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琼脂平板测定法1. 简介琼脂平板测定法是一种常用的微生物检测方法，用于定量测定液体中微生物的数量。
其原理是将待测样品与含有琼脂的培养基混合，然后将混合液倒入琼脂平板中，在适当条件下培养微生物，通过观察生长的菌落数量来估计样品中的微生物数目。
琼脂平板测定法广泛应用于食品、饮料、药品等领域，以及环境监测和医疗卫生等领域。
它具有操作简便、结果可靠、灵敏度高等优点，并且可以同时检测多种不同类型的微生物。
2. 实验步骤2.1 准备工作•清洁实验台面和仪器设备，消毒操作区域。
•准备所需材料：琼脂平板、待测样品、无菌移液器、无菌试管、无菌培养皿等。
•配制适当的琼脂培养基，并进行无菌处理。
2.2 样品处理•将待测样品进行适当的预处理，如稀释、均匀搅拌等。
•取适量的样品，使用无菌移液器将其滴入无菌试管中。
2.3 倒平板•将琼脂培养基加热至液态状态，并保持在适宜的温度。
•将琼脂培养基倒入无菌培养皿中，约15-20ml左右。
•等待琼脂培养基凝固。
2.4 涂布样品•将待测样品与琼脂培养基混合均匀。
•将混合液倒入凝固的琼脂平板中。
•使用无菌棉签或针头，在平板表面上均匀地涂布样品。
•注意避免压力过大，以防止伤害琼脂平板表面。
2.5 培养•将涂布好的琼脂平板倒置放置于恰当的培养条件下（如适宜的温度、湿度等）。
•根据需要选择不同的培养时间和环境条件。
2.6 菌落计数•在适当的时间后，观察琼脂平板上的菌落生长情况。
•使用无菌计数器或放大镜进行菌落计数。
•记录菌落数量并进行统计分析。
3. 实验注意事项•操作过程中要保持严格的无菌操作，避免样品受到外界污染。
•遵守实验室安全规范，使用个人防护装备。
•注意培养条件的控制，如温度、湿度等。
•注意样品的合适稀释，以确保在合适范围内进行菌落计数。
•记录实验过程中的操作细节和结果，以备后续分析和验证。
4. 实验结果分析通过琼脂平板测定法得到的结果可以用于估计待测样品中微生物的数量。
根据菌落数量和相应的标准曲线或经验值，可以确定样品中微生物的含量是否符合相关标准要求。
Baerd Parker 平板配方与配制方法（1L）
成分：
胰蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
酵母浸膏1g
丙酮酸钠 10g
甘氨酸 12g
氯化锂(LiCl·6H2O) 5g
琼脂20g
蒸馏水 950ml
pH7.0±0.2
增菌剂的配制：30％卵黄盐水50ml与除菌过滤的1％亚碲酸钾溶液10ml&127;混合，保存于冰箱内。
制法：将各成分到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25℃校正pH。
分装每瓶95ml，121℃高压灭菌15min。
临用时加热溶化琼脂，每95ml加入预热到50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5ml，摇匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的。
使用前在冰箱储存不得超过48h。
卵黄盐水配置：将鸡蛋放在95%酒精中浸泡1小时左右，用在95%酒精中浸泡的纱布或酒精棉擦拭蛋壳表面，打开鸡蛋取出卵黄置于灭菌平板中，用无菌注射器或吸管取一定卵黄加10%盐水中（比例看你的检测项目而定），混匀，记录调制时间，4℃保存，2个周内使用。
配制过程中，卵黄应保持完整，以免吸入蛋清。
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40％甘油，—80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）:10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5g/L；NaCl：10g/L；pH7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10。
0g酵母粉 5。
0g氯化钠10。
0g水 1000mlpH 7。
4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5%－2。
0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10。
0g，酵母粉5。
0g，NaCl 10.0g,加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7。
