超高效液相色谱法测定鸡组织中二硝托胺及其代谢产物残留量

超高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肉中6种大环内酯类药物残留量罗燕【摘要】建立鸡肉中6种大环内酯类药物的高效液相色谱-串联四级杆质谱(UPLC-MS/MS)残留分析方法.样本在乙腈水溶液提取下经PRiME HLB固相萃取柱净化,氮吹浓缩后定容过膜上机检测.在1.00～50.0μg·L-1线性范围内,红霉素、替米考星、泰乐菌素、林可霉素、吉他霉素和螺旋霉素的标准曲线相关系数(r)>0.999,方法检出限<0.95μg·kg-1,空白样品加标回收率范围为75.8％～110.7％,相对标准偏差<11.50％,适用于可食动物肌肉红霉素、替米考星、泰乐菌素、林可霉素、吉他霉素和螺旋霉素残留的检测.【期刊名称】《饲料博览》【年(卷),期】2018(000)009【总页数】5页(P52-56)【关键词】红霉素;替米考星;泰乐菌素;林可霉素;吉他霉素;螺旋霉素;高效液相色谱-串联质谱【作者】罗燕【作者单位】深圳市农产品质量安全检验检测中心,广东深圳 518005【正文语种】中文【中图分类】S831;TS207.5大环内酯类（MALs）属中谱抗生素，是一类具有12～22个碳内酯环的抗生素类群，以1个大环内酯为母核，通过糖苷键与1～3分子糖相连接，对革兰氏阳性菌和支原体具有较强的抗菌活性，临床上主要用于治疗敏感菌引起的呼吸道、消化道和泌尿生殖系统感染，在低剂量下具有良好的促生长作用[1-2]。

MALs产生治疗作用的同时也存在毒副作用，如果残留超标，这些动物源性食品流入餐桌后会对人体健康造成损害，具有肝、肾毒性[3]。

我国2002年农业部公告第235号及2005年农业部公告第560号规定了红霉素、替米考星等部分大环内酯类药物在动物组织中的最大残留限量值，其中红霉素在动物组织中的最大残留限量（MRL）为200 μg·kg-1；林可霉素在动物组织中MRL为100 μg·kg-1；替米考星在动物组织中MRL为100 μg·kg-1。

