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2024年普通高中学业水平选择性考试生物试卷养成良好的答题习惯，是决定成败的决定性因素之一。
做题前，要认真阅读题目要求、题干和选项，并对答案内容作出合理预测;答题时，切忌跟着感觉走，最好按照题目序号来做，不会的或存在疑问的，要做好标记，要善于发现，找到题目的题眼所在，规范答题，书写工整;答题完毕时，要认真检查，查漏补缺，纠正错误。
本试卷共11页。
考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。
注意事项：1．答题前，考生先将自己的姓名、准考证号码填写清楚，将条形码准确粘贴在考生信息条形码粘贴区。
2．选择题必须使用2B铅笔填涂；非选择题必须使用0.5毫米黑色字迹的签字笔书写，字体工整、笔迹清楚。
3．请按照题号顺序在答题卡各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效；在草稿纸、试卷上答题无效。
4．作图可先使用铅笔画出，确定后必须用黑色字迹的签字笔描黑。
5．保持卡面清洁，不要折叠，不要弄破、弄皱，不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。
一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。
在每小题给出的四个选项中，只有一项符合题目要求。
1. 钙调蛋白是广泛存在于真核细胞的Ca2+感受器。
小鼠钙调蛋白两端有近似对称的球形结构，每个球形结构可结合2个Ca2+。
下列叙述错误的是（）A. 钙调蛋白的合成场所是核糖体B. Ca2+是钙调蛋白的基本组成单位C. 钙调蛋白球形结构的形成与氢键有关D. 钙调蛋白结合Ca2+后，空间结构可能发生变化2. 手术切除大鼠部分肝脏后，残留肝细胞可重新进入细胞周期进行增殖；肝脏中的卵圆细胞发生分化也可形成新的肝细胞，使肝脏恢复到原来体积。
下列叙述错误的是（）A. 肝细胞增殖过程中，需要进行DNA复制B. 肝细胞的自然更新伴随着细胞凋亡的过程C. 卵圆细胞分化过程中会出现基因的选择性表达D. 卵圆细胞能形成新的肝细胞，证明其具有全能性3. 下列关于森林群落演替的叙述，正确的是（）A. 土壤的理化性质不会影响森林群落演替B. 植物种群数量的改变不会影响森林群落演替C. 森林由乔木林变为灌木林属于群落演替D. 砍伐树木对森林群落演替的影响总是负面的4. 关于人类活动对生态环境的影响，下列叙述错误的是（）A. 清洁能源的使用能够降低碳足迹B. 在近海中网箱养鱼不会影响海洋生态系统C. 全球性的生态环境问题往往与人类活动有关D. 水泥生产不是导致温室效应加剧的唯一原因5. 弗兰克氏菌能够与沙棘等非豆科木本植物形成根瘤，进行高效的共生固氮，促进植物根系生长，增强其对旱、寒等逆境的适应性。
2022年新教材重庆生物高考试题学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________一、单选题1．以蚕豆根尖为实验材料，在光学显微镜下不能观察到的是（）A．中心体B．染色体C．细胞核D．细胞壁2．如图为小肠上皮细胞吸收和释放铜离子的过程。
下列关于该过程中铜离子的叙述，错误的是（）A．进入细胞需要能量B．转运具有方向性C．进出细胞的方式相同D．运输需要不同的载体3．将人胰岛素A链上1个天冬氨酸替换为甘氨酸，B链末端增加2个精氨酸，可制备出一种人工长效胰岛素。
下列关于该胰岛素的叙述，错误的是（）A．进入人体后需经高尔基体加工B．比人胰岛素多了2个肽键C．与人胰岛素有相同的靶细胞D．可通过基因工程方法生产4．下列发现中，以DNA双螺旋结构模型为理论基础的是（）A．遗传因子控制性状B．基因在染色体上C．DNA是遗传物质D．DNA半保留复制5．合理均衡的膳食对维持人体正常生理活动有重要意义。