4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7。
4，用1mol/L HCl回调）.2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂)。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干,待锥形瓶的封口纸干燥后取出.液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10—15mL（直径90mm),在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上,放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈,最后中间划之字;接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上,用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字,涂布平板。
稀释涂布平板法操作步骤在制备微生物菌落计数板时，常采用稀释涂布平板法。
这种方法操作简单，能够快速、准确地测定微生物的数量，是微生物学中常用的方法之一。
下面将详细介绍稀释涂布平板法的操作步骤。
一、准备工作1.准备好所需的培养基：根据需要选择适当的培养基，如营养琼脂培养基、大肠杆菌选择性培养基等；2.准备好培养基的配制液：根据培养基的配方，将所需的成分按比例配制好，然后加入适量的蒸馏水，混匀后进行高温高压灭菌处理；3.准备好培养基的平板：将灭菌后的培养基分装到培养皿中，用无菌胶头棉条擦拭培养皿口，然后将培养皿倒置在平板支架上，待培养基凝固后，将平板倒置，存放在4℃冰箱中备用；4.准备好所需的材料和器具：如移液管、量筒、无菌吸管、酒精灯、无菌培养皿等。
二、稀释涂布1.取适量的样品：根据需要，取适量的样品进行稀释，样品的量要根据预期菌落数和样品的浓度来确定。
一般来说，取1ml样品，加入9ml生理盐水进行10倍稀释，再取1ml加入9ml生理盐水进行100倍稀释，以此类推；2.标记培养皿：在培养皿底部用无菌笔标记上样品名称、稀释倍数和日期等信息；3.取稀释液：用移液管或量筒取出适量的稀释液，加入到培养皿中，一般每个培养皿加入约1ml稀释液；4.均匀涂布：用无菌吸管取一定量的样品，滴在培养基表面，然后用无菌铁环或无菌玻璃棒均匀涂布，使样品均匀分布在培养基表面；5.重复操作：对于高浓度样品，可以进行多次稀释涂布，以得到合适的菌落数。
三、培养和计数1.培养：将涂布好的培养皿用胶头棉条擦拭培养皿口，然后倒置存放在恒温培养箱中，一般在30℃左右进行培养，不同的菌种有不同的培养条件；2.计数：经过一定时间的培养，菌落会在培养皿表面生长出来，需要进行计数。
使用计数板计数时，应注意板子上的菌落数量不能过多，一般在30-300个之间，如果过多，则需要再进行稀释。
计数时，应使用放大镜或显微镜，将菌落数量记录下来，用公式计算出样品中微生物的数量。
实验室用平板培养基配方
1.MRS培养基：
液体：蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 柠檬酸铵2g 乙酸钠 5g(无水乙酸钠3g) 酵母粉 5g 葡萄糖 20g
磷酸氢二钾 2g 吐温 1.0ml
盐液甲 5.0ml 蒸馏水： 1000ml
溴甲酚紫 0.8g
[备注]盐液甲的配制：MgSO
4.7H
2
O 11.5g ，MnSO
4
.4H
2
O 2.8g
蒸馏水 100ml
固体：在MRS液体培养基中加入1.6%~2%的琼脂
PH=6.5~7.0 121℃灭菌30min
2.YB培养基：
液体:蛋白胨 5g 葡萄糖 5g 酵母粉 5g 磷酸氢二钾4g
3.08%硫酸锰 1.0ml 蒸馏水 1000ml
固体：在YB液体培养基中加入1.4%~1.7%的琼脂
PH=6.0~7.0 121℃灭菌30min
3.PYD培养基：
液体：酵母粉 10g 蛋白胨 20g
葡糖糖20g 蒸馏水1000ml
固体：在PYD液体培养基中加入2%的琼脂
[备注]灭菌时要将葡萄糖和蛋白胨、酵母粉分开，溶解后单独灭菌，防止三者在高温下发生化学反应。
PH自然121℃灭菌30min
中国农业大学动物科技学院
饲料生物技术实验室
张得龙
2013.10.31。
巧克力色血琼脂平板培养基使用说明书【产品名称】通用名称：巧克力色血琼脂平板培养基英文名称：Chocolate Blood Agar Plate Medium【包装规格】Φ90㎜和Φ70㎜，5块／包。
