39份 医学免疫学实验报告

免疫学实验报告——多克隆抗体制备生物科学与工程学院生物技术吴凡201020131112多克隆抗体的制备和抗体效价的检测实验一多克隆抗体的制备一、目的1. 加深对抗体基本知识的了解。

2. 了解多克隆抗体的制备基本方法及动物免疫的基本原理。

二、原理抗原抗体反应抗原抗体反应:是指抗原与相应抗体之间的特异性结合反应。

原理：抗原抗体反应的物质基础是抗原分子表面的抗原决定簇与抗体分子高变区之间的互补结合，在适宜条件下出现可见反应。

免疫应答的效果取决于抗原和免疫动物的种类，但初次和二次免疫应答之间的关系是免疫应答的一个重要特点。

三次或以后的抗原注射所产生的应答和二次应答结果相似。

把抗原注射到实验动物体内时，抗体会不同程度的与抗原结合，在抗原的刺激下，在血液中产生不同类型的抗体，这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。

多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗原分子表面不同的部分—抗原决定簇相结合。

动物的选择：1 动物的种类和种系：供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。

动物的免疫应答受动物的遗传基因影响，同一种系的动物对不同抗原的免疫应答和不同种系的动物对同一抗原的免疫应答均不尽相同。

抗原的来源与免疫动物的亲缘较远，产生的抗体效价高，同种系或亲缘较近，产生的抗体的效价就差。

2 动物的生理状况：由于个体差异的存在，同一抗原免疫同一种系不同个体的动物，产生的抗体的效价有很大的差异。

与动物的年龄和营养状况密切相关。

免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物，雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适，有时甚至不产生抗体。

3 抗血清的需要量：根据实验中抗血清的需要量，选用最经济的动物、免疫动物的只数。

一般实验室采用的抗体，多用兔和羊制备。

在这次实验中，我们用的是兔子。

三、动物的免疫1 抗原剂量：抗原的免疫剂量应根据抗原的免疫原性强弱、抗原来源难易、动物的种类、免疫周期等来选择抗原剂量。

大学生免疫实验报告范文实验目的本次实验的目的是了解和研究大学生免疫系统的功能和特点。

通过分析大学生的免疫能力，有助于提高我们的健康意识和掌握自身免疫系统的保护机制。

实验材料和方法实验材料- 大学生志愿者- 免疫分析仪器- 免疫实验试剂盒实验方法1. 采集志愿者的血液样本。

2. 提取血液中的白细胞进行免疫分析。

3. 使用免疫分析仪器对样本中的免疫细胞数量和活性进行检测。

4. 根据实验结果分析大学生免疫系统的状态和免疫能力。

实验结果经过对志愿者血液样本的免疫分析，我们得到了以下结果：1. 白细胞数量：与正常数值相比，大学生的白细胞数量整体偏低，但仍处于正常范围内。

2. 免疫细胞活性：大学生的免疫细胞活性相对较高，表明其免疫系统对外界侵袭具有较好的响应能力。

3. 免疫抗体水平：志愿者的免疫抗体水平相对偏低，可能是由于日常生活中的不良生活习惯或营养不均衡所致。

实验分析与讨论通过对大学生免疫系统的实验分析，我们可以得出以下结论：1. 大学生免疫系统相对脆弱：大学生处于高强度的学习和生活压力之下，缺乏充足的休息和锻炼，容易导致免疫系统的不稳定，降低身体的抵抗力。

