结核分枝杆菌检测及相关内容

结核检验项目结核病是一种由结核分枝杆菌引起的感染性疾病，其传播途径主要是通过空气中的飞沫传播。

为了及早发现和治疗结核病，医学界开展了多种结核检验项目。

本文将介绍几种常见的结核检验项目，以及其作用和操作步骤。

一、结核菌素皮肤试验结核菌素皮肤试验是诊断结核病最常用的方法之一。

这项检验通过注射结核菌素溶液到皮下，观察注射部位的反应情况来判断是否感染结核分枝杆菌。

注射后48-72小时，如果注射点周围形成红斑和硬结，直径大于5毫米，则说明感染了结核分枝杆菌。

二、结核病原学检验结核病原学检验是通过检测痰液、组织活检等样本中的结核分枝杆菌，来确定结核病的诊断和治疗方案。

常用的方法有涂片法、培养法和PCR法。

涂片法是将样本涂抹在玻璃片上，经染色后观察结核分枝杆菌的形态。

培养法是将样本放入培养基中培养，待菌落形成后进行进一步鉴定。

PCR法是通过扩增结核分枝杆菌DNA的特定片段来检测其存在。

三、结核抗体检测结核抗体检测是通过检测人体内特定的抗体来判断是否感染了结核分枝杆菌。

这种方法可以辅助结核病的诊断和监测治疗效果。

目前常用的结核抗体检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光免疫分析法（FIA）。

这些方法通过检测血液中的抗体水平来判断感染情况。

四、结核药物敏感性检测结核药物敏感性检测是为了确定结核病患者对抗结核药物的敏感性，从而选择合适的药物治疗方案。

常用的方法有比例法和荧光法。

比例法是将结核分枝杆菌培养物与不同浓度的药物一起培养，观察菌落生长情况来判断药敏性。

荧光法是通过检测结核分枝杆菌培养物中的荧光信号来判断抗药性。

结核检验项目的开展，能够帮助医生及时发现和治疗结核病，减少疾病的传播。

通过结核菌素皮肤试验、结核病原学检验、结核抗体检测和结核药物敏感性检测等项目的综合应用，可以提高结核病的诊断准确性和治疗效果，为控制结核病的蔓延起到重要作用。

希望通过这些结核检验项目的研究和应用，能够更好地保护人们的健康，并减少结核病的发病率。

一、实验目的1. 了解结核分枝杆菌的生物学特性及致病机理；2. 掌握结核分枝杆菌的培养、分离、鉴定及检测方法；3. 增强实验室操作技能，提高对结核病的防控能力。

二、实验原理结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是一种革兰氏阳性细菌，是引起结核病的病原体。

本实验通过培养、分离、鉴定及检测结核分枝杆菌，了解其生物学特性及致病机理。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）结核分枝杆菌菌种；（2）牛肉浸液；（3）鸡蛋；（4）石炭酸复红染液；（5）无菌生理盐水；（6）无菌试管；（7）酒精灯；（8）高压蒸汽灭菌器；（9）显微镜；（10）生物安全柜。

2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）电热恒温水浴锅；（3）无菌操作台；（4）超净工作台；（5）显微镜。

四、实验方法与步骤1. 菌种复苏（1）将冷冻保存的结核分枝杆菌菌种复苏于牛肉浸液中，37℃恒温培养24小时；（2）观察菌落生长情况，记录结果。

2. 分离纯化（1）将复苏后的菌液涂布于牛肉浸液琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（2）挑取单菌落进行纯化，重复涂布、培养，直至获得纯化菌落。

3. 鉴定（1）挑取纯化菌落，用无菌生理盐水洗涤，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于石炭酸复红染液中，37℃恒温染色30分钟；（3）用无菌生理盐水冲洗，观察菌体形态及染色特性；（4）挑取染色阳性菌落，进行生化试验，如氧化酶试验、触酶试验等，以鉴定结核分枝杆菌。

4. 检测（1）挑取纯化菌落，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于含有药物的琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（3）观察药物对菌落的抑制作用，判断药物对结核分枝杆菌的敏感性。

五、实验结果与分析1. 菌种复苏：复苏后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。

2. 分离纯化：纯化后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。

3. 鉴定：挑取染色阳性菌落，进行生化试验，结果显示氧化酶试验、触酶试验均为阳性，符合结核分枝杆菌的生物学特性。

结核分枝杆菌镜检执行标准背景：结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，世界各国都面临着结核病的威胁。

