神经干细胞移植对脑损伤大鼠整合素表达的影响

神经干细胞移植对缺血缺氧性脑损伤大鼠的行为学影响摘要】目的探讨NSCs移植恢复缺血缺氧性脑损伤大鼠行为功能的可行性。

方法建立缺血缺氧性脑损伤模型，在建模后72 h进行经脑室NSCs移植,不同时间点对实验动物进行足印分析试验评估。

结果足印重复间距试验结果显示NSCs组术后3周、7周时实验鼠左侧前后肢足印重复性较好。

表现为间距较小，且间距稳定，明显小于HIE（P<0.01））。

结论 NSCs移植可恢复缺血缺氧性损伤大鼠的行为学功能。

【关键词】神经干细胞移植行为学缺血缺氧性脑损伤【中图分类号】R49 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）24-0158-021 材料1.1实验动物健康7日龄Wistar大鼠40只，清洁级，雌雄不限，体重13.75±0.35g。

1.2实验药品异氟醚吸入麻醉剂DMEM /F12无血清专用培养基、小牛血清1.2.4碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子EGF、青霉素/链霉素、B27无血清添加物、L2谷胺酰胺。

1.3实验器材国产手术显微镜、显微手术器械、动物缺氧箱、智能氧量分析仪、小鼠立体定位仪、微型磨钻、微量注射泵、微量进样器（10UL）、足印分析装置2 方法2.1实验分组随机分为两组：NSCs组（n＝20），HIE组（n＝20）。

NSCs组：生后7天Wistar大鼠麻醉条件下行左侧颈总动脉双重结扎并离断，置于缺氧环境中缺氧3小时；3天后进行神经干细胞移植。

HIE组：生后7天Wistar大鼠麻醉条件下行左侧颈总动脉双重结扎并离断，置于缺氧环境中缺氧3小时；中途脱落12只，最终移植组11只，对照组17只进入评估。

2.2模型的制作2.2.1神经干细胞的制备将E14孕鼠夹取胎鼠大脑皮层组织，用D-Hanks液冲洗。

将脑组织剪成1.0mm3小块，吸管吹打成单细胞悬液离心5min，弃上清，1×106/4mL密度置条件培养基中培养。

2.2.2 HIE大鼠模型的制作 HIE组：选用出生后第7天Wistar大鼠，异氟醚吸入麻醉，显微镜下分离颈总动脉后双重结扎并离断。

脑室内神经干细胞移植修复谷氨酸导致的成年小鼠神经损伤(英文)马娟;于立坚;马润娣;张永平;房娟芝;张霄瑜;于廷曦【期刊名称】《神经科学通报：英文版》【年(卷),期】2007(23)4【摘要】目的探讨脑室内神经干细胞移植修复成年小鼠谷氨酸神经毒性损伤的可能性。

方法从15日小鼠胚胎脑组织分离神经干细胞,采用免疫细胞化学技术检测细胞Nestin抗原表达;通过免疫荧光染色观察所移植神经干细胞在体内的存活及定位。

除对照组外,所有小鼠均以谷氨酸单钠(每天4.0 g/kg)灌胃,连续10天。

灌胃后第1 天和10 天,谷氨酸加神经干细胞移植组行神经干细胞脑室内移植(1× 105细胞 /鼠),对照组和谷氨酸组注射DMEM 液。

末次移植后第 11天进行Y迷宫试验,试验结束后进行小鼠脑病理检查,以分析谷氨酸引起的脑功能和形态学上的改变。

结果所分离细胞呈Nestin阳性表达;移植10天后所移植神经干细胞在小鼠脑中呈区域特异性存活;脑室内移植神经干细胞能明显促进成年小鼠脑谷氨酸兴奋性毒性损伤的修复。