2. 免疫系统活性受到积极影响：尽管大学生面临许多应激因素，但他们的免疫细胞活性较高，可能与年轻人的新陈代谢活跃有关。

3. 不良生活习惯可能影响免疫系统：不规律的作息时间、饮食不平衡以及缺乏运动等不良生活习惯可能导致大学生免疫抗体水平相对较低，容易受到感染和疾病侵袭。

实验结论通过本次实验的研究和分析，得出以下结论：1. 大学生免疫系统整体较为脆弱，需要更加注重健康管理和保护自身的免疫系统。

2. 充足的休息、良好的饮食和适量的运动对大学生的免疫系统具有积极的影响。

3. 需要加强大学生对免疫系统的认识和健康教育，培养良好的生活习惯和健康意识。

参考文献- [免疫学基础教程](- [大学生免疫系统调查研究](。

［实验名称］:沉淀反应 ［实验目的］:通过单向琼脂扩散测定待测血清Ig 含量［实验材料］: 打孔器(1)将溶解后的离子琼脂冷却到4 5 °C ，加入适当浓度的抗原混 合均匀，吸取3—4毫升加在载玻片上，使其均匀布满载玻片 而又不流失。

(2) 琼脂凝固后制成凝胶板，然后隔适当距离打孔。

(3) 在孔内滴加待测可溶性抗体。

(4) 将凝胶平板放入带盖瓷盘中，下面垫一湿纱布以保持湿度，置 于37 °0恒温箱中2 4小时，观察沉淀环。

单向琼脂扩散是一种定量试验，主要用来测定标本中各种免疫球蛋白或补体成分的含量。

在孔中加入待测抗体使其向四周扩散，经一定时间后抗体与琼脂中抗原相遇，在比例适宜处生成白色沉淀环。

沉淀环直径与抗体浓度成正比。

根据测试样品沉淀环直径的大小，可从已知的标准曲线中查出样品中抗体的含量。

实验二［实验名称］:间接凝集抑制试验（妊娠试验）［实验目的］:测定待检尿液中是否含HCG （绒毛膜促性腺激素）以诊断妊娠［实验材料］:孕妇尿液、非孕妇尿液、HCG 致敏乳胶抗原、抗HCG 血清、载实验一1%离子琼脂、白喉类毒素、白喉抗毒素、载玻片、毛细吸管［试验步骤］: ［实验结果］: (沉淀环直径) 测量沉淀环直径:毫米［实验分析］玻片等［试验步骤］:（1）取一片载玻片，标记出左右。

（2）在载玻片左侧加一滴待检尿液，右侧加一滴非孕妇尿液。

（3）在两侧尿液中分别加一滴抗HCG血清，摇动混匀2 —3分钟。

（4）在两侧液滴中分别再加一滴HCG致敏乳胶抗原，摇动混匀2 — 3分钟。

（5）观察判定结果。

［实验结果］:（凝集和非凝集的描述）左侧（待检尿液侧）呈现均匀的乳状液状态，无凝集颗粒。

间接凝集抑制阳性。

右测（非孕妇尿液侧）出现明显的凝集颗粒。

间接凝集抑制阴性。

［实验分析］:（结合实验原理）孕妇尿液中的HCG含量显著增高。

尿液中的HCG与加入的抗HCG结合, 抗HCG被消耗，使得加入的HCG乳胶抗原不能再与抗HCG结合，不出现乳胶抗原间接凝集反应（凝集被抑制），所以液滴呈现均匀乳状液，为乳胶间接凝集抑制阳性反应。

《医学免疫学与微生物学》实验报告实验一【实验名称】：沉淀反应［实验目的］：通过单向琼脂扩散测定待测血清ig含量【实验材料】：1%离子琼脂、白喉类毒素、白喉抗毒素、玻片、毛细管移液管打孔器【试验步骤】：（1）将溶解的离子琼脂冷却至450℃，加入适当浓度的抗原混合均匀，吸取３－４毫升加在载玻片上，使其均匀布满载玻片而又不流失。

