细菌的人工培养方法及意义(平板划线)

平板划线分离_实验六平板划线法分离菌种平板划线法分离菌种一、实验目的1、了解平板划线法分离菌种的基本原理2、练习平板划线法分离菌种的基本操作，掌握无菌操作技术二、实验原理平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。

一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。

通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。

实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，特别是在菌种鉴定等工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。

平板划线分离对细菌、酵母菌较为适宜，而霉菌和放线菌的分离多采用稀释分离法进行菌种的分离纯化。

具体的划线形式有多种，这里仅介绍一种经过长期并证明可获得良好实验效果的方法：将一个平板分成A、B、C、D4个面积不同的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离菌的菌源区，B和C区为经初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。

由此可知，这4个区的面积安排应做到DCBA。

鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。

这样的培养基称之为鉴别培养基。

例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。

（参考GB4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数）其配方中含有乳糖、伊红和美蓝，用以鉴别肠道病原菌及其他杂菌。

伊红、美蓝作为指示剂，伊红系酸性染料，当大肠埃希氏菌或产气肠杆菌分解乳糖产酸时，由于细菌带正电荷，所以被伊红着色。

在大肠埃希氏菌中因为伊红与美蓝结合，所以菌落不呈红色，而是蓝紫黑色，且具有绿色金属光泽；菌落呈棕色者为产气肠杆菌；不分解乳糖的肠道病原菌则不着色，有时因产生碱性物质较多，细菌带负电荷，被美蓝着色后，菌落并不呈蓝色，因美蓝与伊红结合，所以菌落为淡紫色。

细菌的人工培养方法[适用对象]生物工程专业[实验学时] 4学时一、实验目的了解常用的液体、固体和半固体培养基的成分、制备方法和用途。

初步掌握各种培养基接种技术；观察细菌在培养基中的生长现象；认识菌落、菌苔。

二、实验原理培养基是用人工方法将微生物生长繁殖所需的多种营养物质调配在一起，形成的一种营养物质的混合物，用以分离、传代和培养细菌。

按培养基的用途分为基础（普通）培养基、营养培养基、鉴别培养基，选择培养基、厌氧培养基等。

按培养基的物理形状又分为液体、固体和半固体三种。

三、仪器设备三角烧瓶、天平、试管、平皿、高压消毒灭菌器。

四、相关知识点培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

在自然界，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多。

但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、无机盐、生长因子等。

不同的微生物在固体、半固体和液体培养基中能表现出各自特有的培养特征，这些特征可以作为不同种类微生物的鉴别特征之一。

了解它们的培养特征、掌握其生长规律对识别、控制和利用微生物具有重要价值。

五、实验步骤（一）常用培养基的制备1、普通液体培养基(1)将新鲜的精牛肉除去脂肪和筋膜制成肉馅，取500克牛肉馅加l000ml蒸馏水，置4℃冰箱浸泡过夜，使牛肉中的水溶性营养物质充分浸出。

(2)次日将浸泡过夜的牛肉馅加热煮沸30分钟，放凉，使残余的脂肪凝固，然后用纱布和滤纸过滤，最后将滤液补足为原量，此种液体为牛肉浸汁。

(3)取1 000ml牛肉浸汁加蛋白胨10克，氯化钠5克加热溶解，冷至50℃左右时用氢氧化钠调整pH至7．6，再煮沸10分钟(因牛肉浸汁中部分碳水化合物，经加热破坏产酸，影响pH；产生多磷酸盐，培养基不澄清)待冷却后，再调整pH至7．6，然后以滤纸过滤，滤液必须澄清，此种液体称为肉汤培养基。

(4)将肉汤培养基分装于试管或三角烧瓶中，塞好试管和瓶塞，包装好后，用15磅(121℃)蒸气15～30分钟灭菌。

平面划线法接种法的实验总结1、操作前准备：将接种环2支，酒精灯2个，打火机2个，无菌平板两包，酒精棉球2瓶，镊子2个，洁净烧杯2个置于超净工作台，打开紫外灯，灭菌30分钟。