结核分枝杆菌的镜检是结核病的常用检测方法之一，对于早期诊断和治疗监测具有重要意义。

以下是关于结核分枝杆菌镜检的执行标准。

1. 目的本标准旨在规范结核分枝杆菌镜检的操作流程，保证检测结果的准确性和可靠性，提高结核病的早期诊断率，并为治疗和预防提供依据。

2. 材料与仪器2.1 高质量显微镜及放大镜。

2.2 结核分枝杆菌涂片，可通过刮取痰液等方式制备。

2.3 阳性和阴性对照材料，用于质控。

3. 操作流程3.1 准备工作3.1.1 根据个人卫生要求，佩戴洁净外科口罩、手套和实验服。

3.1.2 准备所需材料和仪器。

3.1.3 对显微镜进行预检和校正并清洁。

3.2 样本处理3.2.1 从痰液中取适量样本，将其涂布于玻璃载玻片上，并晾干。

3.2.2 经过染色和脱色处理，使结核分枝杆菌显现出红色的链状或弯曲形态。

3.2.3 加盖干净的盖玻片。

3.3 镜检操作3.3.1 将涂片放在显微镜台上。

3.3.2 使用低倍镜进行初步扫描，找到适当的漏光区域。

3.3.3 切换到高倍镜，检查漏光区域的细胞形态及聚集情况。

3.3.4 在偏光下检查结核分枝杆菌的阳性特征。

包括：红色、链状或弯曲形态、长度及宽度相对较长等。

3.3.5 对疑似结核分枝杆菌进行进一步确认，如需要，可使用特殊染色技术或其他特异性检测方法。

3.4 结果判读3.4.1 对每个涂片进行镜检，详细记录结果。

3.4.2 根据阳性和阴性对照材料进行质控。

3.4.3 结果判读包括：阴性（未发现结核分枝杆菌）、阳性（发现结核分枝杆菌）及鉴定结核分枝杆菌数量。

4. 质量控制4.1 定期对实验人员进行技术培训和考核。

4.2 定期校准显微镜并保持其清洁和良好状态。

4.3 定期对阳性和阴性对照材料进行质控。

5. 报告与记录5.1 根据检测结果生成报告，并进行传达和归档。

5.2 记录检测样本的信息和结果。

分枝杆菌属及检验考点总结一、结核分枝杆菌引起人和动物结核病的病原菌。

目前已知在我国引起人类结核病的主要有人型和牛型结核分枝杆菌。

（一）生物学特性1.形态与染色G+，细长或略带弯曲的杆菌，在培养基中可呈球状或丝状，陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝状。

抗酸菌。

既往在组织中曾发现革兰阳性的非抗酸颗粒，接种动物可产生典型的结核病变，后被称为Much颗粒。

2.培养特性◆专性需氧，在无氧条件下迅速死亡，在5%～10%C02环境中可刺激其生长。

需适当的湿度。

本菌生长缓慢，最快的分裂速度为18h一代。

◆固体培养基：2～6周才能长出菌落，呈干燥颗粒状，不透明，乳白色或米黄色，表面呈皱纹状，形似菜花。

◆液体培养基中生长较快，多为表面生长，形成菌膜，且干燥易碎而沉于管底。

有毒力菌株在液体培养基中可呈索状生长，无毒株则无此现象。

◆营养要求较高，必须在血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能生长。

3.生化反应◆不发酵糖类，能产生过氧化氢酶，耐热触酶试验、聚山梨酯-80水解试验和耐热磷酸酶试验均为阴性，脲酶试验和中性红试验均为阳性。

◆人型结核分枝杆菌：烟酸试验、硝酸盐还原和烟酰胺酶试验均为阳性；牛型结核分枝杆菌均阴性。

4.抵抗力：对酒精敏感。

5.变异性：形态、菌落、毒力、免疫原性和耐药性等变异。

毒力变异：卡介苗（BCG）——将有毒的牛型结核分枝杆菌培养。

于含有甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年传种230代，获得减毒菌株，再接种动物，不能致病而使其获得免疫力。

用于预防结核病。

（二）临床意义1.致病性◆不产生内毒素和外毒素，也无荚膜和侵袭性酶。

◆主要致病物质：脂质。

索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）、磷脂（形成结核结节）、硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合）、蜡质D（引起迟发性过敏反应）。