据下表分析，叙述错误的是（）项目能量（kj）蛋白质（g）脂肪（g）糖类（g）食物（100g）①880 6.2 1.244.2②158013.237.0 2.4③70029.3 3.4 1.2A．含主要能源物质最多的是②B．需控制体重的人应减少摄入①和②C．青少年应均衡摄入①、②和③D．蛋白质、脂肪和糖类都可供能6．某化合物可使淋巴细胞分化为吞噬细胞。
实验小组研究了该化合物对淋巴细胞的影响，结果见如表。
下列关于实验组的叙述，正确的是（）分组细胞特征核DNA含量增加的细胞比例吞噬细菌效率对照组均呈球形59.20% 4.61%实验组部分呈扁平状，溶酶体增多9.57%18.64%A．细胞的形态变化是遗传物质改变引起的B．有9.57%的细胞处于细胞分裂期C．吞噬细菌效率的提高与溶酶体增多有关D．去除该化合物后扁平状细胞会恢复成球形7．植物蛋白酶M和L能使肉类蛋白质部分水解，可用于制作肉类嫩化剂。
2021年全国统一高考生物试卷以及答案解析(全国3卷)2021年全国统一高考生物试卷以及答案解析（全国3卷）注意事项：1.答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。
2.回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑。
如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。
回答非选择题时，将答案写在答题卡上。
写在本试卷上无效。
3.考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。
一、选择题：本题共6个小题，每小题6分，共36分。
在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1.（6分）下列有关高尔基体、线粒体和叶绿体的叙述，正确的是（）A。
三者都存在于蓝藻中B。
三者都含有DNAC。
三者都是ATP合成的场所D。
三者的膜结构中都含有蛋白质2.（6分）下列与真核生物细胞核有关的叙述，错误的是（）A。
细胞中的染色质存在于细胞核中B。
细胞核是遗传信息转录和翻译的场所C。
细胞核是细胞代谢和遗传的控制中心D。
细胞核内遗传物质的合成需要能量3.（6分）下列不利于人体散热的是（）A。
骨骼肌不自主战栗B。
皮肤血管舒张C。
汗腺分泌汗液增加D。
用酒精擦拭皮肤4.（6分）若将n粒玉米种子置于黑暗中使其萌发，得到n株黄化苗。
那么，与萌发前的这n粒干种子相比，这些黄化苗的有机物总量和呼吸强度表现为（）A。
有机物总量减少，呼吸强度增强B。
有机物总量增加，呼吸强度增强C。
有机物总量减少，呼吸强度减弱D。
有机物总量增加，呼吸强度减弱5.（6分）下列关于人体组织液的叙述，错误的是（）A。
血浆中的葡萄糖可以通过组织液进入骨骼肌细胞B。
肝细胞呼吸代谢产生的CO2可以进入组织液中C。
组织液中的O2可以通过自由扩散进入组织细胞中D。
运动时，丙酮酸转化成乳酸的过程发生在组织液中6.（6分）假设在特定环境中，某种动物基因型为BB和Bb的受精卵均可发育成个体，基因型为bb的受精卵全部死亡。
现有基因型均为Bb的该动物1000对（每对含有1个父本和1个母本），在这种环境中，若每对亲本只形成一个受精卵，则理论上该群体的子一代中BB、Bb、bb个体的数目依次为（）A。
2023年高考生物模拟试卷注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。
2．回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑，如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。
