混合高脂饲料喂养新西兰白兔建立DHF模型的实验

混合高脂饲料喂养新西兰白兔建立DHF模型的实验
薛礼美;唐蜀华;鞠晓云
【期刊名称】《中外健康文摘》
【年(卷),期】2011(008)036
【摘要】目的使用无创的方法建立兔舒张性心力衰竭模型.方法采用混合高脂饲料喂养新西兰白兔12周,并设正常饲料组进行对照观察.结果模型组与空白对照组比较在LVSP、收缩指数、左心室收缩期最大压力上升速率、左心室舒张末压、左室压力最大下降速率(LV±dp/dt max)有显著差异,符合舒张性心力衰竭动物模型.结论采用混合高脂饲料喂养新西兰白兔可以建立动物舒张性心力衰竭的模型.【总页数】3页(P48-50)
【作者】薛礼美;唐蜀华;鞠晓云
【作者单位】苏州市中医医院内科,江苏苏州,215000;江苏省中医院,江苏南
京,210029;南京中医药大学,江苏南京,210046
【正文语种】中文
【中图分类】R446
【相关文献】
1.建立新西兰白兔深静脉血栓模型的实验研究 [J], 郑玉江;汤庆;邓方阁;张浩
2.混合高脂饲料喂养新西兰白兔建立DHF模型的实验 [J], 薛礼美;唐蜀华;鞠晓云
3.高脂饲料喂养加静脉注射小牛血清白蛋白建立兔动脉粥样硬化模型 [J], 李琳;实健霖;楚天舒;李婉秋;张戈;孙林
4.高脂饲料喂养加静脉注射小牛血清白蛋白建立兔动脉粥样硬化模型 [J], 李琳;窦
健霖;楚天舒;李婉秋;张戈;孙林
5.高脂饲料喂养时间和STZ剂量对建立2型糖尿病大鼠模型的影响 [J], 魏占英;沈丽;冯晓慧;孙文广;葛声
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新西兰白兔非乙醇性脂肪性肝病模型的建立与评价季榕;唐莉【摘要】BACKGROUND:Fat-rich diet is an independent risk factor of nonalcolholic fatty liver disease.OBJECTIVE:To establish a rabbit model of nonalcolholic fatty liver disease.METHODS:New Zealand rabbits were randomly divided into a control group and a model group. The model group rabbits were given fat-rich diet and the control group rabbits were given standard diet.RESULTS AND CONCLUSION:After raise for 12 weeks, hepatocytes of the model group rabbits developed diffuse fatty degeneration, inflammatory cell infiltration, necrosis and fibrosis were observed in the portal area and lobules. Abnormal liver was not observed in the control group. Liver index (liver weight/weight× 100％), serum alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, and triacylglycerol levels were significantly higher in the model group than in the control group (P ＜ 0.01 or P＜0.05). These results showed that a rabbit model of nonalcolholic fatty liver disease was successfully established.%背景:高脂饮食是导致非乙醇性脂肪性肝病发病的独立相关危险因素.目的:建立非乙醇性脂肪性肝病兔模型.方法:将新西兰白兔随机分为对照组和模型组,模型组给予高脂饮食,对照组给予普通动物饲料喂养.结果与结论:兔饲养12 周后,模型组肝细胞均呈现弥漫性脂肪变性,汇管区与小叶间可见炎细胞浸润、坏死及纤维化,对照组肝脏无异常,且模型组肝指数、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、三酰甘油均高于对照组(P < 0.01 或P < 0.05).说明实验成功建立了非乙醇性脂肪性肝病兔模型.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2011(015)033【总页数】3页(P6124-6126)【关键词】脂肪性肝病;非乙醇性;新西兰白兔;动物模型;组织构建【作者】季榕;唐莉【作者单位】新疆石河子大学医学院第一附属医院感染科,新疆维吾尔自治区石河子市,832008;新疆医科大学第一附属医院感染科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市,830054【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言随着人们饮食结构、生活方式的改变，非乙醇性脂肪性肝病的发病率大幅上升，且呈年轻化趋势[1]，但其发病机制至今尚未阐明，治疗上亦缺乏有效措施。

兔定位性动脉粥样硬化发病机制的实验研究描述：目的探讨定位性动脉粥样硬化模型中动脉粥样硬化的发病机制及各因素间内在联系。

方法将48只新西兰白兔随机分成两组：对照组6只给予基础饲料+假手术，模型组42只饲以1%胆固醇、6%猪油的高脂饲料8周，...[摘要]目的探讨局部动脉粥样硬化模型中动脉粥样硬化的发病机制及各种因素之间的内在联系。

方法48只新西兰大白兔随机分为两组：对照组6只给予基础饲料+假手术，模型组42只给予1%胆固醇和6%猪油的高脂饲料喂养8周。

在食用高脂饮食1周后进行髂动脉球囊内膜切除术。

酶法测定甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平；放射免疫分析法测定血浆内皮素（ET）、血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α水平；用硝酸还原法测定血清一氧化氮（no）；免疫比浊法测定二磷酸腺苷（ADP）诱导的最大血小板聚集率（MPA）。

