
方法之一:动物源食品中呋喃唑酮残留检测方法—高效液相色谱法,全文如下:动物源食品中呋喃唑酮残留检测方法—高效液相色谱法1 范 围本标准规定了动物源食品中呋喃唑酮残留量的检测的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于鸡的肌肉、肝脏、肾脏组织和鱼肉中呋喃唑酮残留量检测。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
G B/T1.1-20001标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则(ISO/IEC Directives,Part 3,1997,Rules for the structure and drafting of Inter2 national Standards,N EQ)G B/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法N Y/T××××—2001动物源食品中兽药残留检测方法标准编制规则3 制 样311 样品的制备 取适量新鲜或冷冻空白或供试组织,绞碎并使均匀。
312 样品的保存 -20℃冰箱中贮存备用。
4 测定方法411 方法提要或原理 组织加C l8混匀后装柱,用正己烷冲洗,真空抽干后,用乙酸乙酯洗脱,洗脱液减压浓缩至干后用流动相溶解,过氧化铝小柱后,用高效液相色谱测定。
412 试剂和材料 以下所用试剂,除特殊注明者外均为分析纯试剂;水为符合G B/T6682规定的二级水。
硝基呋喃类检测方法及标准硝基呋喃简介：硝基呋喃类（Nitrofurans）抗菌剂是一种广效性抗生素，因价格较低廉且疗效佳，广泛用于畜禽及水产养殖鱼类，用以治疗由大肠杆菌或沙门式杆菌所引起之肠炎，养殖鱼之疥疮、赤鳍病、溃疡病等，于饲料中添加或养殖药浴使用。
硝基呋喃类抗菌剂常见有以下四种药物———呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因。
危害性：长时间或大剂量应用硝基呋喃类药物均能对动物体产生毒性作用，其中呋喃西林的毒性最大。
兽医临床上经常出现有关畜禽类呋喃西林、呋喃唑酮中毒的事件,呋喃它酮为强致癌性药物，呋喃唑酮可诱导鱼的肝脏发生肿瘤。
硝基呋喃类药物在动物体内的半衰期短，代谢速度非常快，但其代谢产物能够与组织蛋白质紧密结合,以结合态形式在体内残留较长时间，且毒性更强，是硝基呋喃类药物的标记残留物，若水产品体内有大量的呋喃药物残留，会使人产生耐药性，在临床中降低此类药物的治疗效果，并且此类药物残留对人体也有致癌、致畸胎等副作用。
国内外对之重视程度：1995年起欧盟（EuropeanUnion）禁止硝基呋喃类抗菌剂在食用之畜禽及水产动物使用，并严格执行对输入之食用鱼、虾及禽类进行硝基呋喃的残留检测，2002年美国亦起而效尤；1990年7月欧盟颁布2377/90/EEC条例，将硝基呋喃类药物及其代谢产物列为A类禁用药物；我国农业部文件:农牧发[2002]1号规定食品性动物中呋喃唑酮为不得检出。
呋喃唑酮、呋喃妥因也在1995年被禁用。
科标生物检测中心拥有国际先进的检测仪器和雄厚的技术力量，可以依据多种检测标准，提供硝基呋喃类相关检测服务。
现有检测方法及标准：检测方法参考标准动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法GB/T 21311-2007高效液相色谱/串联质谱法水产品中呋喃唑酮残留量的测定SC/T 3022-2004 高效液相色谱法畜禽肉和水产品中呋喃唑酮的测定SB/T 10387-2004 高效液相色谱法水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定农业部1077号公告-2-2008高效液相色谱法水产品中呋喃唑酮、呋喃它酮代谢物的快速测定DB33/T 744-2009 酶联免疫法动物源性食品中呋喃唑酮残留标示物残留检测农业部1025号公告-17-2008酶联免疫法。