回答非选择题时，将答案写在答题卡上，写在本试卷上无效。
3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。
一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。
)1．下列关于植物的克隆技术的叙述，错误的是（）A．高度成熟和分化的植物细胞，仍保持了恢复到分生状态的能力B．由于遗传性的差异，不同种类植物细胞全能性的表达程度不相同C．适当配比的营养物质和生长调节剂可诱导愈伤组织的形成D．二倍体植物的花粉培养得到单倍体的过程属于器官培养2．下列关于细胞的结构与功能的相关叙述中，正确的是（）A．人成熟红细胞无线粒体，其有氧呼吸场所是细胞质基质B．植物细胞叶绿体产生的ATP能用于生长、物质运输等生理过程C．核糖体是蛋白质的“装配机器”，由蛋白质和RNA组成D．根尖分生区细胞中高尔基体与分裂后期细胞壁的形成有关3．哺乳动物受精卵的前几次分裂异常可能导致子细胞出现多核现象。
经研究发现，受精卵分裂时，首先形成两个相对独立的纺锤体，之后二者夹角逐渐减小，形成一个统一的纺锤体。
科研人员用药物N处理部分小鼠（2n=40）受精卵，观察受精卵第一次分裂，结果如图所示。
以下有关实验的分析中，合理的是A．两个纺锤体可能分别牵引来自双亲的两组染色体，最终合二为一B．细胞A最终可能将分裂成为1个双核细胞，1个单核细胞C．细胞B最终形成的子细胞中每个核的染色体条数为40D．药物N抑制两个纺锤体的相互作用，可能和马达蛋白的作用有关4．果蝇的红眼和白眼由一对等位基因（W/w）控制。
让一只纯合的红眼雌果蝇与一只白眼雄果蝇交配得到F1，F1全为红眼；F1雌雄个体随机交配得到F2。
为了确定W/w是位于常染色体上，还是位于X染色体上，下列数据中不需要统计的是（）A．F2中雌性个体的性状分离比B．F2中雄性个体的性状分离比C．F2中白眼果蝇的性别比例D．F2中红眼果蝇与白眼果蝇的比例5．下列有关高中生物实验的叙述，正确的是（）A．观察DNA和RNA在细胞中的分布时，应选择染色均匀、色泽较浅的区域进行观察B．低温诱导洋葱根尖细胞染色体加倍的实验中能观察到同源染色体联会现象C．利用口腔上皮细胞观察线粒体的实验中细胞的完整性遭到破坏D．探究培养液中酵母菌数量动态变化的实验中无需要使用显微镜6．下列有关生物体中有机物的叙述，正确的是（）A．含有C、H、O、N元素的有机物属于生物大分子B．DNA分子解旋后，空间结构改变，将失去其功能C．淀粉、蛋白质、脂肪在氧化分解时都能释放出能量D．性激素是基因表达的直接产物，可调节生命活动7．如图表示动物体温调节过程的部分示意图，图中①、②、③代表激素，当某人走出房间进入寒冷环境时，下列叙述错误的是A．血液中激素①、②、③的含量会增加B．骨骼肌受有关神经支配，不自主战栗C．激素③作用的靶器官只有甲状腺D．激素①、②对垂体的作用效应都为促进8．（10分）生物是一门实验学科，生物学经典实验有很多，下列相关叙述错误的是（）A．赫尔希和蔡斯实验所用材料噬菌体能在肺炎双球菌中增殖B．卡尔文用放射性同位素标记法研究CO2中的C在光合作用中的转移途径C．摩尔根运用假说一演绎法证明了控制果蝇红眼与白眼的等位基因位于X染色体上D．温特实验证明了胚芽鞘弯曲生长是由化学物质引起的，并把这种物质命名为生长素二、非选择题9．（10分）果蝇体内的Ⅳ号染色体多一条（三体）或少一条（单体）均可以存活并能够繁殖，没有Ⅳ号染色体的个体不能存活。
江苏省天一中学2024届高考生物一模试卷注意事项:1．答题前，考生先将自己的姓名、准考证号码填写清楚，将条形码准确粘贴在条形码区域内。
2．答题时请按要求用笔。