收稿日期:2020-04-02 修回日期:2020-05-08基金项目:江苏省现代农业重点及面上项目(N o .B E 2018363);江苏省属公益类科研院所自主科研经费(N o .B M 2018026);江苏现代农业产业技术体系建设专项资金(J A T S [2020]359);扬州市社会发展面上项目(N o .Y Z 2020060) *通讯作者:高玉时,男,研究员,研究方向:家禽遗传育种和食品安全.E -m a i l :g a o ys 100@s i n a .c o m 第37卷第2期V o l .37 N o .2分析科学学报J O U R N A LO FA N A L Y T I C A LS C I E N C E2021年4月A pr .2021D O I :10.13526/j.i s s n .1006-6144.2021.02.014高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉和鸡蛋中10种硝基咪唑类药物及代谢物张 静,高玉时*,周 倩,马丽娜,陆俊贤,唐修君,万 玉,杨星星,赵 敏(江苏省家禽科学研究所,江苏扬州225125)摘 要:建立了同时检测鸡肉和鸡蛋中7种硝基咪唑类化合物(MN Z ㊁R N Z ㊁D M Z ㊁S N Z ㊁O R N ㊁T N Z 和I P Z ),以及相应的3种羟基代谢物(MN Z O H ㊁HMMN I 和I P Z O H )的高效液相色谱-串联质谱法(H P L C -M S /M S )㊂样品用乙酸乙酯提取,正己烷除脂,S C X固相萃取柱净化㊂采用W a t e r sC 18柱(100m mˑ2.1m m ,1.8μm )分离,以0.1%甲酸甲醇溶液-0.1%甲酸水溶液为流动相,质谱采用多反应监测(M R M )模式检测,内标法定量㊂硝基咪唑及其代谢物在0.5~40n g /m L 范围内线性良好,相关系数在0.9909~0.9991之间;方法的检测限是0.5~1.0μg /k g ,定量限为1.0~2.0μg /k g㊂在添加水平1.0~10.0μg /k g 的回收试验中,平均回收率为70.5%~112%,相对标准偏差为3.21%~14.6%㊂该方法简单,灵敏度高,特异性强,回收率高,可同时检测在鸡蛋和鸡肉中硝基咪唑及其代谢物残留㊂关键词:硝基咪唑类;代谢物;高效液相色谱-电喷雾串联质谱法;鸡肉;鸡蛋中图分类号:O 657.63 文献标识码:A 文章编号:1006-6144(2021)02-217-06硝基咪唑类药物(N i t r o m i d a z o l e s ,NM Z s )是一类具有5-硝基取代咪唑杂环结构的化合物,主要包括甲硝唑(M e t r o n i d a z o l e ,MN Z )㊁二甲硝唑(D i m e t r i d a z o l e ,D M Z )㊁洛硝哒唑(R o n i d a z o l e ,R N Z )㊁塞克硝唑(S e c n i d a z o l e ,S N Z )㊁异丙硝唑(I pr o n i d a z o l e ,I P Z )和奥硝唑(O r n i d a z o l e ,O R N )等㊂因该类药物具有抗菌和抗原虫作用且疗效快,曾广泛用于杀灭及预防厌氧菌和病原虫,同时它们还有促生长和提高饲料利用率[1]的作用㊂研究发现,硝基咪唑类药物具有动物致癌性和细胞诱变毒性,欧盟㊁美国和日本已禁止在食源性动物中使用[2];我国国家标准(G B31650-2019)明确规定MN Z 和D M Z 允许作治疗用,但在动物源性食品中不得检出㊂硝基咪唑类药物代谢迅速,主要是咪唑环上的取代基甲基被氧化成羟甲基,MN Z 形成羟基甲硝唑(M e t r o n i d z o l e -O H ,MN Z O H ),D M Z 和R N Z 都代谢成羟基二甲硝咪唑(2-H y d r o x y m e t h yl -1-m e t h y l -5-n i t r o i m i d a z o l e ,HMMN I ),I P Z 代谢成羟基异丙硝唑(I pr o n i d a z o l e -O H ,I P Z O H )[3]㊂有研究表明硝基咪唑类代谢产物在动物体内的维持时间比原药长,并且具有和原药类似的毒性[4]㊂目前兽医中常用的有MN Z ㊁R N Z 和D M Z ,但S N Z ㊁O R N ㊁T N Z 和I P Z 是继上述三种之后疗效更高,耐受性更好,不良反应较少的药物㊂但未见各国对这5种药物在动物组织中使用和残留量作出规定,其实际应用中它们有可能替代MN Z 和D M Z 等应用于临床兽医,且它们也具有硝基咪唑类药物的毒副作用㊂所以建立这7种硝基咪唑类药物及其相应的3种代谢物残留的检测方法对食品安全监管是完全有必要的㊂目前用于硝基咪唑类药物及其代谢物的研究方法主要有液相色谱法(H P L C )[5,6]㊁气相色谱法(G C/712第2期张静等:高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉和鸡蛋中10种硝基咪唑类药物及代谢物第37卷M S )[7-9]㊁毛细管电泳法[10,11]和液相色谱-质谱法(L C /M S )[12-18]㊂本文采用同位素内标稀释法,利用乙酸乙酯提取,S C X 固相萃取柱净化,高效液相色谱-串联质谱法(H P L C -M S /M S )同时测定鸡肉和鸡蛋中10种硝基咪唑类药物及代谢物㊂方法简单,灵敏度高,特异性强,回收率高,能够满足日常检测和监督的需求㊂1 实验方法1.1 仪器与试剂T h e r m oT S Q MA X 型液相色谱-三重四极杆质谱仪(美国,塞默飞公司);固相萃取装置(美国,S u pe l -c o 公司);N -E V A P112氮吹仪(美国,O r g a n o m a t i o n 公司)㊂S C X 固相萃取柱(500m g/6m L ,上海安谱实验科技股份有限公司)㊂标准品:甲硝唑(MN Z )㊁地美硝唑(D M Z )㊁洛硝哒唑(R N Z )㊁奥硝唑(O R N )㊁塞克硝唑(S N Z )㊁羟基甲硝唑(MN Z O H )㊁羟基二甲硝咪唑(HMMN I )㊁异丙硝唑(I P Z )㊁羟基异丙硝唑(I P Z O H )㊁甲硝唑-D 4(MN Z -D 4)㊁地美硝唑-D 3(D M Z -D 3)㊁洛硝哒唑-D 3(R N Z -D 3)㊁奥硝唑-D 3(O R N -D 3)㊁塞克硝唑-D 6(S N Z -D 6)㊁羟基甲硝唑-D 2(MN Z O H -D 2)㊁羟基二甲硝咪唑-D 3(HMMN I -D 3)㊁异丙硝唑-D 3(I P Z -D 3)㊁羟基异丙硝唑-D 3(I P Z O H -D 3),均购于德国D r .E h r e n s t o r f e r 公司,纯度均ȡ98%㊂标准品溶液:分别准确称取适量MN Z ㊁D M Z ㊁R N Z ㊁O R N ㊁S N Z ㊁I P Z ㊁I P Z O H ㊁MN Z O H 和HMMN I (精确到0.01m g ),用甲醇溶解,配制成浓度为1m g /m L 的标准储备溶液,于-20ħ保存;内标标准溶液分别准确称取适量MN Z -D 4㊁D M Z -D 3㊁R N Z -D 3㊁O R N -D 3㊁S N Z -D 6㊁I P Z -D 3㊁I P Z O H -D 3㊁MN Z O H -D 2和HMMN I -D 3(精确到0.01m g ),用甲醇溶解,配制成浓度为1m g/m L 的内标储备溶液,于-20ħ保存㊂乙腈㊁甲醇㊁丙酮㊁乙酸乙酯(色谱纯,德国M e r c k 公司);其他试剂均为分析纯㊂水为M i l l i -Q 系统制备的超纯水(18.2MΩ㊃c m )㊂1.2 样品的制备空白样品为经检验不含上述硝基咪唑类化合物,搅碎使均匀,-20ħ保存备用㊂实际样品来源于超市㊁养殖场和农贸市场㊂1.3 样品前处理准确称取样品2g (精确到0.01g ),加入100μL100n g/m L 硝基咪唑混合内标工作溶液,采用10m L 乙酸乙酯提取,涡旋混匀,振荡10m i n ,10000r /m i n 离心5m i n ,取上清液㊂重复提取一次,合并上清液㊂上清液中加入5m L 乙睛饱和的正己烷,涡旋混匀后振荡10m i n ,5000r /m i n 离心5m i n 后,弃去正己烷㊂40ħ氮气浓缩仪吹干㊂加入5m L 乙酸-乙酸乙酯(5+95)混匀后备用㊂净化采用S C X 固相萃取柱,5m L 乙酸-乙酸乙酯(5+95)活化,将提取液全部过柱,分别用2.5m L 丙酮,5m L 甲醇,5m L 乙睛淋洗㊂真空抽干,5m L 氨水-乙睛(5+95)洗脱后,45ħ氮气浓缩仪吹干,准确加入1.0m L0.1%甲酸溶液-乙睛(体积比9ʒ1)溶解残渣,过0.45μm 膜,备用㊂1.4 液相色谱-质谱条件色谱条件:色谱柱:W a t e r