瘦肉精的检测PPT课件

猪肉中瘦肉精的检测猪肉中瘦肉精的检测高峰101279012摘要鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害，本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精) 的几种分析检测方法，并对未来的发展方向作了展望。

关键词：瘦肉精GC-MS HPLC ELISA1 引言瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。

在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol，CLB)，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。

当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此，β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产，其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。

长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤；另外还能引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。

[1] 盐酸克伦特罗(Clenbuteerol，CLB) ，又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，俗名瘦肉精，化学名为α—[ (叔丁氨基) 甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇盐酸盐，分子式为C12 H18Cl12N2O?HCl ，相对分子质量为313.65。

目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS) 、毛细管电泳法(CE)等。

中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法，将GC—MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁。

对于动物性食品，GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。

瘦肉精的检测方法1 测定原理“瘦肉精”克仑特罗竞争酶标免疫检测方法快速测定的基础是抗原抗体反应。

酶联板的微孔包被有针对兔抗克仑特罗特异性抗体的羊抗体（第二抗体）。

加入兔抗克仑特罗特异性抗体（第一抗体）与第二抗体结合而被固定，洗涤后加入标准液或样品溶液与酶结合物（酶标记抗原），标准液或样品中的游离抗原与酶标抗原竞争兔抗克仑特罗特异性抗体上有限的结合位点。

通过洗涤除去没有与特异性抗体结合的酶标抗原，加入酶基质（过氧化脲）和发色剂（四甲基联苯胺）并孵育，结合到板上的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的底物。

加酸终止反应后，颜色由蓝色转变为黄色。

在单波长450 nm处测吸光度，吸收光强度与样品中的克仑特罗浓度成反比。

2 试剂盒的组成每个盒中（包括标准分析孔）材料如下：（1）1×96孔板（12排×8孔），包被有第二抗体（兔IgG抗体）；（2）6个标准液（300ul/瓶）为克仑特罗水溶液。

浓度分别为0 ng/kg、100 ng/kg、300 ng/kg、900 ng/kg、2700 ng/kg、8100 ng/kg；（3）1个克仑特罗过氧物酶标记物浓缩液12 ml（红色帽）；（4）1个克仑特罗抗体浓缩液12 ml（黑色帽）；（5）1个酶基质/发色剂11 ml（蓝色帽）；（6）1个反应停止液，1 mol/L硫酸14 ml（黄色帽）；（7）1个缓冲液25 ml，酶标记物及抗体浓缩液稀释用。

3 试验材料3.1 设备微孔板酶标仪（450 nm）、均质器、冷冻离心机、离心管（50 ml）、微量可调移液器（单道、八道）、RIDAC18柱、滤纸（0.45μm）。

3.2试剂甲醇（分析纯、100%）、50 mmol/LHCL、10 mmol/LHCL、50 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）、500 mol/L 磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）、1 mol/LNaOH。

4 储存条件试剂盒保存于2-8℃，不要冷冻。

猪肉中瘦肉精的检测高峰101279012摘　要鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害，本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精) 的几种分析检测方法，并对未来的发展方向作了展望。

关键词：瘦肉精GC-MS HPLC ELISA1 引言瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。

在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol，CLB)，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。

当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此，β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产，其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。

长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤；另外还能引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。

[1]盐酸克伦特罗(Clenbuteerol，CLB) ，又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，俗名瘦肉精，化学名为α—[ (叔丁氨基) 甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇盐酸盐，分子式为C12 H18Cl12N2O•HCl ，相对分子质量为313.65。

目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS) 、毛细管电泳法(CE)等。

中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法，将GC—MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁。

对于动物性食品，GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。

瘦肉精检测中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名盐酸克伦特罗；是一种平喘药。

该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。

盐酸双氯醇胺；克喘素；氨哮素；氨必妥；氨双氯喘通；氨双氯醇胺。

英文名：Clenbuterol; Spiropent; Planipart; NAB365；4-Amino-3,5-dichloro-alpha-(((1,1-dimethylethyl)amino)methyl)benzene m e t h a n o l CAS号：37148-27-9分子式：C12-H18-Cl2-N2-O理化特性白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。

编辑本段瘦肉精检测方法GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定气相色谱-质谱法（GC-MS）GC-MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。

Fente C. A 等用GC-MS法检测牛毛中CLB的残留，最低检测限为5ng/g；Pteer Batioens应用气相色谱－串联质谱法(GC-MS-MS)对牛、羊、猪组织中的CLB含量进行检测，最低检测限为2ng/g；刘琪等用GC-MS法（EI离子源）检测猪尿中的CLB，检测限为0.5ng/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基吗啉衍生物检测尿提取物中的CLB，衍生物用电脉冲方式或化学离子化方式扫描，会产生更高的灵敏度。

另外，GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。

因此，我国将GC-MS法定为检测CLB的确证性方法（NY/T468~2001）。

高效液相色谱法（HPLC）HPLC适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代谢产物，而且，HPLC可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(MS)等系统联用，容易实现分析过程的自动化。