【干货】真菌检测中常见问题专家解答

微生物检测过程中的问题及解答1.微生物实验过程中使用的移液枪怎么灭菌？答：移液枪用纱布包好，外面报纸包好灭菌。

不能湿热灭菌的枪，在枪口处塞入少许棉花，外面采用表面灭菌的方法擦拭灭菌，里面采用热空气交换法或者洁净空气交换法处理。

2.微生物实验过程中如果移液枪枪头想要重复使用怎么办？答：枪头盒装好，报纸包好灭菌。

枪头少的话放入平皿或者小烧杯后，报纸包好灭菌。

3.微生物实验回收率上下限是多少？答：50—200%（药典规定）。

4.灭菌后的物品怎么保存，几天内可以继续使用?答：移液管、平皿之类的工器具没打开放无菌室一般可以放置两个星期左右。

灭菌后的培养基放冰箱冷藏保存通常可放一星期。

6.新国标GB4789.10-2016金黄色葡萄球菌检验中培养时间很多都改成了24-48h，这个跨度有点大，具体怎么判定啊？答：如果培养24h后已经长菌就不需要再进行培养了；如果培养24h后未长菌则需要继续培养至48h。

7.新标准GB4789.15-2016霉菌和酵母计数，有一条新的变化：“菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10-100之间，采用两位有效数字报告”，有这样一种情况：样品按照1:10稀释后，最低稀释倍数10倍的结果，如果分别为：1，0，算平均数并乘以相应稀释倍数后，结果为：5，这个时候，结果报：5CFU/g(mL)吗？以前我们是报<10。

就是如果样品稀释了10倍，检测结果是5，这个时候报"5"还是"<10"?这条规则其他标准没提，只适用于霉菌酵母？其他项目菌落总数，大肠菌群等，是否适用？？？答：6.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

也就是说以小于1乘以稀释倍数形式报告时，是指均无菌落生长时，你的平板既然有长菌落，结果就应该是5，“菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10-100之间，采用两位有效数字报告”这个主要是为了防止出现8.5这样的结果，按10版100以内采用两位有效数字报告，那8.5是符合要求的，存在歧义，16版更严谨了些。

微生物检验常见问题解答微生物检验常见问题解答一、方法验证1.做过验证的样品微生物检验方法是否都需要按照新的方法进行重新验证?答：对于微生物限度检查的产品而言，由于培养时间调整，应重新进行验证。

对于无菌检查的产品而言，如果方法未作实质性调整，可以不必重新验证。

个别产品在各论中收载了新的无菌检查方法，对这些品种，应对收载方法的适用性进行验证。

2.以前做过无菌验证的品种是否需要重新按照新的标准再验证?答：参见问题1。

3.“新增抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜”比如注射用克林霉素磷酸酯属于抗生素，是否需要重新选取滤膜再验证?答：目前采用的方法如果经验证表明可行，则可以继续使用该方法。

4.微生物方法学验证时，培养时间是否跟样品日常检验所培养时间一致?答：应该一致。

5.微生物限度验证时，如果一个方法只有金葡回收率达不到要求，该方法时是否可以用来做细菌霉菌的检测方法?答：按药典的规定，一个计数方法通过验证，是指所有试验菌的回收率均达到要求。

如果采用各种方法以及方法的组合仍无法使金葡回收率达标，则可以采用使金葡回收率最高的方法作为计数方法。

6.薄膜过滤的冲洗量不能超过1000ml，我公司的喹诺酮类产品原来的方法是每张膜冲洗量为1500和2000ml，请问有没有合适的方法将冲洗量降至1000，各菌的回收率仍能符合规定?答：有几种办法可以降低冲洗剂的用量：1)降低接触滤膜的供试品的浓度;2)改进冲洗的方式，如少量多次地冲洗、降低蠕动泵的转速等;3)添加中和剂，如高价金属离子。

