绿叶中色素的提取与分离实验操作过程图文

光。
记录波长和吸光度A于下表中，并在标准绘图纸上绘出叶绿体色 素的吸收光谱曲线。
λ （nm）
400
420
440
460
480
500
…... 600
620
640
660
680
700
A
6、光对叶绿素的破坏作用
将试管4置于暗处，试管3置于强光 下，照射2~3小时后，观察试管颜 色的变化，解释这种现象。
7、铜代叶绿素反应
向试管5中逐滴加入浓盐酸，并不断摇匀，至颜色变化， 观察并记录现象；
向变色后的叶绿素溶液中加入少量醋酸铜，并在酒精 灯上缓缓加热，观察并记录颜色的变化。
分析原因。
二、实验原理
（一）叶绿体色素：
1.叶绿素 2.类胡萝卜素
胡萝卜素 叶黄素
（三）叶绿素的光学性质
叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定 的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。
三、实验材料与试剂
新鲜的菠菜叶片。 95%乙醇 、CaCO3、醋酸铜结晶、浓
盐酸、汽油。 量筒，滤纸，大培养皿一只，小培养皿一只Fra bibliotek长滴管，剪刀。
四、实验步骤
1、 叶绿体色素提取： 将菠菜叶片擦净，去中脉后取 10g剪碎，加少许碳酸钙和石英砂，
再分次加入10mL酒精研磨，过滤，定容至50ml，分装于5个试管内， 容量分别为10ml。
4
2
1
3
5
3、叶绿体色素吸收光谱曲线
取1ml提取液于比色杯中（试管2），加3ml95%乙醇。 用95%乙醇作为对照，在400~700nm之间每隔20nm测一次

Ⅰ、提取叶绿素
•
• Ⅱ、探究pH对叶绿素稳定性的影响 取一些叶绿素粗产品，配成一定浓度的溶液，于室温（约25℃）下进行实验，方法和 结果如下表：
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• 小李想了解叶绿素粗产品中是否含有其他色素，请你提供检测方法并说出主 要步骤
参考答案： 纸层析法 。 主要步骤：1.制备滤纸条； 2.画色素液 细线；
操作目的 使滤液中叶绿素的含量高 有助于研磨充分和保护叶绿素
防止溶剂挥发，并充分溶解色素 使分离的色素分层，防止色素重叠 使分离的色素带清晰，便于观察 防止滤液溶解到层析液中，无法分离
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实验拓展、能力提升 1、用毛细吸管划滤液细线时很难保证细且直，有什么解决办法？ 2、课下搜集资料，探究其他色素提取和分离的方法 。
7
设计实验
分离色素的原理
各种色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的随 层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢，从而使各种 色素相互分离。
8
实验步骤
两角
1cm
毛细吸管 细齐 直
一两
适量 滤液细线
滤液细线
9
分组实验，探究要点
1、制备滤纸条时为什么要剪去两角，否则会出现什么现象？ 2、滤液细线为什么不能浸到层析液中？ 3、画滤液细线为什么要细且直，并待干后重复几次？ 4、为什么装有滤液和层析液的试管一定要用棉塞塞严？ 5、实验后滤纸条上出现了几条色素带?分别是什么颜色? 6、从上往下色素带顺序如何？各色素带宽窄如何？这些说明了什么？
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典例分析 （2012上海）图6表示叶绿体色素提取分离实验中纸层析的结果，据图判断用作
实验材料的叶片颜色为 • A．红色 B．黄色 • C．绿色 DB．紫色
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• 【实践应用】