呋喃它酮的高灵敏伏安测定方法赫春香;王婷婷;于浩;苏萌【期刊名称】《辽宁师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(040)002【摘要】The poly-aminobenzene sulfonic acid modified graphite electrode was prepared by electropolymerization,and it exhibited a remarkable electrocatalysis on electroreduction of Furaltadone(FTD).In phosphate buffer solution (pH 2.00),a sensitive reductive peak currents of FTD was observed at-0.230 V by differtential pulse voltammetry.The reductive peak currents were proportional to concentration of FTD in the range of1.00×10-8~1.00×10-6 and2.00×10-6~ 9.00×10-6 mol/L with a detection limit of 1.00×10-8 mol/L.The proposed method was applied in simultaneous determination of FTD in water samples.The recoveries for these samples were from 92.5% to 101.3%.The electrode reaction mechanism of FTD was studied,which showed that it was a electrochemical reduction process with 2 protons and 2 electron controlled by adsorption.%以循环伏安法电聚合制成聚对氨基苯磺酸薄膜修饰石墨电极,发现对呋喃它酮(FTD)的电化学还原有明显的电催化作用.在 pH 2.00 的磷酸盐缓冲溶液中,以微分脉冲伏安法为激发信号,FTD在-0.230 V处产生一个灵敏的还原峰,还原峰电流与浓度分别在1.00×10-8 ~1.00×10-6、2.00×10-6~9.00×10-6 mol/L范围内呈良好的线性关系,检出限为1.00×10-8 mol/L.将该方法应用于水样中目标物的测定,加标回收率为92.52%~101.3%.研究了FTD的电极反应机理,表明其在电极上发生了由吸附控制的有2质子参与的2电子转移反应.【总页数】5页(P227-231)【作者】赫春香;王婷婷;于浩;苏萌【作者单位】辽宁师范大学化学化工学院,辽宁大连 116029;辽宁师范大学化学化工学院,辽宁大连 116029;辽宁师范大学化学化工学院,辽宁大连 116029;辽宁师范大学化学化工学院,辽宁大连 116029【正文语种】中文【中图分类】O657.1【相关文献】1.基于银镜的高灵敏表面增强拉曼光谱基底制备及其用于呋喃唑酮检测 [J], 陆冬莲;韩鹤友;梁建功2.呋喃唑酮及片剂含量测定方法的改进 [J], 王昕;唐素芳3.饲料中呋喃唑酮测定方法 [J], 廖峰4.多取代的呋喃[3，4-d][1，2]噁嗪合成：金催化的2-（1-炔基）-2-烯基-1-酮与硝酮的高区域选择性和高非对映选择性的1，3-偶极环加成反应 [J],5.微分脉冲阴极溶出伏安法测定呋喃唑酮 [J], 王桂芬;毕淑云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
1 绪论1.1 研究意义呋喃类抗生素是一种具有五元环结构的有机物，其含有一个5-硝基呋喃官能团，目前普遍被人工合成用来作为抗菌药物。
呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因都属于这类药物。
作为一种广谱抗菌药, 能对多种革兰氏阳性及阴性细菌产生抑制，同时对部分真菌和原生动物也具有一定效果。
呋喃类抗生素曾被广泛应用于养殖业中。
但是硝基呋喃类药物及其残留具有很大的危害。
目前国内外都对呋喃类物质的控制相当严格。
美国颁布法规:食源性动物禁止使用呋喃唑酮和呋喃妥因。
韩国禁止呋喃唑酮等应用于生猪养殖。
欧盟则对所有肉类中硝基呋喃实施零容忍。
