动物细胞培养实验方案

一、实验目的1. 熟悉动物细胞培养的基本原理和操作技术。

2. 掌握动物细胞传代、冻存、复苏等基本操作方法。

3. 了解动物细胞在生物学研究中的应用。

二、实验原理动物细胞培养是将动物组织或细胞在体外模拟体内环境条件下，进行生长、繁殖的一种技术。

通过动物细胞培养，可以研究细胞生物学、分子生物学、遗传学等方面的知识，为生物医学研究和药物开发提供实验材料。

三、实验材料1. 细胞：小鼠胚胎成纤维细胞、小鼠胚胎肺细胞等。

2. 培养基：DMEM、RPMI-1640等。

3. 培养试剂：胎牛血清、青霉素、链霉素、胰蛋白酶等。

4. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、倒置显微镜、移液器、离心机、水浴锅等。

四、实验步骤1. 细胞复苏（1）将冻存的细胞从液氮罐中取出，立即放入37℃水浴锅中解冻。

（2）用移液器将细胞悬液转移至离心管中，1000g离心5分钟。

（3）弃去上清液，用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞。

（4）将细胞悬液转移至培养瓶中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。

2. 细胞传代（1）将培养至80%汇合度的细胞取出，用胰蛋白酶消化。

（2）将消化后的细胞悬液转移至离心管中，1000g离心5分钟。

（3）弃去上清液，用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞。

（4）将细胞悬液按1:2或1:3的比例传代至新的培养瓶中。

（5）置于37℃、5%CO2培养箱中培养。

3. 细胞冻存（1）将培养至70%汇合度的细胞取出，用胰蛋白酶消化。

（2）将消化后的细胞悬液转移至离心管中，1000g离心5分钟。

（3）弃去上清液，用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞。

（4）将细胞悬液按1:1的比例转移至冻存管中。

（5）加入10%DMSO，混匀。

（6）将冻存管置于-80℃冰箱中过夜，然后转入液氮罐中保存。

4. 细胞观察（1）将培养好的细胞取出，用胰蛋白酶消化。

（2）将消化后的细胞悬液转移至载玻片上，滴加适量固定液。

（3）室温固定10分钟。

实验篇实验一实验器材的清洗实验物品（一）每一大组公用物品（每班分6大组）吸球4个、酒精棉球瓶两个、消毒水一瓶、吸瓶两个、计数板1块、洗液缸一个、95%酒精1瓶。

（二）每一小组公用物品（两人一小组）刻度吸管5毫升4支, 小漏斗1个、 80-200铜滤网1块、培养皿2个、 l00毫升盐水瓶及塞子4个、l0毫升盐水瓶及塞子1个、100ml培养瓶及塞子4个、10ml 培养瓶及塞子1个、镊子1个、剪刀1把、冻存管（1.5毫升，2毫升）2个、软毛刷2个、塑料盆一个。

（二）公用物品小滤器、大滤器2个、1000毫升量筒2个、100毫升量筒2个、家用剪刀、耐酸乳胶手套长的两双、短的四双、酒精一壶、玻璃棒几个、 0.22μm的小滤膜一盒、电炉3个。

清洗注意事项和要求（一）使用后的实验器材应立即投入清水中。

带毒的玻璃器皿需先浸泡在5％来苏儿或1％盐酸溶液中（依病毒的种类而定）1天以上或高压灭菌。

（二）浸泡、煮沸、酸泡的器皿内要充满液体，不得有气泡。

（三）煮沸前的水面要高于器材5厘米，水沸后投入洗涤剂（直径35厘米的铝锅，用洗衣粉10克左右）；若洗涤剂和实验器材同时从冷水煮至沸腾或使用过量洗剂均易腐蚀玻璃表面，使玻璃碱化PH值上升。

（四）软毛刷的刷端已掉毛的应该弃去，否则会损害玻璃。

玻璃划痕处易残留洗涤剂,会改变培养液PH和毒害细胞。

（五）浸泡器材的蒸馏水容器要专用，并做好标记，如“蒸馏水1盆”、”蒸馏水2盆。

（六）器材清洗干燥后，在以后各步操作时，手指不可接触器材的使用端。

清洗者可戴一次性薄膜手套进行操作，这样省时又保证清洗质量。

（七）清洁物品应及时包装消毒，应注意妥善保存，防止落人灰尘、蟑螂、蚂蚁等引起二次污染。

（八）刷洗、酸泡后的器材要用流水振荡冲洗；不得残留洗涤剂、清洁液。

操作方法（一）清洗液（俗称酸液）的配制方法常用清洁液配方重铬酸钾100g，浓硫酸200ml，蒸馏水800ml。

以配置10000ml常用清洁液为例介绍如下：先在搪瓷盆或塑料盆中加入蒸馏水8000ml，称取1000g重铬酸钾，用玻璃棒搅拌直至溶解（可加热以辅助溶解），待重铬酸钾液冷却后，缓慢加入浓硫酸，边加边用玻璃棒搅动，以混合液温度不过快上升和不出现重铬酸钾结晶为度。