（黄色）
畅想
绿色
关注 环保
珍爱 生命
1．从绿叶中提取色素，选取的最佳叶片应是
A. B. C. D.
肥嫩多汁的叶片 革质叶片 刚刚长出来的小嫩叶 鲜嫩且颜色浓绿的叶片
2．在进行绿叶中色素的提取和分离的实验时不让 层析液触及滤液细线的原因是（ ）
A．滤纸上几种色素会扩散不均匀而影响实验结果 B．滤纸上的滤液细线会变粗而使色素太分散 C．色素会溶解在层析液中而使实验失败 D．滤纸上的几种色素会混合起来不分散
3．研磨绿叶时要加入碳酸钙，其目的是 A．使各种色素溶解在丙酮中 B．使研磨充分 C．防止色素分子被破坏 D．加速研磨
4．纸层析法分离叶绿体色素时,滤纸上最下 端的色素名称和颜色分别是 ( )
A．橙黄色的胡萝卜素 B．黄色的叶黄素 C．蓝绿素的叶绿素a D．黄绿色的叶绿素b
胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a 叶绿素b
一、色素的提取
1.原理：色素不溶于水，易溶于有机溶剂
（如：无水色素含量高)
深绿叶片
剪碎
(充分、迅速)
研磨
过滤
观看实验视频并思考：
1、SiO2、CaCO3在实验中起什么作用？ 2、加入丙酮（或无水乙醇）的作用是什么？ 3、为什么要迅速研磨？ 4、为什么必须及时用棉塞塞紧试管口？
类胡萝卜素 （1/4） 叶绿素 (3/4)
其他层析结果展示
胡萝卜素 叶黄素
叶绿素a
叶绿素b
圆形滤纸层析
柱层析
二、绿叶中色素的种类
胡萝卜素 （橙黄色）
类胡萝卜素
（约占1/4）
叶黄素
（黄色）
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素
(约占3/4)
叶绿素b （黄绿色）

绿叶中色素的提与与分散真验之阳早格格创做一、真验本理1、提与的本理：利用色素溶于有机溶剂无火乙醇而没有溶于火的本量.2、分散的本理：利用百般色素正在层析液中的溶解度分歧，随着层析液正在滤纸上扩集的速度分歧.（纸层析法）两、手段央供1、举止绿叶中色素的提与战分散；2、商量绿叶中含有几种色素三、资料东西1、资料：新陈的绿叶（如菠菜、韭菜的绿叶）.2、东西：剪刀、药匙、研钵、量筒、漏斗、试管、棉塞、僧龙纱布、盖玻片、试管架、搞燥的定性滤纸、铅笔、曲尺、烧杯、脱针的细线、滴管.3、试剂：无火乙醇、层析液、两氧化硅（石英沙）战碳酸钙.四、要领步调1、提与绿叶中的色素（1）与深绿色的动物叶片，洗洁，抹搞火分，并称与5g，剪成小块置于研钵中.（2）正在研钵中加进少许两氧化硅（SiO2）、碳酸钙（CaCO3），再加进6ml无火乙醇.（3）赶快、充分天研磨成糊状.（4）正在漏斗基部搁一小块单层僧龙纱布，将研磨液赶快倒进玻璃漏斗中举止过滤.将滤液支集到试管中，即时用棉塞将试管心塞宽.剪碎绿叶加两氧化硅、碳酸钙，（赶快）研磨成糊状再加进10ml无火乙醇过滤支集滤液，棉塞启心2、造备滤纸条（如下图）3、绘滤液细线（如下图）滤纸条：少6cm，宽1cm，用盖玻片一端蘸与滤液，沿铅笔线绘线，距一端1cm处用铅笔战曲尺等滤液细线风搞后，再绘下一讲细线，沉复绘一条细的横线. 2—3次.绘线央供：细、曲、齐.4、分散色素将3ml层析液倒进小烧杯中，将滤纸条（有滤液细线的一端往下）沉沉拔出层析液中，随后用培植皿盖挡住小烧杯.注意：没有克没有及让滤液细线交触到层析液.5、瞅察与记录瞅察烧杯中滤纸条上橙黄色黄色蓝绿色黄绿色出现了几条色素戴，以及每条色素戴的颜色战宽度.将瞅察截止记录下去，并将层析截止的分散截止揭正在上头.“培植皿法”五、计划1、滤纸条上有几条分歧颜色的色戴？其排序何如？宽窄怎么样？那证明白什么？2、滤纸条上的绿叶细线为什么没有克没有及触及层析液？3、将有色素戴的滤纸条夹正在书籍里，几天后会出现什么局里？那证明白什么？4、到了春天叶色变黄、变白的本果是什么？注：无火乙醇-------------------溶解、提与色素两氧化硅（SiO2）--------研磨充分碳酸钙（CaCO3）--------预防色素损害层析液----------------------分散色素。