【预期用途】主要用于奈瑟氏菌(如脑膜炎球菌，淋病球菌)、流感嗜血杆菌等的增菌培养。
【检验原理】培养基（Medium）是指由人工方法配制而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养制品。
培养基按用途分为基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基和厌氧培养基等，按原料来源分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
按形态分为液体培养基、流体培养基、半固体培养基和固体培养基等。
本产品是以人工的方法配制而成的，除基础培养基外另外还添加了脱纤维羊血，以增加营养性能，并根据具体的要求经过特殊处理使成巧克力色，补加嗜血杆菌生长所须的各种生长因子，以适应营养要求苛刻的微生物的特殊营养要求。
【主要组成成份】巧克力色血琼脂平板培养基由蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、琼脂等培养基原料经配制、高压灭菌，加入动物血和添加液定量灌入一次性塑料培养基内而成。
【贮存条件及有效期】2-8℃，避光保存，有效期3个月，用前复温。
【样本要求】标本可以是液体也可以是固体，液体标本可以直接使用，固体标本需用适量无菌生理盐水溶解后，取溶液使用。
根据浓度需要决定是否采用10倍稀释法进行稀释。
【检验方法】用接种环或棉签以无菌方法取标本直接画线接种于培养基中，或无菌吸取0.1ml适当浓度的标本溶液用玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，置35~37℃温箱中培养。
【检验结果的解释】流感嗜血杆菌菌落微小，无色、透明、光滑整齐、似露滴状，48小时后达1.5mm，从血液或脑脊液中分离到的菌落往往形成液状，菌落较大，老培养物菌落中心凹陷；淋球菌菌落较小，菌落呈灰白色。
【检验方法的局限性】正确的标本采集及良好的细菌划线分离技术是检出细菌的基础，所检出细菌要经镜检、生化鉴定来确认。
HE琼脂成分脙胨12g牛肉膏3g乳糖12g蔗糖12g水杨素2g胆盐20g氯化钠5g琼脂18～20g蒸馏水1000mL0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mLAndrade指示剂20mL甲液20mL乙液20mLpH7.5制法将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液；将琼脂加入于600mL蒸馏水内，加热溶解。
加入甲液和乙液于基础液内，校正pH。
再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷至50～55℃，倾注平板。
注：①此培养基不可高压灭菌。
②甲液的配制硫代硫酸钠34g柠檬酸铁铵4g蒸馏水100mL②乙液的配制去氧胆酸钠10g蒸馏水100mL②Andrade指示剂酸性复红0.5g1mol/L氢氧化钠溶液16mL蒸馏水100mL将复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液。
数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1～2mL。
3SS为强选择性培养基.其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。
如柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用及煌绿共同来抑制肠道非病原性细菌及部分大肠杆菌的生长。
对志贺菌属及沙门菌属相对抑制性较弱。
硫代硫酸钠有助于大肠菌的着色，柠檬酸铁能缓解某些药物对病原菌的毒副作用，同时与细菌产物起反应呈黑色菌落。
中性红指示剂可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落。
葡萄糖半固体发酵管葡萄糖半固体发酵管成分蛋白胨1g牛肉膏0.3g氯化钠0.5g1.6%溴甲酚紫酒精溶液0.1mL葡萄糖1g琼脂0.3g蒸馏水100mLpH7.4制法将蛋白胨、牛肉膏和氯化钠加入于水中，校正pH后加入琼脂加热溶解，再加入指示剂和葡萄糖，分装小试管，灭菌121℃ 15 min。