8周时进行髂动脉造影，并将对照组和部分模型组的动物处死，进行光学显微镜检查。

使用spss19 0统计软件进行配对或非配对t检验，并进行多元线性回归分析，皮尔逊检验用于相关分析。

结果模型组所有髂动脉均有不同程度的狭窄（15%～100%），平均狭窄（61.47±28.10）%。

对照组无明显狭窄。

与对照组相比[TG:（0.96±0.78）mmol/L，TC:（1.89±0.60）mmol/L，LDL-C:（0.85±0.42）mmol/L，et:（297.55±44.67）ng/L，MPA:（33.72±6.35）%，TXB2:（68.55±8.90）ng/L，TXB2/6-keto-pgf1α：与血清tb2.19，tb2.38，tb2.38，tb2.6α相比，模型组[TG:（4.61±2.15）TC:（53）mmol:（49）显著增加mmol/L，LDL-C:（36.96±8.17）mmol/L，et:（386.78±52.92）ng/L，MPA:（48.10±7.25）%，TXB2:（184.14±27.51）ng/L，TXB2/6-keto-pg f1α：85.75±37.50），差异有高度统计学意义（P<0.01）。

家兔脑动脉粥样硬化性狭窄模型的建立田春鸥;张鑫;袁媛;李子付;张永鑫;张磊;赵瑞;杨志刚【摘要】目的：探索建立稳定的家兔脑动脉粥样硬化性狭窄模型的方法。

方法：将25只新西兰大白兔随机分成3组：对照组5只，普通饲料喂养，行股动脉切开手术；单纯高脂饲料喂养组10只，高脂饲料喂养并行股动脉切开手术；高脂喂养联合球囊损伤组10只，高脂饲料喂养并行经股动脉血管内椎动脉颅内段球囊损伤术。

各组手术均在适应性喂养2周后实施，术后继续以原饲料喂养。

分别在术后2周和4周行目标椎动脉数字减影血管造影术（digital subtraction angiography ，DSA），并进行血脂水平检测及病理组织学检查。

结果：对照组与单纯高脂饲料喂养组的目标椎动脉DSA及血管病理切片均未发现明显差异。

高脂喂养联合球囊损伤组术后2周DSA提示，3例有目标段椎动脉轻度管腔狭窄，6例仅见管壁毛糙；术后4周DSA提示，5例可见目标段椎动脉管腔轻度狭窄，2例管腔中度狭窄，2例仅管壁毛糙。

血脂水平检测显示，高脂喂养的两个实验组动物血脂水平高于对照组（均 P＜0．05），单纯高脂喂养组与高脂喂养联合球囊损伤组的血脂水平差异无统计学意义。

病理检查提示，高脂喂养联合球囊损伤组可见目标段椎动脉内皮结构紊乱，连续性中断，内膜下见泡沫细胞沉积。

结论：通过高脂喂养联合血管内球囊损伤，可成功建立较为稳定的家兔脑血管粥样硬化性狭窄模型，为后续研究奠定了基础。

%Objective:To provide a simple and replicable method of building an atherosclerotic intracranial arterial stenosis model ofrabbits .Methods:Twenty‐five N ew Zealand white rabbits were randomly divided into three groups .Five rabbits in control group were fed with normal diet and received sham arteriotomy of femoral artery .Ten rabbitsin pure high‐fat diet group were fed with high‐fat diet and received shamarteriotomy of femoral artery .Ten rabbits in balloon‐injury group were fed with high‐fat diet and underwent endovascular balloon‐injury operation of intracranial vertebral artery through femoral artery .All the operations were performed after two weeks of adaptive feed .Each group was fed with previous diet after operation .Digital subtraction angiography (DSA) of target vertebral artery was performed two and four weeks after operation (four and six weeks after the scheduled diet) .Serum lipid level was test and the histopathologic examinations were performed . Results:No significant difference was found by DSA or pathological detection of blood vessel in target vertebral artery of&nbsp;control group and pure high‐fat diet group .DSA revealed the mild luminal stenosis in three cases and unsmooth inner wall in six cases at the target vertebral arteries in balloon‐injury group two weeks after operation .Also the DSA revealed the mild luminal stenosis in five cases ,moderate luminal stenosis in two cases and u nsmooth inner wall in two cases in balloon‐injury group four weeks after operation .Detection of serum lipid level showed that the serum lipid level of white rabbits in pure high‐fat diet group and balloon‐injury group was significantly higher than that in control group (P< 0 .05) .No significant difference of serum lipid level was found between pure high‐fat diet group and balloon‐injury group .Histopathologic examination showed the disorder of endothelial structure in target vertebral arteries ,interruption of endothelial continuity and deposition of foam cell under intima in the high‐fat diet combined balloon‐injury group .Conclusions: The method of high‐fat diet combined with endovascular balloon‐injury is beneficial tosuccessfully build a relatively stable model of rabbits atherosclerotic intracranial arterial stenosis ,and it provides the basis for further studies .【期刊名称】《中国临床医学》【年(卷),期】2016(023)004【总页数】5页(P444-448)【关键词】家兔模型;球囊损伤;颅内动脉粥样硬化【作者】田春鸥;张鑫;袁媛;李子付;张永鑫;张磊;赵瑞;杨志刚【作者单位】第二军医大学长海医院神经外科，上海 200433; 解放军第四二二中心医院神经外科，湛江 524005;同济大学医学院，上海 200092;上海华佳医院，上海 200433;第二军医大学长海医院神经外科，上海 200433;第二军医大学长海医院神经外科，上海 200433;第二军医大学长海医院神经外科，上海 200433;第二军医大学长海医院神经外科，上海 200433;第二军医大学长海医院神经外科，上海 200433【正文语种】中文【中图分类】R543.12动脉粥样硬化造成的脑供血动脉狭窄是发生缺血性卒中的重要原因之一。