3．请按照题号顺序在答题卡各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效；在草稿纸、试卷上答题无效。
4．作图可先使用铅笔画出，确定后必须用黑色字迹的签字笔描黑。
5．保持卡面清洁，不要折暴、不要弄破、弄皱，不准使用涂改液、修正带、刮纸刀。
一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。
)1．科研人员测定某噬菌体单链DNA的序列，得到其编码蛋白质的一些信息，如下图所示。
据此作出的分析，不正确．．．的是A．谷氨酸（Glu）至少有两种密码子B．终止密码子分别为TAA或TGAC．一个碱基对替换可能引起两种蛋白发生改变D．基因重叠能经济地利用DNA的遗传信息量2．某高等植物细胞呼吸过程中主要物质变化如图，①~③为相关生理过程。
下列叙述正确的是（）A．若该植物为玉米，则③只发生在玉米胚细胞的细胞质基质中B．该植物②过程产生ATP的场所是线粒体基质和线粒体内膜C．等量的葡萄糖在有氧呼吸和无氧呼吸过程中产生丙酮酸的量不同D．只给根部细胞提供同位素标记的H218O，在O2和CO2中能同时检测到18O3．B淋巴细胞发育成熟和增殖分化的过程如下图所示，下列叙述正确的是A．甲发育为乙的主要场所是胸腺B．丙表面形成了特异性抗原受体C．乙增殖分化为丙需要抗原刺激D．丙具有较强的分裂和分化能力4．下列有关血细胞计数板的叙述中，错误的是（）A．利用血细胞计数板计数的方法属于显微镜直接计数法B．血细胞计数板的一个方格网中有九个大方格C．血细胞计数板上的双线用于区分大方格，单线用于区分中方格D．用酒精清洗后的血细胞计算板可用绸布轻轻拭干5．以下实验操作与实验目的之间的匹配，不正确．．．的是（）选项实验目的实验操作A 生长素诱导植物枝条生根高浓度的生长素溶液长时间处理实验材料B 亚硝酸盐含量测定利用分光光度计测定显色后的泡菜汁的吸光值C 腐乳制作（豆腐块已长满毛霉）逐层加盐，抑制微生物生长并析出豆腐水分D 诱导愈伤组织分化调节培养基中生长素/细胞分裂素比例适宜A．A B．B C．C D．F6．在种子发育过程中，许多植物会储存大量的油脂。
2023－2024学年度第一学期期中练习题年级：高三科目：生物考试时间90分钟，满分100分一、单选题（每小题2分，共30分）1.真核细胞中大分子物质与其组成单体、合成部位，对应正确的是（）A.淀粉：蔗糖、叶绿体基质B.糖原：葡萄糖、线粒体内膜C.蛋白质：氨基酸、核糖体D.DNA：脱氧核糖核酸、核孔2.环孢菌素A是一种从真菌培养液中分离出的由11个氨基酸组成的天然环肽，其具有膜穿透性，是临床上常用的免疫抑制药物。
下列关于环孢菌素A说法正确的是（）A.结构中含有10个肽键B.在真菌的高尔基体上合成C.可用于治疗免疫缺陷综合征D.可能是一种脂溶性肽类分子3.胞内体是动物细胞内的囊泡结构，能将细胞摄入的物质运往溶酶体降解。
下列推测不合理的是（）A.胞内体可以将胞吞摄取的多肽运往溶酶体B.胞内体与溶酶体融合体现膜的选择透过性C.胞内体的膜由磷脂、蛋白质等分子构成D.溶酶体水解产生的物质可被细胞再利用4.乙醇是生物学实验中常用的试剂。
下表列出了乙醇在实验中的作用，其中错误的是（）选项实验乙醇的作用A DNA粗提取与鉴定溶解DNA，初步分离DNA与蛋白质B菊花的组织培养工作台、手部、外植体的消毒C绿叶中的色素的提取溶解绿叶中的色素D检测生物组织中的脂肪洗去浮色A.AB.BC.CD.D5.p53蛋白能延迟细胞周期进程以修复DNA损伤，或在DNA损伤严重时参与启动细胞凋亡而防止癌变。
下列叙述错误的是（）A.推测p53基因为抑癌基因B.连续分裂的细胞p53基因表达水平较高C.p53蛋白能使细胞周期停滞在分裂间期D.p53蛋白能参与启动细胞的程序性死亡6.端粒酶由蛋白质和RNA组成，能以自身RNA为模板修复端粒，其活性在正常细胞中被抑制，在肿瘤细胞中被重新激活。
