下载文档原格式
分解纤维素微生物的分离与纯化实验操作与注意事项一、引言纤维素是一种重要的天然生物质，广泛存在于植被、农业废弃物和生活垃圾中。
分解纤维素的微生物对于生物能源转化、环境修复和生物材料制备具有重要意义。
本实验旨在介绍如何进行纤维素分解微生物的分离与纯化，以便更好地研究和利用这些微生物。
二、材料与设备1. 纤维素基质（例如木材粉末、花生壳碎屑等）2. 无菌培养基（适合目标微生物的培养基）3. 纤维素分解微生物样品4. 离心管、试管、平板培养基等常用实验室器材5. 灭菌器、微量移液器、孵化箱等实验设备三、实验步骤1. 样品处理a) 收集纤维素分解微生物样品，如土壤、水体或植物材料。
b) 将样品进行悬浮液处理，使用适当的稀释液（如生理盐水）或培养基进行悬浮液的制备。
c) 通过过滤或离心等操作，去除悬浮液中的大颗粒物质，得到较为均匀的样品。
2. 分离与纯化a) 取一定数量的样品悬液，分别均匀涂布在含有纤维素的固体培养基表面（例如含有纤维素的琼脂平板）。
b) 使用洁净的铁环或无菌塑料处理棒，在固体培养基表面进行菌落的划线、划圆或刺取等操作，以分离出单个微生物菌落。
c) 将分离得到的单个菌落转移到无菌富含纤维素的液体培养基中培养。
3. 筛选与纯化a) 从初步培养基中挑选出优良的单菌落，根据其特征进行初步筛选。
b) 针对初步筛选出的菌落，进行进一步鉴定和纯化，采用形态学、生理生化特性及分子生物学方法进行分析。
c) 辅助使用显微镜、PCR、基因测序等技术手段，确保所得微生物为纤维素分解菌。
四、注意事项1. 实验操作应在无菌环境下进行，避免外源污染。
2. 纤维素的质量和处理方式会影响微生物的分离，选择适当的纤维素基质、浓度和处理方法。
3. 注意培养基的配制和pH值的调节，确保适合目标微生物的生长需求。
4. 操作过程中要注意个人防护，避免对自身和他人造成伤害。
5. 实验后要及时清洗和消毒使用的设备和试剂，避免污染和交叉感染。
专题二 课题3：分解纤维素的微生物的分离一、基础知识 ㈠ 纤维素与纤维素酶 1.纤维素（1）单位： 。
（2）形成方式： ，要脱下 。
（3）本质：一种由 首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。
（4）存在：植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。
其中 是自然界中纤维素含量最高的天然产物。
（5）含量：纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中 能被土壤中能产生纤维素酶的微生物所利用，不会大量积累。
（6）作用：组成细胞壁，作植物的骨架。
2.纤维素酶纤维素酶是一种 ，一般认为它至少包括 组分，即 (外切酶)、 (内切酶)和 ，前两种酶使纤维素分解成纤维 ，第三种酶将纤维二糖分解成 。
思考1：草食性动物是怎样消化食物中纤维素的？答：肠胃中的 微生物。
能产生纤维素酶而分解纤维素。
纤维素酶的作用对照实验思考2：乙试管的滤纸条为什么会消失？答：本实验的自变量是纤维素酶的有无，自变量的操作方法是：在一支试管中添加适量（1mL ）的纤维素酶溶液，在另一支试管不添加纤维素酶，但需加入等量的缓冲液，不能加入蒸馏水，否则会影响溶液的pH 。
（二）纤维素分解菌的筛选 1、刚果红染色法（1）刚果红（ ）能的作用是一种 ，与纤维素形成 复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。
（2）染色原理当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成 。
