动物体细胞杂交技术过程1

第13章动物细胞融合及杂交瘤技术第1节动物细胞融合技术1 动物细胞融合方法:1.1 病毒诱导融合灭活的仙台病毒可诱发细胞融合成多核体细胞。

一般过程：弃上清双亲本细胞—→分别制成细胞悬液—→混合离心—→双亲细胞沉淀+灭活仙台病毒悬液冰浴20min 水浴37o C,30min—→混匀————→ 细胞凝集——————→ 细胞融合—→ 选择培养基间歇摇动间歇摇动1.2 化学诱导融合方法：类似植物细胞融合的PEG法。

特点：来源方便、使用简便、活性稳定、融合效率高由于动物细胞pH值多为中性至弱碱性,PEG溶液的pH值应调至7.4~8.0为宜。

1.3 电激诱导融合方法：类似植物原生质体电激融合。

优点：操作简单；适用于各种细胞类型; 不需加外源因子如PEG等;对细胞的毒性相对低;融合率很高;可用于细胞数量很少的融合过程;可在显微镜直视下定向诱导细胞融合以及直接挑选杂交细胞。

1.4 微流控制细胞配对和融合技术（Microfluidic control of cell pairing and fusion）（Nature Method,2009）2 融合细胞的筛选与植物杂合细胞筛选的模式类似。

同型合胞体（同核体）：其中含有两个或多个相同细胞核合胞体⎨异型合胞体（异核体）：含有两个或多个不同的细胞核。

杂种细胞：少数异型合胞体细胞核融合，染色体合并到一个细胞核内。

亲本体细胞来自同一物种——两套染色体彼此相容不发生排斥融合细胞⎨亲本体细胞来自不同物种——产生排斥现象(其中一套优先排斥)2.1 基于酶缺陷型细胞和药物抗性等所建立的杂种筛选（HAT等）2.2 基于营养缺陷型细胞等所建立的杂种筛选2.3 基于温度敏感突变型细胞组成的杂种筛选2.4 利用荧光激活分选技术进行筛选3 融合细胞克隆化利用单个细胞培养的技术选育出遗传稳定的、能表达特定性状的细胞系。

3.1、有限稀释法3.2、半固体培养基法3.3、显微操作法克隆化后的细胞,经过有限的扩增以后立刻就要冻存种子细胞.鉴定细胞克隆，筛选具有所需性状的杂种细胞杂交细胞的遗传表型：多样性；不稳定性4 细胞融合技术的主要应用:l) 染色体的基因定位；2) 遗传疾病的治疗与基因互补分析；3) 特殊活性物质的制备——淋巴细胞杂交瘤技术。