2021年4月第31卷㊀第4期中国比较医学杂志CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINEApril,2021Vol.31㊀No.4曹旺,李霞,刘彩霞,等.家兔颈总动脉血管内膜增生模型的探讨[J].中国比较医学杂志,2021,31(4):1-8.Cao W,Li X,Liu CX,et al.A model of vascular intimal hyperplasia of the common carotid artery in rabbits [J].Chin J Comp Med,2021,31(4):1-8.doi:10.3969/j.issn.1671-7856.2021.04.001[基金项目]国家自然科学基金(81874406);湖南中医药大学中西医结合一流学科开放基金项目(2019ZXYJH10)㊂[作者简介]曹旺(1993 ),男,在读硕士研究生,研究方向:中西医结合心脑血管疾病防治㊂E-mail:294092838@ [通信作者]邓常清(1963 ),男,博士生导师,教授,研究方向:中西医结合心脑血管疾病防治㊂E-mail:dchangq@家兔颈总动脉血管内膜增生模型的探讨曹㊀旺,李㊀霞,刘彩霞,邓常清∗(湖南中医药大学中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室,长沙㊀410208)㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀探讨家兔颈总动脉血管内膜增生模型的建立方法及影响因素㊂方法㊀30只新西兰大白兔,雌雄各半,随机分为假手术组㊁高脂+单侧套管组(按造模时间分为2周㊁3周亚组)㊁高脂+双侧套管组(按造模时间分为2周㊁3周亚组)㊂单侧套管组在左侧颈总动脉外侧置一硅橡胶管(长度20mm,内径1.0mm)包裹血管并固定,双侧套管组在双侧颈总动脉外侧分别置一硅橡胶管包裹血管并固定㊂两组均于术后次日给予2%胆固醇饲料连续喂养2~3周㊂假手术组只行手术分离颈总动脉,不进行血管套管术,并饲喂普通饲料㊂分别于手术后第2周㊁第3周取损伤段颈总动脉观察病理形态学改变,采用形态计量学方法测定血管内膜增生指标,免疫组化法测定增生内膜中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)㊁骨桥蛋白(osteopontin,OPN)㊁Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)㊁炎性反应因子白细胞介素-1β(IL -1β)㊁肿瘤坏死因子-α(TNF -α)的表达㊂结果㊀高脂+颈总动脉硅橡胶管套管干预2周㊁3周后,颈总动脉出现明显的血管内膜增生,内膜面积(IA)㊁内膜厚度(IT)㊁内膜面积增生率(HRIA)㊁内膜厚度增生率(HRIT)均显著增加,其中双侧套管的内膜增生较单侧明显,干预3周内膜增生较2周严重㊂在双侧套管3周,血管内膜α-SMA 表达显著降低㊁OPN㊁Col-Ⅰ㊁IL-1β㊁TNF-α表达显著增高㊂结论㊀应用高脂+颈总动脉硅橡胶管套管法可成功建立血管内膜增生模型,以双侧颈总动脉套管干预3周以上为宜㊂ʌ关键词ɔ㊀血管内膜增生;血管狭窄;兔;动物模型;高血脂ʌ中图分类号ɔR-33㊀㊀ʌ文献标识码ɔA㊀㊀ʌ文章编号ɔ1671-7856(2021)04-0001-08A model of vascular intimal hyperplasia of the common carotidartery in rabbitsCAO Wang,LI Xia,LIU Caixia,DENG Changqing ∗(Key Laboratory of Hunan Province for Prevention and Treatment of Integrated Traditional Chinese andWestern Medicine on Cardiocerebral Diseases,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha 410208,China)㊀㊀ʌAbstract ɔ㊀Objective ㊀To explore an establishment method and influencing factors of an intimal hyperplasia modelof common carotid artery in rabbits.Methods ㊀Thirty New Zealand white rabbits,half male and half female,were randomly divided into a sham operation group,high fat +unilateral cannula group (divided into 2-and 3-week subgroups in accordance with the modeling time),and hyperlipidemia +bilateral cannula group (divided into 2-and 3-week subgroups in accordance with the modeling time).In the unilateral cannula group,a silicone tube (20mm in length and inner diameter of 1mm)was placed on the lateral side of the left common carotid