取待纯化菌种2支放入超净工作台。

操作者直立坐于操作台前，打开操作台玻璃，高度可供双手顺利出入即可。

2、擦拭：用镊子取酒精棉球擦拭双手，在超净工作台门口处，并将台面擦出与肩同宽的正方形区域，此区域即为操作区域。

将用毕的棉球放入烧杯中。

3、物品摆放：将酒精灯放于擦拭区域的中心，将接种环放于酒精灯的右侧，将菌种放于酒精灯的左侧，将无菌平板的包装除去，包装置于操作区外，无菌平板置于酒精灯左侧。

4、点燃酒精灯：打开酒精灯盖，将盖扣于离开操作区的台面上，点燃酒精灯，酒精灯周围3-5cm之内即为无菌区。

5、灼烧接种环：右手持接种环，将接种环的金属丝直立于酒精灯外焰处，灼烧至红透，然后略倾斜接种环，灼烧金属杆，注意灼烧时要将金属丝与金属杆的连接部分充分灼烧。

6、取菌种：左手持斜面的底部，将管口置于火焰的无菌区，右手小指打开试管塞，将接种环的接种丝放于外焰处再次灼烧至红透，然后将其深入试管内部，稍微凉一下，轻轻取一环，勿划破培养基，将接种环从试管中取出，注意取时勿碰触试管壁。

将试管塞灼烧一圈，塞于试管上。

因试管口一直在火焰的外焰处，故其温度较高，塞试管塞时注意勿烫手。

7、接种：左手取无菌平板一个，用拇指和食指控制皿盖，其余几指控制皿底，打开皿盖，使开口角小于30°，将接种环上的菌种按图示进行划线，一区法要求连续划线，且线的边缘应划至培养皿的内缘，线要紧密但不相连。

三区或四区法要求每划完一区，都应灼烧接种环，后一区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭在一起。

8、培养：将接种完毕的平板放于28℃恒温培养箱中倒置培养72小时。

9、整理台面：操作完毕后，将实验所需的物品放回原处，并将实验所产生的垃圾清理干净，带出超净台，放于垃圾桶中。

10、结果观察：72小时后，观察平板，应无杂菌污染，若菌种不在划线的线上则为杂菌；线应为直的，且每一线都接近平板边缘，平行的线和线之间要紧密，但不能搭在一起；要有较多的单菌落，至少应有10个以上的单菌落方为合格。

微生物培养与分离方法大多数细菌均可以通过人工方法培养，而衣原体和病毒的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊细胞株及动物接种。

只有将微生物培养出来才能对它进行研究、鉴定和应用。

一、接种与分离方法根据待检标本的性质、培养目的和所用培养基的种类，采用不同的接种方法。

1．平板划线分离培养法对混有多种细菌的临床标本，采用划线分离和培养，使原来混杂在一起的细菌沿划线在琼脂平板表面分离，得到分散的单个菌落，以获得纯种。

临床送检的标本如痰、咽试子、泌尿生殖道的分泌物和粪便等细菌检验均需要借助琼脂平板划线分离目的菌。

平板划线分离法通常有两种方法：（1）分区划线分离法：此法常用于含菌量较多的标本如痰、泌尿生殖道的分泌物和粪便或混合细菌的分离。

先用接种环挑取标本涂布于琼脂平板1区（占培养基总面积的1/4）并作数条划线，再于2、3、4区依次划线。

每划完一个区域，均将接种环烧灼灭菌1次，冷后再划下一区域，每一区域的划线均与上一区域的划线交接1~3次。

一个成功分区划线的平板，培养后分别观察1区形成菌苔，2区菌落连成线，3区和4区可分离到单个菌落。

（2）连续划线分离法：此法常用于含菌量不多的标本或培养物中的细菌分离培养。

方法是先将接种物在琼脂平板上1/5处轻轻涂抹，然后再用接种环或拭子在平板表面曲线连续划线接种，直至划满琼脂平板表面。

琼脂斜面接种法主要用于菌落的移种，以获得纯种进行鉴定和保存菌种等。

用接种环（针）挑取单个菌落或培养物，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后再从底部沿直线向上曲折连续划线，直至斜面近顶端处止。