7.微生物限度检查法规定，技术方法验证时，采用上述方法若还存在一株或多株试验菌的回收率达不到要求，那么选择回收率最接近要求的方法和试验条件进行供试品检验。

请问，上述方法是指仅通过一种方法还是一定要通过几种方法联用的?答：应该要把可能采用的所有方法包括方法联用都进行验证。

8.供试品不溶于稀释剂，同时又有抑菌性，限度检查时应如何消除抑菌性?答：采用低速离心的方式，尽可能把供试品去除干净，取离心后的上层液，进行薄膜过滤。

检验科实验室常见问题解答与疑难解析实验室在科学研究和生产实践中起到了至关重要的作用。

无论是进行化学分析、生物测试还是材料性能检测，实验室都是必不可少的环节。

然而，在实验室操作过程中，我们常常会遇到各种问题和困惑。

本文将针对检验科实验室的常见问题进行解答与疑难解析，帮助读者更好地理解实验室操作技巧和科学原理。

一、检验科实验室常见问题解答1. 如何正确使用试剂？试剂在实验室中是必不可少的实验工具。

正确使用试剂可以确保实验结果的准确性和可靠性。

首先，需要仔细阅读试剂说明书，了解其性质、用途、储存条件等信息。

在使用前，应检查试剂的外观是否正常，如有异常应立即停止使用。

使用试剂时，要遵守操作规程，严格控制试剂的用量，避免超量使用或浪费。

使用后，要妥善保存试剂，并及时清洗实验仪器和容器，避免试剂残留导致交叉污染。

2. 如何有效控制实验室的环境条件？实验室的环境条件对实验结果具有重要影响。

首先，要保持实验室的洁净度，定期清洁实验台、仪器设备以及管道系统，防止杂质和污染物对实验产生干扰。

其次，要控制实验室的温度和湿度，避免过高或过低的环境条件对实验结果的影响。

此外，要保持实验室内的噪声和振动水平较低，以减少外界因素对实验的干扰。

3. 如何安全操作实验室仪器？实验室仪器的正确操作可以确保实验结果的准确性和实验人员的安全。

在操作前，要仔细阅读仪器的操作说明书，了解其工作原理和使用方法。

操作时，要根据说明书的要求进行调试和设置，严格控制操作参数，避免误操作导致的事故发生。

操作结束后，要及时关闭仪器设备，并保持其清洁和维护，延长其使用寿命。

4. 如何正确处理实验废弃物？实验废弃物的正确处理是实验室安全与环保的重要方面。

根据废弃物的性质不同，选择合适的处理方法。

对于有害废弃物，应按照环境保护法规定的程序进行收集、封存、运输和处置。

对于非有害废弃物，应进行分类处理，如可回收废弃物进行回收利用，可焚烧废弃物进行安全焚烧等。

严禁将废弃物随意倾倒或排放到环境中，以免给环境和人员健康造成损害。

【干货】真菌检测中常见问题专家解答近年来，随着恶性肿瘤的高发、艾滋病的流行、化疗药物、广谱抗生素、糖皮质激素和免疫抑制剂等药物的广泛使用，以及人工导管等侵入性操作、器官移植等有创诊疗技术的应用，由真菌所引起的感染日益成为临床各科室面临的巨大挑战。

为了提高临床诊断水平，加强真菌的检验能力显得至关重要，现在临床微生物实验室有关真菌检验的常见问题汇总如下，供大家学习参考。

1、为什么培养要设定35 C?实验室通常将孵箱温度设定为35 C,是为了防止温度的波动对细菌或真菌生长的影响。

临床常见细菌的最适生长温度为33〜37 C （嗜热，嗜中温菌除外，占少数），设定为35C时上下波动2C 对培养无影响，如设定为37C C显然就不合适了。

至于真菌培养,要视标本来源而定。

一般怀疑浅部真菌感染的标本如皮屑、甲屑、头屑及毛发等分离培养于26〜28 C。

来源于人体深部组织的标本如痰、胸腹水、血及骨髓深部脓肿等建议放35 C培养，是刚离体的标本在35 C更接近于人体温度，其次临床最常见的白念珠菌在35 C能形成更为典型的伪足样菌落，这与血清出芽试验在35 C做是同样的道理。

同时’ 来源于35 C初分离的光滑念珠菌具有更高的酶活性。

怀疑温度型双相真菌感染或个别真菌需要较高温度生长时则需要两种温度同时培养。

还要注意培养环境的湿度,一般要求大于60%,如果培养箱的湿度不够,最好在平板附近放置盛有无菌水的容器以保证湿度。

2、CO2 对真菌生长影响大吗?真菌属于异养型微生物，主要从有机化合物中获得碳源,而自养型微生物才需要从CO2 中获得碳源，所以真菌一般不需要在二氧化碳环境中培养，而且CO2 对真菌的生长和繁殖均不利,但一定浓度可刺激孢子形成。

3、在血培养中培养出真菌2 次，但是患儿没有临床表现，而且临床也没用抗真菌药患儿就好了，是考虑污染吗? 这种情况要判断是否为污染菌，调查采血过程是否规范、血瓶转运过程是否符合要求、针孔是否适当封口、转运箱是否受到污染等众多因素，最关键的还是患者的临床表现，如没有真菌感染的症状，要么考虑污染，要么考虑定植（可能性不大）。

菌落总数检测过程中TTC添加常见问题解答在环凯建立的交流群里小伙伴经常问关于菌落总数检测计数时，遇到杂质和菌落不好区分，应该怎么办？小编今天与大家分享关于TTC添加的注意事项，把你搞定菌落和杂菌的区分问题。