动物细胞培养实验报告第一篇：一、实验目的1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。

2、学习并掌握细胞传代培养的方法。

3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。

二、实验原理细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。

动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。

由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。

动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。

原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。

传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。

高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。

被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。

三、细胞培养相关设施及材料1、细胞培养室无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。

孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。

制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。

储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。

清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。

2、细胞培养常用基本设施：荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。

动物细胞工程设计方案一、项目名称：____________________二、项目背景：____________________三、项目目标：____________________四、实验材料：1. 动物细胞：____________________2. 试剂：____________________3. 仪器设备：____________________五、实验方法与步骤：1. 动物细胞的培养：（1）取动物组织，剪碎并加入胰蛋白酶分解成单个细胞。

（2）制备动物细胞培养液体培养基，将细胞接种至培养基，放入二氧化碳培养箱中进行初代培养。

（3）当细胞增殖达到一定程度，出现接触抑制现象时，用胰蛋白酶再次处理，并用细胞悬液吹打贴壁生长的细胞。

进行细胞计数。

（4）依照计数结果，分瓶培养，进行传代培养。

获得细胞系或细胞株。

2. 动物细胞融合：（1）选择适当的融合方法，如电融合、聚乙二醇诱导融合等。

（2）将目的细胞和辅助细胞进行融合实验。

（3）筛选融合细胞，并进行鉴定。

3. 动物细胞核移植：（1）取成熟雄性青蛙的体细胞，去除细胞核。

（2）将正常雄性青蛙的体细胞的细胞核移植到去核卵细胞中。

（3）将移植后的卵细胞培养至胚胎阶段。

（4）将胚胎移植到受体青蛙中，观察发育情况。

六、预期结果：1. 成功培养出所需的动物细胞株。

2. 实现动物细胞融合，获得具有特定性状的融合细胞。

3. 成功进行动物细胞核移植，获得具有全能性的核移植胚胎。

七、实验结果分析与讨论：1. 分析培养出的动物细胞株的特性，与预期目标进行对比。

2. 分析融合细胞的性状，探讨融合效率和稳定性。

3. 分析核移植胚胎的发育情况，探讨细胞核全能性的实现程度。

八、实验结论：1. 成功实现了动物细胞工程的实验目标。

2. 掌握了动物细胞培养、融合和核移植的基本技术。

3. 为后续相关研究提供了实验基础和参考。

九、实验注意事项：1. 严格遵守无菌操作原则，确保实验材料的纯净度。

实验一清洗与灭菌一、实验目的：能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。

二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。

体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。

细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。

清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。

如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。

灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。

假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。

以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。

三、实验材料、用品1．材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。

2．药品：70％或75％酒精，0．1％新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0．5％过氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)。

3．仪器：超净台，干燥箱，高压蒸气灭菌锅，过滤器，过滤泵。

四、实验步骤(一)清洗1．新玻璃器皿的清洗先用自来水刷洗，再浸泡5％稀盐酸以中和玻璃表面的碱性物质和其他有害物质。

2．使用过的玻璃器皿的清洗(1)使用过的培养用品应立即浸入清水，避免干涸难洗。

(2)用洗涤剂清洗玻璃器皿，自来水清洗数遍，倒置自然干燥。

(3)浸酸性洗液过夜。

(4)从酸性洗液捞出后自来水冲洗10．15次去除残余酸液，蒸馏水涮洗3次，倒置烘干。

(5)包装(牛皮纸或一般纸)。

(6)高压(15磅20 min)或干热(170℃2 h)灭菌。

(7)贮存备用。

3．胶塞的处理(1)新胶塞应先用清水清洗之后再用0．2％NaOH煮沸lO-20 min。

(2)自来水清洗10次。

(3)再用1％稀盐酸浸泡30 min。

高中生物课程教案分享：动物细胞培养实验案例讲解导言生物学是指研究生物体及其相互关系和运动规律的学科，其内涵包含了多样性、相互作用、进化和适应性等。

而生物学课程不仅是学生学习生物学或进一步攻读医学或生物科学的必要前提，更是一种较为全面的自然科学。

在生物课程的教学中，神经元和细胞、遗传学、免疫学等学科是不容忽视的重要内容之一。

在其中，细胞学更是贯穿整个课程的核心。

教学目的细胞培养实验是细胞学领域一个常见的实验技术，使用这种技术，我们可以在实验环境下研究细胞的许多功能和过程。

这一实验的教学目的包括：1.理解细胞培养的重要性和运作原理；2.学习如何准备培养基及其配制方法；3.学会样本准备和理解细胞培养的基本技能；4.掌握无菌操作和安全措施。