sC 18柱(100m mˑ2.1m m ,1.8μm );流动相:A 为0.1%甲酸溶液,B 为0.1%甲酸甲醇溶液㊂梯度洗脱条件为:0~1.0m i n ,90%A ;1.0~5.0m i n ,90~10%A ;5.0~6.0m i n ,10%A ;6.0~6.1m i n ,10%~90%A ;6.1~8.0m i n ,90%A ㊂柱温:30ħ;流速:0.3m L /m i n ;进样量:10μL ㊂质谱条件:离子源:电喷雾离子源,正离子扫描(E S I +);检测方式:多反应监测(M R M )模式;离子源温度:350ħ;电喷雾电压:3500V ;雾化气压力:35A r b ;辅助气压力:10A r b ;离子传输管温度:350ħ;碰撞气:氩气㊂目标分析物的定性定量离子对㊁碰撞电压㊁离子透镜电压等信息见表1㊂表1 硝基咪唑类药物的信息及质谱参数优化条件T a b l e 1 S t a n d a r d i n f o r m a t i o na n do p t i m i z e dm a s s s pe c t r o m e t r i c p a r a m e t e r s o fN M Z s C o m p o u n d R e t e n t i o n t i m e(m i n)P a r e n t i o n(m /z )D a u gh t e r i o n (m /z)C o l l i s i o ne n e r g y(e V)T u b e l e n s(V)MN Z4.08171.909128.016*82.137102172MN Z -D 44.07176.190128.1271169D M Z4.27141.92281.15696.118*221375812第2期分析科学学报第37卷(续表1)C o m p o u n d R e t e n t i o n t i m e(m i n)P a r e n t i o n(m /z )D a u gh t e r i o n (m /z )C o l l i s i o ne n e r g y(e V )T u b e l e n s(V )D M Z -D 34.26145.22499.2551069O R N4.78219.81282.125127,996*231283O R N Z 4.77225.133128.1081283T N Z 4.34247.851120.985127.997*131884T N Z -D 54.32253.149126.1241275S N Z 4.52185.76882.116127.965*221089S N Z -D 64.51191.842127.99410103R N Z 4.14200.69555.253139.944*207104R N Z -D 34.14203.717142.959697MN Z O H3.73187.801122.950125.956*714104MN Z O H -D 23.73189.812127.97613106HMMN I4.01157.85055.266139.964*165103HMMN I -D 34.02160.880142.966591I P Z 5.07169.883109.105124.082*201382I P Z -D 35.07172.939127.084*112.104142182I P Z O H4.85185.841168.001121.077*52282I P Z O H -D 34.84188.906171.035*125.09691753 *qu a n t i t a t i v e i o n .2 结果与讨论2.1 质谱条件和色谱条件的优化采用直接进样的方式将500n g /m L 的10种硝基咪唑类化合物的标准溶液,以及对应的氘代内标标准溶液注入到离子源中,在正离子模式下进行母离子全扫描,通过优化离子透镜电压得到最佳强度的各待测目标物的分子离子峰㊂以确定的分子离子峰为母离子进行二级质谱碎片离子扫描,获得碎片离子信息,得到二级质谱图㊂选取丰度高的为定量离子,另一种化合物为定性离子㊂内标化合物选取丰度高的为定性离子,不需定量离子㊂2.2 样品前处理方法的选择2.2.1 提取溶剂的选择 硝基咪唑类化合物的提取溶剂一般为乙腈㊁乙酸乙酯㊁二氯甲烷㊁甲醇等单一溶剂或混合溶剂㊂本文比较了乙腈㊁甲醇㊁二氯甲烷-乙腈(1ʒ1,V /V )和乙酸乙酯等溶剂的提取效率,结果见图1㊂由图可以看出,提取溶剂对MN Z O H 和HMMN I 的回收率影响最大,乙酸乙酯提取效率最高,分别为98.1%和80.5%㊂提取溶剂对其他化合物的影响不是很大,且采用乙酸乙酯提取可去除大部分亲水性杂质,降低后续净化的难度,因此选用乙酸乙酯作为提取溶剂㊂2.2.2 固相萃取柱的优化 本文比较了C 18㊁H L B 和S C X 三种固相萃取柱对硝基咪唑化合物回收率的影响㊂由图2可以看出,C 18和H L B 小柱对9种硝基咪唑化合物的回收率均偏低,而S C X 小柱对目标化合物的回收率均在70%~115%之间,因此选用S C X 固相萃取柱净化㊂2.3 基质效应(M E )评价本研究按(空白基质匹配标准曲线斜率/纯溶剂标准曲线斜率-1)ˑ100%计算基质效应(M E )(表2)㊂当M E 为负值时表示存在基质抑制效应,M E 为正值时表示存在基质增强效应;绝对值越大基质效应越强㊂由表2可知,硝基咪唑类药物及其代谢物在各基质溶液中呈现一定的基质抑制作用,其中MN Z O H912第2期张静等:高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉和鸡蛋中10种硝基咪唑类药物及代谢物第37卷图1提取溶剂对硝基咪唑化合物回收率的影响F i g.1E f f e c t so f e x t r a c t i o ns o l v e n t so nt h er e c o v e r i e so f t h eN I Ms 图2不同固相萃取柱对硝基咪唑化合物回收率的影响F i g.2E f f e c t so fS P Ec a r t r i d g e so nt h er e c o v e r i e so f t h e N I Ms和HMMN I基质抑制效应较大㊂经过本方法净化处理后目标化合物的基质效应均可在接受范围内,且本文采用内标法测定实际样品也可在一定程度上补偿基质效应的影响㊂表2不同基质中硝基咪唑类药物及其代谢基质效应评价T a b l e2M a t r i x e f f e c t s(M E s)o n t h eN I M s i n t h e d i f f e r e n tm a t r i c e s(%) M a t r i x MN Z D M Z O R N T N Z S N Z R N Z MN Z O H HMMN I I P Z I P Z O HC h i c k e n-24.5-28.5-21.4-15.4-22.5-20.5-48.4-52.3-31.2-43.5E g g-31.7-32.5-22.5-20.5-18.9-21.4-54.5-58.4-29.9-39.82.4线性范围㊁相关系数(R2)㊁检出限(L O D)和定量限(L O Q)取一系列硝基咪唑类的标准工作溶液,在选定的色谱-质谱条件下进行测定㊂以外标内标峰面积之比Y和对应的质量浓度X(n g/m L)绘制标准曲线㊂结果表明,在0.5~40.0n g/m L范围内具有良好的线性关系,其线性方程和相关系数见表3㊂在空白样品中添加标准溶液,按信噪比(S/N)等于10和3计算,本方法的定量限和检测限见表3㊂表3硝基咪唑药物线性范围㊁线性方程㊁相关系数(R2)㊁检测限(L O D)和定量限(L O Q)T a b l e3L i n e a r r a n g e,l i n e a r e q u a t i o n,c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t,L O Da n dL O Q o fN I M sC o m p o u n d L i n e a r r a n g e(n g/m L)L i n e a r e q u a t i o n R2L O D(μg/k g)L O Q(μg/k g) MN Z0.5-40Y=0.1333X+0.07250.99530.51.0D M Z0.5-40Y=0.2351X-0.11940.99860.51.0O R N0.5-40Y=0.1527X-0.01620.99891.02.0T N Z0.5-40Y=0.0484X+0.02510.99310.51.0S N Z0.5-40Y=0.1149X+0.05360.99910.52.0R N Z0.5-40Y=0.1108X-0.08410.99130.51.0MN