三糖铁琼脂三糖铁琼脂(换用方法)成分蛋白胨15g脙胨5g牛肉膏3g酵母膏3g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化钠5g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g琼脂12g酚红0.025g蒸馏水1000mLpH7.4制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。
血琼脂基础培养基使用说明书【产品名称】通用名称：血琼脂基础培养基英文名称：Blood Agar Base Medium【包装规格】Φ90㎜和Φ70㎜，5块／包。
【预期用途】本产品用于营养需求较高的细菌培养和保存菌种用。
【检验原理】培养基（Medium）是指由人工方法配制而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养制品。
培养基按用途分为基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基和厌氧培养基等，按原料来源分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
按形态分为液体培养基、流体培养基、半固体培养基和固体培养基等。
本产品是以人工的方法配制而成的，除基础培养基外另外还添加了脱纤维羊血，以增加营养性能，适应有些细菌的特殊营养要求。
【主要组成成份】血琼脂基础培养基由脱纤维羊血、蛋白胨、氯化钠、牛肉浸粉、琼脂粉和玫瑰红酸原料经配制、高压灭菌，至45℃加入动物血定量灌入一次性塑料培养基内而成。
【贮存条件及有效期】2-8℃，避光保存，有效期3个月，用前复温。
【样本要求】标本可以是液体也可以是固体，液体标本可以直接使用，固体标本需用适量无菌生理盐水溶解后，取溶液使用。
根据浓度需要决定是否采用10倍稀释法进行稀释。
【检验方法】用接种环或棉签以无菌方法取标本直接画线接种于培养基中，或无菌吸取0.1ml适当浓度的标本溶液用玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，置35~37℃温箱中培养。
【检验结果的解释】大肠埃希氏菌菌落白色，有时带黄白色，不同菌株的溶血作用变化很大，其中有致病力的菌株产生β-溶血环；葡萄球菌圆形，橙色至白色，其中金黄色葡萄球菌产生β-溶血环，而表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌无溶血作用；链球菌菌落圆形突起，透明或半透明，其中草绿色链球菌产生α-溶血环，化脓性链球菌产生β-溶血环，不溶血性链球菌没有溶血作用；脑膜炎奈瑟氏菌菌落圆形，凸起，透明，带兰灰色，不溶血；肺炎球菌菌落圆形，扁平，透明或半透明，在菌落周围有草绿色狭窄溶血环；产气荚膜梭菌菌落灰白色，圆形，多数菌株有双层溶血环。
北京雷根生物技术有限公司
LB 营养琼脂平板(含AMP100μg/ml 抗生素) 简介：
Luria-Bertani 培养基是最经典的细菌培养基，简称LB 培养基, 可以用于各种细菌培养，是分子生物学常规试剂。
Leagene LB 营养琼脂平板(含AMP100μg/ml 抗生素)主要由胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、琼脂组成，经15psi 高压灭菌20min ，呈胶冻状。
LB 营养琼脂平板(含AMP100μg/ml 抗生素)，可用于多种具有氨苄青霉素抗性的细菌的培养，LB 营养琼脂平板(含AMP100μg/ml 抗生素)仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、根据实验具体要求操作。
2、取低温保存的菌接种于新鲜的LB 营养琼脂平板(含AMP100μg/ml 抗生素)，置于37℃过夜培养。
注意事项：
1、 注意无菌操作，尽量避免污染。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：3个月有效。
相关：
编号 名称 CM0082 Storage LB 营养琼脂平板(含AMP100μg/ml 抗生素) 10个/包 4℃
使用说明书 1份 编号 名称 CA0005 氨苄青霉素溶液(Ampicillin,50mg/ml) CM0025 SOC 培养基(PH7.0) DH0006 苏木素伊红(HE)染色液 NR0003 Lezol(总RNA 提取试剂) PE0018
SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒 TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。
培养基配制1)血平板：5%脱纤维绵羊血琼脂平板。