生化鉴定培养基斜面接种，用接种针挑取待鉴定细菌的菌落，从斜面中央垂直刺入底部，抽出后在斜面上由下至上曲折划线接种。

3．穿刺接种法此法多用于半固体培养基或双糖铁、明胶等具有高层的培养基接种，半固体培养基的穿刺接种可用于观察细菌的动力。

接种时用接种针挑取菌落，由培养基中央垂直刺入至距管底0.4cm处，再沿穿刺线退出接种针。

微生物中——平板接种的详解
平板接种即用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管、滴管将一定体积的菌液移至平板培养基上的方法，然后培养。

平板接种的目的是为了观察菌落形态，分离纯化菌种，活菌计数以及在平板上进行各种试验。

1、划线法，斜面接平板，无菌操作，自斜面用接种环直接取出少量菌体，或先制成菌悬液，接种在平板边缘的一处，烧去多余菌体，再从接种有菌的部位在平板培养基表面自左至右轻轻连续划线或分区划线，注意勿划破培养基。

经培养后在沿划线处长出菌落，以便观察或挑取单一菌落。

2、点种法，看了一般用于观察霉菌的菌落。

在无菌操作下,用接种针从斜面或孢子悬液中取少许孢子，轻轻点种于平板培养基上，一般以三点(..)的形式接种，霉菌的孢子易飞散，用孢子悬液点种效果好。

3、液体接平板，即用无菌移液管或者滴管吸取一定体积的菌液移至平板培
养基上，然后用无菌玻璃涂棒将菌液均匀涂布在整个平板上。

4、或者将菌液加人培养皿中，然后再倾人融化并冷至45~50C的固体培养
基，轻轻摇勻，进行平置，凝固后倒置培养，分离菌种时常用。

5、平板接斜面，般是将在平板培养基上经分离培养得到的单菌落，在无菌操作下分别接种到斜面培养基上，以便作进一步扩大培养或保存之用。

接种前先选择好平板上的单菌落，并做好标记。

6、左手拿平板，右手拿接种环，在火焰旁操作，灼烧接种环后将按种环在容白培养基处冷却，挑取菌落，在火焰旁稍等片刻，此时左手将平板放下，拿起斜面培养基，技斜面技种法按种。

⼀⽂搞定细菌的接种⽅法（值得收藏）常⽤的细菌接种⽅法有平板划线分离法、斜⾯接种法、穿刺接种法、液体和半固体接种法、涂布接种法等。

⼀、平板划线分离法平板划线分离法:是指把混杂在⼀起的微⽣物或同⼀微⽣物群体中的不同细胞⽤接种环在平板培养基表⾯，通过分区划线稀释⽽得到较多独⽴分布的单个细胞，经培养后⽣长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微⽣物的纯种。

有时这种单菌落并⾮都由单个细胞繁殖⽽来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。

其原理是将微⽣物样品在固体培养基表⾯多次作“由点到线”稀释⽽达到分离⽬的的。

为⽅便划线，⼀般培养基不宜太薄，每⽫约倾倒20ml培养基，培养基应厚薄均匀，平板表⾯光滑。

划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种（如图1， A、B）。

图1分区划线法是将平板分四区，故⼜称四分区划线法。

划线时每次将平板转动60~70°划线，每换⼀次⾓度，应将接种环上的菌烧死后，再通过上次划线处划线；另⼀种连续划线法是从平板边缘⼀点开始，连续作波浪式划线直到平板的另⼀端为⽌，当中不需灼烧接种环上的菌。

1）连续划线法将琼脂平⽫半开盖倒置于培养箱内⾄⽆冷凝⽔，接种环于酒精灯外焰烧⾄红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环⾄红。

轻轻摇匀待接种试管，左⼿⼿⼼托待接种试管底侧部，右⼿执接种环，右⼿⼩指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，再插⼊待接接种液中，蘸⼀下，取满⼀环，抽出、烧塞、盖盖、放回试管架。

或将接种环通过稍打开⽫盖的缝隙伸⼊平板，在平板边缘空⽩处接触⼀下使接种环冷却，然后以⽆菌操作接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。