在我国，早在02年农业部就在《食品动物禁用兽药及其他化合物清单》中将硝基呋喃类药物禁止。
由于监管机制不健全，同时硝基呋喃的成本低廉效果较好的利益驱动，虽然我国已明文禁止此类药物在养殖业中的使用，但相关个案仍屡屡发生。
例如，06年阳澄湖大闸蟹致癌事件，就是在养殖过程中使用硝基呋喃所导致的。
欧盟也曾检出自中国进口的兔肉、鱼虾、禽肉中含有呋喃类药物残留。
由于抗生素的检出量是世贸组织规定的肉类食品贸易的重要技术参考，因此这类药物的残留将大大制约我国的肉类出口。
加强对我国肉类产品呋喃类兽药残留的检测和监控，势在必行。
为保障人民的身体健康、有效控制硝基呋喃类药物在兽肉生产中的使用和对其残留量进行监控，大力开展硝基呋喃类药物残留检测技术的研究是非常必要的。
1.2 呋喃类兽药简介呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因是常见的四种人工合成的硝基呋喃类抗菌药。
普遍呈黄色粉末状，无味或略苦，性质稳定。
其中常用的呋喃西林难溶于水(1∶4200），微溶于乙醇(1∶590)；呋喃唑酮几乎不溶于水和乙醇；呋喃妥因几乎不溶于水，微溶于乙醇。
1.2.1 呋喃唑酮呋喃唑酮，又名痢特灵，相对分子质量225.2。
呈黄色粉末状（偶尔有黄色晶体出现）。
呋喃唑酮可溶于氯仿，难溶于水和乙醇。
光照后颜色会变深，碰到碱性物质容易分解。
附件5水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测胶体金免疫层析法1范围本方法规定了水产品中硝基呋喃类代谢物快速检测方法。
本方法适用鱼肉、虾肉、蟹肉等水产品中呋喃唑酮代谢物（AOZ）、呋喃它酮代谢物（AMOZ）、呋喃西林代谢物（SEM）、呋喃妥因代谢物（AHD）的快速测定。
2原理待测样中硝基呋喃类代谢物经衍生处理后，其衍生物与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上硝基呋喃类代谢物-BSA偶联物的免疫反应，使检测线颜色变浅，通过检测线与对照线颜色深浅比较，对样品中硝基呋喃类代谢物的含量进行定性判定。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1盐酸。
3.1.2三水合磷酸氢二钾。
3.1.3氢氧化钠。
3.1.4甲醇。
3.1.5乙醇。
3.1.6乙腈。
3.1.7邻硝基苯甲醛。
3.1.8三羟甲基氨基甲烷。
3.1.9乙酸乙酯。
3.1.10正己烷。
3.1.11固相萃取柱（强阴离子交换型）：规格1mL，填装量为60mg。
3.1.12邻硝基苯甲醛溶液（10 mmol/L）:准确称取0.150g邻硝基苯甲醛，用甲醇（3.1.4）溶解并定容至100mL。
3.1.13磷酸氢二钾溶液（0.1mol/L）：准确称取22.822g三水合磷酸氢二钾（3.1.2）,用水溶解并定容至1000mL。
3.1.14氢氧化钠溶液（1mol/L）：准确称40g氢氧化钠（3.1.3）,用水溶解并稀释至1000mL。
3.1.15盐酸溶液（1 mol/L）：取10mL盐酸（3.1.1）加入到110mL水中。
3.1.16三羟甲基氨基甲烷溶液（Tris，10mmol/L）：准确称取1.211g三羟甲基氨基甲烷（3.1.8），溶于80mL水中，加入盐酸（约42mL）调pH至8.0后用水定容至1L。
3.2参考物质3.2.1硝基呋喃类代谢物参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度＞99%。
饲料中呋喃唑酮测定方法饲料中呋喃唑酮测定方法呋喃唑酮（furazolidone）又名痢特灵，是一种抗菌类物质，具有抑菌性和杀菌性，可用于防治球虫病、细菌性痢疾等畜禽疾病，还可用作治疗和预防猪、牛及家禽病的抗微生物类药物。
然而，因其在动物体内的残留，食用鱼类禁用，其他动物的使用剂量也必需严格掌握，因此对呋喃唑酮及其残留产物进行定量检测非常必要。
目前，世界上很多国家和地区对部分人药、兽药的使用及添加剂量都颁布了相应的法令和法规加以限制。
例如美国的食品和药品管理局（ＦＤＡ）规定的禁用和限用的食用动物用药包括：氯霉素、克伦特罗、己烯雌酚、硝基咪唑类物质、呋喃唑酮、硝基呋喃和一些磺胺类药物（泌乳奶牛用）等。
我国于1999年制定出《饲料和饲料添加剂管理条例实施细则》，对食用动物用药及其剂量都有明确规定。