Z O H0.5-40Y=0.0582X-0.01280.99090.51.0HMMN I0.5-40Y=0.0873X-0.01410.99181.02.0I P Z0.5-40Y=0.1960X+0.05530.99640.51.0I P Z O H0.5-40Y=0.0420X-0.02450.99310.51.02.5准确度和精密度在空白组织中添加1.0㊁2.0㊁10.0μg/k g水平的目标分析物,每个样品按上述方法重复测定6次,求日内精密度(R S D);再每天测定一次,连续测定6天,求日间R S D,结果见表4㊂结果表明日内加标回收率在73.8%~112%之间,R S D为3.21%~11.8%;日间加标回收率在70.5%~106%之间,R S D为4.67% ~14.6%㊂准确度和精密度能满足相关标准[19]的要求㊂2.6实际样品分析应用本法测定了当地及周边地区市场鸡肉㊁鸡蛋等60批次样品,鸡肉中无检出;鸡蛋有2份检出MN Z㊁D M Z㊁T N Z和MN Z O H,含量分别为5.7μg/k g㊁3.7~423.5μg/k g㊁5.2μg/k g和3.2μg/k g㊂其余样品未检出上述硝基咪唑类药物㊂说明在鸡养殖过程中,硝基咪唑类药物存在着一定的使用率㊂022第2期分析科学学报第37卷表4方法的加标回收率和精密度T a b l e4S p i k e d r e c o v e r y a n d r e l a t i v e s t a n d a r dd e v i a t i o n f o r t h em e t h o dC o m p o u n d S p i k e d l e v e l(μg/k g)C h i c k e nm a t r i x E g g m a t r i xR e c o v e r y(%)I n t r a-R S D(%)R e c o v e r y(%)I n t r a-R S D(%)R e c o v e r y(%)I n t r a-R S D(%)R e c o v e r y(%)I n t r a-R S D(%)MN Z1.080.36.1385.49.8790.54.2388.37.452.090.56.3388.97.8992.56.8887.99.8710.097.75.2394.37.4288.74.4580.39.24D M Z1.01028.7897.410.690.49.6785.54.672.099.84.8788.57.8788.55.3480.76.3410.01093.211027.2385.45.2690.69.38O R N1.01058.7686.110.880.29.2375.810.12.099.44.8985.211.679.96.4583.48.4310.098.84.9810211.890.48.9880.412.6T N Z1.094.27.2185.45.3499.811.585.614.82.01026.4492.19.3180.36.1575.812.810.01065.1197.810.394.65.6788.99.56S N Z1.087.46.7877.87.3295.67.6590.510.82.088.59.2185.210.796.45.6788.512.510.01074.4094.68.4284.99.4581.58.98R N Z1.098.46.7888.45.8789.411.885.816.82.090.25.9778.99.211036.1796.97.8210.01085.2396.411.51035.6499.612.5 MN Z O H1.099.84.5689.58.8786.47.590.412.42.01097.81994.9895.512.590.510.510.01124.321067.4297.911.788.614.6 HMMN I1.073.810.170.56.9579.76.7875.712.52.078.45.680.513.175.810.170.510.610.079.96.0175.612.174.25.672.812.5I P Z1.089.411.888.512.999.46.5388.79.872.01036.1898.78.7487.66.7898.712.110.097.77.3292.59.521037.3292.510.5I P Z O H1.098.85.7288.69.861026.4586.88.562.01018.6486.410.792.59.4595.412.310.01046.1398.612.090.96.1388.314.63结论本研究建立了高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉和鸡蛋中7种硝基咪唑类药物及其对应的3种羟基代谢物残留㊂硝基咪唑类化合物及代谢物在0.5~40n g/m L范围内线性良好,方法的检测限0.5 ~1.0μg/k g㊂该方法简单㊁准确㊁快速㊁重复性好㊁灵敏度高,且方法的回收率㊁灵敏度和定量限均能满足目前日常监控和检测的要求㊂参考文献:[1] A d a m T,V i r e n d e rK S,S z a b o l c sF,J e n oF,A n d r e aS,S z i l v i aF.J o u r n a l o fP h a r m a c e u t i c a l a n dB i o m e d i c a lA n a l y s i s,2012,64-65:40.[2] C r i s t i n aM S,Z o r a i d aSF,M aE s t h e rTP,J o s e J u a nSR.A n a l y t i c aC h i m i c aA c t a,2010,665(2):113.[3] C r o n l y M,B e h a nP,F o l e y B,M a l o n eE,R e g a nL.J o u r n a l o fC h r o m a t o g r a p h y B,2009,877(14-15):1494.[4] X i aX,L iX W,D i n g SY,Z h a n g SX,J i a n g H Y,L i JC,S h e n JZ.A n a l y t i c aC h i m i c aA c t a,2009,637:79.[5] S u nH W,W a n g FC,A i LF.J o u r n a l o fC h r o m a t o g r a p h y B,2007,857(2):296.[6] S H E NJ Z,X I A N GX H,Z HA N G Y,e t a l.S c i e n t i aA g r i c u l t u r aS i n i c a(沈建忠,项新华,张跃等.中国农业科学),2003,36(6):700.122第2期张静等:高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉和鸡蛋中10种硝基咪唑类药物及代谢物第37卷[7] WA N GJC,MASY,WA N GDJ,e t a l.A c t aV e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c a S i n i c a(汪纪仓,马素英,王大菊等.畜牧兽医学报),2008,39(12):1772.[8] H ED,L IX Y,X I A N YP,e t a l.J o u r n a l o f I n s t r u m e n t a lA n a l y s i s(何东,李秀英,冼燕萍等.分析测试学报),2015,34(8):911.[9] M a y k e lH M,A n aM.GC,C a r m e nCB.F o o dC h e m i s t r y,2014,145:161.[10]L I UP,H U A N G W H,W A N G J Z.J o u r n a l o fA n a l y t i c a l S c i e n c e(刘波,黄为红,王金中.分析科学学报),2008,24(5):586.[11]Y a n g XP,C h e n g X M,L i nY Y,T a nZJ,X i eLX,C h o iM M F.J o u r n a l o fC h r o m a t o g r a p h y A,2014,1325:227.[12]M i t r o w s k aK,P o s y n i a kA,Z m u d z k i J.T a l a n t a,2010,81(4-5):1273.