TTC：俗称红四氮唑，学名2,3,5-三苯基氯化四氮唑，化学式如下：从事微生物检测的朋友都知道，在菌落总数的检测时，经常添加这种物质，可以起到两方面的作用：其一，可以使菌落显红色，便于区分菌落和杂质，更利于计数；其二，可以有效的防止平板上的菌落蔓延情况。

这两种作用的原理是不同的，TTC溶于水是无色的，而嗜中温性需氧菌在新陈代谢过程中产生的琥珀脱氢酶可以使无色的TTC 被还原成红色的TPF，使菌落显色，这是显色的原理；同时TTC还具有抑制某些革兰氏阳性菌生长的作用，因此会防止菌落蔓延。

但既然会抑制细菌的生长，那会不会造成检测误差呢？其实只要合理使用，注意添加量，对检测结果的影响并不是很大，是可以忽略不计的。

有专家对此做过实验，实验结果表明培养基内TTC浓度在0.0003%-0.001%（w/v）的范围内对菌落生长抑制作用不显著，但浓度太低菌落的显色效果并不是很好，因此推荐大家按照TTC浓度为0.0005%的量来添加就不会对检测结果产生较大影响，还会使菌落显色方便计数。

为了方便大家在检测过程中方便添加，小编特意做了一个表格，方便大家查询：除了添加量之外，在使用我们还应该TTC过程中我们还应该注意些什么呢？要点一：TTC的配制过程，一定要在无菌条件下进行。

因为我们配制好的TTC溶液在检测时是直接加入到培养基中的，必须保证TTC 溶液时无菌的，配制用水也必须是无菌水。

要点二：TTC具有比较强的光敏性，见光易分解，因此无论是TTC粉末还是配制好的TTC溶液都要注意避光冷藏保存，配制好的溶液一定要放在棕色的试剂瓶里。

要点三：TTC溶液要在检测过程中直接加入灭菌完的培养基中，即在倾倒平皿之前加入培养基然后摇匀使用。

无菌检测和微生物限度常见问题1、问:做无菌验证时阳性对照菌是怎么加入的？可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入吗？答:严格的说是要在最后一遍冲洗液中加入阳性对照菌的,这主要是考量滤膜对于阳性菌的截留性～但是滤器如果可以提供滤膜对于阳性菌的充分截留的话在最后的培养体系中加入阳性菌也是未尝不可的.如果供试品没有抑菌作用,可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入,摇匀如果供试品有抑菌作用,正如安哥洛卡所讲,在最后一次冲洗液中加入阳性对照菌,摇匀,抽虑,加培养基.无菌检查，加入阳性的方法可以有许多种，可以根据个人的习惯。

只是注意：1、避免人为污染。

2、阳性菌加入数量2、问:离心沉淀法的原理、操作和注意事项是什么?答:原理:利用沉降系数的差异将供试品和微生物进行分离;操作:取规定量的供试液，3000转/分离心20分钟（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5分钟，取全部上清液再离心），弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释剂至原规定量.注意事项:真菌由于沉降系数比较小,500r/min离心5min，黑曲霉、白色念珠菌回收率为20%,因此其检查不适宜用低速离心沉淀法.3、问:稳定性实验的微生物及无菌检查,是否每次都要做?答:是;原因:一实验期内可能会染菌;二灭菌后微生物并不是就彻底"死亡",有些成为碎片,这些碎片在一定的条件和时间下,可以自我修复而复活.三稳定性的考察，也应包括药品有效期的考察，在此期间所有的项目都应是合格的，无菌也是其中之一，如果在有效期内无菌不合格，也可以说明该药品存在一定的缺陷，至少，有效期有问题。

4、问:眼部给药制剂如何做卫生学检验?答:液体制剂:无菌检查;半固体及固体制剂:微生物限度检查5、问:滴眼液的微生物限度为何进行无菌检查?答:一滴眼剂产品系按照无菌工艺生产且终产品为灭菌产品,故其成品的微生物质量应要求统一为无菌;所以,滴眼剂产品的临床合理用药应与其卫生标准要求一致,即将其微生物质量要求统一为无菌,显然更为合理;二滴眼剂的微生物质量要求为无菌,是与各国药典在滴眼剂要求上的统一,及对《中国药典》此项规定合理性的补充及完善等方面看,滴眼剂成品的微生物质量要求统一为无菌具有必要性。

菌种鉴定常见问题解答1.菌种鉴定的方法和步骤是什么？菌种鉴定一般就只要提取基因组DNA，然后PCR扩增16srDNA片段，上GeneBank或者Eztaxon对比即可。

