生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则

发布日期20050718栏目生物制品评价>>生物制品质量控制生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原标题则起草说明（之二）作者罗建辉部门正文内容审评五部生物制品室罗建辉一、有效去除/灭活病毒工艺步骤的基本标准本技术审评一般原则中将病毒的感染性滴度下降指数选定为4Log作为判断有效步骤的标准，完全是根据既往的经验及国内人用血液制品生产工艺病毒去除/灭活验证的基本要求而制定，是目前通行的惯例，未追溯其最初的来源。

鉴于病毒的感染性、致病性对敏感人群具有相似性，但对于特定的个体则可能受多种伴随因素的影响，例如年龄、性别、健康状况、暴露状况、接触的病毒量、持续暴露的时间和次数等。

因此，为安全性考虑，要求制品内不得检出感染性活病毒。

另外，对验证结果分析及验证结果的局限性给予了充分的说明，希望以此加深对试验数据和结论分析的正确理解。

在附录中给出了常用指示病毒的基本特性供选择时参考。

二、对生物原材料病毒检测及采取有效工艺步骤的基本要求由于生物组织提取制品其来源动物可以是牛、猪、羊、家兔等各种不同的动物，每种动物都有相关的病毒检疫要求，而且各种动物携带或者感染的病毒对人体的潜在危害性有所区别，难以一一列举，因此没有提出需筛查的病毒具体种类。

应结合各品种来源动物及已发现的病毒与人类感染性之间的关系综合考虑。

从源头分析看，真核细胞表达制品潜在的病毒污染主要来自于细胞自身及增殖培养过程，控制的重点在于对细胞种子和培养用动物源性添加成分的筛查以及采用有效的病毒去除/灭活工艺；而生物组织提取制品由于不经过细胞的增殖培育过程，潜在的病毒主要取决于组织原材料原有的污染程度，控制的重点在原材料的筛查及有效的病毒去除/灭活工艺步骤。

但由于目前动物来源的原材料可控性差，生产工艺又没有经过病毒去除/灭活验证，因此制品污染病毒的风险性更大。

根据上述分析，本技术审评一般原则要求：无论是动物组织原材料、细胞种子，还是动物组织原材料匀浆、细胞培养结束时的混悬液，如果已知污染了对人感染或者致病的病毒，或者检出了内源性逆转录病毒、具有种属特异性的其它污染病毒，则必须废弃该原材料并妥善处理，不能用于生产制品。

生物制品质量控制分析方法验证技术审评一般原则摘要：本文对《生物制品质量控制分析方法验证技术审评一般原则》中有关验证参数的问题进行了阐述质控分析方法的验证就是根据方法的需要测定该方法的专属性、准确性、精密度、线性、范围、检测限度、定量限度、耐用性等几个指标中的一个或几个，所以上述参数的验证是本技术审评一般原则中的核心内容。