[13]L I CY,WU M,Y A NLJ,e t a l.J o u r n a l o f F o o dS a f e t y a n dQ u a l i t y(黎翠玉,吴敏,严丽娟等.食品安全质量检测学报),2012,3(1):17.[14]A n n aG,V a l e n t i n ad i L,H e l e nC,M a r t i n M,A m b r o s eF,M a r t i nD.J o u r n a l o fC h r o m a t o g r a p h y B,2014,960:105.[15]L I J,S U NL,WA N G H Q,e t a l.J o u r n a l o f I n s t r u m e n t a lA n a l y s i s(励炯,孙岚,王红青等.分析测试学报),2017,36(11):1357.[16]M a y k e lH M,A n aM.GC,C a r m e nCB.J o u r n a l o fC h r o m a t o g r a p h y A,2018,1562:36.[17]F A N GL,Q I UF M,Y U X W,e t a l.C h i n e s e J o u r n a l o fC h r o m a t o g r a p h y(方力,邱凤梅,余新威等.色谱),2018,36(5):431.[18]WA N GC,G U CK,MA Q,e t a l.J o u r n a l o f I n s t r u m e n t a lA n a l y s i s(王春,顾传坤,马强等.分析测试学报),2019,38(3):263.[19]G B/T27404-2008.C r i t e r i o no nQ u a l i t y C o n t r o l o fL a b o r a t o r i e s-C h e m i c a lT e s t i n g o fF o o d(实验室质量控制规范食品理化检测).S i m u l t a n e o u sD e t e r m i n a t i o no f10N i t r o m i d a z o l e sa n dT h e i rM e t ab o l i t e sR e s i d u e i nC h ic k e na n dE g gb y L i q u i dC h r o m a t o g r a p h y-T a n d e m M a s s S p ec t r o m e t r yZ H A N GJ i n g,G A O Y u s h i*,Z H O U Q i a n,MAL i n a,L UJ u n x i a n,T A N G X i u j u n,WA N Y u,Y A N G X i n g x i n g,Z H A O M i n(J i a n g s u I n s t i t u t e o f P o u l t r y S c i e n c e s,Y a n g z h o u223125)A b s t r a c t:I nt h i sw o r k,w ee s t a b l i s h e da m e t h o df o r t h ed e t e r m i n a t i o no fs e v e nk i n d so fn i t r o m i d a z o l e c o m p o u n d s(MN Z,R N Z,D M Z,S N Z,O R N,T N Za n dI P Z)a n dt h r e ek i n d so fc o r r e s p o n d i n g h y d r o x y m e t a b o l i t e s(MN Z O H,HMMN Ia n dI P Z O H)i nc h i c k e na n de g g m a t r i x b y h i g h p e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h y c o u p l e d t o e l e c t r o s p r a y t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y(H P L C-E S I-M S/M S).T h e n i t r o m i d a z o l e s a n d t h e i rm e t a b o l i t e so f i n t e r e s tw e r ee x t r a c t e df r o mt i s s u e sw i t he t h y l a c e t a t e,a n dt h e c r u d e e x t r a c t sw e r es u b j e c t t ol i q u i d-l i q u i d p a r t i t i o n w i t hh e x a n ef o l l o w e db y s t r o n g c a t i o ne x c h a n g e s o l i d p h a s e e x t r a c t i o n.B y g r a d i e n t e l u t i o nw i t hm e t h a n o l a n dw a t e r(c o n t a i n i n g0.1%f o r m i c a c i d,v o l u m e f r a c t i o n)o n W a t e r sC18c o l u m n(100m mˑ2.1m m,1.8μm),t h ec o m p o u n d sw e r et h e nd e t e c t e db y t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y u n d e rm u l t i p l e r e a c t i o nm o n i t o r i n g m o d e u s i n g i n t e r n a l s t a n d a r dm e t h o d.T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h ec a l i b r a t i o nc u r v e so f t h en i t r o m i d a z o l e sa n dt h e i rm e t a b o l i t e sw e r e l i n e a r i na c e r t a i n c o n c e n t r a t i o n r a n g e(0.5-40n g/m L)w i t hc o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n t so f0.9909-0.9991.T h e l i m i t s o f d e t e c t i o nw e r e0.5-1.0μg/k g,a n d t h e l i m i t s o f q u a n t i t a t i o nw e r e1.0-2.0μg/k g.T h e a v e r a g e r e c o v e r i e sa t t h r e e s p i k e d l e v e l s o f1.0-10.0μg/k g w e r eb e t w e e n70.5%-112%w i t hr e l a t i v e s t a n d a r dd e v i a t i o n so f3.21%-14.6%.T h e r e s u l t s i n d i c a t e t h a t t h em e t h o d s i s s e n s i t i v e,s i m p l e a n d a c c u r a t e t o s i m u l t a n e o u s l yd e t e r m i n e s e v e nk i n d s o f n i t r o m i d a z o l e s a n d t h r e ek i n d s o f t h e i rm e t a b o l i t e s i n c h i c k e na n d e g g.K e y w o r d s:N i t r o m i d a z o l e s;M e t a b o l i t e s;H P L C-E S I-M S/M S;C h i c k e n;E g g222。