artery and fixed,whereas in the bilateral cannula group,a silicone tube was placed on the lateral side of the bilateral common carotid artery and fixed.Both groups were fed a 2%cholesterol diet for 2-3weeks starting from the day after the operation.In the sham operation group,thecommon carotid artery was separated,no vascular cannula was performed,and the rabbits were fed a regular diet.At2and 3weeks after the operation,pathomorphological changes of the injured common carotid artery were observed,the index of intimal hyperplasia was measured by morphometry,and expression ofα-smooth muscle actin(α-SMA),osteopontin (OPN),type I collagen(Col-Ⅰ),inflammatory response factor interleukiN-1β(IL-1β),and tumor necrosis factor-α(TNF-α)in intimal hyperplasia was determined by immunohistochemistry.Results㊀After treatment with high fat and the silicone tube for2or3weeks,intimal hyperplasia was found in the common carotid artery.The intimal area,intimal thickness,intimal area proliferation rate,and intimal thickness were increased significantly.Intimal hyperplasia in the bilateral cannula was more obvious than that in the unilateral side,and intimal hyperplasia at3weeks was more serious than that at2weeks.After3weeks of the bilateral cannula,expression ofα-SMA in the vascular intima was reduced significantly and expression of OPN,Col-Ⅰ,IL-1β,and TNF-αwas increased significantly.Conclusions㊀A model of intimal hyperplasia can be successfully established using high fat and a common carotid artery silicone cannula,and the bilateral common carotid artery cannula should be applied for more than3weeks.ʌKeywordsɔ㊀intimal hyperplasia;vascular stenosis;rabbit;animal model;hyperlipidemia㊀㊀冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)是严重危害人类健康的心血管疾病㊂经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)治疗可以很好地实现冠脉血运重建,改善患者的生存质量,明显降低患者的死亡率,但术后由于血管内膜损伤后引起的血管再狭窄是困扰介入治疗的难题,也是影响患者预后和再发缺血性心脏病的重要原因㊂众所周知,血管再狭窄的基本病理特征是血管内膜增生,在PCI术后,由于血管内膜损伤,导致内膜下血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)迁移至内膜并发生增殖,使血管内膜增厚而致血管再狭窄的发生[1-3]㊂因此,防治PCI术后血管内膜增生引起的血管再狭窄是当前迫切需要解决的问题㊂而建立动物血管内膜增生模型是其防治研究的前提㊂目前,血管内膜增生模型的建立方法主要有球囊导管损伤血管内膜引起内膜增生和高脂喂养引起动脉粥样硬化血管内膜增生等方法[4-6]㊂球囊导管可损伤血管内皮,引起内膜增生,可用于大鼠㊁家兔等内膜增生模型的建立,但手术操作复杂,动物存活率较低,引起病变的程度变异较大,不利于防治方法的评价㊂动脉粥样硬化模型主要用于小鼠和家兔,可在一定程度上引起血管内膜增生,但实验周期长,病变部位难以控制[7-10]㊂家兔是动脉粥样硬化的易感动物,高脂高胆固醇饲料喂养可以形成类似人动脉粥样硬化的病变,而单纯用高脂高胆固醇喂养虽然可诱发动脉粥样硬化病变,但血管内膜增生病变不典型,实验周期长㊂因此,建立一种病变明确㊁操作简单的血管内膜增生模型是研究其病理生理和防治的重要前提㊂本实验采用家兔高胆固醇饲