本文拟就该部分内容进行补充说明。

1、精密度由于各种生物活性测定方法的变异均较大，所以精密度往往不太理想。

对于一些新建立的活性测定方法而言，测定结果不稳定、难以进行定量及无法准确标示等问题已成为质控中的主要问题。

针对上述情况，本技术审评一般原则拟强调，作为测定有效成分含量水平的生物活性指标，需采用定量的测定方法，并尽可能减少方法的变异。

参照国外的有关标准，对各种测定方法，提出了一般的可接受标准。

经课题研究组讨论认为，本原则中所提出的可接受标准，一般情况下均可以做到。

对于个别难以做到的，可结合制品特性及其临床效应等进行综合评估，如基本不影响到产品的安全、有效和质量可控，也可考虑适当放宽。

鉴于生物学测定方法的多样性和复杂性，本原则的正文中未对精密度测定的重复次数作明确要求。

从理论上考虑，测定次数主要取决于方法学的误差，变异大的方法应增加测定次数；从可操作性角度考虑，对于复杂、成本高及周期长的方法，重复次数太多，试验难度将很大。

所以关于验证次数的设计，需综合考虑，应以基本达到验证的目的为准则。

验证设计方案中的重复次数供参考。

2、线性线性关系一般是指检测结果与样品含量的直线相关性，而且一般情况下线性关系是定量测定的基础，所以应尽可能摸索出存在较好线性关系的测定方法并进行线性验证。

但对于某些生物活性测定方法而言，其线性范围较小（如细胞测定中呈S曲线），这时采用曲线拟合的方法应更合理。

鉴于目前曲线拟合的方法在生物活性测定中被广泛采用，所以本原则中的线性验证亦包括了有关曲线拟合的内容。

3、专属性和准确性专属性和准确性不是每个生物学测定方法都需要测定的参数，但同样重要，只是对于不同品种的不同方法应有不同的考虑，所以对于这两个参数进行了较详细的说明，并列举了一些具体情况，提请研制单位在建立方法和进行方法验证过程中能有所考虑。

[S]GPH3-1生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则药品审评中心二OO五年十二月目 录一、概述 (3)(一) 病毒安全性控制的迫切性 (3)(二) 病毒安全性技术审评基本内容和适用范围 (3)二、病毒污染的来源和控制 .................. ..4(一) 病毒污染的可能来源 (4)1 细胞种子/动物组织原材料携带的病毒 (4)2 细胞培养增殖过程中引入的病毒 (4)(二)病毒污染的控制和检测 (5)1组织原材料和种子库细胞来源动物病毒感染方面的研究资料 (5)2 严格控制生产用生物组织原材料的来源动物.53 严格生产用种子库细胞的病毒检测 (6)4 细胞培养结束时混悬液的病毒检测 (6)5动物组织原材料匀浆的病毒检测 (7)三、病毒检测方法 (8)(一) 体外法 (8)(二) 体内法 (8)(三) 动物抗体产生试验 (8)(四) 其他方法 (8)四、病毒去除/灭活验证研究及有效工艺步骤评价 (8)(一) 病毒去除/灭活验证研究 (8)1 目的和基本原则 (9)2 方法和要点 (9)3 指示病毒的选择 (10)4 人员、设施 (11)(二)病毒去除/灭活有效工艺步骤评价 (11)1 评价基本要点 (11)2 影响因素及综合分析 (12)(三)统计处理分析 (14)五、病毒安全性追踪观查 (15)六、小结 (15)七、名词解释 (17)八、参考文献 (17)九、附录 (18)生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则一、概述（一）病毒安全性控制的迫切性随着动物源性组织、细胞、体液及重组真核细胞表达制备的生物制品逐渐增多，使用的人群不断扩大，加之动物源性产品原材料质量控制未引起足够重视，生产工艺又基本没有经过严格的病毒去除/灭活效果验证。

因此，目前动物源性病毒感染人类的风险性极高，潜在医源性感染问题变的日益突出。

其中动物组织来源制品由于动物本身健康检疫状况差，不同动物携带的病毒外源因子复杂多变，可控性因素尚不确定，对人体的潜在危害性较之经过系统鉴定和严格控制的真核细胞表达制品的风险性更高。

发布日期20050718栏目生物制品评价>>生物制品质量控制关于《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一标题般原则》征求意见稿的补充说明作者罗建辉部门正文内容审评五部生物制品室罗建辉目前生物制品技术审评一般原则6个征求意见稿已在中心网站正式对外公布，生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则作为其中之一，在起草过程中经历了中心内部酝酿、专家分析讨论和课题组反复修改等不同阶段，并附带了起草说明。

但许多实际问题依然存在。

为了进一步诠释突出和重要的现实问题，正确认识和理解征求意见稿中描述的相关内容，借此机会对若干问题进行进一步补充说明。

一、病毒灭活/去除工艺验证方法开展病毒灭活/去除工艺验证是为了保证生产工艺中含有能够有效灭活/去除感染性活病毒的特定步骤，通过模拟条件的确定，为生产工艺能够表现出预期的实际效能，特别是灭活能力，提供支持依据和基础。