当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红--纤维素的复合物就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的 ，可通过是否产生透明圈来筛选 。
例3：纤维素分解菌的筛选方法？透明圈越大，纤维素分解菌越多？ 答： 。
二、实验设计思考4：本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？答：课题2是将土样成的菌悬液直接涂布在以尿素为 氮源的选择性培养基上，直接分离得到菌落。
本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。
纤维素菌分离和鉴定的方法纤维素菌是一类能够分解纤维素的微生物，它们在自然界中起着重要的生态作用。
纤维素是植物细胞壁的主要成分，是一种难以降解的高分子化合物。
纤维素菌能够分解纤维素，将其转化为可利用的有机物质，为土壤生态系统的健康发展做出了贡献。
因此，纤维素菌的分离和鉴定对于研究土壤生态系统具有重要意义。
纤维素菌的分离和鉴定是一项复杂的工作，需要采用一系列的实验方法。
下面将介绍纤维素菌分离和鉴定的方法。
一、纤维素菌的分离纤维素菌的分离需要采用含有纤维素的培养基。
常用的培养基有半固体纤维素培养基、液体纤维素培养基等。
在培养基中加入适量的纤维素，将土壤样品或其他样品接种到培养基上，放置在适宜的温度和湿度条件下进行培养。
在培养过程中，纤维素菌会利用纤维素生长繁殖，形成菌落。
通过观察菌落形态、颜色、大小等特征，可以初步判断纤维素菌的种类。
二、纤维素菌的鉴定纤维素菌的鉴定需要采用一系列的生化和分子生物学方法。
常用的鉴定方法有：1. 形态学鉴定法通过观察纤维素菌的形态特征，如菌落形态、细胞形态、芽孢形态等，可以初步判断纤维素菌的种类。
2. 生理生化鉴定法通过检测纤维素菌的代谢产物、酶活性等生理生化特征，可以进一步鉴定纤维素菌的种类。
常用的生理生化鉴定方法有氧化酶试验、碳水化合物利用试验、氮素代谢试验等。
3. 分子生物学鉴定法分子生物学鉴定法是一种快速、准确的鉴定方法。
通过PCR扩增纤维素菌的16S rRNA基因序列，然后进行序列比对和系统发育分析，可以确定纤维素菌的种类。
纤维素菌的分离和鉴定是一项复杂的工作，需要采用多种方法进行综合分析。
通过纤维素菌的分离和鉴定，可以深入了解纤维素菌的生态特征和功能，为研究土壤生态系统提供重要的科学依据。
纤维素菌分离和鉴定的方法一、概述纤维素由于其特殊的生化性质，一直是微生物学和食品工业研究的关注焦点。
特别是纤维素的分解，除了传统的化学方法，生物法也是目前广泛采用的技术之一。
对纤维素酶活性和产酶微生物的分离和鉴定，是纤维素生物技术研究的重要内容。
纤维素分解酶是产生于微生物体内的一类酶，广泛存在于真菌和细菌中，可划分为纤维素酶和半纤维素酶两大类，规律的利用这些微生物菌种，开发新型的纤维素分解酶。
纤维素的微生物分解菌种较多，其中许多菌种能分泌出多种细胞外酶，如单糖的转化酶、纤维素酶、半纤维素酶、葡萄糖氧化酶、木糖酶、果糖酶和葡聚糖酶等。
多种新型有机物的产生依赖于工业生产中微生物的应用技术，目前各国纤维素降解的菌株和发酵产物分离和鉴定方法越来越多。
纤维素菌的分离可采用筛选、稀释和富集等方法。
实际应用中，常用的分离方法有：（一）厌氧富集法：根据纤维素菌能够在厌氧条件下进行生长和代谢的特点，采用富集培养方法，利用耐氧性微生物限制氧气的供应，引起产生厌氧性纤维素分解菌类，然后推广领域固定化、发酵和应用。