体细胞杂交技术的原理
体细胞杂交技术，也称为核移植技术或克隆技术，利用体细胞的核转移来实现基因的重组。

其原理主要包括以下几个步骤：
1. 提取供体细胞：从一个成熟的个体中选择一种或几种基因型优良的体细胞作为供体细胞。

常用的供体细胞有皮肤细胞、血细胞、脂肪细胞等。

2. 制备卵母细胞：从同一物种的成熟个体中提取卵母细胞。

在大部分动物中，卵母细胞通常存在于卵巢中。

而对于植物，则常通过控制激素处理来提取卵母细胞。

3. 去核与体细胞融合：通过物理或化学方法，去除卵母细胞的核，得到去核卵母细胞。

然后，将供体细胞核转移到去核卵母细胞中，使其与卵母细胞融合。

4. 诱导发育：通过培养基以及一定的体外环境，诱导融合细胞发育成为胚胎。

这个过程可以通过控制培养基中的营养物质、生长因子以及培养条件的调节来实现。

5. 种植胚胎：将发育完全的胚胎植入供体或者其他寄主个体中，继续发育成为一个新的个体。

在动物中，常常将胚胎植入到母体的子宫内，进行进一步发育。

而植物则常常通过切割和茎体培养等方法来进行胚胎种植。

体细胞杂交技术主要靠核转移来实现基因的重组，因而利用这一技术可以获得与供体细胞相同基因组的个体，即克隆个体。

这项技术在生物医学研究、动物繁殖与保育、植物繁殖改良等领域有着广泛应用。

体细胞杂交程序
体细胞杂交程序是一种实验技术，用于将两个不同物种的体细胞融合在一起，形成一个细胞，包含了两个物种的染色体。

该程序通常包括以下步骤：
1. 准备细胞：从两个不同物种选择合适的细胞，如动物的体细胞或植物的叶片细胞。

2. 刺激融合：将两种细胞置于适当的培养基中，并通过使用化学物质或电脉冲等方法，刺激细胞融合。

3. 培养和选择：将融合细胞转移到含有必要营养物质和因子的培养基中，以促进其生长和分裂。

在培养的过程中，根据需要进行选择，通过筛选和分析细胞形态、染色体数量和遗传特征，以确定成功融合的细胞。

4. 培养成功细胞：一旦成功融合的细胞被鉴定出来，将其传代至足够数目，以确保细胞具备稳定的遗传性状，并确保可以进行后续的实验或应用。

体细胞杂交程序的目的是将两个物种的特性结合在一个细胞中。

这种技术可以用于生物研究、育种改良、生物医学和生物工程等领域，例如创建转基因生物、研究细胞发育和遗传学等。

人教版高中生物选修三知识点汇总(背诵版)专题一基因工程1.2.3.4.5.6.7.8.9.基因工程的场所？（生物体外）基因工程操作水平？（DNA分子水平）基因工程利用的技术？（基因重组和转基因技术）基因工程的原理？（基因重组）基因工程的别名？（DNA重组技术）基因工程的目的？（获得人类需要的基因产物）基因工程/DNA重组技术的基本工具？（限制性核酸内切酶（限制酶），DNA连接酶，载体）工具酶？（限制酶，DNA连接酶）限制酶的分布？（主要分布在原核生物中）限制酶的作用部位？（磷酸二酯键）10.限制酶的特异性？（限制酶只能识别特定的双链DNA 序列，并在特定的切割位点切割）11.限制酶的专一性？（不同的限制酶识别不同的核苷酸序列）12.限制酶作用的结果是？（形成黏性末端或平末端）13.DNA连接酶的种类？（2类。

来自大肠杆菌的E.coliDNA连接酶（只能催化连接黏性末端），来自T4噬菌体的T4DNA连接酶（既能催化连接黏性末端也能连接平末端））14.DNA连接酶的作用位点？（磷酸二酯键）15.DNA连接酶和DNA聚合酶的区分？（DNA连接酶催化连接DNA片断，不需要模板，DNA聚合酶催化连接单个脱氧核苷酸，需要模板）16.载体的种类？（质粒（最常用），λ噬菌体的衍生物，动植物病毒）17.作为载体必备的条件？（能够在受体细胞中稳定存在并自我复制，对受体细胞无害，有一个或多个酶切位点，具有标志基因）18.质粒？（独立于拟核之外的小型环状双链DNA 份子）19.标志基因的作用？常用的有？（供重组DNA的鉴定和选择）（四环素抗性基因，氨苄青霉素抗性基因）20.基因工程中使用的质粒是否是天然质粒？（不是，使用的是人工改造过的天然质粒）21.基因工程的基本操作程序的步骤？（4个，获取目的基因，基因表达载体的构建（核心工程），将目的基因导入受体细胞，目的基因的检测与鉴定）24.PCR（多聚酶链式回响反映）技术的原理？（DNA复制）25.PCR技术操作环境？（生物体外，在PCR扩增仪中）26.PCR与DNA复制不同之处？（前者不需要解旋酶，高温解旋，后者要用解旋酶解旋；前者的DNA聚合酶要求热稳定性高，后者环境温和不需要热稳定性高的DNA聚合酶）（PCR技术中需要一种特殊的酶：Taq酶，又叫热稳定性DNA聚合酶）27.若基因较小，核苷酸序列，则能够通过DNA合成仪？（用化学方法直接人工合成）28.基因表达载体？（不同生物构建的表达载体有差别，但都需具备四部分：启动子，终止子，目的基因，标记基因）（复制原点）29.启动子和起始密码子，终止子和终止密码子？（启动子和终止子是DNA，起始密码子和终止密码子是RNA。