（2）琼脂被固化并制成凝胶板，然后在适当的距离穿孔。

（3）将待测可溶性抗体滴入孔中。

（４）将凝胶平板放入带盖瓷盘中，下面垫一湿纱布以保持湿度，置于在370C培养箱中观察沉淀环24小时。

［实验结果］：（沉淀环直径）测量沉淀环直径：mm。

［实验分析］单向琼脂扩散是一种定量试验，主要用来测定标本中各种免疫球蛋白色或补体成分的含量。

在孔中加入待测抗体使其向四周扩散，经一定时间后抗体与琼脂中当抗原相遇时，以适当的比例形成白色沉淀环。

沉淀环直径与抗体浓度成正比。

根据测试样品沉淀环直径的大小，可从已知的标准曲线中查出样品中抗体的含量。

第1页，共6页实验二【实验名称】：间接凝集抑制试验（妊娠试验）［实验目的］：测定待检尿液中是否含ｈｃｇ（绒毛膜促性腺激素）以诊断妊娠［实验材料］：孕妇尿液、非孕妇尿液、ｈｃｇ致敏乳胶抗原、抗ｈｃｇ血清、载玻电影等［试验步骤］：（1）做一张幻灯片，在左右两边做标记。

（２）在载玻片左侧加一滴待检尿液，右侧加一滴非孕妇尿液。

（３）在两侧尿液中分别加一滴抗ｈｃｇ血清，摇动混匀２－３分钟。

（４）在两侧液滴中分别再加一滴ｈｃｇ致敏乳胶抗原，摇动混匀２－３分钟。

（５）观察判定结果。

[实验结果]（关于凝集和非凝集的描述）左侧（待检尿液侧）呈现均匀的乳状液状态，无凝集颗粒。

间接凝集抑制阳性。

右测（非孕妇尿液侧）出现明显的凝集颗粒。

间接凝集抑制阴性。

［实验分析］：（结合实验原理）孕妇尿液中hCG含量显著升高。

尿液中的hCG与添加的抗hCG结合，消耗抗hCG，使添加的hCG乳胶抗原不再与抗hCG结合，乳胶抗原无间接凝集反应（凝集被抑制）。

实验报告一姓名：王亚斌班级：生物技术12（1）学号：2012332860026实验一：_淋巴细胞的分离一、实验目的1.熟悉人外周血淋巴细胞的组成2.熟悉人外周血淋巴细胞分离的方法3.熟悉密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理和方法二、方法步骤、观察内容1、采静脉血2ml加入抗凝管，轻轻摇动试管，混匀，5min后加入Hank's 液2ml，手动轻轻摇匀。

2、将抗凝血全部沿管壁缓慢加至另一含2ml淋巴细胞分离液管的液面上，注意保持两种液体界面清晰。

3、将试管平衡后置水平式离心机，1000rpm离心20min。

4、用毛细吸管仔细吸取血浆与分层液界面处淋巴细胞层至一刻度离心管内。

5、加入5倍体积的Hank's液，手动旋转试管使液体混匀，1000rpm离心10min，弃上清，沉淀即主要为淋巴细胞（或单位个核细胞）。

加入含10%灭活小牛血清Hank’s液1 ml，混匀后进行计数。

（备注：如做淋巴细胞转化或其它培养，所用试剂、器材应是无菌的。

）6.细胞存活率检测：取10ul淋巴细胞悬液加入0.4%台昐蓝染色液10ul，混匀。

取10ul加入血细胞计数板，精制片刻，置显微镜高倍镜下观察。

三、观察结果利用显微镜观察如上图所示。

单个核细胞总数=（四个大方格中单个核细胞总数/4）x稀释倍数x细胞悬液毫升数x10的四次方利用细胞计数方法得知总细胞数为639.根据细胞存活率=活细胞数/（活细胞+死细胞）x100%=（639-26）/639=96%活细胞不折色，折光性强。

