微生物 肠杆菌科

实验三：肠杆菌科的检验一、接种细菌：MAC培养基接种大肠埃希菌和变形杆菌，SS培养基接种福氏志贺菌和乙型副伤寒沙门菌，采用分区划线法，放在35℃温箱中培养18—24h。

二、观察肠道杆菌在MAC和SS平板上的菌落形态。

1、SS平板：1）福氏志贺菌形成无色、半透明、光滑、湿润、突起、直径为1—2mm大小的菌落；2）乙型副伤寒沙门菌为中心带黑褐色，其余部分为半透明、光滑、湿润、突起的小菌落2、MAC平板：1）大肠埃希菌形成红色、圆形、凸起、边缘整齐、多数为光滑型的菌落。

中等大小。

2）变形杆菌为圆形、扁平、无色、半透明的菌落。

三、涂片、革兰染色将玻片分为四个区域，并分别标记，将四种肠道杆菌分别在四个区域内的生理盐水中研磨，待其自然干燥后固定，采用“改良快速法”进行染色，结果如图所示：福氏志贺菌乙型副伤寒沙门菌变形杆菌大肠埃希菌G-杆菌G-直杆菌，较细长G- 杆菌G-直短杆状显微镜检查特征为革兰阴性杆菌，肠杆菌科多数细菌的形态及染色性相似，根据形态及染色性难以相互鉴别。

四、生化试验：1、氧化酶试验（纸片法）：在滤纸条上滴一滴氧化酶试剂，用无菌接种环挑取待测菌落在滤纸条上滴了试剂的部位研磨，；滤纸变为红色则为阳性，不变色为阴性，结果表明，以上四种肠道杆菌的氧化酶试验均为阴性。

2、接种KIA、MIU上。

五、2、微量生化：六、沙门菌、志贺菌的血清学鉴定：1、在洁净载玻片上两端分别滴加一滴志贺菌四种多价血清和福氏四价血清，各取一环志贺菌在两种血清上研磨10S，观察两组结果均出现肉眼可见的凝集物，提示该菌为福氏志贺菌。

2、采用同上方法，在洁净玻片上分别在其两端滴加一滴沙门菌多价O（A—F）和Hd血清，各取一环待测菌与之混合，研磨10S，几分钟后观察两组结果，出现肉眼可见的颗粒状凝聚物表示该菌为乙型副伤寒沙门菌。

七、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。

肠杆菌科细菌归纳总结肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类常见的革兰氏阴性菌，它包括了许多与人类和动物相关的致病菌，同时也包括了许多与环境和食品卫生相关的菌株。

肠杆菌科细菌的特点是在普通培养基上能够产生气体，并且在革兰染色中呈现棒状。

1. 肠杆菌属（Enterobacter）肠杆菌属是肠杆菌科中的一个重要属，常见的菌株包括粪肠杆菌（Enterobacter cloacae）和黄色肠杆菌（Enterobacter aerogenes）等。

这些菌株广泛存在于土壤、水体以及人及动物的肠道中，有些种类具备耐药性，并且可能引发医院感染。

2. 大肠杆菌属（Escherichia）大肠杆菌属是肠杆菌科中的另一个重要属，其中最著名的是大肠杆菌（Escherichia coli），它一般存在于人和动物的肠道中。

大肠杆菌是一种常见的致病菌，可以引起腹泻、尿路感染等疾病。

此外，某些大肠杆菌菌株还产生毒素，如致命的肠毒性大肠杆菌产生的毒素可以引起严重的食物中毒。

3. 鲍曼不动杆菌属（Klebsiella）鲍曼不动杆菌属是肠杆菌科中的另一个重要属，常见的菌株包括肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）等。