1、呋喃唑酮的测定方法呋喃唑酮呈黄色粉末状，味苦，微溶于氯仿，不溶于水和乙醇，其分子量为225．16，熔点245－258℃。
它是由乙醇胺经缩合反应，亚硝化、环合、还原后再经缩合而制得的。
以往理论认为：呋喃唑酮是一种光敏性物质，见光易分解。
目前，在分析化学领域采用紫外分光光度分解产物进行分析，发觉仅有很小部分发生了分解；而运用质谱仪和远红外光谱仪也可证明呋喃唑酮一般较稳定，不易分解。
下面对呋喃唑酮的分析测定，就质量检测法、分光光度法和高效液相色谱法分别作一介绍。
1．1质量检测法此法是将饲料碾碎过筛后，分别用二甲基甲酸胺（DMF）试剂和乙二胺试剂进行测试。
1．1．1DMF测试放9滴DMF和1滴氢氧化钾醇溶液于白色凹盘中的3个低凹处，再将0.01g饲料试样喷洒到每个低凹处液滴上，用显微镜观看，当呋喃唑酮含量大于25mg／kg 时，会生成易于观测的亮蓝色物质。
1．1．2乙二胺测试把干滤纸放在培育皿底部，并将试样匀称地喷洒在滤纸上，再将一定量的乙二胺分布于滤纸边缘，用显微镜在10X档观测，若有深红色物质生成则为呋喃唑酮。
1设备和材料
1.1设备
1.1.1酶标仪（检测波长450 nm，参考波长630 nm）
1.1.2均质器
1.1.3天平，精度0.01 g
1.1.4旋涡振荡器
1.1.5温箱（可控温度：25℃、37℃）
1.1.6离心机
1.1.7氮吹仪
1.1.8微量移液器
1.1.9计时器
1.2 试剂
1.1.10 1 M HCl：量取8.6 mL浓盐酸，加去离子水定容至100 mL。
1.1.11N,N-二甲基甲酰胺（分析纯）
1.1.120.1 M K2HPO4：称取11.4 g K2HPO4•3H2O，加400 mL去离子水溶解并定容至500 mL。
缓冲溶液：500 mL 0.1 M K2HPO4溶液中加入100 g NaCl，充分溶解备用。
1.1.13 1 M NaOH：称取4 g NaOH，用去离子水溶解并定容至 100 mL。
1.1.14乙酸乙酯（分析纯）
1.1.15正己烷（分析纯）
2贮存
2.1.1试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻。
2.1.2未使用完的微孔板条应密封，2~8℃保存。
3注意事项
3.1.1使用试剂盒前仔细阅读说明书。
3.1.2不要使用过期试剂盒，不同批号试剂盒中的试剂不得混用。
3.1.3试剂盒使用前，将试剂盒内各组份置于实验台上，待其恢复至室温（25±2℃）（提
示：约2 h），方可使用。
3.1.4实验前，应预先开启生化培养箱调至所需温度，并检查生化培养箱温度是否正常。
3.1.5应避免使用金属类物质盛装和搅拌试剂。
3.1.6各试剂在使用前请摇匀。
3.1.7提取药物时，涡动或摇床振摇应尽量充分；加入样品稀释液后（见8.1.9和8.2.9）
应低速涡动1 min，以上操作将直接影响检测结果！！
3.1.8检测时，应尽量检测板孔上方空气流动。
3.1.9终止液中含有2 M硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
3.1.10不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。
3.1.11混合试剂时应避免出现气泡。
3.1.12使用后请立即将试剂放回2~8℃保存。
4工作液准备
4.1.150 mM邻硝基苯甲醛：向装有7
5.55 mg邻硝基苯甲醛的试剂瓶中加入10 mL N,N-
二甲基甲酰胺溶解，浓度为50 mM。
4.1.2样品稀释液：用去离子水按1:4（1份浓缩液+3份去离子水）稀释。
4.1.3洗涤工作液：用去离子水按1:20（1份浓缩液+19份去离子水）稀释。
4.1.4样品前处理
4.2组织（猪肉、鸡肉、鱼肉、虾肉）
4.2.1准确称取1±0.01 g均质后的组织样品于50 mL离心管中；
4.2.2依次加入4 mL去离子水、 0.5 mL 1 M HCl、80 μL 50 mM邻硝基苯甲醛（见
7.1），充分涡动至组织分散；
4.2.337℃温箱孵育16 h；
4.2.4依次加入5 mL缓冲溶液（见4.2.3~4.2.4）、400 μL 1 M NaOH和6 mL乙酸乙酯；
4.2.5室温（25±2℃）下，剧烈涡动1 min（或摇床300 rpm振摇 10 min）；