研究芪莲舒痞颗粒（QLSP）对胃炎模型鼠胃黏膜细胞端粒酶活性的影响，结果如图。
注：胃复春是一种主治胃癌前期病变的临床用药。
下列叙述错误．．的是（）A.端粒酶是一种逆转录酶，可被RNA酶彻底降解B.相对正常鼠，胃炎模型鼠的黏膜细胞更易癌变C.随QLSP浓度升高，实验组端粒酶活性逐渐降低D.测定端粒酶活性时，应控制温度、pH等一致7.研究者发现一种单基因遗传病——线粒体解偶联综合征，患者线粒体的氧化功能异常活跃，使他们摄入远超身体所需的营养物质，但体重却很低。
整理编辑公众号：生物考吧2020-2021学年天津一中高三（下）第四次月考生物试卷1.在线粒体中，线粒体DNA能通过转录和翻译控制某些蛋白质的合成。
下列物质或结构中，线粒体不含有的是（）A. 信使RNAB. 转运RNAC. 核糖体D. 染色质2.生物大分子之间的相互结合在生物体的生命活动中发挥重要作用。
下列叙述正确的是（）A. 蛋白质与DNA结合后都能调控基因表达B. RNA聚合酶与起始密码子结合启动转录的起始C. RNA与蛋白质的结合在细胞生物中普遍存在D. DNA与RNA的结合可发生在HIV中3.如图，图中甲表示酵母丙氨酸tRNA的结构示意图。
乙和丙是甲相应部分的放大图，其中已知Ⅰ表示次黄嘌呤，能够与A、U或C配对。
下列有关叙述正确的是（）①图中tRNA的P端是结合氨基酸的部位②丙氨酸的密码子与反密码子是一一对应的③单链tRNA分子内部存在碱基互补配对④转录丙所示序列的双链DNA片段含有3个腺嘌呤A. ①③B. ②③C. ②④D. ③④4.某同学用黑藻叶临时装片观察叶绿体后，进一步探究植物细胞的吸水和失水现象。
下列叙述正确的是（）A. 可观察到细胞中有螺旋带状叶绿体B. 由于叶片薄，叶肉细胞少，被卡尔文用作发现光合作用过程的实验材料C. 高浓度乙醇可引起细胞的质壁分离和复原D. 处于质壁分离状态的细胞，细胞液浓度可能等于细胞外液的浓度5.为探究影响光合作用强度的因素，将同一品种玉米苗置于25℃条件下培养，实验结果如图所示。
下列叙述，错误的是（）A. 此实验有两个自变量B. D点比B点CO2吸收量高原因是光照强度大C. 实验结果表明，在40%-60% 的条件下施肥效果明显D. 制约C点时光合作用强度的因素主要是土壤含水量6.C1、C2、C3、C4是某动物体的4个细胞，其染色体数分别是N、2N、2N、4N，下列相关叙述错误的是（）A. C1、C2可能是C4的子细胞B. C1、C3不一定是C4的子细胞C. C1、C2、C3、C4可能存在于一个器官中D. C1、C3、C4核DNA分子比值可以是1：2：27.HIV侵入人体后只与T细胞相结合，是因为只有T细胞表面含有CCR5的特殊蛋白质（由CCR5基因编码）。
愈伤组织需要光照的原因愈伤组织是指在机体受伤后，由于细胞的自愈能力，能够恢复和修复受损组织的一种特殊组织。
它起到了连接和填补伤口的作用，有助于伤口的愈合。
而光照对于愈伤组织的形成和修复有着重要的作用。
光照可以促进愈伤组织的形成。
当身体受伤后，光照能够刺激机体产生更多的细胞，从而加速愈伤组织的形成。
光照中的光线能够刺激伤口周围的细胞进行增殖和分裂，使其快速填充伤口，形成新的组织。
这些新生的细胞和组织能够帮助修复受损的组织，加快伤口的愈合。
光照可以提高愈伤组织的修复能力。
光照中的光线能够促进细胞内能量的产生和代谢的进行，从而增强细胞的活力和修复能力。
光线照射到受伤的组织上，可以促使细胞内的线粒体产生更多的三磷酸腺苷（ATP），进而提供更多的能量供给受损组织的修复和再生。
同时，光照还能够促进细胞内的DNA合成和蛋白质合成，有助于细胞的增殖和修复过程。
因此，光照可以提高愈伤组织的修复速度和质量。
光照还可以改善愈伤组织的微环境。
光照能够提高受伤组织的血液循环和氧气供应，为愈伤组织提供充足的营养物质和氧气。