料喂养联合硅橡胶管颈总动脉套管术使颈总动脉狭窄的方法,建立了一种颈总动脉血管内膜增生模型,为血管内膜增生病理生理和防治方法的研究提供了有效手段㊂1㊀材料和方法1.1㊀实验动物普通级新西兰种大白兔雌雄各15只,10周龄体重1.8~2.0kg,均购于湖南太平生物科技有限公司[SCXK(湘)2015-0004]㊂实验在湖南省中医药研究院动物中心进行[SYXK(湘)2015-0008],动物实验得到湖南中医药大学医学动物实验伦理委员会批准(2019-0027),并按实验动物使用的3R原则给予人道的关怀㊂1.2㊀主要试剂与仪器改良Masson三色染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司,批号20190613);二步法免疫组化法检测试剂盒(北京中杉金桥,批号2015G0115);DAB显色试剂盒(北京中杉金桥,批号K196721D);小鼠抗α-smooth muscle actin(α-SMA)单克隆抗体(abcam,批号GR3257713-3);小鼠抗Osteopontin(OPN)单克隆抗体(NOVUS,批号NB110-89062);兔抗TNFα多克隆抗体(Bioss,批号bs-2150R);兔抗1L-1β多克隆抗体(Bioss,批号bs-0812R);兔抗Collagen1 (Col-1)多克隆抗体(Bioss,批号bs-0578R)㊂石蜡切片机(英国Shado公司,HM325);光学显微镜(日本Olympus公司,BA410E)㊂1.3㊀实验方法1.3.1㊀动物分组及处理实验前适应性饲养1周,饲养于普通级动物实验室,室温25ħ㊁湿度45%~65%,喂食标准饲料,自由摄食和水㊂将家兔随机分为假手术组(A组),高脂+单侧套管组(B 组,按造模时间分为B1㊁B2亚组),高脂+双侧套管组(C 组,按造模时间分为C1㊁C2亚组),每组6只,雌雄各3只排除性别干扰㊂按颈总动脉套管法改良制作颈总动脉血管内膜增生模型[11]:动物术前12h 禁食不禁水,耳缘静脉注射2.5%戊巴比妥钠(1mL /kg)麻醉后仰卧固定,颈部正中切口,分离两侧颈总动脉㊂高脂+单侧套管组将一个无活性的柔软的硅橡胶管(长度20mm,内径1.0mm)沿长轴剪开后,套在分离的左侧颈总动脉外面,用丝线结扎固定㊂高脂+双侧套管组将两个硅橡胶管分别套在分离的左右侧颈总动脉外面,用丝线结扎固定㊂术后第1天起连续喂养高脂饲料(2%胆固醇+3%橄榄油+95%普通饲料)㊂假手术组只进行手术操作分离颈总动脉,不进行血管套管,从术后第1天起连续喂养普通饲料㊂术中A 组㊁B1组㊁C1组麻醉意外死亡1只,各组术后肌注青霉素7d 抗感染,术后未有动物死亡㊂分别于术后2周㊁3周处死动物检测,取材时硅橡胶管脱落者即为造模不成功,其中B2组1只,C1组1只,C2组2只㊂1.3.2㊀检测指标血管内膜增生形态学计量分析:取损伤段颈总动脉,在PBS 缓冲液中将血管剥离干净,放入4%多聚甲醛固定7d,乙醇梯度脱水,石蜡垂直定向包埋,每段血管间断均匀切取8片后按试剂盒说明行Masson 染色,以病理图像分析系统测定中膜面积(media area,MA),内膜面积(intimal area,IA)㊁内膜中线周长㊁中膜中线周长,计算中膜厚度(media thickness,MT)㊁内膜厚度(intimal thickness,IT)㊁内膜面积增生比率(hyperplasia ratio of intimal area,HRIA)㊁内膜厚度增生比率(hyperplasia ratio of intimal thickness,HRIT),以评价血管内膜增生程度㊂计算公式如下:MA =(外弹力膜内面积-内弹力膜内面积)IA =(内弹力膜内面积-管腔面积)MT =外弹力膜内面积π-内弹力膜内面积πIT =外弹力膜内面积π-管腔面积πHRIA =[(内膜面积)/(内膜面积+中膜面积)ˑ100%]HRIT =[(内膜厚度)/(内膜厚度+中膜厚度)ˑ100%]免疫组化法测定损伤段颈总动脉增生内膜中α-SMA㊁OPN㊁TNF-α㊁1L-1β㊁Col-1蛋白表达:按照免疫组化试剂盒说明书操作:将损伤段血管组织置4%多聚甲醛固定7d,乙醇梯度脱水,石蜡垂直定向包埋,石蜡切片机均匀切片,每厚约4μm;60ħ烤片过夜;脱蜡水化;微波抗原修复;冷却至室温后每张切片滴加一抗50μL(小鼠抗α-SMA 单克隆抗体,稀释浓度1ʒ2000,小鼠抗OPN 单克隆抗体,稀释浓度1ʒ200,兔抗TNF-α多克隆抗体,稀释浓度1ʒ200,兔抗1L-1β多克隆抗体,稀释浓度1ʒ200,兔抗Col-Ⅰ多克隆抗体,稀释浓度1ʒ200),4ħ孵育过夜;然后按PV -9000二步法检测试剂盒滴加二抗,37ħ温育30min;DAB 显色,苏木素复染,脱水与透明后封片㊂光镜下可见阳性表达呈棕黄色点状或纤维状染色,每张切片选择5个不同视野进行拍照,用Image-Pro Plus6.0图像分析软件测量阳性染色积分光密度(integrated optical density,IOD)值以及阳性染色面积,并计算出平均IOD 值以反映目的蛋白的表达强度㊂平均积分光密度值=IOD Sum /Area Sum (μm 2)㊂1.4㊀统计学方法实验数据采用平均数ʃ标准误差( x ʃsx )表示,运用SPSS 23.0统计软件进行统计分析㊂先将各组数据进行方差齐性检验,多组间比较采用单因素方差分析,方差齐者用LSD 检验;方差不齐者用Dunnett ,s T3检验,P <0.05为差异有统计学意义㊂2㊀结果2.1㊀血管内膜病理形态学改变Masson 染色显示,假手术组血管内膜内弹力膜完整,呈单层,未见明显增生㊂各实验组血管内膜呈均一或不均一增生,大量VSMC 