一般序列相似度在97%以上就可以认为是同种细菌（当然也有例外，DNA序列仅仅是一个参考指标）。

-----消息来源：百度问答.2.微生物的菌种鉴定可以鉴定到“株”一级吗？如果你的菌株是自然界中分离得到，就只能鉴定到种，不能鉴定到株，因为多多少少和其他株系的细菌有区别，即便你做了一些特征的鉴定，发现和某一株细菌一模一样，你也没有理由说你的细菌就是那一株细菌，因为你不可能把所有的特征都做完，株和株之间的关系就相当于不同的人之间的关系，世界上不可能有完全相同的两个人。

除非你知道你的细菌本来就是某一株细菌扩增出来的（而且要保证没有变异，否则就是一个新株），可是这样就没必要鉴定了。

-----消息来源：百度问答3．为什么鉴定出来的菌种跟我想象的相差太大？答：我们菌种鉴定使用PCR直接扩增的方法，即以客户提供的菌株为模版直接进行PCR扩增，中间不经过传代培养，因此不会引入新的污染，如果出现结果不一致的情况，一般有以下原因导致：1、您提供的样品未经过三次分离纯化，含有其他杂菌；2、您提供样品的真实情况确认如此。

建议您提供三次纯化的菌株重新进行鉴定。

4．为什么有时会出现PCR扩增不出的现象；答：扩增不出的原因主要有以下几种：1、您提供的菌种从严格意义上讲不是细菌或者真菌，或者是信息有误；2、您提供的菌种为革兰氏阳性菌，由于细胞壁较厚，采用常规方法不能有效地破壁；3、培养基或菌体中表达产物含有抑制PCR产物的组份。

对于第二种或第三种情况需要提供基因组DNA。

5．PCR扩增直接测序为什么会出现套峰的现象；答：1、测序结果个别碱基出现N，是由细菌rDNA多态性造成，对菌种鉴定没有无影响；2、所有测序反应均出现大面积套峰，是由于您提供的样品模版不纯造成的。

这种情况需要重新纯化菌种。

2020版《中国药典》真菌毒素八大热点问题深度解答中药材从种植、生产、流通的全过程周期较长，控制不当易受真菌毒素危害，再加上真菌毒素的产生与宿主基质特性密切相关，不同类型中药材会产生种类和性质各异的真菌毒素，全方位加强中药材中真菌毒素污染水平监控成为《中国药典》2020版的重中之重。

2020版《中国药典》6月正式发布，自该标准发布以来，中药分析检测工作者面临了一系列的挑战。

今天小编整理了老师们关注有关真菌毒素检测的八大热点问题。

01 Q:黄曲霉素检测有哪些注意事项？怎么样才能使测试结果更加准确可靠？A:在测试黄曲霉素的时候需要注意如下几点，这样能保证测试的准确性。

（1）取样一定要均匀，对于性质特殊的供试品，可适当调整取样量，像地龙比较粘稠的可以适当调整取样量，不过一般应不低于5g；（2）正确的测试免疫亲和柱，可测柱回收率，考察免疫亲和柱的性能；（3）采用第一法液相色谱法测定结果超出限度时，应采用第二法液相色谱串联质谱法进行确认；（4）进行真菌毒素检测时，实验室应有相应的安全防护措施，不得污染环境；黄曲霉毒素的毒性很强，需要采取必要的安全措施。

建议设用单独的实验室和实验器材，不与别的实验一起混用；（5）残留有黄曲霉毒素的废液或者废渣的玻璃器皿，应置于专用储存容器（装有10%次氯酸奶溶液）内，浸泡24h以上，再用清水将玻璃器皿清洗干净。

02Q:真菌毒素实验的过程中使用的对照品有什么要求？A:（1）对照物质应能够溯源量值，首选使用法定标准物质；（2）很多品种为剧毒品，使用时应加强安全防护；（3）一般情况下不推荐使用固体纯品，已知浓度的标准物质溶液（或混合溶液）在痕量分析中使用更为方便，也更为广泛；（4）针对很多剧毒成分，如黄曲霉毒素，使用标准物质溶液也能够有效减少对检验人员的安全风险。

通常，首先配置成1-100u g/m l的浓溶液，作为储备液使用。

储备液可保存在惰性，密封，避光，低温环境下。

储备液的浓度，溶剂，配制日期应详细记录，并在原始记录中明确显示，以便于溯源。

【检测】微生物检测过程中的细节问题汇总（包含稀释液、培养基制作及基本操作等）！一、稀释液的制作磷酸盐缓冲稀释液贮存液：磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g；蒸馏水 500mL；用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2（图1-1、1-2），用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。

稀释液：用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL，分装于合适容器，121℃高压灭菌15min。