教学过程实验材料1.细胞培养基（DMEM）；2.无血清胎牛血清（FBS）；3.法尼迪胆红；4.表面活性剂（如Tween 20）；5.96孔板。

步骤1：样品收集洗涤细胞样品及其培养。

为保证实验能够顺利进行，必须使用无菌技术并避免感染风险。

在进行收集样品作业前，务必洗手及其消毒，并在时期内保持反复按照。

此外，需要准备完整的实验平台及其消毒设备，如消毒液、眼罩、手套、口罩等。

步骤2：试管准备收集样品后，需要将其移动至已经清洗和消毒的环境中。

此时，必须通过微生物循环柜和干燥器来消毒以及干燥工具和表面。

之后，Proceed to add the culture medium, FBS,and penicillin-streptomycin combination.在处理试管时使用无菌循环柜，紧挨着清洁过的手套将保存期点的细胞样品注入，使其均匀分布于试管中。

步骤3：细胞培养在培养过程中，需要定期观察其细胞的生长状况和替换细胞培养基。

此外，还需要为细胞提供必要的营养物质和环境因素。

在这些位置，需要进行的步骤如下：1.使用微量注射器在试管里添加保护培养基和抗生素，确保细胞的生存和稳定；2.在试管上方贴上无菌膜，不仅可以保护试管和培养基，还能增加细胞的纯度和稳定性；3.将试管在配备好了的細胞培養箱中放置，在恒温孵育器上设置适宜的温度、湿度和氧气供应，确保试管保持稳定和深度。

动物细胞培养实验实验⼀：实验器材准备【实验原理】细胞培养技术与其他⼀般实验室⼯作的主要区别在于要求保持⽆菌操作，避免微⽣物及其他有害因素的影响。

⼀般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。

三室既相互连接⼜相对独⽴，各⾃完成培养过程中的不同操作。

【实验⽬的】①培养室的设置和设备。

②⽆菌概念和⽆菌操作要领。

【操作步骤】1．实验室设置（1）配液室（2）准备室（3）培养室培养室内要完全密闭，保持恒定的温度，在设计上要注意以下⼏点：①培养室的位置最好设在阴⾯，阳光不能直接照射的地⽅，防⽌室内温度增⾼。

②天花板的⾼度不要超过2⽶，以保证紫外灯的有效杀菌效应，③门⼀般⽤拉门，以防⽌空⽓流动。

④天花板、地板和四周墙壁要光滑⽆死⾓，要镶瓷砖或涂油漆，这样设计，⼀是便于清洗和消毒，另外也不易在墙⾓堆积灰尘。

2．实验室常⽤设备（1）准备室的设备①双蒸馏⽔蒸馏器：制备双蒸⽔。

②酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。

③⼲燥箱：洗涤完的玻璃器⽫⽤⼲燥箱烘⼲。

④⾼压锅：玻璃器⽫、解剖⽤具、部分液体、塑料器具等灭菌。

不同物品其有效灭菌压⼒和时间不同。

⑤储品柜1：放置未消毒物品。

⑥储品柜2：放置已消毒物品。

准备室注意事项：①预防蒸馏器被烤⼲。

②勿将酸液溅到⾐物或地⾯。

③勿将⾼压锅排⽓阀和安全阀堵塞。

④已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。

（2）配液室的设备①天平（扭⼒天平和电⼦天平）：称量⽤②pH计。

③磁⼒搅拌器。

（3）细胞培养室的设备①超净⼯作台：超净⼯作台的种类很多，有单⾯单⼈、单⾯双⼈、双⾯双⼈或双⾯四⼈等，其⼯作原理是利⽤⿎风机，使通过⾼效滤⽓的空⽓，徐徐通过台⾯，这样使⼯作环境中具⽆菌⽽均匀的空⽓。

根据层流⽅式的不同，超净⼯作台主要分为⽔平层流式和垂直层流式两种，基本原理⼤致相同，都是将室内空⽓经粗过滤器初滤，由离⼼风机压⼊静压箱，再经⾼效空⽓过滤器，由此送出的洁净⽓流从⼀定的均匀的断⾯风速通过⽆菌，从⽽形成⽆尘⽆菌的⾼洁净度⼯作环境。