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3
实验步骤：
3.画滤液细线
2019-11-27
滤液细线的要求：
细、直、齐（使色素处于同 一起跑线）；
重复2—3次（防止色素太少 分离现象不明显）。
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4
实验步骤：
4.分离绿叶中的色素
培养皿
注意:
滤液细线
层析液
滤液细线不能触到层析液（防止色素溶解在层析液中）
烧杯要盖上培养皿、试管要塞上棉塞（层析液易挥发且有毒）
颜色
度
能
胡萝卜素 橙黄色 最少 叶黄素 黄色 较少
最大 较大
最快 蓝紫光 较快
叶绿素ａ 蓝绿色 最多 叶绿素ｂ 黄绿色 较多
较小 最小
较慢 蓝紫光 最慢 红光
与光合作用有关的色素存在于哪呢？
2019-11-27
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7
四种色素对光的吸收 叶绿体中的色素提取液
叶绿素a、b主要吸__蓝__紫__光__、__红__光___
胡萝卜素和叶黄素主要吸收_蓝__紫__光_____
2019-11-27
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8
叶绿体中色素提取和分离实验中几个关键问题
• 取叶要新鲜 ， 滤液中含有较多的色素；
• 研磨要迅速充分，防止无水乙醇挥发，同时可以得到色素浓度较大的
滤液；
• 画滤液细线要重复２－３次，以便色素带清晰；
• 滤液细线要细、直、齐，防止色素带重叠；
2019-11-27
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5

实验步骤：
5、观察与记录实验结果
胡萝卜素 捕 类胡萝 （橙黄色）
获 光 能
卜素
(占1/4)
叶黄素
（黄色）
的
叶绿素a

画滤 液细 线
①用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔画线处均匀 画一条直的滤液细线；
②干燥后，再画一两次
PPT教学课件
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绿叶中色素的提取和分离过程
称量：称取 5 g 新鲜绿叶
提
剪碎：去掉叶柄和粗的叶脉
取
色
研磨：加入少许SiO2、CaCO3和 10 mL 无水乙醇
素
过滤：漏斗基部放单层尼龙布
收集滤液：用棉塞将试管口塞严
制备 滤纸 条
①将干燥的滤纸剪成长与宽略小于试管长与宽 的滤纸条，并在一端剪去两角；
②在距剪去两角的一端 1 cm 处用铅笔画一条细 的横线

1
为什么有些植物叶片不是绿色的? 为什么有些植物的叶片在不同时期颜色不同呢？ 植物叶片中到底含有哪些色素？
2
汤阴一中：司庆文
3
一、实验目的
1.掌握叶绿体色素的提取方法； 2.掌握纸层析法分离叶绿体色素的原
理和步骤；
4
二、实验原理
叶绿素
叶绿素a（黄绿色） 叶绿素b（蓝绿色）
类胡萝卜素
胡萝卜素（橙黄色） 叶黄素 （黄色）
6
四、实验步骤
（一）提取色素：
原理： 色素能溶解在酒精等有机溶剂中，
所以可用无水乙醇提取色素。
材料:5g鲜叶
1.研磨
SiO2——使研磨充分
药品 CaCO3 ——防止色素破坏
无水乙醇——溶解色素
7
2.过滤：获取绿色滤液
8
（二）分离色素
原理： 色素随层析液在滤纸上扩散速度不同，从而
分离色素。
★扩散速度与色素在层析中的溶解度的关系：
4．如图做色素层析分离的正确装置是（ D ）
15
七、课后作业
1、在作业本上画出滤纸条的色素分布 2、查阅相关资料，了解各种色素的功能
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胡萝卜素（橙黄色）
类胡萝卜素
1 /4
叶黄素（黄色）
叶绿素
3 /4
叶绿素a (蓝绿色) 叶绿素b（黄绿色）
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六、课堂训练
1．通过纸层析法分离叶绿体色素，结果在滤纸条上
出现4条色素带，从上而下依次为：（ A ）
A．胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b B．胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素 C．叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素、叶黄素 D．叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素 2．假如在圆形滤纸的中央点上色素滤液，对叶绿体 的色素进行纸层析法分离，会得到近似同心的四个