光照能够刺激血管扩张，增加血流量，从而加速伤口周围血管的再生和修复。
此外，光照还能够促进淋巴液的循环和排毒，有助于消除伤口周围的废物和代谢产物，保持组织的清洁和健康。
除了以上几点，光照还能够提高愈伤组织的免疫功能。
光照中的光线可以激活机体免疫系统，增强免疫细胞的活性和功能。
光线照射到受伤的组织上，能够激活巨噬细胞和淋巴细胞，促进炎症的清除和伤口的愈合。
光照还能够抑制病原体的生长和繁殖，减少感染的风险。
因此，光照可以提高愈伤组织的免疫功能，保护伤口免受感染。
光照对于愈伤组织的形成和修复起着重要的作用。
它可以促进愈伤组织的形成，提高其修复能力，改善微环境，增强免疫功能。
因此，在伤口治疗和康复过程中，适当地利用光照，可以加速伤口的愈合，减少并发症的发生，提高康复效果。
当然，在使用光照治疗时，还需要根据受伤情况和个体差异进行合理的调整和控制。
柑橘愈伤组织中线粒体DNA含量增加1程运江，郭文武，邓秀新*华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉，430070Email: xxdeng@摘要：对它们在长期继代保存过程中线粒体基因组（mitochondrial DNA, mtDNA）进行了遗传稳定性的RFLP分析和组织切片观察，并对线粒体向核基因组转移进行了初步等研。
结果表明古老栽培柑橘愈伤组织在保存过程中mtDNA十分稳定，而部分杂种起源的柑橘mtDNA检测到变异，但这23份愈伤组织中有18份材料检测到mtDNA含量分加增加了1.2到6.4倍；用线粒体探针与核基因组DNA进行斑点杂交，在愈伤组织核基因组中检测到较强的杂交信号，推测愈伤组织中线粒体基因可能存在向核基因组转移的现象。
关键词：柑橘，愈伤组织，线粒体DNA中图分类号：S665.21．引言愈伤组织保存是作物资源离体保存的一种尝试，它既是理论研究的重要资源，又是开展作物现代生物技术育种研究中广泛采用的外植体材料，在原生质体融合和遗传转化等方面独具优势。
资源离体保存的主要目的是为了保证特定基因型资源可被长久利用，不因为自然或人为的因素而流失。
不论以何种组织形式进行离体保存，理论上该组织都应被视为原始资源的一个拷贝，通过适当的培养手段就能还原到原始资源的组织或形态。
因此，保证作物种质资源在离体条件下的遗传稳定性是进行资源有效保存的基本前提。
与其它作物不同，柑橘愈伤组织诱导后经长期继代保存依然表现出很高的再生频率，从核基因组和染色体倍性等不同水平对其再生前后的遗传稳定性进行了系统的研究，结果均表面再生前后无显著差异（郝玉金，2000；张俊娥等2003，2006）。
越来越多的证据表明，作物的线粒体基因组（mtDNA）也控制着许多重要的农艺性状，尤其与柑橘的雄性不育导致的无核性状紧密相关（Yamamoto等，1997；曹庆芹，2003），以雄性不育柑橘类型愈伤组织为亲本，通过原生质体融合，现已创造出大批体细胞杂种或胞质杂种，有望将不育性性状导入有核栽培品种对其进行无核化改良（Guo et la 2005）。
另外，以愈伤组织为外植体的遗传转化研究也取得了可喜进展，获得大1本研究得到教育部博士点基金《柑橘愈伤组织继代保存中细胞质基因组遗传变化研究》（20040504023），国家自然科学基金（30500350）资助。
量再生植株。
但是就愈伤组织本身而言，在其诱导和保存过程中线粒体基因组的遗传变异研究目前很少有相关报道。
基于此，本研究对经过长期保存的柑橘愈伤组织线粒体基因组的遗传稳定性进行了系统的研究。
2．材料和方法2.1实验材料采用败育和种子进行愈伤组织诱导，并在不含激素的MT培养基中每月继代一次进行保存。
选取的23份材料包括普通甜橙、脐橙、酸橙、温州蜜柑、古老橘类、杂柑类、葡萄柚类、来檬、金柑、澳洲指橘及部分体细胞杂种愈伤，这些材料充分代表了柑橘类作物的各种类型，它们的保存时间都在8—20-年之间（表1）。