动物细胞培养方法
动物细胞培养是一种常用的实验手段，广泛应用于细胞生物学、药物研发、生物医学研究等领域。

以下是一般性的动物细胞培养方法：
1.细胞系的选择：选择合适的动物细胞系是动物细胞培养的第一步。

细胞系的选择要考虑细胞类型、来源、生长特性和用途等因素。

2.细胞培养基的准备：准备适用于所选细胞系的培养基。

培养基包括基本培养基和补充物，如生长因子、抗生素等。

不同的细胞系需要不同的培养基。

3.细胞的解冻：从冷冻保存的细胞库中取出细胞，进行解冻。

解冻过程要尽可能快速，以减少细胞对冷冻损伤的敏感性。

4.细胞传代：当细胞达到一定的密度时，需要将其传代，以维持细胞的生长状态。

传代过程包括细胞的分离、计数和重新接种。

5.细胞培养条件的控制：控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等。

通常细胞培养箱会提供稳定的培养环境。

6.细胞的观察和检测：定期观察细胞的形态、生长状态，并进行必要的细胞检测，如细胞计数、细胞周期分析等。

7.防止细胞污染：严格遵循无菌操作规程，防止培养物受到细菌、真菌、支原体等的污染。

使用无菌操作室和经过无菌处理的实验器材。

8.制备细胞冻存物：定期制备细胞冻存物，以备将来使用。

冻存物的制备需要使用适当的冻存液和合适的冷冻保存温度。

9.特殊操作：针对具体实验需求，可能需要进行细胞转染、感染、药物处理等特殊操作。

在进行动物细胞培养时，实验者需具备丰富的培养经验和相关技能，同时需按照实验室的标准操作规程进行操作，以确保实验的准确
性和可重复性。

实验篇实验一实验器材的清洗实验物品（一）每一大组公用物品（每班分6大组）吸球4个、酒精棉球瓶两个、消毒水一瓶、吸瓶两个、计数板1块、洗液缸一个、95%酒精1瓶。

（二）每一小组公用物品（两人一小组）刻度吸管5毫升4支, 小漏斗1个、 80-200铜滤网1块、培养皿2个、 l00毫升盐水瓶及塞子4个、l0毫升盐水瓶及塞子1个、100ml培养瓶及塞子4个、10ml 培养瓶及塞子1个、镊子1个、剪刀1把、冻存管（1.5毫升，2毫升）2个、软毛刷2个、塑料盆一个。

（二）公用物品小滤器、大滤器2个、1000毫升量筒2个、100毫升量筒2个、家用剪刀、耐酸乳胶手套长的两双、短的四双、酒精一壶、玻璃棒几个、 0.22μm的小滤膜一盒、电炉3个。

清洗注意事项和要求（一）使用后的实验器材应立即投入清水中。

带毒的玻璃器皿需先浸泡在5％来苏儿或1％盐酸溶液中（依病毒的种类而定）1天以上或高压灭菌。

（二）浸泡、煮沸、酸泡的器皿内要充满液体，不得有气泡。

（三）煮沸前的水面要高于器材5厘米，水沸后投入洗涤剂（直径35厘米的铝锅，用洗衣粉10克左右）；若洗涤剂和实验器材同时从冷水煮至沸腾或使用过量洗剂均易腐蚀玻璃表面，使玻璃碱化PH值上升。

（四）软毛刷的刷端已掉毛的应该弃去，否则会损害玻璃。

玻璃划痕处易残留洗涤剂,会改变培养液PH和毒害细胞。

（五）浸泡器材的蒸馏水容器要专用，并做好标记，如“蒸馏水1盆”、”蒸馏水2盆。

（六）器材清洗干燥后，在以后各步操作时，手指不可接触器材的使用端。

清洗者可戴一次性薄膜手套进行操作，这样省时又保证清洗质量。

（七）清洁物品应及时包装消毒，应注意妥善保存，防止落人灰尘、蟑螂、蚂蚁等引起二次污染。

（八）刷洗、酸泡后的器材要用流水振荡冲洗；不得残留洗涤剂、清洁液。

操作方法（一）清洗液（俗称酸液）的配制方法常用清洁液配方重铬酸钾100g，浓硫酸200ml，蒸馏水800ml。

以配置10000ml常用清洁液为例介绍如下：先在搪瓷盆或塑料盆中加入蒸馏水8000ml，称取1000g重铬酸钾，用玻璃棒搅拌直至溶解（可加热以辅助溶解），待重铬酸钾液冷却后，缓慢加入浓硫酸，边加边用玻璃棒搅动，以混合液温度不过快上升和不出现重铬酸钾结晶为度。

实验动物细胞培养基础实验技术——器械的清洗与消毒实验目的：学习并掌握细胞培养使用的器皿、器械的洗涤和消毒。

实验用品：1．仪器和用品：超净工作台、干燥箱、高压锅、过滤器、紫外灯、0.22μm/0.45μm微孔滤膜。

2．试剂：75%酒精、5%HCl、1‰新洁尔灭、重铬酸钾。

实验内容：1．准备培养用血清瓶（PBS、培养基，约10套，包括20、50ml）、培养瓶（50个）、玻璃滴管（若干）、离心管（10ml）、EP管若干、不锈钢滤器、胶塞、滴头等。

2．分别包装上述物品，其中血清瓶和瓶盖分别包装，玻璃吸管置于不锈钢筒中、玻璃离心管、 EP管分别置于饭盒中。

3．将上述物品置于高压灭菌锅中进行消毒灭菌。

4．实验室准备。

实验步骤（一）清洗1．玻璃器皿的清洗浸泡刷洗浸酸冲洗（1）. 新购玻璃血清瓶先用洗衣粉洗，再以0.1-0.05 mol/l HCl 浸泡数小时，然后用铬酸浸泡过夜，最后用自来水、一次与二次去离子水洗净后才能开始使用。