结论脑室内移植神经干细胞可用于疾病或损伤脑组织的修复。

【总页数】6页(P209-214)【关键词】脑修复;神经干细胞;移植;兴奋性损伤;小鼠【作者】马娟;于立坚;马润娣;张永平;房娟芝;张霄瑜;于廷曦【作者单位】广东海洋大学海洋药物研究与开发重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R741.05【相关文献】1.人胎脑组织神经干细胞的分离培养、克隆和分化/EGF和bFGF对成年大鼠神经干细胞增殖和分化的影响/小鼠脊髓重量和脊髓颈膨大截面积的基因组扫描分析[J],2.坐骨神经损伤大鼠模型鞘内移植神经干细胞后脊髓背角和背根神经节脑源性神经营养因子的表达 [J], 张民皓;胡益民;张红;胡玉萍;刘清珍;王洪超;李伟彦3.坐骨神经损伤大鼠模型鞘内移植神经干细胞后脊髓背角和背根神经节脑源性神经营养因子的表达 [J], 张民皓;胡益民;张红;胡玉萍;刘清珍;王洪超;李伟彦4.阿魏酸钠脑室内注射对谷氨酸单钠诱导成年小鼠神经损伤的修复作用 [J], 杨培培;于立坚;马润娣;张永平;张霄瑜;于廷曦5.新生ROSA β geo26小鼠海马神经干细胞移植入成年大鼠脑内的存活与分化 [J], 夏峥嵘;卢玉珊;方杰;韩群颖;丁炯;肖明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。

与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。

作者签名：日期：年月日关于学位论文使用授权说明本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。

作者签名：导师签名：日期：年月日脑出血大鼠神经干细胞脑内移植及移植后VEGF、FN、LN表达的实验研究研究生：胡苏华导师：武衡摘要目的了解体外培养的大鼠神经干细胞（neural stem cells, NSCs）生长、增殖及分化等生物学特性，体外培养的大鼠NSCs移植入脑出血大鼠脑内后，观察大鼠的神经功能缺损恢复情况，观察局部脑组织的病理学变化及移植细胞的存活、迁移、分化，了解血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）、纤维粘连蛋白（fibronection, FN）、层粘连蛋白（laminin, LN）的表达情况，探讨NSCs移植对脑出血后神经功能的修复作用，移植后VEGF、FN及LN的变化对神经回路重建的作用。

方法采用胶原酶注入大鼠苍白球方法复制脑出血大鼠模型；在特定条件下进行大鼠NSCs的体外分离培养、传代，并观察其生物学特性，采用免疫细胞化学染色方法鉴定培养的NSCs，利用BrdU整合入细胞DNA以标记NSCs；将实验大鼠随机分为脑出血模型组（A组）、移植组（B组）、假手术组（C组）及正常对照组（D组），移植组中，将标记后的NSCs移植于脑出血大鼠脑内；在脑出血（或假手术）后1天、7天、14天及30天，通过神经功能评分观察各组大鼠神经功能缺损情况及恢复情况；并于上述时间点提取各组大鼠脑组织标本，HE染色后观察各组脑组织病理变化，采用免疫组织化学染色方法鉴定各组脑组织的神经细胞，采用免疫组织化学方法检测各时间点各组血肿（损伤或移植）周围区及正常组织区VEGF、FN、LN的表达，采用免疫组织化学方法观察移植组BrdU的表达及分布。

神经干细胞移植在大脑缺损修复中的应用研究神经干细胞是一类具有自我更新和多向分化能力的细胞，其具有再生和修复神经系统的潜力。

近年来，神经干细胞移植已成为大脑缺损修复研究领域的热点。

本文将介绍神经干细胞移植的研究现状，探讨其在大脑缺损修复中的应用前景。

一、神经干细胞移植的研究现状神经干细胞移植是一种将外源性神经干细胞移植到受损的神经系统中，以达到修复神经系统的目的的方法。

目前的研究表明，神经干细胞的移植可以显著改善脑损伤后的行为和神经功能，是大脑缺损修复领域的有力手段。

1、神经干细胞的来源神经干细胞可以来源于胚胎、成人神经系统组织以及皮肤、骨髓等组织。

胚胎干细胞具有最大的潜能和可塑性，但其移植对伦理和纠纷等问题较为敏感。

成人神经系统组织来源的干细胞具有天然的神经系统特异性，移植后不会出现排异反应，成为神经系统损伤修复的理想来源。

欧洲药品管理局已经批准了同种异体来源的成人神经干细胞产品应用于临床治疗脑损伤和中风等疾病。

皮肤、骨髓等组织来源的干细胞也被用于大脑缺损修复研究中。

不同来源的干细胞具有各自的优缺点，其适用范围需要进一步探究。

2、神经干细胞移植的方式目前，神经干细胞移植的方式主要包括注射、扩散、移植到透明质酸基质中等方式。

注射方式比较直接，但干细胞的生存率和分化效果较低；扩散方式使干细胞在损伤区域内更加分散，但缺乏定位性；移植到透明质酸基质中可以提高干细胞的存活率和分化效果，但存在相关安全风险，需要进一步评估。