因此，通常采用感染性活病毒进行验证试验，并采用细胞培养和盲传的方法检测感染性病毒的存在。

虽然有许多研究报道采用浓缩灭活的病毒液和非细胞培养的替代方法反映工艺步骤对病毒的潜在去除效果，例如检测病毒抗原量、病毒核酸的定量检测、病毒颗粒的测定等，这些方法可以间接反应对于病毒去除的能力。

但由于检测的对象不是感染性活病毒本身，活病毒与病毒成分之间的定量转换对应关系比较复杂和难以确定。

因此，上述替代方法一般仅提示对于病毒可能的去除效果，但不能反映对于感染性活病毒的灭活/去除实际效能。

而病毒灭活/去除工艺验证的目的则是为了明确工艺中特定步骤的条件和参数，确保对于潜在污染病毒的实际灭活效果。

因此，在目前现实阶段需要采用细胞培养和盲传的方法，以确定对感染性活病毒的灭活/去除效果。

二、病毒灭活/去除工艺验证机构目前国家尚未指定对于组织提取或者真核细胞表达的生物制品进行病毒灭活/去除工艺验证的权威机构。

从科学方面分析，只要具备开展感染性活病毒培养、检测和安全性保障的基础设施和人员条件，能够出具真实、准确、科学检测数据并承担相应责任的研究机构都应当被承认和接纳。

指导原则编号：【S】G P T2-1预防用生物制品临床前安全性评价技术审评一般原则二零零五年十二月目录一、概述 (2)二、适用范围 (3)三、试验设计中的重点问题 (3)（一）相关动物 (3)（二）免疫毒性 (4)（三）具体问题具体分析 (4)四、研究内容 (5)（一）急性毒性试验 (5)（二）长期毒性试验 (5)（三）局部刺激性试验 (7)（四）过敏试验 (7)（五）生殖毒性试验 (8)（六）其它特殊考虑 (8)1．免疫原性试验和保护力试验 (8)2. 佐剂 (9)3．其它 (10)五、结语 (10)六、参考文献 (10)七、起草说明 (11)八、著者 (117)一、概述预防用生物制品（以下简称疫苗）系指含有抗原、能够诱导人体产生特异性主动免疫的制剂，它可以保护机体免受感染原、毒素，以及感染原引起的抗原性物质的损伤。

疫苗的安全性评价贯穿非临床试验、临床试验和上市后评价。

它包括对原辅材料、生产工艺和过程的控制、理化性质和生物学性质的检定、动物安全性评价、临床安全性评价以及上市后不良反应监测等一系列过程。

本文适用于疫苗的临床前动物安全性评价。

临床前动物安全性评价的主要目的系通过相关动物来考察疫苗的安全性，包括对免疫器官和其它毒性靶器官的影响、毒性的可逆性，以及与临床相关的参数，预测其在大规模人群中使用时可能出现的不良反应，降低临床试验受试者和临床使用者承担的风险，并为临床试验方案的制订提供依据。

疫苗可能导致的毒性反应主要包括：制品成分本身作为毒性物质对机体的直接损伤、诱导免疫系统引起的与免疫相关的毒性，以及污染物和残余杂质引起的毒性。

由于疫苗系通过诱导免疫系统产生抗体及/或效应T细胞发挥作用，因此其最主要的潜在毒性来自与免疫系统相关的毒性，常规药物安全性评价的方法并不完全适用于疫苗。

本文仅代表目前对疫苗安全性评价的基本认识，其中的内容并不完全是注册申请人进行开发时必须完成的内容，仅作为技术审评的一般原则。

20070914栏目生物制品评价>>生物制品技术审评一般原则标题重组制品生产用哺乳动物细胞质量控制技术评价一般原则作者审评五部部门正文内容一、前言对于结构复杂、带有糖基化修饰基团的抗体、凝血因子、酶、激素等生物大分子，通常需要借助哺乳动物细胞才能正确表达和修饰成与预期生物活性相同的重组制品。