增生,细胞排列紊乱,内膜增生明显,向血管管腔呈向心性或偏心性增厚㊂其中单侧套管组术后2周和3周内膜均呈局限性增生,术后3周的增生程度大于2周㊂双侧套管组内膜多呈向心性增厚,术后2周增生程度较轻,术后3周见明显的内膜增生,血管管腔狭窄明显(图1)㊂2.2㊀各组增生内膜形态计量学指标的比较假手术组血管内膜无明显增生㊂与假手术组比较,单侧套管2周组HRIA㊁HRIT 显著增加(P <0.05),单侧套管3周组IA㊁IT㊁HRIA㊁HRIT 均显著增加(P <0.05);单侧套管3周组与2周组比较,IA㊁IT㊁HRIA㊁HRIT 差异无统计学意义(P >0.05)㊂双侧套管2周组㊁3周组IA㊁IT㊁HRIA㊁HRIT 均较假手术组显著升高(P <0.01);双侧套管3周组与2周组比较,IA㊁IT㊁HRIA㊁HRIT 均显著升高(P <0.05-0.01)㊂双侧套管2周组与单侧套管2周组比较,IA㊁IT㊁HRIA㊁HRIT 均显著升高(P <0.05),双侧套管3周组与单侧套管3周组比IA㊁IT㊁HRIA㊁HRIT均显著增加(P <0.01)㊂(表1)注:A:假手术组;B1:单侧套管2周;B2:单侧套管3周;C1:双侧套管2周;C2:双侧套管3周㊂图1㊀颈总动脉Masson 染色Note.A,Sham operation group.B1,Unilateral cannula for 2weeks.B2,Unilateral cannula for 3weeks.C1,Bilateral cannula for 2weeks.C2,Bilateral cannula for 3weeks.Figure 1㊀Masson staining of common carotid artery表1㊀各组血管形态学计量指标的比较( x ʃsx )Table 1㊀Comparison of blood vessel morphology measurement indexes in each group组别Groups样本数Number ofsamples MT (μm)MT (μm)IA(μm 2)IT (μm)HRIA (%)HRIT (%)A 5126188.50ʃ8359.1253.37ʃ3.8717330.00ʃ1302.058.83ʃ0.6012.15ʃ0.9114.26ʃ0.74B1598511.40ʃ8249.9946.56ʃ4.1228397.20ʃ8183.8815.49ʃ3.8922.00ʃ5.40∗24.74ʃ5.37∗B25132937.40ʃ9779.2049.92ʃ2.3439637.40ʃ5450.12∗16.96ʃ0.52∗22.71ʃ1.47∗25.51ʃ1.43∗C14106725.40ʃ11931.0442.04ʃ2.5162069.60ʃ8655.39∗∗әә27.98ʃ2.95∗∗әә36.57ʃ3.13∗∗әә39.73ʃ3.19∗∗әәC24108896.00ʃ7438.7042.78ʃ1.79100494.00ʃ5161.38∗∗▼▼әә44.86ʃ2.25∗∗▼▼әә48.08ʃ1.67∗∗▼әә51.14ʃ1.67∗∗▼әә注:A:假手术组;B1:单侧套管2周;B2:单侧套管3周;C1:双侧套管2周;C2:双侧套管3周㊂与假手术组比较,∗P <0.05,∗∗P <0.01;与2周比较,▼P <0.05,▼▼P <0.01;与同时间单侧比较,әP <0.05,әәP <0.01㊂Note.A,Sham operation group.B1,Unilateral cannula for 2weeks.B2,Unilateral cannula for 3weeks.C1,Bilateral cannula for 2weeks.C2,Bilateral cannula for pared with sham operation group,∗P <0.05,∗∗P <pared with 2weeks,▼P <0.05,▼▼P <pared with the same time,әP <0.05,әәP <0.01.2.3㊀各组增生血管内膜中α-SMA ㊁OPN ㊁TNFα㊁1L-1β㊁Col-1表达的比较与假手术组比较,单侧套管2周组㊁3周组和双侧套管2周组增生内膜中血管平滑肌细胞收缩表型标志蛋白α-SMA 表达差异无统计学意义(P >0.05),双侧套管3周组增生血管内膜中α-SMA 表达显著降低(P <0.05)㊂(图2)与假手术组比较,单侧套管2周组㊁3周组和双侧套管2周组㊁3周组增生内膜中血管平滑肌细胞合成表型(去分化型)标志物蛋白OPN㊁细胞外基质成分Col-Ⅰ㊁炎性反应因子IL-1β㊁TNF-α表达显著增高(P <0.05)㊂(图3㊁图4㊁图5㊁图6)3㊀讨论目前采用套管制作血管狭窄模型有两种方法,一种是在血管外包裏硅橡胶圈,血管套管可使颈总动脉狭窄,造成局部血流动力学变化,同时动脉套管的机械刺激可诱导血管局部特别是血管外膜的炎症反应,从而促进动脉内膜增生[12]㊂但单纯的血管套管法造成血管狭窄的时间较长,且病变不稳定㊂另一种方法是在血管套管的基础上加高脂饲养[13-14]㊂家兔属于动脉粥样硬化易感动物,与啮齿类动物相比,由于啮齿类动物缺乏胆固醇酯转移酶,仅给予高脂饲料无法引起明显的动脉粥样硬化斑块,因此,啮齿类动物不容易发生动脉粥样硬化性病变,而兔体内存在胆固醇酯转移酶,给予高脂饲料可引起脂质在内膜沉积,因此高脂饲料可诱发家兔动脉粥样硬化[15]㊂但单纯高脂饮食饲养往往实验周期较长,且病变部位难以控制,故可在高脂基础上施以损伤血管及其他干预手段,诱导内膜出注:A:假手术组;B1:单侧套管2周;B2:单侧套管3周;C1:双侧套管2周;C2:双侧套管3周㊂与假手术组比较:∗P <0.05,∗∗P <0.01,∗∗∗P <0.001㊂下图同㊂图2㊀α-SMA 免疫组化染色Note.A,Sham operation group.B1,Unilateral cannula for 2weeks.B2,Unilateral cannula for 3weeks.C1,Bilateral cannula for 2weeks.C2,Bilateral cannula for pared with sham operation group,∗P <0.05,∗∗P <0.01,∗∗∗P <0.001.The same as below.Figure 2㊀Immunohistochemical staining ofα-SMA图3㊀OPN 免疫组化染色Figure 3㊀Immunohistochemical staining of OPN现动脉粥样硬化性改变而出现血管内膜增生㊂因此,本实验采用血管套管法加高脂饲料喂养,目的是促进动脉粥样硬化和血管狭窄,使病变固定在某个部位,便于对血管狭窄病理生理机制和防治方法的研究㊂实验证明,无论是单侧还是双侧颈总动脉套管加高脂喂养,均可诱导血管内膜增生,且随着时间的延长,病变逐渐加重,并且双侧血管套管诱导的病变较单侧套管法更重㊂说明采用硅橡胶圈血管套管加高脂喂养法能诱导明显的血管狭窄,可缩短血管狭窄形成时间,并使血管狭窄局限发生在颈总动脉,从而为特定目的的研究提供合适的动物模型㊂这种方法引起的血管狭窄与人类动脉粥样硬化引起的血管狭窄近似,由于套管和高脂刺激,使血管内皮细胞损伤,产生血管炎症反应,诱导血管平滑肌细胞迁移㊁增殖,导致内膜增生而产生血管狭窄㊂该方法保存了血管内膜的完整性,对血管的损伤小,具有成模时间短㊁病变固定等优点㊂血管内膜增生发生机制十分复杂,目前认为与Figure4㊀Immunohistochemical staining of TNF-αFigure5㊀Immunohistochemical staining of1L-1βFigure6㊀Immunohistochemical staining of Col-1内皮功能障碍与损伤㊁血小板聚集与血栓形成㊁血管平滑肌细胞向内膜迁移㊁增殖㊁炎症反应及合成大量细胞外基质等多种因素有关[16-17]㊂正常情况下,血管壁自内向外依次分为内膜㊁中膜㊁外膜㊂内膜主要由内皮细胞和内皮下成分组成;中膜主要由血管平滑肌细胞与胶原纤维构成;外膜由疏松结缔组织组成,细胞成分以外膜成纤维细胞为主㊂本研究表明,在血管套管后不同时间,出现明显的内膜增生,新生内膜中血管平滑肌细胞数量明显增多,排列紊乱,增生内膜中细胞外基质沉积明显增多,局部增生的内膜中炎性反应显著增强,表明在炎性反应下中膜VSMC向内膜迁移㊁增生并合成大量细胞外基质诱导了血管内膜增生㊂VSMC增殖是血管内膜增生的中心环节㊂VSMC增生的前提是其发生了表型转化㊂在成熟的血管中,VSMC呈现 收缩 或分化的表型,其特征是可见到VSMC特异性收缩标志物如α-SMA㊁平滑肌22α(smooth muscle22α,SM22α)的表达,它们在收缩调节中起重要作用[18-19]㊂当血管损伤后,VSMC 去分化并重新进入细胞周期,发生细胞增殖,表达OPN等特异性合成表型(去分化型)标志物㊂这种去分化表型在动脉粥样硬化㊁PCI术后再狭窄以及高血压血管重构的发生发展中具有重要的病理生理意义[20]㊂有研究发现,在大鼠血管损伤模型,增生内膜中α-SMA表达下调,表明血管受损后VSMC 发生了由分化型向去分化型的表型转化㊂血管损伤后局部炎性反应可以诱发全身的慢性炎性反应,进而促进VSMC迁移与增殖引起内膜增生㊂血管中膜的VSMC增殖并迁移至内膜后合成大量细胞外基质并在血管壁沉积,从而进一步促进内膜的增生㊂我们的研究也发现,在双侧套管3周,增生血管内膜中VSMC收缩型标志物α-SMA表达显著降低,合成表型标志物OPN表达显著增高,细胞外基质成分Col-Ⅰ表达显著增高,炎性反应因子IL-1β㊁TNF-α表达显著增高,提示在这种模型的血管内膜增生中,VSMC由收缩表型转化成合成表型,使VSMC自血管中膜向内膜迁徙,发生过度增殖,并合成和分泌多种生物活性物质和细胞外基质,导致血管内膜增生㊂此外,我们在实验中还发现,在血管套管后,如果硅橡胶管套管与血管贴合不紧密,可能导致套管脱落,导致造模失败㊂因此,在血管套管时,可以采用多重丝线结扎的方法,使血管套管能紧密地贴合血管,这样可保证血管狭的形成并且可以保证模型的一致性㊂总之,本文采用颈总动脉血管套管加高脂喂养的方法,可以造成明显的颈总动脉局部血管内膜增生,使血管腔狭窄㊂而且,在使用这种方法时,双侧颈总动脉套管比单侧的成模效果好,套管后3周血管狭窄的程度更明显㊂因此,在应用这种方法造模时,建议采用双侧血管套管加高脂喂养,造模时间以3周以上为宜㊂参考文献:[1]㊀Canfield J,Totary-Jain H.40years of percutaneous coronaryintervention:History and future directions[J].J Pers Med,2018,8(4):33.[2]㊀Jun MY,Karki R,Paudel KR,et al.Alkaloid rich fraction fromNelumbo nucifera targets VSMC proliferation and migration tosuppress restenosis in balloon-injured rat 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快速成功建立兔腹主动脉狭窄的模型【摘要】目的复制动脉粥样硬化狭窄的模型，血管造影测量动脉狭窄程度以证实造模成功。