高效液相色谱法检测鸡肉中替米考星药物残留的检测与分析曹忠君【摘要】本研究应用高效液相色谱法对来自市场中64批次鸡肉样品进行替米考星药物残留的检测。

结果表明，替米考星药物残留物在鸡肉中的平均回收率为70.5%～92.3%。

显示该方法具有灵敏、快速的特点，符合现行兽药残留分析的要求。

替米考星药物残留有一定检出率，相关部门应加强监管。

%Tilmicosin drug residue were tested from 64 chicken samples collected from urban areas using HPLC method. The results showed that recoveries for each analyte in chicken ranged from 70.5%~92.3%.This method is fast and sensitive, and can be used to simultaneously analyze residual of quinolones in actual samples. There is a relevance ratio of tilmicosin residue, therefore Au-thorities should take it seriously.【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2014(000)010【总页数】4页(P13-16)【关键词】替米考星;鸡肉;高效液相色谱法【作者】曹忠君【作者单位】辽宁省铁岭市畜产品安全检测站，辽宁铁岭 112000【正文语种】中文【中图分类】S859.84替米考星（ti lmicosin，TIL）属于大环内酯类抗生素（macrol ide antibiotics，MALs），其分子式为C46H80N2O13，分子量为869.15。

英国Elanco动物保健品公司在20世纪80年代开发成功。

食品科技高效液相色谱在食品农兽药残留中的检测应用刘 姝（江苏省生产力促进中心理化测试服务中心，江苏南京 210042）摘 要：近年来，我国食品安全问题日益突出，食品农兽药残留检测作为保证食品安全的重要手段，具有十分重要的作用。