分别以其田间植株叶片做对照。
表1 用于愈伤组织继代保存过程中细胞器DNA稳定性分析的材料 Table 1 Calli selected for the cytoplasmic DNA stability analyses vialong-term subculture名称编号Code 中文名Chinese Name 英文名Common Name拉丁文名Scientific Name保存年代Subculturetime1 伏令夏橙 ‘Valencia’Orange C.sinensis ‘Valencia’152 锦橙(2x) ‘Jincheng’ Orange (2x) C. sinensis ‘Jincheng’ 203 锦橙(4x) ‘Jincheng’ Orange (4x) C. sinensis ‘Jincheng’ 84 暗柳橙 ‘Anliucheng’OrangeC. sinensis ‘Anliucheng’ 85 纽荷尔脐橙‘Newhall’ Navel Orange C. sinensis.Newhall’136 朋娜脐橙 ‘Bonanza’ NavelOrangeC. sinensis ‘Bonanza’ 117 福罗斯特脐橙 ‘Frost’Navelorange C. sinensis ‘Frost’ 88 红肉脐橙‘Cara Cara’ NavelorangeC. sinensis ‘Cara Cara’ 129 国庆四号 ‘Guoqing No.4’SatsumaC.reticulata ‘Guoqing No.4’ 810 国庆五号 ‘Guoqing No.5’SatsumaC.reticulata ‘Guoqing No.5’ 811 枸头橙 ‘Goutou’sourOrangeC. aurantium ‘Goutou’ 1012 红橘A ‘Hongju’TangerineC. reticulata ‘Hongju’ 1013 红橘B ‘Hongju’TangerineC. reticulata ‘Hongju’ 1414 本地早橘 ‘Bendizao’TangerineC. reticulata ‘Bendizao’ 815 椪柑 ‘Ponkan’MandarinC. reticulata ‘Ponkan’ 816 红玉葡萄柚‘Red Ruby’ Grapefruit C. paradisi ‘Red Ruby’ 1017 摩克特橘橙 ‘Murcott’tangor 1718 佩奇橘柚 ‘Page’tangelo 1519 墨西哥来檬 ‘Mexican’Lime C.aurantifolia ‘Mexican’ 1420 宁波金柑 ‘Meiwa’kumquat F. crassifolia ‘Meiwa’1121 澳洲指橘 Microcitrus M. papauwana 1022 伏令夏橙+金柑 ‘Valencia’+’Meiwa’ 1423 四季橘 Calamonidn C. reticulata ‘Calamonidn’ 112.2 实验方法2.2.1 DNA提取选取生长旺盛的愈伤组织和健康的田间植株叶片，采用CTAB法提取总DNA （Cheng等，2003a）。
约5 g的材料经液氮研磨后加入CTAB提取缓冲液，于65℃水浴45—60 min，除去RNA，用苯酚/氯仿抽提一次，加入水饱和乙醚结合高浓度NaCl处理后沉淀DNA，用70%乙醇漂洗后溶于TE中，用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测并调整浓度后于-20 ℃备用。