可根据繁殖时间将厌氧富集法分为短时间富集法和长时间富集法。
（二）筛选法：在纤维素富含的自然环境或人工培养环境中进行筛选。
先用一些微生物菌株做为预培养菌种，加入富含纤维素的培养基，通过短期采取接种、稀释、摇动等处理方式，寻找纤维素分解酶活力最高的培养物，然后进行分离纯化、性质鉴定。
（三）稀释法：将样品依一定比例进行稀释，将稀释后的液体均匀地均匀的加入纤维素培养基中，用深层培养的方式进行发酵，进行分离鉴定纯化。
稀释法适用于富含纤维素且菌株较多的培养基的菌群筛选。
（一）形态学特征鉴定法：根据菌株的形态学特征进行鉴定。
此方法是最基本也是最重要的鉴定方法之一。
菌株的形态学特征包括形状、结构、颜色和大小等，进一步对分离的菌株进行正确定义。
常用的形态学特征包括：形态特征、结构特征、色素特征和大肠杆菌。
（二）生理生化特征鉴定法：通过菌株的生长特性在不同培养基中的表现，或菌体在不同生长条件下表现的生化过程，如碳源利用情况，氮源利用情况，温度和pH值的影响等，进行鉴定。
纤维素降解微生物的分离与鉴定方法解析纤维素是植物细胞壁的主要成分之一，它是一种由大量葡萄糖分子通过β-1,4-糖苷键连接而成的多糖。
纤维素的降解对于生物能源开发、废弃物处理和环境保护具有重要意义。
而纤维素降解微生物则扮演着关键的角色。
因此，分离和鉴定纤维素降解微生物的方法显得尤为重要。
本文将介绍几种常用的纤维素降解微生物的分离与鉴定方法。
一、平板法平板法是最为常用的纤维素降解微生物分离方法之一。
具体操作如下：1. 准备培养基：将适合纤维素降解微生物生长的培养基高温固化。
常用的培养基包括CMC培养基和Avicel培养基。
2. 稀释样品：将待分离的纤维素降解微生物样品进行适当稀释，通常采用百倍至千倍的稀释倍数。
3. 倒平板：将稀释后的样品均匀倒在高温固化的培养基上，并利用均衡板将其平均分布。
4. 培养：将平板培养在适当的温度下，一般为30-37℃，孵育时间根据需要而定。
5. 分离：观察培养基上的菌落情况，挑取个别菌落进行分离纯化。
二、液体培养法液体培养法是另一种常用的纤维素降解微生物分离方法。
主要包括以下步骤：1. 准备液体培养基：选取适合纤维素降解微生物生长的液体培养基，如液体CMC培养基、液体Avicel培养基等。
2. 接种：将待分离的纤维素降解微生物样品接种到含有相关培养基的试管中。
3. 培养：将试管放置于摇床或恒温培养箱中，在适当的温度和转速条件下培养一定时间。
4. 分离: 通过稀释方法，将培养液中的微生物进行分离纯化，得到单菌株。
三、生理生化特性分析对于分离的纤维素降解微生物，进一步进行鉴定需要进行生理生化特性分析。
常见的特性分析包括以下内容：1. 糖类利用能力：在各种糖类培养基上观察微生物的菌落形态和生长情况。
2. pH和温度适应性：分析微生物在不同pH和温度条件下的生长状况。
3. 酶活性检测：测定微生物产酶的能力，如纤维素酶、β-葡萄糖苷酶等。
4. 生理代谢产物分析：通过气相色谱-质谱联用技术或其他适当的方法，分析微生物在纤维素降解过程中产生的代谢产物。
课题3 分解纤维素的微生物的分离课题背景纤维素，一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。
植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。
地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%～60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。