随着生物工程技术的进步和发展，目前这些细胞应用不断增多。

在宿主细胞选择、重组工程细胞构建以及生产细胞的培养扩增和监控过程中，不仅要关注细胞的适用性、目的产物表达生产能力，同时还应当重视伴随细胞培养产生的内源性病毒、宿主细胞残余蛋白和DNA、致肿瘤成分等潜在的风险性因素对重组产品带来的安全性影响，在早期研究阶段，同步开展库细胞、生产培养过程细胞、生产终末细胞的全面检定和控制以及病毒和/或致瘤性成分的去除/灭活工艺的验证。

（一）目的和意义经过全面检测的种子细胞是实现重组基因工程产品生产的前提和基础，使生产用种子细胞具有共同的始祖细胞，保持相同的遗传和生物学特征，在特定的培养环境和条件下持续稳定表达携带的外源目的基因；经过研究确定细胞在扩增培养和生产过程中的变化，才能够有效控制风险性因素，满足生产的持续需求，使产品质量保持一致。

本技术评价一般原则重在阐述重组制品生产用哺乳动物细胞质量控制的基本内容和相关要求，以期引导开展全面完整的细胞质量试验研究、生产细胞培养工艺验证，建立系统规范的重组工程细胞库及实现生产过程细胞质量的有效监控。

（二）适用范围本技术评价一般原则适用于生产治疗用重组制品的哺乳动物细胞，不包括细菌、酵母等重组工程菌，也不包括治疗用体细胞、疫苗生产用细胞基质、杂交瘤细胞等。

相关内容可参见国家局已颁布的指导原则和药品审评中心公布的药品技术评价一般原则，重组制品生产用哺乳动物细胞亦须符合这些已有文件的相关要求。

（三）局限性本技术评价一般原则主要结合目前对于重组工程细胞结构、功能，细胞致瘤性和内源性病毒对重组产品带来的风险及微生物污染因子的危害性共识，提出技术审评关注的重点问题和基本原则，需要结合具体细胞和实际培养控制条件考虑和选择。

新药研究指导原则汇总——总目录2010。

7。

23注释:1。

本汇总包括已经颁布和正在起草征求意见的化药、中药、天然药物及生物制品研究的指导原则、评审一般原则及技术标准/技术要求.2.每条指导原则的状态标注于指导原则标题后.[2005 颁布］表示该指导原则或者审评原则是2005年颁布的，[2008 化药］表示该化药技术标准/技术要求是2008年发行的。