二、培养基制作① 计算出所需数量，用电子称、称量纸、药勺来称取。

② 放入比所用蒸馏水大的烧瓶中，使之充分混匀于蒸馏水后加热溶解并煮沸。

※ 备注：即使是同一培养基，各个厂家的配制方法多少有些不同，所以一定要充分参照培养基上的说明。

2.1 倾注培养培养基：●平板计数琼脂等：高压灭菌后保存，使用时加温溶解。

●去氧胆酸盐琼脂培养基：使用时将培养基粉末加温溶解。

※备注：倾注培养时，向培养基分注的步骤参照下述的注意事项：①样液稀释以及从接种到培养基混合完毕，最好在15分钟以内完成。

②每个平皿的分注量约15-20ml。

分注后将平皿倾斜和旋转使之充分混合，但要注意不要让培养基从平皿内溢出，且不要粘附在平皿壁和盖上。

③分注时三角烧瓶挂有培养基滴时，下一次分注的培养基可能被烧瓶外壁的细菌污染，所以要用酒精棉擦拭，再将瓶口用火焰灭菌。

2.2 平板培养基：平板培养基是将溶解后的培养基分注15-20ml到无菌平皿里，使之凝固。

●TCBS琼脂培养基、DHL琼脂培养基：加温溶解后，分注、凝固、干燥表面。

为了防止沉淀的发生，加温溶解后要充分混匀（注意不要起泡）。

● EMB琼脂培养基：高压灭菌后，分注、凝固、干燥表面。

● 卵黄甘露醇高盐琼脂培养基：将鸡蛋放在95%酒精中浸泡1小时左右，用酒精棉（纱布）擦拭蛋壳表面，打开鸡蛋取出卵黄。

加入经高压灭菌后冷却到55-60℃培养基里（6%卵黄）搅拌摇匀凝固后干燥表面（搅拌时不要起泡）。

若培养基温度过高，卵黄凝固，过低则培养基分注时开始结块，所以操作要迅速。

真菌检验1、什么是真菌？真菌为真核细胞型微⽣物，属于真菌界。

具有典型的细胞核，不具有叶绿素，以腐⽣和寄⽣⽅式摄取营养，细胞壁含⼏丁质和纤维素，有完善的细胞器，能进⾏有性⽣殖和（或）⽆性繁殖。

真菌在⾃然界分布极为⼴泛，约有20余万种，⼤多对⼈⽆害，仅有约150种对⼈和动物致病。

2、真菌的基本结构是什么？真菌的基本结构为菌丝和孢⼦，菌丝为微细的管状结构，具有细胞壁，细胞膜，细胞浆和细胞核，分枝或不分枝，分隔或不分隔，有粗有细，着⾊或不着⾊。

⼀般致病真菌的菌丝较细⽽且分隔。

孢⼦是真菌的繁殖器官，也是抵抗不良环境的结构，类似于⾼等植物的种⼦，是真菌分类坚定的最主要依据。

3、引起⼈和动物感染的真菌分为哪两类？引起⼈和动物感染的真菌分为病原性真菌和条件致病菌两⼤类。

病原性真菌本⾝具致病性，⽽条件致病菌⼀般不具致病性，只有在⼀定条件下，即机体免疫⼒降低时才致病。

4、引起真菌病的常见诱因有哪些？长期使⽤⼴谱抗⽣素，⽪质激素和免疫抑制剂，代谢障碍，⾎液病，尿毒症，慢性消耗性疾病，外伤，⼤⼿术，器官移植，静脉⾼营养，导插管，放化疗及爱滋病等都是重要的诱因。

5、真菌⽣长的特点？真菌在⽣长过程中有从中⼼向四周等距离⽣长形成圆形菌落的倾向。

也正因为这⼀特点使体股癣的⽪肤损害表现为环⾏或多环⾏。

6、实验室检查真菌包括什么？实验室检查主要包括真菌直接检查和真菌培养。

7 、真菌直接检查的意义？（1）直接检查阳性有诊断意义，⼀般可确定有真菌感染，但阴性不能排除诊断。

（2）根据直接检查所见的真菌镜下形态可确定少数病原菌的种，如新型隐球菌，花斑癣菌等。

有些可确定属，如念珠菌属等。

（3）直接检查所见的真菌形态，代表该菌在组织内的形态即组织象。

（4）真菌镜下形态有时可提⽰该菌的活动性，如念珠菌出现真菌丝和假菌丝，⽪肤癣菌的菌丝肥⼤粗长多分枝，胞浆浓都表⽰该菌处于活跃状态。

8 、真菌培养的⽬的是什么？真菌培养的⽬的在于从临床标本中分离病原菌，确定是否有真菌感染及感染真菌的种类，以弥补直接检查的不⾜，同时在培养鉴定的过程中对其形态，镜下结构，⽣理特点和⽣化特征等进⾏充分的研究，以了解全部⽣活史并据以推断其应归⾪的属和种，指导临床治疗。