绿叶中色素的提取和分离
色素的提取：称取5g绿叶，剪碎，放入研钵中；接着加入少量二氧化硅和碳酸钙，然后加入5——10ml的无水乙醇，迅速、充分研磨；将研磨的叶片匀浆倒入垫有尼龙布的漏斗中进行过滤，将滤液收集到试管中，并有棉塞将试管看塞严实。

制备滤纸条：将干燥的定性滤纸剪成宽度略小于试管直径，长度略短于试管长度的长方形纸条，并在下端剪掉两个角，并用铅笔在距离下端约1cm处画一条标记线。

画滤液细线：用毛细管（可以用毛笔等代替）吸取过滤得到的滤液，在滤纸条上沿着刚才用铅笔画的标记线画一条细线，等待干后，再沿着这条线重复画几次，使画出来的滤液细线：细、浓、齐。

分离色素：将画有滤液细线的滤纸条插入放有少量层析液的试管中，随后塞上棉塞。

注意，将画有滤液细线的一端朝下，不能让滤液细线淹没在层析液中。

观察与记录：当滤纸条上出现几条色素带后，注意观察色素带的颜色和宽窄，并记录下来。

绿叶中色素的提取与分离实验一、 实验原理1、提取的原理：利用色素溶于有机溶剂无水乙醇而不溶于水的性质。

2、分离的原理：利用各种色素在层析液中的溶解度不同，随着层析液在滤纸上扩散的速度不同。

（纸层析法）二、目的要求1、进行绿叶中色素的提取和分离；2、探究绿叶中含有几种色素三、材料用具1、材料：新鲜的绿叶（如菠菜、韭菜的绿叶）。

2、用具：剪刀、药匙、研钵、量筒、漏斗、试管、棉塞、尼龙纱布、盖玻片、试管架、干燥的定性滤纸、铅笔、直尺、烧杯、穿针的细线、滴管。

3、试剂：无水乙醇、层析液、二氧化硅（石英沙）和碳酸钙。

四、方法步骤1、提取绿叶中的色素（1）取深绿色的植物叶片，洗净，抹干水分，并称取5g ，剪成小块置于研钵中。

（2）在研钵中加入少许二氧化硅（SiO 2）、碳酸钙（CaCO 3），再加入6ml 无水乙醇。

（3）迅速、充分地研磨成糊状。

（4）在漏斗基部放一小块单层尼龙纱布，将研磨液迅速倒入玻璃漏斗中进行过滤。

将滤液收集到试管中，及时用棉塞将试管口塞严。

剪碎绿叶 加二氧化硅、碳酸钙， （迅速）研磨成糊状再加入10ml 无水乙醇过滤 收集滤液，棉塞封口2、制备滤纸条（如下图）3、画滤液细线（如下图）滤纸条：长6cm ，宽1cm ， 用盖玻片一端蘸取滤液，沿铅笔线画线， 距一端1cm 处用铅笔和直尺 等滤液细线风干后，再画下一道细线，重复 画一条细的横线。

2—3次。

画线要求：细、直、齐。

4、分离色素将3ml 层析液倒入小烧杯中，将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）轻轻插入层析液中，随后用培养皿盖盖住小烧杯。

注意：不能让滤液细线接触到层析液。

5、观察与记录观察烧杯中滤纸条上出现了几条色素带，以及每条色素带的颜色和宽度。

将观察结果记录下来，并将层析结果的分离结果贴在上面。

“培养皿法” 五、讨论橙黄色 黄色蓝绿色 黄绿色1、滤纸条上有几条不同颜色的色带？其排序怎样？宽窄如何？这说明了什么？2、滤纸条上的绿叶细线为什么不能触及层析液？3、将有色素带的滤纸条夹在书里，几天后会出现什么现象？这说明了什么？4、到了秋天叶色变黄、变红的原因是什么？注：无水乙醇-------------------溶解、提取色素）--------研磨充分二氧化硅（SiO2碳酸钙（CaCO）--------防止色素破坏3层析液----------------------分离色素。