对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。
而要研究这些微生物，首先要将它们从土壤中种类众多的微生物中分离出来。
在本课题中，我们将探讨如何分离土壤中能够分解纤维素的微生物。
基础知识（一）纤维素与纤维素酶棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物（图2-11），此外，木材、作物秸秆等也富含纤维素。
许多商品纤维素都是由天然纤维素制得的，如水溶性的羧甲基纤维素钠（ CMC-Na ）、不溶于水的微晶纤维素（Avicel ）等。
纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。
正是在这三种酶的协同作用下，纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养，同样，也可以为人类所利用。
下面我们通过一个小实验来体会纤维素酶的作用。
在2支20 mL的试管中，分别放入1 cm×6 cm的滤纸条，再分别加入pH为4.8、物质的量浓度为0.1 mol/L的醋酸—醋酸钠缓冲液10 mL、11mL。
在加入10 mL缓冲液的试管中加入 1 mL纤维素酶（70~80 U/mL ）。
将2支试管固定在50 mL的锥形瓶中，在摇床上以140 r/min的转速振荡反应1h，观察结果。
你也可以用报纸、复印纸做这个实验。
如果没有摇床，你可以采用定时人工振荡的方法。
时间足够长时，你会观察到滤纸被完全分解（图2-12）。
1U表示1个酶活力单位，是指在温度为25℃，其他反应条件，如pH等，均为最适的情况下，在1 min内转化1 mmol的底物所需的酶量。
分解纤维素微生物的分离方法与技巧绪论近年来，随着环境污染问题的日益突出，分解纤维素的微生物研究变得越来越重要。
纤维素是一种复杂的多糖类化合物，其有效降解对于生物质资源的利用具有重要意义。
本文将介绍一些常用的分离方法与技巧，以期为相关研究提供参考。
一、物理分离方法1. 筛选法筛选法是常用的物理分离方法之一。
通过对样品进行适当的物理处理，如研磨、过筛等，可以将纤维素微生物与其他杂质分开。
这种方法简单易行，但存在一定的局限性，无法区分不同种类的微生物。
2. 显微镜观察法显微镜观察法可根据微生物的形态特征进行分离。
将纤维素样品放置在显微镜下进行观察，识别并分离出目标微生物。
这种方法适用于微生物数量较少的情况，但需要一定的显微观察技巧。
二、化学分离方法1. 酸碱处理法酸碱处理法通过调节样品的酸碱度来分离目标微生物。
纤维素微生物对酸碱度较敏感，可以利用这一特性实现分离。
例如，可以将样品浸泡在酸性溶液中，使纤维素微生物脱离样品并转移到溶液中，然后用适当的方法将其分离收集。
2. 加热处理法加热处理法是一种常用的化学分离方法。
纤维素微生物对高温较为敏感，通过加热样品可以使其脱离纤维素并转移到其他介质中。
例如，可以将样品加热至一定温度，使纤维素微生物被释放出来，然后采用适当的方法将其分离。
三、生物分离方法1. 生物筛选法生物筛选法是利用其他微生物对纤维素微生物的生物竞争关系来进行分离。
通过将待分离样品与其他微生物接种在同一培养基中，观察结果可以得出纤维素微生物的分离情况。
2. 培养方法培养方法是常用的生物分离方法。
可以利用纤维素微生物的特殊生长要求，构建适合其生长的培养基，从而分离目标微生物。
例如，可以选择添加纤维素作为碳源的培养基，利用纤维素微生物对碳源的特异性降解，进行分离。