药品微生物检验常见问题在药品生产和销售过程中，微生物检验是非常重要的环节。

它可以有效防止药品受到微生物污染，确保药品的质量和安全性。

然而，在进行微生物检验时，常常会遇到一些问题。

本文将介绍常见的药品微生物检验问题及其解决方法。

一、样品处理在微生物检验过程中，样品的处理是非常关键的。

常见的问题包括样品提取不当、样品保存条件不当等。

在样品提取过程中，应注意采样工具和容器的清洁，并避免外界环境的污染。

同时，在样品保存过程中，应确保温度适宜，避免细菌的生长繁殖。

解决方法：正确选择和使用样品提取工具，并在采样前进行消毒处理。

在采样后，应立即将样品送至实验室，并确保保存条件适当。

二、培养基选择培养基的选择对微生物的检验结果具有重要影响。

常见的问题包括培养基成分不合适、菌落生长过多等。

选择适当的培养基可以提高检测的准确性，并减少假阳性和假阴性结果的发生。

解决方法：根据待检测微生物的特点和需求，选择适当的培养基。

并在使用前，确保培养基的质量和保存条件符合要求。

三、试验环境和设备试验环境和设备的卫生状况对微生物检验结果也具有重要影响。

常见的问题包括实验室环境污染、设备清洁不彻底等。

不良的试验环境和设备可能导致微生物的污染，从而影响检验结果的准确性和可靠性。

解决方法：保持实验室环境的良好卫生状况，定期进行清洁消毒。

对于使用的设备，要进行定期维护和清洁，确保其正常运行。

四、检测方法微生物检验方法的选择和操作也是常见的问题。

不同的方法可能会导致不同的检验结果。

常见的问题包括方法选择不当、操作不规范等。

选择适当的方法并按照规范的操作步骤进行微生物检验是确保检验结果准确可靠的关键。

解决方法：根据检测要求和实际情况，选择适当的微生物检验方法。

在进行检验前，要充分了解该方法的详细操作步骤，并按照规范要求进行操作。

五、结果判读结果的判读也是微生物检验中的一个重要环节。

常见的问题包括判读结果主观性强、判读标准不明确等。

不准确的结果判读可能导致错误的结论，并对药品的质量评估产生误导。

浅谈微生物检测中常见的问题及应对措施摘要：本文阐述了食品微生物的分类和命名，浅要的分析了食品微生物检测技术和方法，并对微生物检测中常见的问题及应对措施进行探讨。

关键词：微生物；食品；问题；措施在食品生产过程中要注意食品的食用安全以及营养价值，在生产各环节中要采取有效的措施防止微生物产生对人体的危害，控制食品安全性。

其中，各工厂研究关注的重点在于微生物一般菌种的特定，其微生物有害种类繁多，污染范围较大，且不容易被控制住，进而引起严重的食品安全等问题，成为了国内社会较为关注的热点之一。

1食品微生物的分类和命名食品微生物无特殊的分类系统。

按照微生物分类系统，可将与食品密切相关的微生物分为细菌、酵母菌、霉菌和病毒。

由于微生物种类繁多，很多微生物的亲缘关系（根据生物的外部性状、内部结构、生活特性等加以确定）尚未清楚，所以尚不能完全按照亲缘关系进行分类。

细菌有3种不同分类系统，即克拉西里尼科夫氏、伯杰氏和普雷沃氏分类系统。

他们的通用分类单位命名法则和高等动植物一样，依次分为界、门、纲、目、科、属、种。

种是分类的最基本单位。

从某地区或某实验室分离到的菌种，称为菌株或品系。

酵母菌为真菌的一部分，采用荷兰人洛德1952年发表的酵母分类系统分类。

霉菌也为真菌的一部分，不同的真菌分类学者采用不同的霉菌分类系统，但在“纲”这一级分类意见都一致。

世界各国都采用双名制的国际植物命名法命名微生物。

命名后的名称为学名。

它由两个拉丁文组成，前一个是属名，词首字母大写；后一个是种名，字母则一律小写。

有的还在学名后附上命名人和发表年份。

当分离到未知菌名时，即根据其形态、生理生化生态以及免疫血清反应等特性，对照各分类系统进行鉴定确认为某一菌种名。

2食品微生物检测技术和方法2.1凝集反应凝集反应是通过将特异性的抗体包被在乳胶颗粒上，通过抗体与相应的细菌抗原结合，产生肉眼可见的凝集反应。

通常此法需获得细菌纯培养物再将培养物与致敏乳胶反应。

食品中霉菌检测及微生物检测常见问题的分析作者：周文来源：《西部论丛》2019年第18期霉菌是一些丝状真菌的总称，霉菌的种类多种多样，其作用也是各不相同，有的可以用于工业发酵、酿造等;还有的可用来研制抗生素;也有能使食品、农副产品腐烂的;更严重的是一些会危及人类的生命安全的，比如黄曲霉，可通过发霉的花生产生，黄曲霉能够产生一种叫黄曲霉毒素的物质，黄曲霉毒素具有致癌的副作用。