死细胞由于染料可渗入细胞内，故死亡细胞染成蓝色，死细胞体积较大，无光泽。

四、分析讨论1. 人外周血中的淋巴细胞组成？2. 根据细胞的表面标志分离淋巴细胞的原理是什么？1.答：血液循环中的淋巴细胞。

主要由T细胞(占70%～80%)和B细胞(占20%～30%)组成2.答：外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同.淋巴细胞分离液是一种密度介于1.075∽1.090之间而近似于等渗的溶液,用它做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离.实验报告二姓名：王亚斌班级：生物技术12（1）班学号：2012332860026实验二：_E-玫瑰花环形成实验_一、实验目的1.掌握人T淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法。

实验报告一姓名：陈羽迪 班级： 12生物制药（1） 学号：2012332870002实验一：_淋巴细胞的分离 一、实验目的1.熟悉人外周血淋巴细胞的组成2.熟悉人外周血淋巴细胞分离的方法3.熟悉密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理和方法二、方法步骤、观察内容1、采静脉血2ml 加入抗凝管，轻轻摇动试管，混匀，5min 后加入Hank's 液2ml ，手动轻轻摇匀。

2、将抗凝血全部沿管壁缓慢加至另一含2ml 淋巴细胞分离液管的液面上，注意保持两种液体界面清晰。

3、将试管平衡后置水平式离心机，1000rpm 离心20min 。

4、用毛细吸管仔细吸取血浆与分层液界面处淋巴细胞层至一刻度离心管内。

5、加入5倍体积的Hank's 液，手动旋转试管使液体混匀，1000rpm 离心10min ，弃上清，沉淀即主要为淋巴细胞（或单位个核细胞）。

加入含10%灭活小牛血清Hank ’s 液1 ml ，混匀后进行计数。

（备注：如做淋巴细胞转化或其它培养，所用试剂、器材应是无菌的。

）6.细胞存活率检测：取10ul 淋巴细胞悬液加入0.4%台昐蓝染色液10ul ，混匀。

取10ul 加入血细胞计数板，精制片刻，置显微镜高倍镜下观察。

优秀良好中等及格不及格成绩3、观察结果如图：离心前上层为红色，分离液层（下层）为白色。

离心后分为四层。

血浆层为黄色，淋巴细胞层为白色。

分离液层为浅黄色红细胞层为红色。

结果计算：四个大方格中淋巴细胞总数为339单个核细胞总数=339/4×5（稀释倍数）×1×10^4=4.24×10^6细胞存活率=226/(226+10)=95.8%四、分析讨论1. 人外周血中的淋巴细胞组成？T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞2. 根据细胞的表面标志分离淋巴细胞的原理是什么？不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同。

具体如下图：实验报告二姓名： 陈羽迪 班级： 12生物制药（1） 学号：2012332870002 实验二：_E-玫瑰花环形成实验_ 一、实验目的1.掌握人T 淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法。

医学免疫学沉淀反应实验报告一、实验目的1、掌握沉淀反应的基本原理和操作方法。

2、熟悉琼脂扩散试验和免疫比浊法的应用。

3、观察沉淀反应的结果，理解抗原抗体反应的特异性和定量关系。

二、实验原理沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在特定条件下结合，形成肉眼可见的沉淀物的反应。