2.2.2 杂交探针本研究所使用的线粒体探针由华中农业大学张方东博士（Try，pro， cox Ⅱ，pro2，coxⅡ，atp6，atp9，26S，atp9）和美国佛罗里达大学柑橘研究与教育中心（CREC）的Moreira 博士惠赠(atpA，cob，coxⅠ，coxⅢ，coxⅡ)；另外nad4和5S-18S由CAPS分析扩增产物回收制备。
叶绿体探针也由CAPS扩增产物回收制备。
2.2.3 DNA酶切、转膜及RFLP分析取30μl (约15μg) DNA样品，按5 U/μg DNA加入限制性内切酶（MBI，10U/μl），5 μl 相应的10×Buffer，加无菌水将反应体系补至50μl，充分混匀后加一滴矿物油覆盖，于37℃水浴18-20 h。
取5μl酶切DNA样品检测酶切是否充分。
0.8%琼脂糖凝胶电泳后经酸变性和碱变性处理，用毛细管法印迹使凝胶上的DNA能充分转移到Hybond-N+尼龙膜上（Amersham Cat. # RPN. 203B），取出尼龙膜，用滤纸包好放入80℃烘箱烘烤2 h后用保鲜膜包好，放于4℃保存。
探针标记、杂交、洗膜等均参照程运江等报道的程序（2002）。
杂交信号的强度用UVP软件分析并定量(UVP, Inc., Upland, CA, USA)。
2.2.4 组织切片观察参照Nagata等（1999）的方法，选取生长旺盛的愈伤组织团或长度在0.5 cm 左右的春梢茎尖于固定液（2%的戊二醛，20 mmol/L次甲砷酸钠pH7.2）中4℃下固定16 h。
经乙醇系列梯度脱水后，用Technovit 7100 树脂（Kulzer and Co., Wehrheim Germany）对样品进行包埋。
在徕卡超薄切片机（Leica Ultracut R）上切片，切片厚度为0.5 μm。
展片后，于80℃固定2h。
固定好的切片于室温乙醇溶液染色30 s后，在50%乙醇中清洗 10 s，再下，用100 μg/ml的DiOC6用蒸馏水清洗10 s。
用等体积的1μg/ml的DAPI/TAN（20 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6), 0.5 mmol/L EDTA, 7 mmol/L β-巯基乙醇，1.2 mmol/L 亚精胺)和1mg/ml 的氮-没食子酸丙脂/50%甘油溶液染色5 min。
在OLYMPUS-AH3显微镜下进行观察，并用Sensys CCD系统进行拍照。
2.2.5 完整细胞核的分离细胞核的分离参照邱芳等（1999）的方法并做适当修改。
取50—100 g柑橘幼嫩叶片或愈伤组织用液氮研碎，加入200 ml预冷的1×HB（0.01 mol/L Tris-HCl (pH 9.4-9.5),0.08 mol/L KCl, 0.01 mol/L EDTA, 0.001 M 精胺，0.001 mol/L 亚精胺，0.5 mol/L 蔗糖，0.2%β-巯基乙醇， 0.5% Triton X-100）溶液，于冰上混匀10 min，用2层纱布2层miracloth (CALBIOCHEM，475855 1R)过滤，4℃，1800 g 离心20 min。
沉淀用100 ml 1×HB溶液重新悬浮，用4层miracloth 过滤，4℃，1800 g 离心20 min，再多次用1×HB悬浮、离心洗涤，直到洗涤液的绿色完全退去，沉淀呈白色为止。
白色的细胞核沉淀，溶于适量不含β-巯基乙醇和Triton X-100的1×HB溶液中，吸10μl滴到载玻片上，经DAPI 染色后于OLYMPUS-AH3显微镜下40×目镜观察，并照相。
细胞核经溶解后，加入0.1 mg 蛋白酶K，于37℃保温处理36 h，加入3ml煮沸的 2×CTAB DNA 提取缓冲液，65℃水浴30 min， 加入3 ml 氯仿：异戊醇（24:1）充分混匀后室温下4000 g 离心10 min, 吸上清液，加入等体积冷冻的异丙醇，充分混匀后，-20℃冷冻 30 min, 5000 g 离心15 min, 沉淀细胞核DNA。