结论分解纤维素微生物的分离方法与技巧多种多样，不同的方法适用于不同的研究目的和样品特点。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的分离方法，并结合其他分析手段进行综合分析。
环境微生物技术实验总结报告一、国内外研究进展：①纤维素资源据不完全统计，全球每年通过光合作用产生的植物物质高达1.8×1011 t，这些植物物质所含的能量相当于全球人类每年能量消耗量的20倍，食物中所含能量的200倍。
纤维素是构成植物细胞的基本成分，纤维素占全球植物总干重的30%一50%，是地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物，它存在于所有植物当中。
在生物界中，结合于有机体中的碳达27×1010t，在自然界有机体中构成纤维素的碳约占40%，据此估算，在植物界中纤维素的总量约达26.0×1010t，而且自然界中的植物原料是年复一年地不断生长和更新的，可以说，纤维素在自然界中是一种最丰富的可再生的有机资源。
纤维素是一种不能被大多数动植物直接利用的多糖物质。
但对人类来说只要能将其降解成小分子物质，纤维素就会成为一种有广阔应用前景的资源。
而且这种潜在的资源数量是惊人的，其中的大多数作为绿色植物的成分在维持生态平衡中起作用而不宜利用，但是仍有数量可观的纤维素由人类生活和生产产生，它们主要存在于农作物秸秆和城市垃圾之类的废弃物中。
灾荒或战乱造成的粮食危机依然是正存在的和潜在的威胁;随着全球经济的飞速发展，地球上石油、煤炭的储量正以惊人的速度减少，能源危机成了世界大多数国家所面临的一个严峻问题;由于对资源的破坏性开采和利用，人类赖以生存的环境正在不断地恶化，对可再生资源利用的研究与开发的可持续发展战略己在世界各国逐步展开。
如何处理和利用废弃纤维素将成为一个十分紧要的问题。
②农业废弃物资源的利用现状植物纤维素资源的开发利用对解决粮食和能源短缺以及环境污染问题有极其深远的意义。
我国的纤维素资源极为丰富，每年的农作物秸秆产量达5.7x107吨，约相当于北方草原年打草量的50倍。
但是，农作物秸秆产生数量多且产生时间集中(每年到收获季节农村就会有大量的秸秆产生)，而我国的农作物秸秆主要用于燃料、畜禽饲料与自然堆肥，不仅利用效率低，而且随着农村生活水平的提高，农作物秸秆成为农村固体废弃物的主要来源。
现阶段，农作物秸秆的最常用的处理和利用方法有:1.加工成粗饲料，作为草食动物的食料。
这是一种传统的方法，现在我国约有巧%的秸秆用于此用途。
此法的主要缺点是秸秆营养价值低。
2.秸秆还田。
即利用农田土壤中的微生物降解秸秆。
这是我国处理秸秆的主要方法。
虽然此法可暂时解决秸秆过剩问题，但是由于农田土壤中的微生物降解能力有限，秸秆会残留在土壤中不腐烂，从而使土壤肥力过低，并造成耕作困难。
3.造纸，编织，制燃料、沼气等。
4.自然界的许多微生物具有氧化、分解有机固体废弃物的能力。
而我国的劳动人民在长期的生产实践中，早已懂得利用秸秆、落叶、野草和畜、禽粪便堆积发酵制作肥料。
但都是采用传统的手工操作和自然堆积的方式，并依靠自发的生物转化作用，发酵周期长，处理量小。
上个世纪20年代，出现了机械堆制技术，并逐渐发展为处理生活垃圾、污泥污水、人和畜禽粪便及农林废物的重要方法之一。
即使有以上方法，对于我国这样的一个农业大国，特别是在城市周边较富裕的农村地区，每年仍会产生大量的无法处理的秸秆，农民将其焚烧，产生大量的烟雾，不仅污染了环境，而且会造成交通事故，甚至机场、高速公路无法运行。
由此可见，秸秆的处理与利用技术急需开发。
现在已经取得成效和正开发的新技术有:生产食用菌、生产蛋白饲料[3]、制有机肥、生产纤维素酶等。