植物体细胞杂交技术流程的原理英文回答：Somatic Cell Hybridization Technique: Principle and Process.The somatic cell hybridization technique is a valuable tool in genetics and biotechnology that allows for the fusion of two different somatic cells to create a hybrid cell. This technique has a wide range of applications, including the production of hybridomas for monoclonal antibody production, the study of gene expression and regulation, and the creation of cell lines for genetic engineering.The principle of somatic cell hybridization is based on the fusion of two cells with different genetic backgrounds. The resulting hybrid cell contains the genetic material from both parental cells, creating a unique combination of traits. The process of somatic cell hybridization involvesseveral key steps:1. Cell Preparation: The first step is to isolate and prepare the two desired cell types. Typically, one cell type is a recipient cell, which is often a myeloma cell or a cell line lacking specific genes, while the other cell type is the donor cell, which contains the desired genes.2. Cell Fusion: The next step is to fuse the two cell types together. This is typically achieved by using a chemical agent such as polyethylene glycol (PEG), which promotes cell membrane fusion. The fused cells are then cultured in a medium that supports their growth and allows for the selection of hybrid cells.3. Selection of Hybrid Cells: After cell fusion, the hybrid cells must be selected from the unfused parental cells. This is often achieved by using a selective medium that allows only the hybrid cells to survive. For example, if the recipient cells are myeloma cells that lack the ability to synthesize a specific enzyme, the selective medium can be supplemented with this enzyme, allowing onlythe hybrid cells to grow.4. Clonal Isolation: Once the hybrid cells are selected, they are cloned to produce a stable cell line. Thisinvolves isolating individual hybrid cells and culturing them to establish a clonal population. The resulting clones are then characterized and screened to identify those that possess the desired traits.中文回答：体细胞杂交技术原理和流程。