带将不整齐 D．若在圆形滤纸的中央点上滤液，进行叶绿体色素层析，
排列在同心的四个色素环最里圈的色素为橙黄色
3、恩格尔曼用水绵进行的光合作用实验证明的是（ B ） A.绿色叶片在光合作用中产生了淀粉 B.氧气是由叶绿体所释放 C.植物可以净化空气 D.光合作用释放的氧全部来自水
4、下列关于叶绿体中色素的提取和分离实验原理的叙述中，正 确的是（ C ）
(2)将临时装片放在黑暗并且没有空气的环境中，排 除了__光__线和__氧__气的影响，从而确保实验正常进行。
(3)选用了_极__细_光__束__照射，并且选用___好__氧__细__菌检测， 从而能够准确判断出水绵细胞中释放__氧___的部位。
(4)进行黑暗(局部光照)和曝光对比实验，从而明 确实验结果完全是____光_引照起的。
③
④.
① 外膜 ② 内膜
③ 基粒
④ 类囊体膜
⑤ 基质
捕获光能的色素分布在类__囊__体_的__薄_膜__上___
恩格尔曼实验
结论：氧是由_叶_绿__体__释放出来的， 叶绿体是光__合__作_用__的 场所。光合作用需要___光__照___。
思考：恩格尔曼实验在设计上有什么巧妙之处?
(1)选材方面，选用___水_绵_为实验材料。水绵不仅具有 细长的带状叶绿体，而且叶绿体螺旋状地分布在细 胞中，便于观察、分析研究。
2.某人做叶绿体中色素分离实验时，使用的 是圆形滤纸，装置如下图。实验结束时在圆形 滤纸上形成四个同心色素圆环，则最内圈所呈 颜色为（ D）
实战演练
1、将提取的绿叶中色素滤液装入试管中，一束白光
穿过该滤液后经三棱镜对光进行色散，哪条光谱的颜
色明显减弱？（C ）
A. 绿光
B. 黄光

主要吸收蓝 叶绿体的类 叶绿素b 紫光和红光 囊体薄膜上 类胡萝卜素 胡萝卜素 主要吸收蓝 (约占1/4) 叶黄素 紫光 吸收光谱
叶绿素a
(二)叶绿体的结构与功能
1．形态：一般呈扁平的椭球形或球形 外膜 2．结构： 内膜 基粒 由囊状结构的类囊体堆叠而成 需光反应―发生在类囊体薄膜上 基质 3．功能： 叶绿体是进行光合作用的场所，内部膜 表面上分布着许多吸收光能的色素分子 和许多进行光合作用所必需的酶。
③、光照强度与光合作用效率的关系曲线
光照强 度影响光反 应，与光合 强度成正相 关，有饱合 点和补偿点。
二 氧 化 碳 吸 收
c
净光合量
光饱和点
总光合量
二 氧 a 化 碳 释 放
b
光补偿点
呼吸作用
光照强度
④生产应用的具体措施
（2）CO2浓度对光合作用的影响
①规律：影响暗反应，在一定范围内与光合强度成 正相关，有饱合点。浓度过高，则由于抑制呼吸作 用而抑制光合作用的速率。
有光、无光都能进行 6(CH2O) ＋6O2 ＋6H2O
1、叶绿体色素提取液放在自然光源和三棱镜之间， 通过棱镜的连续光谱中缺少 （ A ） Ａ.红光和蓝紫光 Ｂ.红光和绿光 Ｃ.黄光和蓝紫光 Ｄ.黄光和绿光 2、高等绿色植物叶绿体中含量最多的色素是（ A ） Ａ.叶绿素a Ｂ.叶绿素b Ｃ.胡萝卜素 Ｄ.叶黄素
①水的光解
① CO2的固定 CO2+C5
酶
物质 变化 ②ATP的合成
H 2O
光
O2+[H]
2C3
② C3的还原和C5的再生
2C3+[H]+ATP 酶 (CH2O)+C5+ADP+Pi