方法实验于2003年2~5月在郑州大学人民医院心血管内科实验室完成。

选择雄性4月龄新西兰大白兔20只，随机分为单纯饲喂高脂饮食组、高脂饮食同时动脉内膜剥脱组，每组10只。

分笼饲养，饲喂正常的全价颗粒饲料，自由饮水，观察1周后进入实验。

1周后所有的兔子均开始高脂饮食(含1.5%胆固醇)喂养，高脂饮食同时动脉内膜剥脱组高脂喂养3 d后用股动脉穿刺法行腹主动脉内皮剥脱术。

术后继续喂养同样的高脂饲料。

于术后第9周行腹主动脉血管造影检查，记录腹主动脉狭窄程度。

结果术后第9周进行血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白胆固醇测定，两组兔血清总胆固醇、甘油三酯、高、低密度脂蛋白胆固醇均升高，高脂饮食与动脉内膜剥脱组升高更明显(P【Abstract】Objective To establish models of atherosclerosis and stenosis of rabbits, and evaluate the degree of stenosis by angiography.Methods The experiment was carried out in the laboratory of Department of Cardiovascular Medicine, People s Hospital of Zhengzhou University from February to May 2003.Twenty male New Zealand rabbits aged 4 months were fed with a standard diet in separate cages for 1 week without inhibiting drinking. Twenty New Zealand rabbits were randomly divided into high fat diet and high fat diet combined with arterial injury groups with 10 animals in each group.One week later, all the rabbits were fed with cholesterol supplemented diet (1.5% cholesterol) and rabbits of high fat diet combined with arterial injury groups were subject to balloon catheter injury of the abdominal aorta by puncturing into femoral artery after 3 days of cholesterol fed. Rabbits were continuing fed with cholesterol rich diet after the operation. Angiography were used to record the degree of stenosis of the abdominal aorta at the 9th week after operation.Results All the 20 rabbits entered the result analysis. ①After 9 weeks,the levels of TC,TG,HDL,LDL were increased,which was more obviously in the high fat diet combined with arterial injury groups. ②Stenosis of abdominal aorta was observed at the 9th week by angiography and the rate of stenosis was 50%~70% ［(57.000±7.888)%］and it was 8~23 mm in length. Conclusion The animal model of stenosis can be successfully established in a short time by balloon endothelial denudation of abdominal aorta combined with cholesterol fed. Angiography can accurately measure the degree of stenosis of the abdominal aorta.【Key words】Meal;Atherosclerosis;Animalmodel;Angiography________________________________________1.1 设计对比观察动物实验。