◆主要通过呼吸道、消化道和受损伤的皮肤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起的肺结核最多见。

◆肺外感染可发生在脑、肾、肠及腹膜。

肺结核属于肺部慢性传染疾病，临床发病率高，该病的主要致病菌为结核分枝杆菌，病程相对较长，会向全身多个脏器累及。

菌阴肺结核指的是通过一次结核杆菌培养以及三次痰涂片检查，结果均显示为阴性的肺结核患者，具有较低的传染性。

大多数患者不了解菌阴肺结核的相关性知识，如果没有采取及时有效的诊断、治疗，患者的病情就会延误，继而转变为阳性，对患者的预后造成不利影响。

目前，临床中对于菌阴肺结核的特异性诊断措施相对缺乏，最常用的方法就是痰或呼吸道采集标本中结核分枝杆菌的检验。

近年来，结核病的发病率及死亡率呈现逐年上升的趋势。

筛选出一种能有效确诊早期结核病的检验方法十分重要。

目前临床上应用于辅助结核病诊断的检验方法以结核分枝杆菌培养和抗酸染色涂片为主，其中培养法作为结核疾病诊断的金标准具有准确性高、特异性高的优势。

结核分枝杆菌痰的分离培养，消耗时间较长，如果利用固体改良罗氏培养基进行培养，一般会需要至少20d，最长可需要60d，如果使用先进的全自动分枝杆菌进行检测，至少需要7d，至多需要20d。

实验室一般会通过痰涂片法进行检测，该方法的操作相对简单，价格较低，但是，操作费时，在基层痰检实验室涂片量过大的时候，一天内无法得到实验结果，这种现象无法满足目前的结核病防治工作。

近些年来，随着染色技术的逐渐先进，荧光染色技术作为新型的实验手段，已经在医学科学领域中广泛应用。

目前，涂片染色法已经成为无菌体液的主要检查方法，但是，通过传统制片以及染色法的检出率相对较低，误诊率以及漏诊率较高。

主要是因为染色时制片以及标本固定环节容易出现误差，而细胞沉淀仪法、改良的抗酸染色法、萋-尼氏抗酸染色法、金胺O荧光染色法、PCR等技术的应用越来越多。

传统方法：获取痰标本后，排除口水痰，然后纳入研究范围，确认纳入的当天，需要在每份痰标本相同位置，取两份，制成痰涂片。

离心处理标本，再在洁净的玻片上涂抹沉渣，涂完一层之后，使其自然干燥，再次涂抹，形成厚涂片，先使用萋尼抗酸染色法进行染色，随后使用石炭酸复红溶液初染，再使用盐酸酒精脱色，然后用美兰复染，寻找红色区域，待涂片干燥后置于显微镜镜检，于蓝色背景中寻找红色的杆状、分枝状细菌。

分枝杆菌检测方法总结分枝杆菌检测方法主要有以下几种：1. 痰涂片：这是最常用的方法，优点是快速、低廉、操作简便，但无法区分死活菌，尤其是无法区分结核分枝杆菌（MTB）和非结核分枝杆菌（NTM），而且受制于痰液中分枝杆菌数量，敏感性较低，漏检率很高。

2. 结核培养：与痰涂片相比，培养法灵敏度增加了不少，结核培养阳性是诊断抗酸杆菌的金标准，但缺点在于培养时间周期过长，一般需要8周左右时间，这样很耽误医生用药和患者及时治疗。

3. 结核杆菌IgG抗体检测：感染结核分枝杆菌后，体内可产生特异性抗体。

将结核分枝杆菌抗原包被在固相载体上，与待测血清反应，血清中相应的抗体可结合于其上，再以胶体金（或酶）标记，显示反应，可检出血清中结核分枝杆菌抗体。

结核杆菌IgG抗体检测特异性较好，对于排除结核阳性有利，但无法确诊活动性结核。

4. Xpert MTB/RIF：通过检测MTB基因组中的rpoB基因及其突变情况，实现MTB核酸和利福平耐药检测的全自动实时荧光定量核酸扩增技术。

具有以下优势：特异性好，能准确区分MTB和NTM；灵敏度高，检测快速，仅需要两个小时就完成检查了；适用于各种标本，痰液、肺泡灌洗液、肺组织、脑脊液、淋巴结、关节液以及尿液等均可用于检测；同时可以检测利福平耐药，检测对一线抗结核药物利福平的耐药情况，敏感性特异性极高，可及时为临床用药提供有效参考。