动物细胞和植物细胞杂交的实例标题：一次奇妙的实验：动物细胞与植物细胞的杂交在人类历史上，科学家们经常进行各种实验，以便更好地了解生命的奥秘。

而在这些实验中，有一次尤其引人注目，那就是动物细胞与植物细胞的杂交实验。

这次实验的目的是探索动物细胞和植物细胞之间是否存在某种可能的结合方式。

科学家们通过精密的操作将一种动物细胞与一种植物细胞进行结合，希望能够在新的细胞中观察到两种细胞的特征和功能的结合。

实验开始前，科学家们对动物细胞和植物细胞进行了详细的研究和分析。

他们发现，动物细胞具有高度的活动性和灵敏性，能够通过神经传导和肌肉运动实现各种生物功能。

而植物细胞则具有良好的稳定性和自养能力，能够通过光合作用和根系吸收水分养分来维持生命活动。

在实验中，科学家们首先选择了一种动物细胞和一种植物细胞，然后将它们置于一种特殊的培养基中。

经过一段时间的培养，他们观察到了一些有趣的现象。

新的细胞在形态上呈现出中间状态，既有动物细胞的柔软和可塑性，又有植物细胞的稳定和坚韧。

这种形态的结合使得新细胞在外形上显得独特而美丽。

新细胞在功能上也呈现出了动植物细胞的特点的结合。

它能够通过神经传导实现一定的运动，同时还能够通过光合作用和根系吸收养分来自养。

这样的功能结合使得新细胞具备了独特的生存和适应能力。

通过进一步的观察和实验，科学家们还发现，这种动植物细胞杂交的新细胞在抵抗病原体和适应环境变化方面具有更强的能力。

这为进一步研究细胞的特性和生命的演化提供了重要的线索。

这次动植物细胞杂交的实验不仅仅是一次科学的突破，更是人类对生命奥秘追求的体现。

通过这次实验，科学家们对生物界的多样性和复杂性有了更深入的理解，也为未来的科学研究提供了新的思路和方向。

当我听到这个实验的结果时，我感到非常震惊和兴奋。

这次实验不仅探索了动植物细胞之间的奇妙结合，也让我更加深入地思考了生命的本质和起源。

我深信，在不久的将来，科学家们会继续探索生命的奥秘，带给我们更多关于生命的惊喜和发现。

山东大学细胞生物学实验报告聚乙二醇（PEG ）法诱导的动物细胞融合实验2012/9/11实验目的：了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理，用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验，掌握实验的基本操作，观察鸡血红细胞融合的不同时期。

实验原理：1. 细胞融合的概念两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合，细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。

细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。

2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导，化学诱导和物理诱导。

1953年，M. Kuroya 在临床中第一次分离到仙台病毒（HVJ ）[1]。

1958年，日本学者Okada 发现仙台病毒（HVJ ）能诱导动物细胞融合[2]，其基本原理是仙台病毒的衣壳上有细胞表面受体的结合位点，可以诱导不同细胞凝集，最终使不同细胞的细胞膜相互融合。

1974年，加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇（Polyethyleneglycol ，PEG ）化学融合法，由于该方法对实验条件要求极低，试剂易得，操作简单，成为应用最广泛的细胞融合方法。

化学诱导细胞融合的基本原理是PEG 等化学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重排，相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。

比之于仙台病毒诱导法，PEG 诱导法的效率提高了几百倍。

80年代，科学家发明了细胞电融合法[4, 5]，电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。

电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。

当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时，细胞表面会发生极化现象，相邻的细胞将吸附在一起。

这时突然提高电场强度，细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿，细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。

图2. 以电融合方法得到的3T3-C2融合细胞 （引自J. Teissie 等，1982 )。

基因工程细胞工程知识点汇总一、基因工程（一）基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA 重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。