3.红色字体的指导原则已经汇总整理到《指导原则具体内容.doc》里。

蓝色的尚未整理。

4.此目录和《指导原则具体内容.doc》里每条原则对应的编号一致.1.化药1.1临床前研究1.1。

1药学1。

1。

1.1化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则［2005颁布]1.1。

1.2化学药物原料药制备和结构确证研究技术指导原则［2005 颁布] 1.1。

1。

3化学药物杂质研究技术指导原则［2005颁布］1。

1.1。

4化学药物残留溶剂研究技术指导原则[2005颁布］1。

1.1。

5化学药物稳定性研究技术指导原则［2005颁布]1.1。

1.6化学药物制剂研究技术指导原则 [2005颁布]1。

1.1.7化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则［2005颁布］1.1。

1。

8合成多肽药物药学研究技术指导原则［2007颁布]1。

11.9化学药物口服缓释制剂药学研究技术指导原则[2007颁布]1.1.1。

10吸入制剂质量控制研究技术指导原则 [2007颁布］1。

1.1.11化学药品技术标准［2008化药]1.1。

1.12多组分生化药技术标准［2008化药］1。

1.1.13化药药品研究资料及图谱真实性问题判定标准[2008化药]1。

1.1。

14化学药品注射剂基本技术要求（试行）［2008化药］1。

1.1。

15多组分生化药注射剂基本技术要求（试行）[2008化药］1。

1.2毒理学1。

1。

2。

1化学药物急性毒性试验技术指导原则[2005颁布］1。

1.2。

2化学药物长期毒性试验技术指导原则［2005颁布]1.1。

【S】GPH1-1生物制品质量控制分析方法验证技术审评一般原则药品审评中心2005 年12 月目录一、概述………………………………………………………….。

2二、生物学测定常用方法.。

………………………………………。

3三、方法的来源（种类) (4)四、分析方法 (5)五、分析方法的验证…………………………………………….。

7（一）专属性(二）准确性（三）精密度（四）线性(五）范围（六)耐用性（七）检测限度（八)定量限度六、综合分析……………………………………………………..。

13七、名词解释……………………………………………………。

13八、参考文献……………………………………………………。

14九、附录（推荐的验证方案）…………………………………。

. 15十、起草说明…………………………………………………….。

16十一、著者…………………………………………………….。

21一、概述质控分析方法验证就是证明采用的方法适合于相应检测要求，具有相当的准确性和可靠性，进而可以达到控制产品质量的目的.只有经过验证的分析方法才能用于控制产品质量，因此方法验证是制定质量标准的基础.一般情况下,需验证的分析项目有：鉴别试验、杂质检查、原液或制剂中有效成分的含量测定及生物活性测定。

其它质控方法，如必要时也应加以验证。

生物制品质控中采用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法.生物制品的理化分析方法验证原则与化学药品基本相同，可参照《化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》进行，同时需结合生物制品的特点考虑。

本技术审评一般原则主要针对生物学测定方法的验证进行讨论.生物学测定方法可广泛用于各种检测目的，包括鉴别、生物活性和杂质检测等,其中最主要的是生物活性（或效价、效力）测定。

相对于理化分析方法而言，生物学测定具有更大的可变性，一般要使用动物、细胞或生物分子,因此对于生物学测定的判断标准可适当灵活掌握，但是对于定量测定方法应尽可能减少方法的变异,验证的结果仍应能证明该方法具有相当的准确性和可靠性,并应以能够有效控制产品质量为基本标准。

动物来源的药用辅料质量应基于全过程的质量控制文/洪小栩一、药用辅料的概念《中国药典》规定，药用辅料生产药品和调配处方时使用的赋形剂和附加剂作为非活性物质。

药用辅料除了充当载体、提高稳定性外，还具有增溶、缓控释等重要功能。

《美国药典》《欧洲药典》以及国际药用辅料协会（IPEC）则将药物活性成分制备成药物制剂的非药物活性成分，除活性成分以外的所有成分均纳入药用辅料范畴。

国际上药用辅料概念上涵盖了除活性成分以外的所有成分，在一定程度上，相对弱化了药用辅料的界限，扩大了辅料的范畴。

意味着无论在制剂过程中使用，还是其他生产加工阶段使用的制剂或物质成分，制剂生产企业都应根据其风险程度，遵循相应的管理制度和技术规范。

我国当前实施的关联审评审批制度，取消药用辅料单独注册，是逐步向基于风险管理理念，以制剂企业为责任主体的管理体制转变。

二、药用辅料的分类药用辅料可按来源、用途、用于制备的剂型、给药途径分类。

常用的分类方式是按其用途分类，包括助溶剂、乳化剂、着色剂、崩解剂、填充剂、稳定剂等。

按来源性质分类分为天然物、半合成和全合成物，天然物按其来源分为动物来源、植物来源和矿物质来源的药用辅料。

2015年版《中国药典》收载药用辅料标准270个，动物来源辅料14个，约占总量的5 %（见表1）。

尽管动物来源辅料占比不高，但对于制剂的安全性和有效性至关重要。

China Food & Drug Administration Magazine 表1 《中国药典》2015年版收载动物来源的药用辅料三、动物来源药用辅料面临的问题动物来源的辅料不同于化工合成辅料，由于其来源和制备工艺复杂性，给质量控制带来很大挑战，主要体现在：一是来源多样。

不同地域、不同种属，甚至不同种群的同一物种，制备材料的来源存在一定差异；二是成分复杂。

动物来源药用辅料通常为多组分制品，成分复杂，稳定性差，组分分离、批件控制难度较大；三是动物影响因素较多。