根据反应介质和检测方法的不同，沉淀反应可分为液相沉淀反应和凝胶内沉淀反应。

液相沉淀反应包括絮状沉淀试验和免疫浊度测定。

絮状沉淀试验是将抗原和抗体溶液混合，在电解质存在的条件下，抗原抗体结合形成絮状沉淀物。

免疫浊度测定则是通过测量溶液中抗原抗体复合物形成导致的浊度变化，来定量检测抗原或抗体的含量。

凝胶内沉淀反应常用的是琼脂扩散试验，包括单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验。

单向琼脂扩散试验是将一定量的抗体混入琼脂凝胶中，制成琼脂板，然后在板上打孔，加入抗原，抗原在凝胶中向四周扩散，与抗体形成沉淀环。

沉淀环的直径与抗原浓度成正比，可通过测量沉淀环的直径来计算抗原的含量。

双向琼脂扩散试验是将抗原和抗体分别加入琼脂凝胶的不同孔中，两者在凝胶中扩散，形成沉淀线，用于检测抗原和抗体的特异性以及它们之间的相对分子量。

三、实验材料1、试剂抗原：人血清白蛋白（HSA）、羊抗人血清白蛋白抗体（抗HSA）。

生理盐水。

琼脂糖。

巴比妥缓冲液。

2、器材载玻片。

打孔器。

移液器。

分光光度计。

四、实验步骤（一）絮状沉淀试验1、取两支试管，分别标记为“抗原管”和“对照管”。

2、在“抗原管”中加入 05ml 抗原溶液（HSA），在“对照管”中加入05ml 生理盐水。

3、向两支试管中分别加入05ml 抗体溶液（抗HSA），轻轻摇匀。

4、室温放置 10-20 分钟，观察两支试管中溶液的变化。

（二）单向琼脂扩散试验1、制备琼脂板：称取一定量的琼脂糖，加入巴比妥缓冲液，加热溶解，制成 1%的琼脂糖溶液。

将溶液倒入载玻片上，使其均匀铺开，形成厚度约 2-3mm 的琼脂板，待琼脂凝固后打孔。

免疫学实验报告姓名:买迪来木.坎代尔学号:201020131222 班级:2010131实验一：多克隆抗体的制备和抗体效价的检测一：实验原理有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好的抗体。

质量好的抗体的标准：特异性强和效价高多克隆抗体的概念：在含有多种抗原决定簇的抗原刺激下，体内多个 B 细胞克隆被激活并产生针对多种不同表位的单克隆抗体，其混和物为多克隆抗体。

机体内所产生多克隆免疫血清实质上是由多种抗体组成的混合物，又称多克隆抗体。

多克隆抗体产生的基本原理：初次反应的抗体持续时间较短，亲和力也较低，多无实际应用价值。

机体初次接触抗原后，激发体液免疫应答反应。

在 Mø 和 Th 的作用下，B 细胞被激活,增生分化为浆细胞和记忆 B 细胞（Bm）。

浆细胞产生特异性抗体。

由于初次反应时，只有少量对该抗原特异的免疫活性细胞被诱导而增生分化为浆细胞。

随着抗原的消耗，抑制 T 细胞（Tc）的激活和循环抗体的反馈抑制作用，浆细胞减少，抗体滴度很快下降。

二次反应产生的抗体主要是高亲和力的 IgG。

机体再次受同一抗原刺激后，对该抗原特异性的 Bm 迅速增殖分化为浆细胞，产生特异性抗体。

Th 的记忆细胞也加快反应的进行，在抗原作用 1~2 天后，抗体滴度迅速上升。

抗体合成率为初次反应的几倍到几十倍。

1.用于免疫的动物用于免疫的动物可以是哺乳类和禽类，可以是羊、马、兔、鸡等，实验室常用兔、山羊和豚鼠。

动物种类的选择标准：1.根据抗原的生物学特性和所需获得的抗血清数。

2.用于免疫的动物需适龄、健壮、无感染性疾病，最好为雄性。

3.十分注意动物的饲养，消除动物个体差异及在免疫过程中死亡的影响。

4.如果用兔子，最好用纯种新西兰兔，一组三只，体重2-3kg为宜。

2.免疫途径：途径有很多种：静脉注射、腹腔内注射、肌肉内注射、皮内注射、皮下注射、淋巴结内注射等。

一般选择多点皮内或背部注射，每点注射0.1ml左右。

免疫学基础及实验技术修免疫学基础及实验技术实验报告姓名姚丽君专业针灸推拿学年级2002年研究生实验室免疫试验室时间2003年1月12日教师李永念老师免疫学教研室人血清I 的提取及鉴定一．主要原理（一）离子交换层析提取人血清I gG离子交换剂采用DEAE-纤维素，是表面交联有二乙基乙胺基团的纤维素，本身带有真电荷，能吸附阴离子。