（2）. 用过之玻璃血清瓶，用洗衣粉洗净后铬酸浸泡过夜，最后用自来水、用一次与二次去离子水冲洗干净。

此外，玻璃器皿的瓶子的盖子必须也泡铬酸，培养瓶瓶盖可以不用泡铬酸，高温灭菌的时候要拧上瓶盖，留有一定的缝隙，灭菌后盖紧。

瓶盖的上面应当用锡箔纸或者牛皮纸包住，用绳子扎紧2．塑料器皿的清洗自来水充分浸泡冲洗 2%NaOH浸泡过夜蒸馏水漂洗3次 2%-5%盐酸浸泡30min 自来水冲洗晾干紫外线照射30min3．胶塞等橡胶类的清洗自来水冲洗 2%NaOH 煮沸15min 自来水冲洗蒸馏水煮沸10min 自来水冲洗5次以上2%-5%HCl煮沸15min 晾干晾干后高压灭菌4．金属器械的清洗新购置的器械用过的器械（二）包装分为局部包装和全包装。

为了防止消毒灭菌后再次遭受污染。

按照不同类别进行包装。

（三）消毒灭菌主要包括物理法和化学法。

物理法：热灭菌、蒸汽灭菌、滤过除菌、紫外线、熏蒸消毒、煮沸消毒。

实验十五动物细胞培养技术及其应用一．实验目的通过本实验使学生掌握细胞培养、细胞检测和细胞表达等成套技术的原理和方法。

二. 实验内容1.培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏等基本技术；2.细胞生长曲线测定、细胞活性检测等常用技术；3.细胞污染检测方法与技术；4.病毒在细胞中的感染与增殖、重组病毒异源蛋白的细胞表达等实用技术。

三．实验用品1. 材料：Sf 细胞、Hi5 细胞等2. 器材：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、培养基抽滤装置、电泳仪、离心机、pH计、液氮罐（含液氮）、水浴锅、温度计、培养瓶、血清瓶、5 ml和10 ml 移液管、不锈钢移液管筒、大小不锈钢饭盒、酒精灯、吸耳球、血球计数板、96孔板、24孔板、无菌冻存管、离心管、记号笔、一次性过滤器、微量加样器、精密pH试纸、酒精棉球等3. 试剂与药品：Grace培养基、胎牛血清、甘油、DMSO、双抗（青霉素、链霉素）100 u/ml、Hank’s液、胰蛋白酶、台盼蓝、液氮、分析纯无水酒精、95%医用酒精、Tris碱、硼酸、EDTA、琼脂糖粉（电泳用）、dNTPs、Taq酶、支原体检测试剂盒、DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue kit （Qiagen）等。

四．实验方法与步骤（一）培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏1. 缓冲液及培养基配制Hank’s液：KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml，高压灭菌。