这类菌株是常见的医院感染病原菌，可以引起肺炎、尿路感染以及败血症等严重疾病。

而产超强粘多糖的黏质性肺炎克雷伯菌更是具有高度的传染性和致病性，是医疗环境中的重要威胁之一。

4. 沙门氏菌属（Salmonella）沙门氏菌属是肠杆菌科中的一类重要致病菌，它包括众多血清型，其中一些血清型可以引起食物中毒和沙门氏菌感染。

这些菌株主要存在于动物及其产品中，比如家禽、牛奶和蛋等。

如果不注意食品的卫生状况，摄入被污染的食物可能导致人体感染引起胃肠炎等症状。

5. 艰难梭菌属（Clostridium）虽然肠杆菌科主要是指肠道相关的菌属，但在其中也包括一些与人体肠道无关或者少数与肠道关联不紧密的菌株。

艰难梭菌属是其中之一，该属的细菌广泛存在于土壤和水体中。

微生物检验-肠杆菌科笔记一、共性(一)【形态染色】●G –中等大小杆菌或球杆菌●多数有鞭毛，有动力，除“三个半”：克雷伯菌、志贺菌、鼠疫、小肠耶氏菌●小肠耶尔森菌25℃阳性, 35℃阴性●少数有荚膜，无芽胞●动力：志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌阴性（无鞭毛）(二)【培养】●兼性厌氧●营养要求不高，普通培养基或麦康凯均能生长●常用选择培养基或鉴别培养基双糖铁琼脂（红－黄－黑）（乳糖、葡萄糖）上层红色原因：发酵糖类和分解蛋白胨产生的胺中和了。

●麦康凯（红－无色））（乳糖）红色表示发酵乳糖产酸 S●S琼脂（红－无色－黑）（乳糖）柠檬酸铁产黑(三)生化反应※●1.发酵葡萄糖●2.氧化酶－（邻单胞菌除外）●3.触酶＋●4.硝酸盐还原试验＋●吲哚阳性：大肠、爱德华菌属、摩根菌属、邻单胞菌属、普通变形杆菌、普罗威登斯菌属大爱魔林普阳气呼呼（产气，弧菌+）●H2S阳性：沙门菌属、变形杆菌属、弗劳地枸橼酸杆菌、爱德华菌属老刘爱杀蝙蝠●VP阳性（葡萄糖酸盐）：克雷伯菌属、哈夫尼亚菌属、肠杆菌属、沙雷菌属让VIP客人赴长沙●尿酶阳性：摩根菌属、克雷伯菌属、变形杆菌属（摸个遍）●甲基红阴性：肠杆菌属、克雷伯菌属（抢客人）(四)致病●侵袭力：K（Vi）抗原：保护菌毛：粘附、侵袭肠粘膜●内毒素：毒性部位在类脂A，所有革兰阴性杆菌产生的内毒素一样，引起如发热、休克、DIC等。

●肠毒素（外毒素）：大肠、志贺、鼠疫耶尔森二、埃希菌属(一)【概述】正常菌群，可以合成人类不能合成的微生物，例如B1、B2(二)【形态特征】革兰阴性短杆菌，不规则排列，有鞭毛、菌毛、有些有荚膜(三)【培养特性】兼性厌氧●在普通营养琼脂上生长良好，形成较大的圆形、光滑、湿润、灰白色的菌落，有特殊气味。

●麦康凯和SS琼脂平板发酵乳糖形成红色菌落(四)【生化反应】●发酵多种糖产酸产气●在克氏铁琼脂（KIA）上斜面和底层均产酸、产气，●H2S阴性（AA+-）●吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐（IMVC）等4个试验的结果为++--●在动力、吲哚、脲酶（MIU）结果为++-(五)【ESBL超广谱β内酰胺酶（耐药）】三、沙门菌属(一)【概述】人类食物中毒的主要病原之一。

肠杆菌科及检验● 考点概述概念；命名与分类原则；共同特点；自然与人体内的分布；微生物学检查方法；临床意义。

埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属及其他肠杆菌科细菌。

生物学性状；微生物学检验；临床意义。

【内容讲解】一、概述（共性）肠杆菌科是由多个菌属组成，G-杆菌，生物学性状相似。

大多数肠道杆菌属于正常菌群。

当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时成为条件致病菌而引起疾病。

部分为致病性细菌。

（一）分类肠杆菌科细菌的种类繁多。

主要根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。

根据《伯杰系统细菌学手册》（1984年）将肠杆菌科的细菌分为20个属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威登斯菌属、变形杆菌属、摩根菌属、耶尔森菌属等。