高效液相色谱法是一种迅速、灵敏、选择性高的检测方法，因操作简便、分离效率高等特点，在食品农兽药残留分析中得到广泛应用。

本文综述了高效液相色谱法在农药兽药残留分析中的应用，主要介绍了高效液相色谱在食品中农兽药残留检测中的作用和检测方法，以供相关人员参考。

关键词：高效液相色谱；食品；农兽药残留；检测Application of High Performance Liquid Chromatography in the Detection of Agricultural and Veterinary Drug Residuesin FoodLIU Shu(Jiangsu Provincial Productivity Promotion Center Physical and Chemical Testing Service Center,Nanjing 210042, China)Abstract: In recent years, China’s food safety issues have become increasingly prominent, the detection of residues of agricultural and veterinary drugs in food plays a very important role as an important means to ensure food safety. High performance liquid chromatography is a rapid, sensitive and selective detection method. It is widely used in the analysis of agricultural and veterinary drug residues in food because of its simple operation and high separation efficiency. This paper reviewed the application of high performance liquid chromatography in the analysis of pesticide and veterinary drug residues, mainly introduced the role and detection methods of high performance liquid chromatography in the detection of agricultural and veterinary drug residues in food, for the reference of relevant personnel.Keywords: high performance liquid chromatography; food; residues of agricultural and veterinary drugs; detection近年来，随着人们对食品安全关注度的不断提高，食品中农兽药残留问题成为公众关注的焦点。

高效液相色谱-串联质谱法测定有机肥抗生素残留-土壤污染论文-农学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——近年来，随着养殖业的快速发展，抗生素被广泛用作畜禽饲料添加剂，用于预防和治疗畜禽疾病，促进畜禽生长。

由于抗生素被盲目地过量使用，对环境造成了大量的污染。

研究表明，动物体内的抗生素以母体或代谢物的形式随尿或粪便排出体外的量，约占用药量的40%～90%［1－3］。

以畜禽粪便为主要肥料的有机肥因含有丰富的有机质及氮、磷元素广泛用于农业生产。

对农田土壤、地表和地下水及生态系统中各类生物产生危害，并发和传播各类抗生素耐药细菌，威胁着人类的健康与生存环境［4－8］。

分属于青霉素类的青霉素G和普鲁卡因青霉素，分属于磺胺类的磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺噻唑，以及分属于四环素类的土霉素、四环素、金霉素和强力霉素是养殖业常用的抗生素类药物［9，10］。

研究多关注的是这些药物在地表水或地下水体系，水产品及动物组织中的残留［11－13］，但对有机肥料中青霉素类、磺胺类和四环素类药物的残留研究却未见报道。

因此建立同时测定有机肥料中3类抗生素的方法亟待解决，对我国主要商品有机肥及有机肥原料鸡粪、猪粪、污泥等中抗生素类污染的种类和含量筛查和检测起到一定的积极作用。

目前，抗生素残留检测主要的方法有:微生物抑制法、酶联免疫方法、液相色谱法、液相色谱与质谱联用法［14－22］。

微生物抑制法和酶联免疫方法属于筛选方法，操作简便、快速，成本低，但是微生物抑制法检测时间较长，易受到其他抗生素的干扰，常缺乏专一性和精确度，酶联免疫方法存在一定的假阳性，需要其他方法进行确认［12］。

液相色谱法是较常用的方法，具有分离效果好，测定精度高的优点，但前处理比较复杂。

随着质谱技术的发展，液相色谱－质谱联用法正越来越广泛地应用于抗生素残留的分析中，其分析范围广，背景干扰少，灵敏度高，结果精确可靠，将是抗生素残留检测的首选方法。

第21卷第4期分析测试学报V ol.21N o.42002年7月FENXI CESHI XUE BAO(Journal of Instrum ental Anal y sis)Jul.2002鸡肉中多种磺胺兽药残留量测定的高效液相色谱-电化学检测法王建华,林黎明,陈长法(青岛出入境检验检疫局食品实验室,山东青岛266002)摘要:采用液相色谱电化学法测定了鸡肉中磺胺类药物残留量;磺胺用氯仿提取后,取部分提取液用氮气吹干,残渣溶于K H2PO4中,用正己烷脱脂,水相进样,液相色谱分析用C18柱,流动相为甲醇-0.01m ol/L KH2PO4(p H6,体积比25∶75),检测电位1.0V;与紫外检测器相比,电化学检测器(ECD )有更高的灵敏度和选择性,ECD的检出限为磺胺嘧啶0.02n g,磺胺甲氧哒嗪0.06n g,磺胺甲基异　唑0.07n g。

关键词:高效液相色谱;安培电化学检测;磺胺类药物;残留物;鸡肉中图分类号:T S251.55文献标识码:A文章编号:1004-4957(2002)04-0079-03磺胺类药物(SAs)广泛用于预防和治疗食源性动物的疾病,然而过量使用这些抗生素会导致在食用动物产品中残留。