4℃下保存。

胰蛋白酶液：称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。

4%台盼蓝染液：称取台盼蓝4克，加双蒸水至100 ml。

MTT溶液：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的Hank’s液中。

动物细胞培养实验报告实验目的本实验的目的是通过培养和观察动物细胞，了解细胞的结构和功能。

实验材料和设备•动物细胞培养基•细胞培养皿•细胞培养罩•无菌移液器•显微镜•离心机实验步骤步骤一：准备工作1.将工作台、实验室器材和手部清洗消毒，确保无菌环境。

2.准备所需的实验材料和设备。

步骤二：细胞培养基的制备1.将细胞培养基倒入细胞培养皿中，每个培养皿倒入适量的培养基。

2.用无菌移液器将细胞培养基均匀涂布在培养皿内表面。

3.将培养皿放入细胞培养罩中，用透明膜封闭。

步骤三：细胞的收获1.从实验动物体内提取所需的组织样本，保持组织样本的完整性和无菌状态。

2.将组织样本置于离心管中，加入少量的预先准备好的细胞培养基。

3.使用无菌移液器将组织样本与细胞培养基充分混合。

4.将混合液转移到培养皿中，确保液体均匀覆盖培养皿表面。

步骤四：细胞培养1.将培养皿放入孵化器中，设置合适的温度和湿度，提供细胞生长所需的最佳环境条件。

2.定期观察培养皿内细胞的生长情况，记录细胞的数量和形态变化。

步骤五：细胞观察1.从培养皿中取出一小部分细胞，放入显微镜载玻片上。

2.将载玻片放入显微镜下，使用适当的倍率观察细胞的形态特征和细胞器的结构。

3.记录细胞的形态特征、大小和细胞器的分布情况。

实验结果和讨论通过以上步骤，我们成功地进行了动物细胞的培养实验，并观察到了细胞的生长和形态变化。

在显微镜下观察到的细胞形态特征和细胞器的结构，可以帮助我们更好地理解细胞的组成和功能。

细胞培养是生物学研究中常用的技术手段，通过培养和观察细胞，我们可以深入了解细胞的生命活动和疾病发生机制。

在实验过程中，我们需要保持无菌操作，以确保细胞的纯度和生长条件的良好。

细胞培养实验的结果和观察对于生物医学研究和药物开发具有重要意义。

通过改变培养条件和添加适当的药物，我们可以研究细胞的响应和代谢途径，为新药物的筛选和评估提供重要依据。

结论通过本次实验，我们成功地培养和观察了动物细胞。

一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本原理和操作方法。

2. 观察动物细胞在体外培养过程中的形态变化，了解细胞生长、衰老和死亡过程。

3. 探讨细胞培养技术在动物医学研究中的应用。

二、实验原理动物细胞培养是指将动物体内的细胞取出，在体外条件下进行培养和繁殖的技术。

通过细胞培养，可以研究细胞的生物学特性、细胞代谢、细胞分化等，为动物医学研究提供有力支持。

三、实验材料1. 实验动物：小白鼠2. 实验器材：细胞培养瓶、超净工作台、显微镜、剪刀、镊子、培养皿、移液器、吸管、细胞培养液、胰蛋白酶、青霉素、链霉素、75%酒精、无菌生理盐水、DMSO （二甲基亚砜）3. 实验试剂：细胞培养液、胰蛋白酶、青霉素、链霉素、75%酒精、无菌生理盐水、DMSO四、实验步骤1. 取小白鼠胚胎，用剪刀剪开胚胎包膜，取出胚胎组织。

2. 将胚胎组织置于超净工作台上，用无菌生理盐水冲洗，去除杂质。

3. 将冲洗后的胚胎组织用剪刀剪成小块，加入胰蛋白酶，消化10-15分钟。

4. 倒掉消化液，加入适量细胞培养液，用吸管吹打均匀，制成细胞悬液。

5. 将细胞悬液转移至培养瓶中，加入青霉素、链霉素，防止细菌污染。

6. 将培养瓶放入细胞培养箱中，37℃、5%CO2条件下培养。

7. 观察细胞生长情况，记录细胞形态、数量、生长速度等指标。

8. 在细胞生长过程中，定期更换培养液，以维持细胞生长环境。

9. 细胞培养至一定时期后，观察细胞衰老和死亡现象，分析衰老和死亡原因。

五、实验结果与分析1. 细胞形态：培养初期，细胞呈圆形，排列紧密。

随着培养时间的延长，细胞逐渐变长，形态不规则，出现细胞突起。

2. 细胞数量：培养初期，细胞数量增长较快，约每2-3天翻倍。

后期，细胞数量增长速度减慢，进入平台期。

3. 细胞生长速度：培养初期，细胞生长速度快，约每2-3天翻倍。

后期，细胞生长速度减慢，进入平台期。

4. 细胞衰老和死亡：培养至一定时期后，细胞出现衰老和死亡现象。

《细胞工程实验技术》（动物细胞培养部分）目录实验一实验器材的清洗、包装和消毒 (2)实验二常用的仪器设备介绍 (3)实验三常用动物细胞培养用液的配制 (4)实验四组织块原代培养、传代培养及生物学检测 (6)实验五心肌细胞的原代培养、传代培养及培养细胞的常规检查 (8)实验一实验器材的清洗、包装和消毒一、实验目的1、掌握细胞培养常用实验器材的清洗要领、清洗步骤和注意事项。

2、掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求。

3、掌握正压滤器的安装、使用和拆除方法及操作注意事项。

二、实验用品以组为单位包装物品1、量筒（100mL、500mL）2、大、小烧杯3个3、1000mL容量瓶×14、移液管1mL×3(灭菌)5、（100mL、250mL、500mL）盐水瓶、（500mL）广口瓶×各4(灭菌)6、眼科剪刀、眼科镊子各2把(灭菌)7、细胞培养瓶×3(灭菌)其它：饭盒、青霉素瓶、牛皮纸、离心管、滴管、注射器、磁棒、绳、标签纸等杂干。

三、实验内容（一）清洗1、要领：浸泡、刷洗、酸泡。

2、步骤：洗衣粉浸泡12h→刷洗→流水震荡冲洗15~20遍→漓水→蒸馏水洗荡2次→37℃烘干→待包装。

3、注意事项：(1)使用后的器材要立即投入水中。

(2)器皿内要充满液体，不得有气泡。

(3)器材要用流水震荡干净。

（二）包装1、大的器材如：量筒、广口瓶、培养皿、吸管等要包装。

2、小的器材如：注射器、剪刀、镊子放入饭盒。

3、注意事项：(1)包装时手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材使用端。

(2)封闭器材使用端，标记器材手持端。

(3)小包装(4)玻璃管道口加棉花。

（三）湿热消毒：高压灭菌锅消毒四、作业1、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？2、器材包装有何要求？3、实验二常用的仪器设备介绍一、实验目的了解动物细胞培养中常用仪器设备的使用方法、注意事项和保养方法二、实验用品1）超净工作台2）自动双重纯水蒸馏器3）高压蒸气灭菌器4）过滤器5）电热恒温干燥箱6）二氧化碳培养箱7）冰箱8）倒置显微镜三、实验内容1、了解超净工作台的工作原理2、自动双重纯水蒸馏器结构、使用注意事项。