（二）生物学特性1.形态与染色G-，杆菌，大小为（1.0～6.0）μm×（0.3～1.0）μm。

多数有周鞭毛（除志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。

2.培养需氧或兼性厌氧；营养要求不高；普皿和麦康凯培养基：中等大小、表面光滑的菌落；液体培养基：混浊生长。

3.生化反应发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形杆菌）。

触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为亚硝酸盐。

4.抗原构造表面抗原（如Vi抗原、K抗原）：包绕在O抗原外的不耐热的多糖抗原，可阻断O抗原与相应抗体之间的反应，加热处理能破坏其阻断作用。

5.变异菌落S～R变异鞭毛H～O变异耐药性变异生化反应性质的改变6.抵抗力不强。

加热60℃，30分钟即被杀死。

不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。

对低温有耐受力，能耐胆盐。

7.肠杆菌科的初步分类（三）致病性1.致病性肠道杆菌：以肠内感染为主，腹泻为共显症状，引起急慢性肠道感染、食物中毒、旅游者腹泻及肠热症等。

2.条件致病菌：为医院感染主要病原菌，出现移位感染。

[医学微生物学]肠杆菌科概述肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是杆状革兰氏阴性菌的一种。

这一科菌是许多病原菌的重要成员，包括沙门氏菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌和致病性鲍曼不动杆菌等。

肠杆菌科菌还可以在医院感染中发挥重要作用。

从肠杆菌科中分离出的细菌通常具有类似的表型和基因组学，其中包括特殊的粘附因子和毒素。

肠杆菌科菌是通常生活在动物和人体内肠道内的一类细菌。

一个人的肠内生态系统通常由自身宿主免疫系统和居住在肠道内的微生物组成。

肠内微生物群落（肠道菌群）是肠道内大约400种细菌群落的总称。

大肠杆菌和其他肠道菌株是正常肠道菌群的重要成分，它们可以分解食物并生成维生素和其他重要物质，同时还可以抑制潜在的病原体。

分类肠杆菌科菌包括24个属和近200种细菌，其中大多数为人和动物病原体。

这些属包括：Escherichia、Salmonella、Klebsiella、Citrobacter、Erwinia、Enterobacter、Hafnia、Morganella、Proteus、Providencia、Serratia、Shigella、Yersinia等。

这些菌株的生态系统是复杂的，各种菌株之间存在交互作用。

许多肠杆菌属菌株都是优良的益生菌，可以帮助人体对抗潜在的病原菌，从而保持身体健康。

另一方面，有些菌株也可能是病原体，可以引起感染和疾病。

特征肠杆菌科菌通常是革兰氏阴性的、非芽孢形成的杆状菌，一般具有以下特征：•具有胞内和胞外的纤毛；•有专门的表面粘附结构，如菌毛和赖氨酸胶囊；•具有多种代谢途径和酶的活性，包括糖、酒精、氨基酸、脂肪酸等代谢途径；•能够在不同的环境中生长，包括温度、pH值、氧气含量等不同的生理条件；•可以产生多种毒素和酶，包括肠毒素、细胞外蛋白酶和溶血素等。

病原性与疾病许多肠杆菌科菌株都是潜在的病原体，其中一些可以引起严重的疾病。

各个菌属所引起的病症、感染路径和病原生物学特征都不一样，但都具有类似的生理和生化特征。

格兰阴性杆菌肠杆菌科：共同特点大肠埃希菌沙门菌属志贺菌属克雷伯菌属沙雷菌属变形杆菌属耶尔森菌属形态结构1）格兰阴性杆菌；2）中等大小；3）无芽孢，多数有周边毛，少数有荚膜1)格兰阴性短杆菌2)有周鞭毛、菌毛，某些菌株有微荚膜1）格兰阴性杆菌2）有菌毛，周鞭毛，无荚膜1）格兰阴性杆菌2）无鞭毛，无荚膜，多数有菌毛1）格兰阴性2）卵圆或球杆状，常成双排列3）有明显荚膜，无芽孢，无鞭毛，有菌毛1）格兰阴性小杆菌2）粘质沙雷菌是细菌中最小者，可用于检查除菌滤器的除菌效果（最大炭疽）3）周鞭毛，除臭味沙雷菌外均无荚膜，无芽孢格兰阴性杆菌，呈多形性，周鞭毛格兰阴性球杆状，偶有两级染色，无荚膜，22~25度有周边毛，35度无鞭毛（鼠疫耶尔森无鞭毛）培养特征1）需氧或兼性厌氧；2）营养要求不高；3）选择性培养基：麦康凯（Mac.C），S.S,伊红-美兰（EMB）1）兼性厌氧2）营养要求不高3）在普通琼脂和血琼脂平板生长良好，菌落呈圆形、湿润、灰白色、、、4）在肠道培养基上能发酵乳糖产酸1）兼性需氧2）营养要求不高；3）在SS、Mac等选择鉴别培养基上形成中等大小无色半透明的S型菌落1）兼性厌氧2）营养要求不高，能在普通培养基上生长，中等大小，半透明的光滑型菌落3）在肠道杆菌选择培养基上形成不分解乳糖的菌落(宋内氏菌除外，它迟缓分解乳糖）1）在血琼脂上菌落呈圆形、凸起、灰白、不溶血。