与粗饲料及秸秆还田相比，蛋白饲料和有机肥料分别有营养价值较高和肥力较高的优势，而生产纤维素酶则具有更高的商业价值。
以上四个方法除食用菌以生产高等真菌为目的外，其他三个方法均需要快速高速降解纤维素的菌种参与发酵。
③城市垃圾的处理与利用现状城市生活垃圾是指以家庭为主以及办公室、餐馆、饭店等场所所排放出的各种废物，成分主要有厨余、纸张、塑料、竹木、布类、玻璃及其他废物。
世界的垃圾年产量约为10亿吨，其中纤维素的含量是十分可观的。
纸张、织物、含纤维素食品及草木等均含有纤维素。
我国城市生活垃圾产量在1995年已超过1亿吨，并且仍在以每年10%左右的速度增长，超过世界平均8.42%的年增长速度。
据统计，大城市生活垃圾中有机成分约占总量的60%，无机物约占40%，其中废纸、塑料、玻璃、金属、织物等可回收物约占总量的30%。
城市垃圾处理方法常见的有:焚烧法、填埋法、堆肥法等。
其中堆肥法适用于有机垃圾，它是利用自然界的微生物降解有机垃圾为腐殖质的垃圾处理法。
堆肥(composting)是指在控制条件下(在一定的水分、C/N比和通风条件下)，使来源于生物的有机废物，发生生物稳定作用(Biostabilization)的过程。
这一定义强调，堆肥原料来自生物界;堆制过程需在人工控制下进行，不同于卫生填埋、废物的自然腐烂和腐化;堆制的实质是生物化学过程。
木质素、纤维素在堆肥中的主要结构形式是木质纤维素，约占40%;半纤维素约占20%一30%;木质素约占20%~30%。
现代化的堆肥生产一般采用好气堆肥工艺，它通常由前处理、一次发酵、后发酵、后处理及贮藏等工序组成。
前处理指破碎和分选前处理工艺，通过破碎和分选，去除非堆肥物质，调整垃圾的粒径;一次发酵即好氧高温发酵;后发酵即简易堆放;后处理就是对完全腐熟的堆肥进行再分选，去除无机物，可再根据需要调整粒径。
在堆肥堆制过程中，进行微生物接种，可以加速堆肥材料的腐熟作用。
关于堆肥微生物生物接种的工艺，普遍认为城市垃圾中微生物种类繁多，接种好热性纤维素分解菌不能起到积极作用。
在堆肥腐熟过程中，纤维素分解作用是关键问题，因此各种加速纤维素分解的技术都是有积极意义的。
研究者利用筛选出的一株自生固氮菌和一株纤维素分解菌进行混合培养，初步探索了两种菌混合作用下对生活垃圾的降解作用及增肥效应。
结果表明，两种菌在一定情况下能相互利用、相互依存，在两种菌混合作用下可以加速有机垃圾的降解，同时可提高其含氮量[5]。
在堆肥过程中，有机质生化降解会产生热量，如果这部分热量大于堆肥向环境的散热，堆肥物料的温度则会上升。
此时，热敏感的微生物就会死亡，耐高温的细菌就会快速地生长、大量地繁殖[7]。
还有学者对城市生活垃圾堆肥过程中的微生物类群进行了分离鉴定，在此研究基础上，提出在原生垃圾含有的自然微生物群体基础上，添加高效菌种或酶制剂，将增强对垃圾的分解和利用，对于缩短堆肥时间也具有重要意义。
④纤维素分解菌由于微生物治理环境或处理固体有机废弃物方法具有成本低、无二次污染、生态恢复好等特点，进入80年代以来，发达国家更是对有益环境的微生物开发、应用研究领域投入了大量人力物力，取得了巨大的经济、环境和社会效益。
国内的研究者也在分离可转化有机化合物的微生物，探索有机物生物降解途径的多样性，研究微生物引发生物降解的生化和遗传机制等领域做了大量工作。
纤维素酶的来源非常广泛，昆虫、软体动物、原生动物、细菌、放线菌和真菌等都能产生纤维素酶。
目前研究较多的是霉菌，其中酶活力较强的菌种为木霉、曲霉、根霉和青霉，特别是里斯木霉、绿色木酶、康氏木霉等较为典型，是目前公认的较好的纤维素酶生产菌。