这些残留物对人体有不良影响。

因此,欧盟将磺胺类药物列为必须严格监控的药物,并制定了动物源食品中磺胺的最大残留限量为100μg/k g[1]。

G C和G C-MS对肉、奶中磺胺类药物残留的测定灵敏度高而且专属性强,但需要繁冗的净化和衍生步骤[2],不适合大量样品的分析。

液相色谱紫外检测法也有许多应用[3],但灵敏度低。

有些分析方法基体干扰严重。

美国农业部食品安全检查局(FSIS)采用荧光胺衍生的薄层色谱(T LC)筛选方法[4]。

这种方法灵敏度、选择性较好,但重复性不够好。

近年来,用荧光胺柱前衍生或柱后衍生,进行磺胺测定的液相色谱荧光检测法已成为测定动物组织多种磺胺快速分析方法[5],这种方法灵敏度、选择性都较好。

高效液相色谱-串联质谱法检测动物源食品中硝呋索尔代谢物残留黄帆;王传现;张缙;盛永刚;王敏;韩丽;李晓虹;徐敦明;刘茜【摘要】建立动物源食品中硝呋索尔代谢物3,5-二硝基水杨酸肼(DNSH)残留量的液相色谱-串联质谱(LCMS/MS)检测方法.样品经盐酸水解,2-硝基苯甲醛衍生,提取净化后,用液相色谱-电喷雾三重四极杆串联质谱检测,多反应监测模式(MRM)优化质谱参数,内标法定量.该方法的线性范围为0.5～10 μg/kg,DNSH的线性相关系数为0.9995,检出限为0.5 μg/kg.在0.5、1.0、2.0和4.0 μg/kg的浓度添加水平下,加标回收率为63.4％～109.5％,RSD为2.0％～11.9％.本方法灵敏度高、重现性好,适用于动物源食品中硝呋索尔代谢物3,5-二硝基水杨酸肼残留量的确证检测.%A method of liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) was developed for the determination of 3,5-dinitrosalicylic acid hydrazine (DN-SH), which was the metabolite of nifursol antibiotic in animal origin food. The samples were hydrolyzed with 0. 1 mol/L HC1, and derivatised with 2-nitrobenzaldehyde at 37 ℃ for 16 h. The derivative solutions were adjusted to pH 7. 0-7. 5, and extracted by ethyl acetate. The analyte was detected by tandem mass spectrometry with electrospray ionizationsource by MRM mode. There is good linear correlation between the peak areas and concentrations of DNSH(the calibration coefficient is 0. 999 5), the dynamic linear range is 0. 5-10 μg/kg. The limit of detection (S/N = 3) is 0. 5 μg/kg. The recoveries of DNSH at four spiked levels of 0. 5, 1.0, 2. 0, 4. 0 μg/kg range from 63. 4% to 109. 5% (n = 6) and the RSDs are between 2. 0% and 11. 9% (n = 6). It is proved tobe fast and effective for simultaneously qualitative and quantitative inspection of the metabolite of nifursol antibiotic in animal origin food.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2013(034)002【总页数】6页(P82-87)【关键词】硝呋索尔;3,5-二硝基水杨酸肼;动物源食品;液相色谱-串联质谱法【作者】黄帆;王传现;张缙;盛永刚;王敏;韩丽;李晓虹;徐敦明;刘茜【作者单位】上海海洋大学食品学院,上海201306【正文语种】中文【中图分类】O657.63硝基呋喃类抗生素是一类人工合成的具有5－硝基结构的广谱抗菌药物，包括众所周知的呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因，该类药物也是一类具有潜在致癌和诱导有机体产生突变的物质。

高效液相色谱法测定鸡肉中磺胺类药物残留的不确定度评定赵健亚1，陈 丹2，谢怀根2，肖 静1,*(1.南通大学公共卫生学院，江苏 南通 226019；2.南通市动物疫病预防控制中心，江苏 南通 226006) 摘 要：依据JJF 1059—1999《测量不确定度评定与表示》和CNAS —GL06《化学分析中不确定度的评估指南》规定的测量不确定度的基本方法，建立数学模型，分析高效液相色谱法测定鸡肉中磺胺类药物残留的不确定度来源，并对各分量进行量化，给出5种磺胺类药物残留测定结果的扩展不确定度，评定结果表明：影响检测结果不确定度的主要因素为标准曲线拟合、样品前处理过程和测量重复性等。

关键词：不确定度；磺胺；高效液相色谱法；鸡肉Uncertainty Evaluation for Determination of Sulfonamide Residues in Chicken by High Performance Liquid ChromatographyZHAO Jian-ya 1，CHEN Dan 2，XIE Huai-gen 2，XIAO Jing 1,*(1. School of Public Health, Nantong University, Nantong 226019, China ；2. Nantong Center for Animal Disease Control and Prevention, Nantong 226006, China)Abstract ：A mathematical model was established according to the basic method for uncertainty evaluation from JJF 1059—1999 and CNAS-GL06. The sources of uncertainty for determining sulfonamide residues in chicken by high performance liquid chromatography (HPLC) were analyzed and each component of uncertainty was quantified. The expanded uncertainty for fi ve sulfonamides residues results was calculated. The major uncertainty sources were standard curve fi tting, sample pretreatment and measurement repeatability.Key words ：uncertainty ；sulfonamides ；high performance liquid chromatography (HPLC)；chicken 中图分类号：TS207.3 文献标志码：A 文章编号：1002-6630(2013)10-0144-04doi:10.7506/spkx1002-6630-201310031收稿日期：2012-02-24基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目(31000539)；南通市应用研究计划项目(K2010066)作者简介：赵健亚(1980—)，女，讲师，硕士，主要从事食品安全质量控制研究。