于靠近酒精灯处打开平⽫盖约30°，右⼿将环伸进平⽫，将菌种点种在平板边缘⼀处，轻轻涂布于琼脂培养基边缘（如图2），抽出接种环，盖上平⽫盖，然后将接种环上多余的培养液在⽕焰中灼烧，打开平⽫盖约30°伸⼊接种环，待接种环冷却后，再与接种液处轻轻接触，开始在平板表⾯轻巧滑动划线，接种环不要嵌⼊培养基内划破培养基，线条要平⾏密集，充分利⽤平板表⾯积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上⽫盖。

一、实验目的1. 掌握细菌培养的基本原理和方法。

2. 学习细菌接种和纯化技术。

3. 了解细菌在不同培养基上的生长情况。

二、实验原理细菌培养是微生物学的基本实验技术之一，通过在人工配制的培养基上培养细菌，可以观察细菌的生长和代谢特征，进而对细菌进行鉴定和分类。

实验中，我们采用平板划线法将细菌接种到琼脂平板上，通过观察菌落的特征，对细菌进行分离和纯化。

三、实验材料与试剂1. 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、营养肉汤培养基3. 试剂：无菌生理盐水、无菌水、无菌滤纸、无菌接种环、无菌培养皿、酒精灯、火焰灯4. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台四、实验步骤1. 准备工作：将菌种从冰箱取出，恢复至室温。

将无菌生理盐水、无菌水、无菌滤纸、无菌接种环、无菌培养皿、酒精灯、火焰灯等实验器材准备好。

2. 培养基制备：按照培养基配方，将牛肉膏蛋白胨培养基和营养肉汤培养基分别称量，加入适量蒸馏水，搅拌均匀，分装到无菌培养皿中。

3. 灭菌：将培养皿放入高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌15分钟，取出待冷却。

4. 接种：将菌种从冰箱取出，恢复至室温。

用无菌接种环挑取少量菌种，分别接种到牛肉膏蛋白胨培养基和营养肉汤培养基中。

5. 培养：将接种后的培养皿放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。

6. 观察与记录：观察菌落的特征，包括菌落的大小、形状、颜色、边缘、表面等。

记录菌落的特征，并对菌种进行鉴定。

五、实验结果与分析1. 大肠杆菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好，菌落呈圆形、光滑、湿润、白色、边缘整齐。

2. 金黄色葡萄球菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好，菌落呈圆形、凸起、光滑、金黄色、边缘整齐。

3. 枯草芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好，菌落呈圆形、粗糙、干燥、灰白色、边缘不规则。