光亮的大而粘液菌落，相邻菌落易于融合，呈粘液状，用接种环可拉起长丝（拉丝实验）2）在MAC上多数形成发酵乳糖产酸的红色菌落室温下可产生脂溶性或水溶性色素，菌落呈粉红色，红色1，点种在营养/血琼脂培养基上可迅速生长弥漫成同心圆形波纹状薄膜，布满培养基表面，称迁徙生长。

可悲胆盐，式碳酸，苯酚等抑制。

2）在肠道选择鉴别培养基上形成无色透明，乳糖不发酵的菌落，产硫化氢的菌落在SS上菌落中心呈黑色1）最适温度20~28,4度能生长+2）在肠道培养基（如MAC）呈无色，半透明，较小的不发酵乳糖型菌落生化反应+ 1）活泼，能分解多种糖；葡萄糖，O/F F2）氧化酶（-）1）氧化酶阴性，硝酸盐还原阳性2)活泼，能分解多种糖产气；分1）分解葡萄糖产酸，多数产气2）不分解乳糖3）H2S(+) 赖/鸟1）分解葡萄糖，产酸不产气2）不分解乳糖，宋内氏志贺菌能1）葡萄糖酸盐阳性，本病氨酸脱羧酶阴性2）分解葡萄糖1）葡萄糖酸盐阳性，苯丙氨酸脱羧酶阴性2）分解葡萄糖1）苯丙氨酸脱羧酶阳性，葡萄糖酸盐阴性2）H2S阳，乳糖1）生化反应特征不稳定，分解葡萄糖产酸不产气触酶实验（+）3）都能够还原硝酸盐为亚硝酸盐4）致病菌多不分解乳糖，非致病菌多分解乳糖解乳糖3)H2S（-）尿素酶（-）4)IMViC:++——5)MIU：++—6)KIA：AA+—氨酸脱羧（+）4）吲哚（—）尿素酶（—）5）枸橼酸盐利用：多数（+）（伤寒阴性）IMViC:-+-+迟缓发酵乳糖3）H2S（-）吲哚（-/+）来氨酸脱羧（-）4）尿素酶（-）枸橼酸盐利用（-）5）4种志贺菌生化鉴别见下表产气，乳糖（+/-）脲酶（+）VP（+）3）吲哚（-）鸟氨酸脱羧（-）4）KIA:AA+-5）MIViC：--++产气，不分解乳糖（但因本身产色素，也成红色），DNA酶阳性（与其他菌鉴别）3）鸟氨酸与赖氨酸脱羧酶，明胶酶，酯酶阳性4）H2S阴性，MIViC：--++5）阳，能迅速分解尿素2）H2S阴，乳糖阴3）脲酶多阳性，鸟氨酸脱羧酶阳4）VP试验22~25度阳性，35~37度阴性抗原结构1）O抗原;菌体抗原2）H抗原;鞭毛抗原3）表面抗原1）O抗原：细胞壁LPS，耐热，血清学分型基础2）H抗原:不耐热蛋白抗原3）K抗原：表面抗原，不是每种菌株都有K抗原，分LAB三类，致病性大肠埃希菌的K抗原主要为B类1)O抗原:每个沙门菌的血清型含一种或多种O抗原，凡含有相同抗原组分的归位一个组。

《医学微生物学》第10章肠杆菌科练习题及答案【知识要点】1.掌握：（1）大肠埃希菌的生物学性状、致病性。

（2）志贺菌的生物学性状、致病性、微生物学检查法原则。

（3）沙门菌的生物学性状、致病性、微生物学检查法原则；血清学诊断和肥达试验。

2. 熟悉：（1）大肠埃希菌的微生物学检查法及防治原则。

（2）志贺菌和沙门菌感染的防治原则；3.了解：（1）大肠埃希菌在卫生细菌学检查中的意义。

（2）志贺菌感染的免疫性；（3）沙门菌的分类及其感染的免疫性；（4）其他菌属的致病性。

【课程内容】第一节埃希菌属一、生物学性状（一）形态与染色（二）培养特性（三）生化反应（四）抗原结构（五）分类（六）抵抗力二、致病性与免疫性（一）致病物质（二）所致疾病三、微生物学检查法（一）临床标本的检查（二）卫生细菌学检查四、防治原则。