3、神经干细胞移植的应用神经干细胞移植已被广泛应用于脑损伤、中风、脊髓损伤等神经系统疾病的治疗中。

大量的动物实验和临床试验表明，神经干细胞的移植可以改善患者的神经功能和认知功能。

在脑损伤修复中，神经干细胞的移植可以促进损伤区域内的胶质细胞增生、神经元再生和突触形成，同时抑制神经元细胞死亡和炎症反应。

在中风治疗中，神经干细胞的移植可以促进新生神经元的产生，改善运动、感觉和认知功能。

在脊髓损伤中，神经干细胞的移植可以促进神经再生和胶质细胞变化，改善行为和感觉功能。

人参皂苷Rg1 对脑损伤新生大鼠海马神经干细胞bFGF表达的影响摘要：探讨脑损伤对神经干细胞bFGF 阳性细胞表达的影响及人参皂苷Rg1 的作用；实验采用无血清体外培养新生大鼠海马神经干细胞，实验包括两部分：缺血实验分为1h 组、2h 组和4h 组，每组分对照组和模型组，缺血采用氧糖剥夺（OGD）法；再灌注实验分为对照组，模型组和人参皂苷Rg1 组，4h 进行再灌注，通过免疫组织化学方法检测脑损伤以及给予人参皂苷Rg1 后新生大鼠海马神经干细胞bFGF 阳性细胞的表达。

免疫荧光染色巢蛋白(Nestin)、5-溴脱氧尿苷(BrdU)、β-Ⅲ型微管蛋白(Tuj-1)、波形蛋白(Vimentin)均呈阳性反应；缺血后，在1h、2h 模型组bFGF 阳性细胞面密度、光密度和细胞数表达较对照组增强，其中在2h 两组比较具有统计学意义(p<0.05)，在4h 模型组阳性细胞面密度、光密度和细胞数表达较对照组明显减少，比较具有统计学意义（p<0.05）；再灌注后，模型组bFGF 阳性细胞面密度(0.051±0.008)、光密度(293.94±42.19)和细胞数(4.25±0.13)表达明显低于对照组（p<0.001），应用人参皂苷后，bFGF 阳性细胞面密度(0.086±0.03)、光密度(487.4±27.37)和细胞数(6.74±0.38)明显高于模型组，统计具有显着差异(P<0.001)。

体外模拟缺血在一定时间内能引起海马神经干细胞bFGF 水平上调，再灌注导致bFGF 的表达下降，而人参皂苷Rg1 对bFGF 水平的上调具有促进作用。

关键词：脑缺血再灌注；海马神经干细胞；碱性成纤维生长因子；人参皂苷Rg11 引言研究表明，大脑缺氧缺血刺激神经再生是通过各种营养因子发挥作用而实现的[1]。

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor ,bFGF) 是一种具有多种生物学活性的阴离子多肽，具有神经营养因子作用，能促进神经元存活及突起生长，对维护中枢神经系统正常功能起重要作用，被认为是一种最有效的营养因子[2,3]。