霉菌就像是一把双刃剑，给人类的生产生活带来便利的同时，也有可能会威胁人类的生命安全。

食品中霉菌检测的重要性不言而喻，接下来我们一起来分析食品中霉菌检测及微生物检测常见问题。

一、检测中的注意事项：1、取样的代表性：保证所抽取的样品单位对全部样品具有充分的代表性。

2、取樣工具的无菌。

对菌落等取样的时候一定要注意所使用的取样工具和容器经过了严格的灭菌。

如果工具和容器在空气中暴露过，一定要再次进行灭菌，因为空气中霉菌的孢子含量很高，即便是已经经过灭菌的用具也很容易被污染。

3、检样的方法。

（1）、避免自身携带：霉菌很容易被携带，换句话说，也就是霉菌很容易附着在手、衣服等地方。

操作人员在进行检测的时候应注意换好操作服并做好手部的杀菌。

（2）、样品的均质和振摇：一些孢子的分布比较集中，因此需要通过均质和振摇让孢子充分散开。

在不同梯度的连续稀释时，需要用灭菌吸管多吸几次，让孢子最大程度地散开来。

4、培养温度和时间。

进行细菌培养的最佳温度范围为25-28℃，培养3天之后再进行观察，然后每天观察，连续培养观察一周时间。

5、检样中常见的问题。

（1）在进行连续梯度稀释的时候，可能会遇到不同的稀释浓度出现了相同的计数结果的情况。

（2）孢子不生长或孢子集中生长难以计数，出现这种情况的原因有很多：首先，可能是在稀释的时候没有进行均质和反复振摇，吹吸，孢子没有办法散开，自然也无法计数，所以在培养过程中对样品进行充分均质和振摇是必不可少的步骤。

其次，培养环境不适合，比如温度不适宜、PH值不适宜等，可能会导致孢子生长缓慢。

1、霉菌正置培养如何避免菌落蔓延呢？因为很多时候培养一天就开始有长菌，而且一蔓延整个培养箱就交叉污染了。

答不要经常去动平板，如果整筐放的话，就不要动，打开培养箱门，隔着平皿盖直接观察。

如果有蔓延的先挑出来。

只要你动了培养皿，无论正置或倒置，都会增加霉菌抱子的扩散和蔓延。

2、霉菌的培养湿度有要求吗？有没有标准，我在有的地方见过是65-85%之间。

答霉菌的培养湿度没有标准，因为不同的实验室，比如南方的、北方的实验室空气湿度要求是不一样的。

霉菌的培养还是应该控制其湿度的，湿度太高霉菌会蔓延，湿度太低培养皿就干燥了，霉菌生长受影响，所以实验室应该自行规定。

3、霉菌培养箱的霉菌怎么处理？答平时最简单的就是先喷一些酒精，喷酒精杀菌，然后挥发干了以后你测一下，如果还是不行的话，我们的培养箱如果里面有电源插座的话也可以加一盏紫外灯。

插在里面，它会产生一些臭氧，也会杀死一些表面的菌，如果最麻烦严重污染的我们建议用甲醛熏蒸，甲醛对培养箱没有任何的腐蚀作用，反正闷在里面。

4、食品企业发生天花板长霉情况，请问有什么办法处理？答天花板长霉，原因是有冷凝水、温度又合适。

如果加工环境不可更改的情况下，可以使用一些防霉的材料。

对于已经有霉菌的情况下，使用清洗剂和消毒剂对天花板表面进行清洁、消毒。

但一定要做好高空作业人员的安全。

5、食品霉菌检测要正置培养，每次培养都和倒置培养区别很大，倒置几乎没霉菌生长，但正置就很容易染菌，是什么原因呢？答霉菌的特性是由蔓延性，且由于培养箱加热，培养箱内部还有风机使内部气流在旋转，如果有一个样品有霉菌，那么菌丝就会通过缝隙往上爬，且随着抱子会脱落而且非常轻，培养箱风机吹出的风把抱子吹散，停到盖子上设置通过盖子之间的缝隙污染了其他样品，但同一叠随着菌丝蔓延，那个过培养皿直接蔓延到另外一个培养基上，一个蔓延一个，那么一叠被污染的情况会更严重。