英国Oxoid公司哥伦比亚琼脂（或TSA琼脂或脑心浸液琼脂）加热溶化后，高温高压灭菌，用时冷却至500C左右，加入无菌5-10%脱纤维绵羊血，充分轻摇混匀后，倾制平板，血平板厚4mm。
2)巧克力平板：应用马血或兔血制备，市售哥伦比亚琼脂热溶化后，高温高压灭菌，约在800C左右加入无菌血液配成5-10%，摇匀后置800C左右水浴中维持15分钟，使之成为巧克力色，絮状，取出冷却至500C左右倾制平板。
因其中含有X和V因子，嗜血杆菌、奈瑟氏菌等生长良好。
若用绵羊血制备，则要加入X、V因子添加剂（按产品操作说明）。
3)庆大霉素血平板：（分离肺炎链球菌培养基）哥伦比亚琼脂250mL绵羊血12.5mL庆大霉素0.5mL附：庆大霉素配法：4万单位+16mL水=2.5mg/mL1万单位（u）=10mg 4万单位=40mg4)杆菌肽巧克力平板：（分离流感嗜血杆菌培养基）哥伦比亚琼脂250mL兔血（马血）12.5mL杆菌肽lmL附：杆菌肽配制：1.含760mg杆菌肽加10mL灭菌水。
2. 250mL兔血巧克力加入1mL(76mg/mL)杆菌肽。
杆菌肽最终浓度：0.3mg/mL(300mg/L)5)万古霉素巧克力平板（分离流感嗜血杆菌培养基）哥伦比亚琼脂 250mL兔血（马血） 12.5mL万古霉素 1.0mL (5mg/250mL)附：万古霉素配制法：（去甲万古霉素400mg/瓶，相当500mg/瓶万古霉素，分装80支）①一瓶400mg去甲万古霉素加0.85％NaCl 10mL=50mg/mL②1mL万古霉素（50mg/mL）加0.85％NaCl 9mL=5mg/mL6)高盐甘露醇琼脂：（分离金黄色葡萄球菌培养基）蛋白胨10g 牛肉浸膏1g氯化钠7g 琼脂15g水 1000mL 甘露醇10g0.2%酚红25mL煮溶后调pH7.4，冷却用大试管倾倒斜面保存。
7)吕氏血清培养基：（分离白喉棒状杆菌用）1. 1%葡萄糖肉汤（pH 7.6）100mL2. 无菌动物血清（牛、羊、猪）300mL肉汤与动物血清混合，分装于无菌试管，每管5mL，在血清凝固器或流动蒸汽灭菌器内灭菌制成斜面。
血平板培养基配方
血平板培养基是一种常用的细菌培养基，主要成分包括胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、酚红指示剂、琼脂、牛血粉、葡萄糖、丙酮酸钠、硫酸镁和氯化钾等。
这种培养基主要用于细菌的分离、鉴定和培养。
以下是血平板培养基的配方及制备方法：
一、主要成分及作用
1.胰蛋白胨：提供氮源和氨基酸，促进细菌的生长和繁殖。
2.酵母提取物：提供氮源、维生素和生长因子，促进细菌的生长。
3.氯化钠：调节培养基的渗透压，有利于细菌的生长。
4.酚红指示剂：指示培养基的酸碱度，帮助判断细菌的生长情况。
5.琼脂：提供凝固剂，使培养基凝固成固体。
6.牛血粉：提供营养物质和生长因子，促进细菌的生长。
7.葡萄糖：提供碳源，促进细菌的生长。
8.丙酮酸钠：提供碳源和氮源，促进细菌的生长。
9.硫酸镁：提供微量元素，促进细菌的生长。
10.氯化钾：调节培养基的离子平衡，有利于细菌的生长。
11.蒸馏水：稀释和溶解各种成分，形成培养基。
二、制备方法
1.将上述成分加入蒸馏水中，搅拌均匀。
2.将琼脂加入煮沸的水中，加热至完全溶解。
3.将上述溶液冷却至室温，加入酚红指示剂。
4.将培养基分装到平板或试管中，凝固后即可使用。
三、注意事项
1.制备过程中要保持无菌操作，避免污染。
2.使用前要检查培养基的pH值是否适宜，一般pH值为7.2-7.4之间为最佳。
3.在使用前要检查培养基的有效期，过期的培养基不能使用。
稀释倒平板法和涂布平板法的基本操作流程稀释倒平板法和涂布平板法是常用于微生物种类和数量分析的实验操作方法。
它们是为了在培养基上培养微生物并计数其菌落形成单位（CFU）而设计的。
下面将分别对稀释倒平板法和涂布平板法的基本操作流程进行详细介绍。
一、稀释倒平板法的基本操作流程：1. 准备培养基：选择适当的培养基，按照生产厂家的说明书配制好培养基，并进行必要的灭菌。
2. 对待测样品进行稀释：将待测样品根据需要的稀释倍数，取相应体积的样品加入到已经准备好的无菌试管中。
使用无菌移液器和无菌试管，确保样品的无菌性。
3. 摇匀样品：使用无菌的摇瓶或涡旋仪等设备，将试管中的样品充分摇匀，确保菌体均匀分散。
4. 取适当体积的稀释液进行平板接种：将摇匀的样品取出一定的体积，均匀地倒入无菌平板中，并轻轻旋转平板使样品均匀分布。
5. 等待培养：将装满样品的平板盖好，置于适当的培养条件下，如温度、湿度等，并在预定时间内培养。
6. 菌落计数：在培养适宜的条件下，待菌落生长到适当大小后，使用放大镜或计数盘进行菌落计数。