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后皮质脊髓束神经元和皮层体感诱发电位的影响孔令胜;靳峰;郭强;张浩;韩光魁;胡亚伟;杨冬旭【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2012(28)23【摘要】Objective To study the effects of neural stem cells (NSCs) transplantation on corticospinal tract neurons and cortical somatosensory evoked potentials ( CSEP) of rats after spinal cord injury ( SCI). Methods 40 SD rats were randomly divided into 4 groups: normal group, SCI group, NSCs group, and BrdU+NSCs group. Rat models with SCI were induced by electrocircuit control spinal cord injuring device. NSCs in logarithmic phage were labeled with BrdU, and the NSCs were transplanted into the injured site after SCI. The survival and immigration of BrdU labeled NSCs were detected by immunohistochemisty, and the function recovery of spinal cord was valued with CSEP. Corticospinal tract neurons were labeled by retrograde transport of the horseradish peroxidase (HRP) from the lesion site, and the survival of corticospinal tract neurons were shown by tetramethylbenzidine (TMB) reaction. Results BrdU labeled NSCs were detected in the spinal cord after transplantation in BrdU+NSCs group, in which the number of corticospinal tract neurons labeled by HRP was more than that in SCI group (P 〈 0.05), and the latency of CSEP-P wave was obviously shortened (P〈 0.05). There was a negative correlation betweenthe number of corticospinal tract neurons labeled by HRP and the latency of CSEP-P wave (r = -0.914, P〈0.001). There was no significant difference of these index between NSCs group and BrdU+NSCs group (P 〉 0.05). Conclusions The transplanted NSCs can survive in the injured site of spinal cord, protect corticospinal tract neurons, and shorten the latency of CSEP-P wave, through which can promote more remarkably functional recovery of hind limb in rats after SCI.%目的:研究神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后皮质脊髓束神经元和皮层体感诱发电位(CSEP)的影响.方法:40只SD大鼠随机分为正常对照组(Normal组)、脊髓损伤组(SCI组)、神经干细胞组(NSC组)、神经干细胞标记组(BrdU+NSCs组).采用电控脊髓损伤打击装置制作模型,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法标记处于对数生长期的NSCs,SCI后即刻进行NSCs移植.免疫组化法观察BrdU标记NSCs的存活、迁移,CSEP监测大鼠神经电生理的变化.用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术标记皮质脊髓柬神经元并用四甲基联苯胺(TMB)呈色反应显示皮质脊髓束神经元的存活情况.结果:BrdU+NSCs组在SCI区域可检测到BrdU标记的阳性NSCs,HRP标记皮质脊髓束神经元数目较SCI组明显增多(P<0.05).CSEP-P波潜伏期比SCI组明显缩短(P<0.05).HRP标记皮质脊髓束神经元数目与CSEP-P波潜伏期变化呈负相关(r=-0.914,P<0.001).BrdU+NSCs 组与NSC组之间比较差异无显著性(P>0.05).结论:体外培养的胚胎大鼠NSCs可在SCI区域存活、迁移,并可减轻皮质脊髓束神经元的逆行性损伤、缩短SCI后CSEP-P波潜伏期,从而促进大鼠瘫痪肢体功能的恢复.【总页数】3页(P3866-3868)【作者】孔令胜;靳峰;郭强;张浩;韩光魁;胡亚伟;杨冬旭【作者单位】272029,济宁医学院附属医院神经外科、济宁医学院神经肿瘤学实验室;272029,济宁医学院附属医院神经外科、济宁医学院神经肿瘤学实验室;272029,济宁医学院附属医院神经外科、济宁医学院神经肿瘤学实验室;272029,济宁医学院附属医院神经外科、济宁医学院神经肿瘤学实验室;272029,济宁医学院附属医院神经外科、济宁医学院神经肿瘤学实验室;272029,济宁医学院附属医院神经外科、济宁医学院神经肿瘤学实验室;272029,济宁医学院附属医院神经外科、济宁医学院神经肿瘤学实验室【正文语种】中文【相关文献】1.电针夹脊穴对脊髓损伤大鼠皮层体感诱发电位的影响 [J], 王振宇;孙忠人;刘睿姝2.天津医科大学硕士研究生导师胎鼠神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经红蛋白及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响 [J], 孔令胜;靳峰;陈德勤;邵彤;颜世清;郭强;张浩3.基因修饰神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经营养素养-3表达及神经细胞凋亡的影响 [J], 孔令胜;姚维成;栗世方;贺昭忠;成磊4.神经营养因子对成年大鼠脊髓损伤后皮质脊髓束再生的影响 [J], 鲁凯伍;陈哲宇;侯铁胜;金大地5.胎鼠神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经元特异性烯醇化酶和皮质体感诱发电位的影响研究 [J], 孔令胜; 靳峰; 郭强; 张浩; 胡亚伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。