DEAE-纤维素悬浮在PH高于6.5，克分子浓度低的缓冲液内，置备成层析柱。

人血清经过PH7.4磷酸缓冲液透析平衡后，其中的IgG 不带电荷或仅带少量电荷，其他的蛋白质则主要带负电荷，这样的血清样品通过相同缓冲液平衡好的DEAE-纤维素柱，除IgG以外的血清蛋白都吸附在柱上，仅IgG最易形成吸附-解离-再吸附-再解离的状态，因此能随洗脱液一起最早从柱中流出，收集洗脱液获得IgG。

（二）血清I鉴定以收集的洗脱液为抗原，与兔抗人IgG 做琼脂双扩散实验，可根据沉淀线的形成确定IgG抗原性。

用免疫电泳法使血清中各种蛋白的分子大小以及电荷状态、电荷量均有差异，因而它们的泳动速率也不相同，根据在凹槽中加入免抗人血清，上下两孔加入用蔗糖包埋法进行浓缩后的浓缩液和正常人血清，经一段时间后出现沉淀弧，根据沉淀弧的情况来检测所获的IgG的纯度。

用754型分光光度计于280nm紫外光源测定洗脱液光密度值，根据IgG的E1cm114.3OD公式，可计算出收获的IgG 含量，并推算出所获得IgG的百分率。

二．主要材料1．0.5N NaOH、0.5N HCL 、0.85NaCL 按常规配制2．DEAE-纤维素健康人全血3．PH7.4 0.01M 磷酸缓冲液4．20三氯醋酸水溶液按W/V比例配制5．蔗糖（研成细粉状）6．PH8.6 0.025MBA巴比妥纳-巴比妥缓冲液，2M NaCL水溶液7．1.5琼脂凝胶8．布氏漏斗、抽滤瓶、水泵、试管，烧杯，玻璃棒，滤纸试纸、蝴蝶铁架、透析袋、离心机，746-电泳仪、754型分光光度计三、操作步骤（一）DEAE-纤维素预处理1、称取DEAE-纤维素1２克，均匀撒在事先盛有150ml 0.5NNaOH的烧杯中，人其自由沉降，放置４０－５０分钟，不时地用玻璃棒轻轻搅动。

免疫学实验报告 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020免疫实验—抗血清制备及抗体效价检测摘要：用具有抗原性的物质牛血清白蛋白（BSA)注入到健康动物例如鼠、兔的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。

抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。

抗血清，是指含有免疫蛋白的血清。

抗体效价指抗体的物理状态及其在体内滞留时间，以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果。

此次实验主要是进行小鼠的牛血清白蛋白（BSA)抗血清的制备过程，并通过酶免疫吸附试验（ELISA）对其进行抗体效价检测。

关键字：牛血清白蛋白（BSA) 抗血清抗体效价免疫实验过程：本次实验一共分为三个分实验：实验一：免疫实验二：抽血、放血，分离抗血清实验三：ELISA测定抗体效价实验一：免疫一、抗血清制备的原理用具有抗原性的物质注入到健康动物的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。

抗体主要存在于血清中，经多次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集动物血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。

二、目的制备高效价的抗血清三、实验仪器、材料和试剂实验仪器：1mL 注射器，酒精棉球，剪刀材料：家兔，小鼠试剂：3％～5％苦味酸溶液或80％～90％苦味酸，牛血清白蛋白（BSA)三、方法和步骤1、动物编号左前腿上部为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6，右侧从前至后依次为7、8、9。

红色表示十位数,用黄色表示个位数。

免疫前用金属编号牌固定兔耳，或用染料涂沫在动物的背部，作出明确的标记。

2、动物抓取及注射按如下图所示抓取目标动物家兔为300～600 μg/次（400），每次不超过2mL；小鼠为10～100 μg /次（10-20，20~40 μg / ml），每次不超过。