六、实验总结通过本次实验，我们掌握了细菌培养的基本原理和方法，学会了细菌接种和纯化技术。

同时，通过观察不同菌种在不同培养基上的生长情况，加深了对细菌生长特征的认识。

细菌的人工培养人工制备营养充足的培养基并提供适宜的温度、气体、pH等培养条件，即能使细菌在体外环境迅速生长繁殖。

细菌培养对临床上病原菌的分离鉴定、制备抗生素、制备疫苗等生物制品都是必不可少的。

一、培养基的制备原则：1、必须有充足的营养。

2、合适的酸碱度。

3、绝对无菌。

二、培养基的制备培养基是用人工方法将多种营养物质按照各类微生物生长的需要而合成的一种混合营养料。

常用的培养基有基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基等。

按照培养基的物理性状可分为液体，固体和半固体三类。

以下介绍常用基础培养基的制备。

（一）肉汤培养基：制法：称取营养肉汤粉1.8g（含牛肉膏0.3克g，蛋白胨1g、氯化钠0.5g）加入100ml蒸馏水中，用玻棒搅拌加热溶解。

按需要分装于三角瓶或试管，瓶口或管口塞棉塞，包装后置高压蒸汽灭菌器内，在0.11Mpa（1.05公斤/厘米2）压力下，温度达1210C，维持15～20分钟。

冷却后贴好标签，40C冰箱贮存备用。

制成后的肉汤呈浅黄色，清晰透明，pH 7.1+0.2肉汤培养基常用于增菌培养。

（二）肉汤琼脂固体培养基：在上述肉汤培养基中加入2～3%琼脂即成。

经高压灭菌后，趁热将试管斜置、冷凝，即成普通琼脂斜面培养基；或趁热取出后，稍冷，以无菌操作倾入灭菌的空培养皿，冷凝后即为普通琼脂平板。

制作琼脂平板时，每一空皿（9厘米直径）需培养基15～20ml。

普通琼脂平板用于分离培养繁殖细菌；普通琼脂斜面用于纯培养和保存菌种。

（琼脂是从石花菜等海藻类中提取的多糖物质，当温度达到98℃以上可溶化，45℃以下则凝固。

琼脂对细菌一般无营养作用，用做斜面、平板、高层等不同类型固体培养基的凝固剂。

琼脂通常呈酸性，加入液体培养基中可使酸碱度下降pH 0.2左右。

）（三）肉汤琼脂半固体培养基：在上述肉汤培养基中加入0.3～0.5％琼脂，加热溶化后，分装于小试管（10×100mm），每管约3ml，高压灭菌后直立冷凝即成。

细菌的接种与培养方法操作规程一、细菌的接种根据待检标本的来源、培养目的及所用培养基的性状，采用不同的接种方法。

l、平板画线分离法（1）、连续画线分离法此法主要用于杂菌不多的标本。

用接种环取标本少许，于平板l/5处密集涂布，然后回来作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。

（2）、分区画线分离法此法适用于杂菌较多的标本。

先将标本均匀涂布于平板边缘一小区(约占平板1/5)，再在二、三区依次连续画线，每画线一区均将接种针灭菌一次。

每一区的划线均接触上一区的接种线1～2次。

以获得单个菌落。

2、斜面接种法该法主要用于单个菌落的纯培养。

用灭菌接种针取菌少许，从培养基斜面底部向上划一直线，然后从底部向上作连续曲线画线。

一直画到斜面顶端。

3、液体接种法多用于一些液体生化试验管的接种。

用灭菌接种环取菌少许，在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻研磨，使细菌混合于液体中。

4、穿刺接种法主要用于半固体培养基、明胶及双糖铁的接种。

用接种针取菌少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针原路退出。

5、倾注平板法临床上主要用于尿液等标本的细菌计数。

将标本经适当稀释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，倾入已经溶化并冷却至45℃左右的定量培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。

6、涂布接种法常用于纸片药物敏感性测定，也可用于被检标本的细菌计数。

加定量的被检菌液于琼脂平板表面，然后用灭菌的棉签反复涂布几次，使被检菌均匀分布在琼脂平板表面。

然后贴上药敏纸片培养，或直接培养观察结果。

二、细菌培养方法根据临床初步诊断及待检细菌的种类，可选用不同的环境进行培养。

常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。

1、需氧培养法本法是临床细菌室常用的培养方法，即将已经接种好的平板、斜面和液体培养基等。

置于35℃温箱中孵育18～24小时。

2、二氧化碳培养法本室用CO2孵箱将已接种好的培养基置于CO2孵箱内培养。

《医学微生物学》细菌的人工培养实验[目的]1．掌握平板划线法、斜面、液体和半固体培养基等各种接种方法。

2．掌握接种细菌用具、接种细菌的环境要求和无菌操作要领。

3．熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。

4．熟悉细菌和二氧化碳培养方法。

5．熟悉常用的厌氧菌培养技术。

6．了解培养基制备的基本过程。

[内容]（一）、培养基制备技术[材料]1．试剂：牛肉膏、氯化钠、蛋白胨、琼脂粉、抗凝绵羊血、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、葡萄糖、乳糖、甘露醇、柠檬酸钠、硫酸镁、磷酸二氢铵、硝酸钾、硫代硫酸钠、柠檬酸铁、硫酸。

亚铁、尿素、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中性红、酚红、lmol ／L NaOH、lmol／L HCl。

2．器材：500ml锥形瓶、500ml量筒、10ml、5ml和lml吸管、精密pH试纸、华氏试管、硅胶塞、天平、高压蒸气器、血清凝固器、脱脂棉、滤纸、漏斗、无菌平皿。