4.2.64000 g以上，离心10 min；
4.2.7取3 mL上清于新的离心管中；
4.2.850-60℃水浴中，氮气吹干；
4.2.9加入2 mL正己烷，充分涡动10 s，再加入1 mL样品稀释液，低速涡动1min；4.2.104000 g以上，离心5 min；
注意事项：高脂肪组织易发生乳化，可根据情况加大正己烷用量；离心后如仍有乳化现象，可于80℃水浴加热5 min，并再次离心。
4.2.11完全弃去上层正己烷及中间杂质；
4.2.12取50 μL进行检测。
4.3蜂蜜（原蜜、成品蜜）
4.3.1准确称取1±0.01 g蜂蜜样品于50 mL离心管中；
4.3.2依次加入10 mL去离子水、 0.5 mL 1 M HCl、80 μL 50 mM邻硝基苯甲醛（见
7.1），充分涡动至蜂蜜分散（注意：涡动须充分，使蜂蜜完全溶解！！）；
4.3.337℃温箱孵育16 h；
4.3.4依次加入5 mL缓冲溶液（见4.2.3~4.2.4）、400 μL 1 M NaOH和6 mL乙酸乙酯；
4.3.5室温（25±2℃）下，剧烈涡动1 min（或摇床300 rpm振摇 10 min）；
4.3.64000 g以上，离心10 min；
取3 mL上清于新的离心管中（注意：吸取时一定要小心，避免吸到下层杂质，否则将影响检测结果！！）；
4.3.750-60℃水浴中，氮气吹干；
4.3.8加入3mL正己烷，充分涡动 10 s，再加入1 mL样品稀释液，低速涡动1 min；
4.3.94000 g以上，离心5 min；
4.3.10完全弃去上层正己烷及中间杂质；
4.3.11取50 μL进行检测。
5检测
5.1.1将所需的酶标板条插入酶标板架上，未使用的酶标板条用自封袋密封后，立即保存
于2-8℃环境中，并记录下各标准品和样品的位置，建议均做平行实验；
5.1.2将50 μL各标准品工作液/样品溶液分别加入对应的标准品/样品孔中；
5.1.3在每个板孔中加入50 μL呋喃它酮代谢物酶结合物；
5.1.4盖好盖板膜，轻轻振荡酶标板 10 s，充分混匀，室温下（25± 2℃），避光反
应30 min；
5.1.5揭开盖板膜；
5.1.6倒掉板孔中液体，在每孔加入 260 μL洗涤工作液，浸泡30 s；
5.1.7再重复上一步骤3次；
5.1.8倒掉板孔中液体，将酶标板倒置于吸水纸上，拍干；
5.1.9立即在每孔中加入100 μLA、B混合液（注意：底物A液、底物B液按体积1:1
混合，必须充分混匀，混合液在5min内使用，避免使用金属盛装、搅拌试剂）；5.1.10盖好盖板膜，轻轻振荡酶标板 10 s，充分混匀，室温下（25± 2℃），避光反
应15~20 min；
5.1.11揭开盖板膜，在各板孔中加入 50 μL终止液轻轻振荡酶标板 10 s，充分混匀；
5.1.12用酶标仪在双波长450 nm、 630 nm下检测吸光度，结果在终止后5 min内读取。
6计算
6.1.1各标准品（或样品）的平均吸光度值，除以零标（浓度为0 ppb的标准品）吸光度
值，乘以100，可以得到各标准品对应的吸光度的百分比：
6.1.2
6.1.3将各标准品所得值输入半对数系统中，对应各标准品浓度可以拟合标准曲线，请参
见质检报告。
6.1.4将样品吸光度的百分比代入标准曲线，可得出样品对应的浓度，再乘以相应样品的
稀释倍数，方得样品中实际药物含量。
6.1.5按照本说明书的前处理方法，各样品稀释系数如下：
组织（猪肉、鸡肉、鱼肉、虾肉）、蜂蜜 (2)
7特异性
7.1.1呋喃它酮代谢物酶联免疫试剂盒的特异性是通过与相应的物质进行交叉反应试验
来确定的，结果如下：
呋喃西林代谢物；AOZ-呋喃唑酮代谢物；AHD-呋喃妥因代谢物。
8试剂盒参数
8.1.1本试剂盒灵敏度0.05 ppb，标准曲线范围为0.05 ppb~5.4 ppb。
8.1.2B0吸光度最佳值应大于0.8。
8.1.3试剂盒吸光度板内误差小于 5%，板间误差小于10%。
8.1.4回收率：
8.1.5组织……………………90%±30%
8.1.6蜂蜜……………………100%±30%
8.1.7样品最低检测限：
8.1.8组织（猪肉、鸡肉、鱼肉、虾肉）、蜂蜜…………………………约0.3 ppb
9分析限制
本试剂盒应用于筛查实际样品，检测若为阳性样品，应该用另一种方法如HPLC或GC/MS 加以确证。