一、实验目的1. 掌握动物细胞培养的基本原理和方法。

2. 熟悉动物细胞培养过程中常用的仪器和试剂。

3. 通过动物细胞培养实验，了解细胞生长、增殖、分化的过程。

二、实验原理动物细胞培养是指将动物组织或器官中的细胞取出，在体外模拟体内环境，使其在适当的营养和条件下生长、增殖、分化。

动物细胞培养是生物学、医学、药理学等领域的重要研究手段。

三、实验材料1. 试剂：胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、胰蛋白酶。

2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、移液器、培养皿、显微镜等。

四、实验方法1. 细胞复苏：将冻存的细胞取出，用无菌生理盐水洗涤，加入适量DMEM培养基，在37℃、5%CO2培养箱中复苏。

2. 细胞传代：将复苏后的细胞用胰蛋白酶消化，加入适量的DMEM培养基终止消化，用移液器吹打细胞，制成单细胞悬液。

将单细胞悬液接种于培养皿中，在37℃、5%CO2培养箱中培养。

3. 细胞观察：在显微镜下观察细胞的生长状态，记录细胞生长、增殖、分化的过程。

4. 细胞传代：待细胞铺满培养皿底部时，用胰蛋白酶消化细胞，制成单细胞悬液。

将单细胞悬液接种于新的培养皿中，重复上述步骤。

五、实验结果1. 细胞复苏：复苏后的细胞在显微镜下观察到细胞呈圆形，细胞质清晰，细胞核明显。

2. 细胞生长：细胞接种后，在培养箱中培养，细胞逐渐铺满培养皿底部。

细胞生长过程中，细胞体积逐渐增大，细胞核逐渐增多。

3. 细胞增殖：细胞生长过程中，细胞数量逐渐增多，细胞铺满培养皿底部的时间逐渐缩短。

4. 细胞分化：在培养过程中，部分细胞发生分化，形成不同形态的细胞。

如神经细胞、肌肉细胞等。

六、实验讨论1. 细胞培养过程中，温度、CO2浓度、培养基成分等条件对细胞生长、增殖、分化具有重要影响。

实验中应严格控制这些条件，以确保细胞正常生长。

2. 细胞传代过程中，应注意防止污染。

操作应在超净工作台中进行，使用无菌器材，避免细菌、真菌等微生物污染。

3. 细胞培养实验过程中，应定期观察细胞生长状态，及时调整实验条件，以保证细胞正常生长。

动物细胞培养实验报告动物细胞培养实验报告引言：动物细胞培养是一项重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究、药物开发和生物工程等领域。

本实验旨在通过培养动物细胞，观察细胞的生长、分裂和功能表达，以及研究细胞在不同环境条件下的生理和生化特性。

材料与方法：1. 细胞培养基：选择适合培养动物细胞的培养基，如DMEM或MEM等。

2. 细胞培养器具：细胞培养瓶、细胞培养皿、离心管、显微镜等。

3. 细胞株：选择合适的细胞株，如人类肺癌细胞株A549。

4. 细胞培养条件：温度、湿度、CO2浓度等。

5. 细胞培养试剂：胎牛血清、抗生素等。

实验步骤：1. 细胞传代：将细胞株从冻存管中取出，加入培养基中，将细胞传代至合适的密度。

2. 细胞培养：将细胞悬浮液均匀地加入细胞培养器具中，放入培养箱中培养。

3. 细胞观察：使用显微镜观察细胞的形态、数量和分裂情况。

4. 细胞染色：使用荧光染料或细胞染色剂对细胞进行染色，观察细胞内部结构。

5. 细胞功能表达：通过Western blot、PCR等技术，检测细胞中特定基因或蛋白的表达情况。

6. 细胞处理：在特定条件下处理细胞，如药物处理、温度变化等，观察细胞的反应和变化。

7. 细胞计数：使用细胞计数板或细胞计数仪等工具，统计细胞的数量。

结果与讨论：1. 细胞生长：观察到细胞在培养基中呈现出典型的生长曲线，包括潜伏期、对数期和平台期。

2. 细胞形态：细胞在培养基中呈现出典型的形态特征，如细胞核的形状、细胞质的颜色等。

3. 细胞分裂：观察到细胞在培养基中进行有丝分裂或无丝分裂，并计算细胞分裂指数。

4. 细胞染色：通过荧光染料或细胞染色剂染色后，观察到细胞内部结构的变化，如细胞器的位置和形态。

5. 细胞功能表达：通过Western blot、PCR等技术，检测到特定基因或蛋白在细胞中的表达水平。

6. 细胞处理：在特定条件下处理细胞后，观察到细胞的形态、数量和功能发生变化，如细胞凋亡、增殖等。

《细胞工程实验技术》（动物细胞培养部分）目录实验一实验器材的清洗、包装和消毒 (2)实验二常用的仪器设备介绍 (3)实验三常用动物细胞培养用液的配制 (4)实验四组织块原代培养、传代培养及生物学检测 (6)实验五心肌细胞的原代培养、传代培养及培养细胞的常规检查 (8)实验一实验器材的清洗、包装和消毒一、实验目的1、掌握细胞培养常用实验器材的清洗要领、清洗步骤和注意事项。