第二节志贺菌属一、生物学性状（一）形态与染色（二）培养特性（三）生化反应（四）抗原结构及分群（五）抵抗力二、致病性和免疫性（一）致病物（二）所致疾病（三）免疫性三、微生物学检查法（一）标本（二）分离培养与鉴定（三）毒力试验（四）快速诊断法四、防治原则第三节沙门菌属一、生物学性状（一）形态与染色（二）生化反应与培养特性（三）抗原结构（四）抵抗力二、致病性和免疫性（一）致病物质（二）所致疾病（三）免疫性三、微生物学检查法（一）标本（二）分离培养与鉴定（三）血清学诊断（四）伤寒带菌者的检出四、防治原则第四节其他菌属一、雷伯菌属二、变形杆菌属三、肠杆菌属四、沙雷菌属五、枸橼酸杆菌属六、莫根菌属【应试习题】一、名词解释1．肠热症2．肥达试验（Widal test）3．Vi抗原4．S-R变异5．人致病性大肠埃希菌定居因子6．S.S培养基二、填空题1．肠杆菌科细菌是一大群生物学性状相似的革兰染色____杆菌，常寄居在人和动物的肠道内。

2．大多数肠杆菌科细菌是______菌群的成员，在特定条件下也可引起疾病，故称为______。

肠杆菌科其他菌属的微生物学检验肠杆菌科除上述主要对人致病的菌属外，还有克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属等，为条件致病菌，在临床上感染性疾病中较常见。

1 克雷伯菌属克雷伯菌属主要包括肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌等，为条件致病菌，临床上感染性疾病中以肺炎克雷伯菌多见。

肺炎克雷伯菌包括肺炎亚种、臭鼻亚种和鼻硬结亚种。

1.1微生物学检验：克雷伯菌检验程序可按肠杆菌科细菌进行检验。

据不同疾病采集不同标本，如血液、痰、脓汁、尿液、脑脊液、胸水和腹水等。

取痰、脓汁、尿液、脑脊液、胸水、腹水标本，离心后将沉淀物涂片做革兰染色镜检，可见革兰阴性球杆菌，有明显的荚膜。

血液标本或穿刺液标本接种于肉汤培养基增菌培养，其他标本接种于血平板和MAC平板。

35℃孵育18～24 h，取血平板上灰白色大而黏稠的菌落和 MAC上乳糖不发酵型黏液菌落，作进一步鉴定。

菌落性状、形态染色特性符合克雷伯菌的特点，氧化酶阴性、硝酸盐还原阳性，在KIA试验斜面产酸、底层产酸产气、H2S阴性，MIU试验为－－+／－，V－P试验为阳性，可初步鉴定为克雷伯菌。

然后可进一步进行生化反应鉴定到种和亚种，并结合荚膜肿胀试验进行鉴别。

1.2生物学性状：形态与染色：克雷伯菌为革兰阴性杆菌，卵圆形或球杆状，常成双排列，有菌毛；无芽胞，无鞭毛。

有明显的荚膜，荚膜肿胀试验是本属菌与其他类似菌的主要鉴别方法；培养特性：克雷伯菌兼性厌氧，营养要求不高，在血平板上形成较大凸起、灰白色、不透明、不溶血、黏液型菌落，用接种环挑起时可出现拉丝现象。

在肠道选择培养基上，可发酵乳糖产酸，形成较大的有色黏稠菌落。

在液体培养基中呈混浊型生长，可见菌膜和黏性沉淀物。

生化反应：克雷伯菌IMViC试验结果为－－++，脲酶、ONPG、丙二酸盐、黏质酸盐试验呈阳性。

1.3临床意义克雷伯菌是医院感染中常见的条件致病菌，以肺炎克雷伯菌感染较多见。

肺炎克雷伯菌可引起典型的原发性肺炎，也可引起肺外感染，如肠炎、婴儿脑膜炎、菌血症、泌尿系统感染等。