减少堆叠平板数。

6、对于食品工厂来说对于酵母和霉菌是必检项吗？还是根据企业的自身情况？答对于终产品是否要检测霉菌和酵母，依赖的是产品标准。

微生物检测常见问题问答集锦（二）技术交流知识分享应广大粉丝的需求，小编将陆续推出《微生物检验问答集锦》系列。

本系列所列出的问题均是微生物检验过程中提问频次较高的问题，我们咨询专家老师后汇编，希望可以帮助微生物检验从业人员对检验过程中遇到的问题有新的理解。

大家对感兴趣的、比较关注的问题，也可以后台留言，我们一起交流探讨！一- 问答 - GB 4789系列什么情况下应作阳性对照，假如检测50批样品致病菌都是阴性结果，需要人工污染样品做阳性对照来做质控吗？答：GB 4789.1里规定要定期进行，没有明确说什么时候进行。

自己实验室需要制定sop进行规定，比如我们实验室总是检出某个致病菌的阳性结果，就规定一个月的时间来进行阳性对照。

保证实验室人员具有可以持续进行阳性检出的能力的。

最新的RB/T 038-2020 食品微生物检测结果质量监控指南文件里规定：对于日常质量监控,应执行检测方法的规定，否则建议每批或每组样品每20个样品1次的频次进行；质控不一定需要人工污染样品来做，可以用标准菌株来做阳性和阴性对照。

二- 问答 -商品化的即用培养基（比如血平板平皿），有供应方的验收报告和CMA报告，购入后实验室是否还需要做验收吗？商品化基础培养基中需要添加的配套添加剂是否需要进行验收吗？如何验收呢？答：目前的标准需要做，配套添加剂不需要单独验收。

三- 问答 -关于培养基性能测试，我们公司也有文件要求，我们平时做培养基性能测试除了参考GB4789.28外，可不可以也参考我们的文件做验收？GB4789.28是一个最低的标准，一定要达到。

比如EC肉汤只写了大肠埃希氏菌和粪肠球菌这两的菌株，必须要达到，如果企业自己的验收标准（里包含了国家标准里的菌株）高于国家标准，那就更好。

四- 问答 -在琼脂培养基制备过程中，发现灭菌后的培养基制成的平板部分偏软甚至有不凝固的现象，是什么原因？答：主要是琼脂分布不均导致的。

建议琼脂类培养基灭菌前加热溶解均匀（如果是大体积配制进行分装灭菌的培养基，建议煮沸溶解，搅拌分装）；灭菌后，使用前，关注培养基的透光性是否均一，如果不均一，轻轻摇晃使其均匀，再倾注平皿使用。

食品中霉菌检测及微生物检测会遇到哪些问题？又该如何解决？食品中霉菌检测及微生物检测会遇到哪些问题呢？又该如何解决？一起来看！实验室霉菌检测中常见问题霉菌：不是分类学上的名词，而是一些丝状真菌的通称，属真菌的一部分；其对人类具有双重性，有利的方面是它可以用来酿造、工业发酵、抗生素和酶制剂的生产等，不利方面是它能引起农副产品、食品、原料及器材的腐烂，也感染并引起人类和动、植物的多种疾病，少数种类，如黄曲霉，能产生黄曲霉毒素，黄曲霉毒素是一种致癌物质，危害人、畜的健康和生命。

因此，霉菌的检测对于食品的安全性很重要。

食品中常见的霉菌：毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属等。

检测中的注意事项：1、取样的代表性。

2、取样工具的无菌。

空气中霉菌的孢子含量很高，所以，取样的工具、容器等要经过严格的高压灭菌。

3、检样的方法。

（1）由于霉菌易被携带，所以，检样时操作人员应尽量避免自身携带的可能。

（2）样品的均质及充分振摇。

因为有些孢子是连成串的，故均质和振摇能使其充分散开，同时，在各梯度连续稀释时，也要用灭菌吸管反复吹吸几次，使孢子充分散开。

4、培养温度和时间。

培养温度25-28℃培养，3天后观察，需培养观察一周。

霉菌检验中常用的培养基：孟加拉红琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、察氏琼脂、高盐察氏琼脂等。

5、检样中常见的问题。

（1）不同稀释度计数结果相同；（2）不生长或生长很好连成片无法计数；原因：①稀释时未经反复振摇，吹吸，导致孢子未充分散开，影响了计数的结果。

②由于培养基不适宜，pH值低等，致使生长较慢。

③观察时间的掌握。

真菌生长较慢，故需5d后才能观察出结果。

每天都要观察结果。

微生物操作中常见问题的讨论与分析1、划不出单个菌落的原因：（1）平板上有过多的水分；（2）划线时接种环未经反复灼烧；（3）多区划线，三区或四区划线。

2、涂布和倾注的区别：涂布利于观察，但由于涂布棒上会带有少量的菌液，可能影响计数的准确性；倾注更为准确，但不利于观察菌落的状态。