2、掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求。

3、掌握正压滤器的安装、使用和拆除方法及操作注意事项。

二、实验用品以组为单位包装物品1、量筒（100mL、500mL）2、大、小烧杯3个3、1000mL容量瓶×14、移液管1mL×3(灭菌)5、（100mL、250mL、500mL）盐水瓶、（500mL）广口瓶×各4(灭菌)6、眼科剪刀、眼科镊子各2把(灭菌)7、细胞培养瓶×3(灭菌)其它：饭盒、青霉素瓶、牛皮纸、离心管、滴管、注射器、磁棒、绳、标签纸等杂干。

三、实验内容（一）清洗1、要领：浸泡、刷洗、酸泡。

2、步骤：洗衣粉浸泡12h→刷洗→流水震荡冲洗15~20遍→漓水→蒸馏水洗荡2次→37℃烘干→待包装。

3、注意事项：(1)使用后的器材要立即投入水中。

(2)器皿内要充满液体，不得有气泡。

(3)器材要用流水震荡干净。

（二）包装1、大的器材如：量筒、广口瓶、培养皿、吸管等要包装。

2、小的器材如：注射器、剪刀、镊子放入饭盒。

3、注意事项：(1)包装时手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材使用端。

(2)封闭器材使用端，标记器材手持端。

(3)小包装(4)玻璃管道口加棉花。

（三）湿热消毒：高压灭菌锅消毒四、作业1、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？2、器材包装有何要求？3、实验二常用的仪器设备介绍一、实验目的了解动物细胞培养中常用仪器设备的使用方法、注意事项和保养方法二、实验用品1）超净工作台2）自动双重纯水蒸馏器3）高压蒸气灭菌器4）过滤器5）电热恒温干燥箱6）二氧化碳培养箱7）冰箱8）倒置显微镜三、实验内容1、了解超净工作台的工作原理2、自动双重纯水蒸馏器结构、使用注意事项。

动物细胞培养实验设计1.实验目的本实验旨在研究动物细胞在体外培养条件下的生长情况，并探究培养基、培养温度和培养时间对细胞增殖和存活率的影响。

2.实验材料-细胞培养物（如人体肺癌细胞株A549）-培养基（如DMEM）-胎牛血清（FBS）-无菌PBS缓冲液-1%无菌青霉素/链霉素混合液-0.25%胰酶/EDTA溶液-无菌培养皿-离心管-显微镜-倒置显微镜-培养箱3.实验步骤3.1细胞传代-使用0.25%胰酶/EDTA溶液处理细胞培养物，使其分离成单个细胞。

-计算损失率和细胞数，根据所需的细胞数目进行传代。

3.2细胞计数-取适量的细胞悬液，并使用显微镜在计数室或倒置显微镜下进行细胞计数。

确保计数的精度和准确性。

3.3细胞培养基配制-使用DMEM培养基作为培养基，添加适量的胎牛血清（一般为10%）和1%无菌青霉素/链霉素混合液，制成DMEM完全培养基。

-为对照组，不添加药物或其他试剂。

3.4细胞处理-将细胞悬液均匀分配到不同的无菌培养皿中。

-添加适量的DMEM完全培养基，使细胞完全覆盖。

-将培养皿置于培养箱中，设置适当的培养温度（一般为37°C）。

3.5细胞观察和评价-在不同的培养时间点（如24小时、48小时和72小时），取出培养皿中的细胞悬液。

-使用显微镜观察细胞形态，评估细胞生长和形态变化。

3.6细胞增殖分析-使用显微镜或自动细胞计数器计算细胞数目。

-根据细胞数目的变化，计算细胞增殖速率和倍增时间。

3.7细胞存活率分析-使用PBS缓冲液将细胞悬液洗涤一次，去除培养基。

- 使用0.4%尝试性胺蓝（Trypan Blue）染色液染色，染色时间不超过3分钟。

-使用显微镜观察和计数染色细胞和非染色细胞的数目，计算细胞存活率。

4.数据分析根据实验结果，绘制细胞增殖曲线图和细胞存活率曲线图。

使用适当的统计方法分析数据，比较不同培养条件下的细胞增殖和存活率差异。

5.结论根据实验结果，得出不同培养条件对细胞增殖和存活率的影响结论。