（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。

（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。

（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。

2.“分子缝合针”——DNA连接酶(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。

②区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。

(2)与DNA聚合酶作用的异同: DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。

DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。

3.“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。

②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

（2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。

（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。

2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。

人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。

3.PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。

体细胞杂交应用的原理1. 引言体细胞杂交，也称为物质杂交或体细胞融合，是一种生物技术，用于将两个或更多种不同的细胞融合在一起。

体细胞杂交应用的原理是基于细胞的能力合并成一个无性繁殖细胞，从而创造有特定特征或功能的细胞或生物体。

2. 核心原理体细胞杂交应用的核心原理是通过融合两个或多个不同种类的细胞，将它们的遗传物质合并在一起，创造出新的细胞或生物体。

这个过程可以通过以下步骤来实现：•细胞收集：选择需要进行杂交的细胞类型，并进行细胞培养，使其处于最佳状态。

•细胞融合：将不同种类的细胞放置在适当的环境中，以促使细胞融合。

常用的方法包括化学诱导、电融合和病毒介导的融合。

•杂交细胞的培养：融合后的细胞需要在特定的培养基中进行培养和繁殖，以保持其生存和繁衍。

•杂交细胞的筛选：对培养后的杂交细胞进行筛选，选择具有特定特征或功能的细胞或生物体。

•杂交细胞的繁殖：选定的杂交细胞或生物体可以被用作进一步的繁殖和应用。

3. 应用领域体细胞杂交应用在多个领域中具有重要意义，包括：3.1 作物改良体细胞杂交被广泛应用于作物改良中，以改良作物的品质、抗病性、产量等方面。

通过融合不同种类的作物细胞，研究人员可以创造出具有抗虫、抗逆性以及其他重要农艺性状的新品种。

3.2 动物繁殖体细胞杂交也被用于动物繁殖领域。

通过将不同种类的动物细胞进行融合，可以创造出具有特定特征的新动物品种。

这对于家畜品种改良和保护濒危物种都具有重要意义。

3.3 人类医学研究体细胞杂交在人类医学研究中也有应用。

例如，通过将人类细胞与小鼠细胞融合，研究人员可以创造出带有人类基因的小鼠模型，用于研究人类疾病、药物测试等方面。

3.4 细胞治疗体细胞杂交还被应用于细胞治疗领域。

通过融合患者体内的成熟细胞与多能干细胞，可以创造出具有再生能力和修复功能的细胞，用于治疗各种疾病和创伤。

4. 优势和挑战体细胞杂交应用具有以下优势：•提供了创造新品种和改良特性的方法。

•可以用于研究和理解遗传物质的功能。

【实验目的】1.了解动物细胞融合的常用方法2.学习化学融合和电融合的基本操作3.观察动物细胞融合过程中的行为和变化【实验原理】1.病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融合。

这类病毒的被膜中含有融合蛋白，可以介导病毒同宿主细胞融合，也可以介导细胞与细胞的融合。

用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。

2.化学诱导融合很多化学试剂都能诱导细胞融合，如聚乙二醇（PEG），二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂，磷脂酰丝氨酸等。

这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。

在恢复的过程中相接处的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。

化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。

PEG是被广泛使用的化学融合剂。

3.电击诱导融合包括电诱导、激光诱导等。

其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力作用，两细胞发生融合。

电诱导方法具有融合过程易控制，融合概率高，作用机制明确，可重复性高等优点。

【实验材料】1.材料鸡血红细胞2.试剂 50%PEG、0.85%氯化钠溶液、GKN缓冲溶液3.器材倒置显微镜、离心机、量筒、注射器、载玻片、盖玻片、离心管等【实验步骤】1.取离心管，加入冷藏的鸡血1ml，加入4ml 0.85%氯化钠溶液，摇匀2.将离心管放入离心机中，以1000-1200r/min的速度离心5分钟左右。

取出离心管，弃掉上清液，再加入4ml氯化钠溶液，重复以上操作。

3.取离心管，弃掉上清液后，按照红细胞沉积的体积，加入1-2mlGKN溶液，摇匀。

4.取以上溶液1ml，加入3mlGKN溶液，再次摇匀5.取以上溶液1ml，加入0.5mlPEG，先静置1-2min，再将溶液摇匀后，静置1-2min。

动物细胞融合的方法动物细胞融合是一种重要的生物学技术，它可以用于基因工程、生物医学研究、动物繁殖等领域。

在动物细胞融合的过程中，需要采用一定的方法和技术来实现细胞的融合。

下面将介绍几种常见的动物细胞融合方法。

首先，电脉冲法是一种常用的动物细胞融合方法。

这种方法利用瞬时的高压电脉冲，使细胞膜发生短暂的通透性增加，从而促使细胞融合。

在实验室中，可以利用专门的电脉冲仪器对细胞进行脉冲处理，从而实现细胞融合。

电脉冲法融合的细胞可以用于体细胞核移植、基因转染等研究领域。

其次，化学融合法也是一种常见的动物细胞融合方法。

这种方法利用化学物质（如聚乙二醇）破坏细胞膜，使细胞融合成为可能。

化学融合法相对于电脉冲法来说，操作简单，成本低廉，因此在实验室中得到广泛应用。

化学融合法融合的细胞可以用于细胞杂交、细胞克隆等研究领域。

另外，病毒介导的融合方法也是一种常用的动物细胞融合技术。

这种方法利用病毒载体将目标细胞中的融合蛋白基因导入到另一种细胞中，从而实现细胞融合。

病毒介导的融合方法可以用于基因治疗、病毒载体构建等研究领域。

最后，微操作融合法是一种微操作技术，通过显微镜下的精细操作，将两个细胞融合在一起。

这种方法操作复杂，需要操作者具有较高的微操作技能，但可以实现单个细胞的融合，适用于一些特定的细胞融合实验。

总的来说，动物细胞融合的方法有多种多样，每种方法都有其特点和适用范围。

在实际应用中，可以根据具体的研究目的和条件选择合适的融合方法，从而实现细胞融合的目的。

希望本文介绍的动物细胞融合方法对您有所帮助。