[方法]1．培养基制备的基本过程包括调配成分、溶解、矫正pH、过滤澄清、分装、灭菌、质量检查和保存。

（1）调配成分：按培养基组成准确称取各成份用量，放入锥形瓶或大容量烧瓶中，加一定量蒸馏水，使其充分混合。

应注意染料、胆盐和指示剂等应在矫正pH后加入。

（2）溶解：将调配好的混合物在沸水浴或流动蒸气灭菌器中，使其完全溶解。

不可将培养基装在铜铁容器中加热，因培养基中含铜量超过0.3mg／L时，细菌不易生长；含铁量超过0.14mg／L时可抑制细菌毒素的产生。

（3）矫正pH：一般将培养基的pH调至7.2～7.6左右。

经高压灭菌后其pH可发生0.1～0.2变动。

若用NaOH矫正，高压灭菌后pH下降0.1～0.2；若用Na2CO3矫正，高压灭菌后pH升高0.1～0.2。

（4）滤过澄清：自配的培养基通常有一些混浊或沉淀，需滤过澄清后方可使用。

液体或半固体培养基常用滤纸过滤；固体培养基在熔化后趁热以绒布或双层纱布加脱脂棉过滤。

（5）分装：①基础培养基：一般分装于锥形瓶灭菌后备用，以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等；②琼脂斜面：通常在熔化后分装于试管，量约为试管高度的1/4～1/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3，且保持试管下端1cm柱高；③半固体培养基：分装量为试管量的1/4-1/3，加塞灭菌后趁热直立凝固④琼脂高层培养基：分装量为管长的2/3(接种厌氧菌用)，灭菌后趁热直立凝固；⑤琼脂平板无菌分注：先将灭菌琼脂熔化后冷却至50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内(内径90mm的平皿约13～15min)，水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。

菌种划线平板标准操作规程菌种划线平板是一种常用的微生物学实验方法，主要用于菌种的分离和纯化。

为了保证实验的准确性和结果的可靠性，需要按照一定的操作规程进行操作。

如果存在多个菌种，则需准备相应数量的平板。

2. 准备培养基：根据菌种的生长特性选择合适的培养基，并按照菌种需求配制。

常用的培养基包括营养琼脂、肉汤葡萄糖琼脂平板等。

3. 准备培养器具：清洁培养皿、培养管、移液器、吸球等，并对其进行高温高压灭菌处理，确保无菌。

4. 暴露培养器具：开盖的培养皿、培养管等暴露在空气中易被细菌污染，使用前需进行烧烤消毒。

5. 准备菌种：选择需要划线的菌种，将其提取到无菌环境下，用吸液器或移液器进行分装，分装至不同的培养皿中。

二、实验操作步骤1. 消毒操作台：将操作台表面擦拭，用75%酒精喷洒，待酒精挥发后进行紫外线照射消毒，照射时间约15-30分钟。

2. 划线操作：将已经配制好的培养基倒入无菌平板中，使其均匀分布，待其固化后（约15-30分钟），开始划线。

(1) 布置待划线的培养平板：将待划线的培养平板放在炉盘或搁板上，不要弄湿培养平板。

(2) 取菌种：取一支已分装好的菌种，用吸球或移液器吸取适量的菌液，然后轻轻地均匀涂抹于培养平板上。

(3) 用划线针划线：用消毒的划线针，在培养平板上进行划线操作。

先将划线针消毒，再从菌液中取菌，然后从培养皿的一个角划至另一个角，最后将划线针消毒。

(4) 过程控制：整个划线操作应迅速、准确，并且尽量避免划重叠线。

3. 清理操作台：划线操作完成后，用75%酒精擦拭操作台表面，然后喷洒消毒液，待其挥发后，注意再次使用紫外线照射消毒。

三、实验后的处理工作1. 培养平板的封存：将培养平板进行密封，避免外界细菌的污染。

可使用透明胶带或锡纸进行包裹。

2. 培养平板的保存条件：将密封好的培养平板放入恒温培养箱中，设定适当的温度（如37℃），使其进行培养。

3. 培养结果的观察和分析：经过一定时间的培养后，观察培养平板上的菌落情况，分析并鉴定相应的菌种。