5. IGRA：γ-干扰素释放试验（IGRA）是检测结核分枝杆菌（MTB）特异性抗原刺激T细胞产生的γ-干扰素（IFN-γ），以判断是否存在MTB感染。

IGRA适应证主要包括结核潜伏感染（LTBI）的诊断和活动性结核（ATB）的辅助诊断。

与结核菌素皮肤试验（TST）相比具有明显优势：特异度高，不受卡介苗接种及大多数非结核分枝杆菌（NTM）的干扰；使用单一阈值作为阳性判断标准；作为体外诊断方法，更适用于疫情检测和流行病学调查。

IGRA是世界卫生组织（WHO）推荐的用于诊断MTB感染的体外免疫学方法。

结核分枝杆菌的耐药性及检测方法结核病是一种由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）引起的慢性传染病，主要累及肺部，但也可侵犯其他器官。

然而，近年来出现了结核分枝杆菌对抗生素的耐药性问题，给结核病的防治带来了巨大挑战。

本文将就结核分枝杆菌的耐药性机制以及常用的检测方法进行论述。

一、耐药性机制1.多重耐药（MDR）多重耐药是指结核分枝杆菌对两种最主要的抗结核药物——异烟肼和利福平同时产生耐药现象。

这种耐药形式使得传统治疗手段无法有效控制感染，并且增加了传播风险。

2.延迟耐药（XDR）延迟耐药是在MDR基础上，又产生对氟喹诺酮类等二线抗结核药物的耐药性。

这使得治疗选择更加有限，且通常需要使用更昂贵和毒副作用更大的抗结核药物。

3.全耐药（TDR）全耐药是指对所有一线和二线抗结核药物都产生耐药现象，这种情况下仅能依靠其他的药物才能进行治疗。

然而，这些替代治疗方案费用昂贵且可行性有限。

二、检测方法1.传统的抗生素敏感性测试传统的抗生素敏感性试验使用培养分枝杆菌，并将其接种于含有抗生素的琼脂平板上。

通过观察细菌在不同浓度抗生素下的生长情况来判断其对该抗生素是否具有耐药性。

尽管这种方法简单易行，但其确诊时间较长，且容易出现误判。

2.分子检测方法随着分子生物学技术的进步，利用PCR技术可以更快速地检测结核分枝杆菌的耐药基因突变。

这种方法通过检测与耐药性相关基因序列的存在与否来确定细菌对特定抗生素是否具有耐药性。

由于PCR技术高灵敏度和高特异性，它已成为常用的结核分枝杆菌耐药性检测方法之一。

3.流式细胞术流式细胞术利用荧光标记的结核分枝杆菌单个细胞对特定抗生素的反应进行测定。

通过测量细胞内荧光信号的变化来判断其对抗生素是否产生了耐药性。

这种方法具有高通量和快速的优势，但需要对样本进行前期处理以获得单个菌落。

4.质谱法质谱法利用MALDI-TOF质谱仪检测结核菌代谢产物图谱与数据库匹配，从而快速确定结核分枝杆菌的耐药类型。

结核三项指标一般是指结核抗体检测、结核分枝杆菌培养、结核菌素试验。

1、结核抗体检测
结核抗体检测是指通过采取受试者的静脉血，检测体内是否存在结核抗体，以此判断是否感染结核分枝杆菌。

如果检测结果为阴性，提示未感染结核分枝杆菌，如果检测结果为阳性，提示感染结核分枝杆菌。

2、结核分枝杆菌培养
结核分枝杆菌培养是指将分离出的结核分枝杆菌进行培养，从而判断结核分枝杆菌的生长情况，对于结核病的诊断具有较高的价值。

3、结核菌素试验
结核菌素试验是指通过皮内注射结核菌素，并根据注射部位的皮肤状况，来判断是否感染结核分枝杆菌。

如果确诊感染结核分枝杆菌，建议及时到医院就诊，积极配合医生进行针对性治疗。

平时需要注意加强营养，适当进食富含蛋白质的食物，如牛奶、鸡蛋等，同时还需要注意保持居住环境的清洁卫生。