根据每个平板上的菌落数量和稀释倍数计算出实际样品中的菌落形成单位（CFU）。
7. 计算结果：根据菌落计数的结果和稀释倍数的关系，推算出原始样品的微生物数量。
二、涂布平板法的基本操作流程：1. 准备培养基：选择适当的培养基，按照生产厂家的说明书配制好培养基，并进行必要的灭菌。
2. 涂布工具的准备：准备好需要使用的细菌涂布棒或铂丝环，并通过高温炙烤或灭菌液消毒处理。
3. 取适量的培养基：在无菌工作台上取适当量的培养基，将其倒入无菌平板中，并轻轻旋转平板使培养基均匀分布。
4. 涂布样品：将涂布棒或铂丝环浸入待测样品中，然后均匀地在培养基表面上来回涂布样品。
确保样品均匀分布。
5. 平板培养：将装有样品的平板盖好，置于适当的培养条件下，如温度、湿度等，并在预定时间内培养。
6. 菌落计数：在培养适宜的条件下，待菌落生长到适当大小后，使用放大镜或计数盘进行菌落计数。
菌种划线平板标准操作规程菌种划线平板是一种常用的微生物学实验方法，主要用于菌种的分离和纯化。
为了保证实验的准确性和结果的可靠性，需要按照一定的操作规程进行操作。
如果存在多个菌种，则需准备相应数量的平板。
2. 准备培养基：根据菌种的生长特性选择合适的培养基，并按照菌种需求配制。
常用的培养基包括营养琼脂、肉汤葡萄糖琼脂平板等。
3. 准备培养器具：清洁培养皿、培养管、移液器、吸球等，并对其进行高温高压灭菌处理，确保无菌。
4. 暴露培养器具：开盖的培养皿、培养管等暴露在空气中易被细菌污染，使用前需进行烧烤消毒。
5. 准备菌种：选择需要划线的菌种，将其提取到无菌环境下，用吸液器或移液器进行分装，分装至不同的培养皿中。
二、实验操作步骤1. 消毒操作台：将操作台表面擦拭，用75%酒精喷洒，待酒精挥发后进行紫外线照射消毒，照射时间约15-30分钟。
2. 划线操作：将已经配制好的培养基倒入无菌平板中，使其均匀分布，待其固化后（约15-30分钟），开始划线。
(1) 布置待划线的培养平板：将待划线的培养平板放在炉盘或搁板上，不要弄湿培养平板。
(2) 取菌种：取一支已分装好的菌种，用吸球或移液器吸取适量的菌液，然后轻轻地均匀涂抹于培养平板上。
(3) 用划线针划线：用消毒的划线针，在培养平板上进行划线操作。
先将划线针消毒，再从菌液中取菌，然后从培养皿的一个角划至另一个角，最后将划线针消毒。
(4) 过程控制：整个划线操作应迅速、准确，并且尽量避免划重叠线。
3. 清理操作台：划线操作完成后，用75%酒精擦拭操作台表面，然后喷洒消毒液，待其挥发后，注意再次使用紫外线照射消毒。
三、实验后的处理工作1. 培养平板的封存：将培养平板进行密封，避免外界细菌的污染。
可使用透明胶带或锡纸进行包裹。
2. 培养平板的保存条件：将密封好的培养平板放入恒温培养箱中，设定适当的温度（如37℃），使其进行培养。
3. 培养结果的观察和分析：经过一定时间的培养后，观察培养平板上的菌落情况，分析并鉴定相应的菌种。
LB平板制备：Amp终浓度为100μg/ml（1）配制LB液体培养基（无Amp）按25g/l 称取 6.25 g LB powder ，加入250 ml 锥形瓶中，再加入250 ml dd H2O，用双层铝箔封口121℃，20 min，灭菌。
（2）配制LB固体培养基（含有Amp）1）按15 g/l称取3.75 g Agar加入已有6.25 g LB powder 的250 ml锥形瓶中，加入250 ml ddH2O，双层铝箔封口。
121℃，20 min，高温高压灭菌。
2）带培养基冷却至55 ℃左右时，按1：1000 加入250μl Amp stock（100mg/ml）使终浓度为100μg/ml，即工作浓度。
摇匀，同时避免产生气泡。
3）趁热倒平板，每个表面皿约25 ml左右，冷却成形后，倒置，用保鲜膜，5个一组封装，防止变干，于4℃保存。
（3）分装1）将LB液体培养基1ml/EP管分装，于-20℃保存2）将灭菌水1 ml/EP管分装，于-20℃保存3）将A mp stock 按1 ml/EP管分装，用封口膜封口，-20℃保存（4）80%甘油灭菌分装1）按1：4将灭菌水与甘油充分混合，得80%甘油2）每EP管分装250μl，121℃，20 min高温高压灭菌，-20℃保存50*TAE buffer：242 gTris，57.1 ml 冰醋酸100 ml，0.5 mol/l EDTA （PH8.0），定容至1 LTBE buffer：Tris ,Boric acid ,EDTA.16.87g TBE Powder溶于 1L ddH2O10*PBS: NaCl 80g,KCl 2g,Na2HPO4 6.1g,KH2PO4 1.9g 加ddH2O定容至1L,调PH为7.350*TE Buffer: 500μl 1M Tris-HCl 和100μl 0.5M EDTA于50ml ddH2O中DEPC水：按0.1%比例将1 mlDEPC加入1L ddH2O中，摇匀，37℃温育至少 12 h。
琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。
本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
1.培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。
淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。
2.含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。
通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。
配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。
3.接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。
接种好后置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h），观察结果。
奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
4.结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。
平板的配制及用途
血平板
（1）成分：普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），脱纤维羊血
（2）制法：取所需要量的普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），加蒸馏水溶解后，高压灭菌。
冷却至50℃，加入一定量（5%）的羊血，倾注平板。
（3）用途：适于各类细菌的生长。
巧克力平板
（1）成份：普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），氯化血红素，万古霉素，辅酶A
（2）制法：取所需要量的普通营养琼脂（或哥伦比亚琼脂），加蒸馏水溶解后，高压灭菌。
冷却至60℃左右加入一定量的羊血，置85℃水浴中摇动10-15分钟，冷却到50℃左右后加入相应量的万古霉素和辅酶A，摇匀后倾注平板。
（3）用途：除可以分离奈瑟菌，嗜血杆菌外，由于加入了万古霉素，可抑制绝大多数的革兰阳性菌的生长，在分离培养上具有重要意义，而非楼主所说的可用血平板来替代。
血液中有V，X因子是位于红细胞中的，一般细菌不能利用，轻微的加热使红细胞破坏释放到细胞外方可利用。
YPD培养基
YPD 或YEPD，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基
用于酵母菌的培养
配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉
配制方法：
1 溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）于900ml水中，如制平板加入20g琼脂粉
2 高压 121度20min
3 加入100ml 20gDextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入)
注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。
葡萄糖可以过滤除菌，也可以115℃15min灭菌。
YPD另外一种配方：
2%Trypton(胰化胨或称胰蛋白胨)、2%Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉，115℃15min灭菌。
液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。
加入Zeocin 100ug/ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2 周。
YPEG：除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作为碳源外，其他成分同YPD
YPDZ 是在YPD的基础上加上ZEOCIN抗生素。
YPDA 是在YPD的基础上加0.003%的腺嘌呤硫酸盐。