细菌中酶活力较强的菌种有纤维粘菌属、生抱纤维粘菌属和纤维杆菌属，放线菌中有黑红旋丝放线菌、玫瑰色放线菌、纤维放线菌和白玫瑰放线菌等。
微生物中的真菌能降解各种木质纤维原料。
白色致腐真菌能够降解纤维素、半纤维素和木质素等主要成分。
在对侧抱菌、绿色木霉等菌种的研究中，科学家对它们的酶作用机理进行了阐述。
有关白色致腐真菌和放线菌对木质素和木质纤维的降解能力已有些报道。
研究者已成功进行了菌株杂交，通过杂交提高了真菌利用木质纤维的能力。
很有可能应用基因工程技术对于这些能降解木质纤维的菌株进行改良，这些技术还包括原生质体融合技术和DNA转化技术等。
在长期的实验和生产实践中，人们发现很多生物过程是微生物单独作用不能完成或只能微弱进行的，必须依靠两种或两种以上的微生物共同作用才能完成。
城市垃圾处理方法一一堆肥过程中，由于各种好热性微生物的最适温度互不相同，因此随着堆温的变化，好热性微生物的种类、数量也逐渐发生着变化。
堆肥发热阶段主要由中温好氧的细菌和真菌利用容易分解的有机物，释放出热量，使堆肥温度升高。
在50℃左右，主要是嗜热性真菌和放线菌，如嗜热真菌属(Thermomyees)、嗜热褐色放线菌(Aetinomyceshermofoscus)、普通小单胞菌(Mieromonosporavulgaris)等。
温度升至700C时，大多数嗜热性微生物已不适应，相继大量死亡或进入休眠状态。
微生物混合培养中各种微生物之间的相互关系是既多样又复杂的，可以有互生、共生、寄生、拮抗和捕食关系。
研究不同纤维素降解菌降解效果的差异以及混合菌中各菌株的相互作用，可以为工程中优选菌种、发挥菌株间协同作用、防止拮抗作用的发生提供实验依据。
.二、研究目的：①了解生物技术在环境污染治理中的应用，掌握环境生物技术研究的基本方法，提高实践能力、团队合作能力与综合运用知识的能力。
②学习和巩固选择性培养基及鉴别培养基的制备原理和方法，了解和掌握从环境中分离筛选纤维素酶产生菌的原理和方法。
三、任务：从土壤中分离筛选纤维素分解微生物及初步的菌种鉴定。
四、流程：采样→复筛→分离纯化→鉴别→革兰氏染色。
五、器材：试管（10支），培养皿（21个），移液管（1mL一个，10mL一个），涂布器（1个），烧杯（2个），锥形瓶（4 个），玻璃棒，接种环，酒精灯，显微镜，载玻片，天平及其它基本器材六、药品：土样，革兰氏染液（结晶紫，碘液，95%乙醇，番红），无菌水①羧甲基纤维素钠培养基（CMC培养基）：NaCl 6g，MgS O4·7H2O，0.1g，KH2PO40.5g, CaCl20.1g，K2HPO4 2.0g，CMC-Na 15g，（NH4）2SO4 2.0g，PH值7.0-7.4,蒸馏水500mL，琼脂10g。
②刚果红鉴别培养基：CMC-Na 1.88g , Na2HPO42.5g, KH2PO4 0.5g, MgSO4·7H2O0.3g, 刚果红 0.2g，蛋白胨2.5g，酵母膏15g，蒸馏水300mL, 琼脂6g。
七、步骤：1.土样采集土样的采集要选择富含纤维素的环境，例如落叶堆积丛，这是因为在纤维素含量丰富的环境，通常会聚集较多的分解纤维素的微生物。
如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，过一个月右也会有能分解纤维素的微生物生长。
2.灭菌取所需实验仪器，对移液管、培养基、试管、锥形瓶进行包扎，然后放入高压锅进行灭菌。
3.培养基配置配置足量复筛培养基，倒入锥形瓶，包扎灭菌。
4．接种将灭完菌的培养基在酒精灯旁分别倒入7个培养皿中，标号10-3、10-4、10-3、10-3、10-4、10-3、空白，记上小组号。
