常规实验所用溶液配方大全
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一、常规溶液一1/15mol/L PBS磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution,PBS 甲液:1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO4 9.465g 蒸馏水加至1000ml 乙液:l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P04 9.07g 蒸馏水加至1000m1 分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液见下表: pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI 5.29 5.59 5.91 6.24 6.47 6.64 2.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 97.5 95.0 90.0 80.0 70.0 60.0 6.81 6.98 7.17 7.38 7.73 8.04 50.0 60.0 70.0 80.0 90.0 95.0 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 5.0 二0.3%台盼兰染液称取台盼兰Trypan blue粉0.3克,溶于100ml生理盐水中,加热使之完全溶解,用滤纸过滤除渣,装入瓶内室温保存。
三0.5%酚红指示剂酚红0.5g 0.1N0.4%NaOH 15ml 双蒸水85ml 将0.5克酚红置研钵中,缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨,并不断吸出已溶解的酚红液,直至全部溶解,然后加入85ml双蒸水,颜色为深红,经粗滤纸过滤后使用,室温保存。
四5.6%NaHCO3溶液称NaHCO35.6克,溶于100ml蒸馏水中,室温保存即可如需要也可10磅15分钟高压灭菌,4℃冰箱保存五10μg/ml秋水仙素秋水仙素lOmg 生理盐水100ml 装入茶色瓶中,为贮备液,4℃冰箱中保存。
甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。
六0.4%KCl-0.4%柠檬酸钠低渗液将0.4%KCl和0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可,室温保存。
七2%柠檬酸钠称取柠檬酸钠2克,加100ml 双蒸水即可,室温保存。
实验常用试剂配置1.铜标准贮备溶液:称取1.000±0.005g金属铜(纯度99.9%)置于150ml烧杯中,加入20ml1+1硝酸,加溶解后,加入10ml1-1硫酸并加热至冒白烟,冷却后,加水溶解并转入1L容量瓶中,用水稀释至标缓。
此溶液每毫升含1.00mg铜。
2.铜标准溶液:吸取5.00ml铜标准贮备溶液于1L容量瓶中,用水稀至标线。
此溶液每毫升含5.0μg铜。
3.二乙基二硫代氨基甲酸钠0.2%(m/v)溶液:称取0.2克二乙基二硫代氨基甲酸钠三水合物(C5H10NS2Na •3H2O,或称铜试剂cupral)溶于水中并稀释至100ml,用棕色玻璃瓶贮存,放于暗处可用两星期。
4.EDTA-柠檬酸铵-氨性溶液:取12g乙二胺四乙酸二钠二水合物(Na-EDTA•2H2O)、2.5g柠檬酸铵[(NH4)3•C6H5O7],加入100ml水和200ml浓氨水中溶解,用水稀释至1L,加入少量0.2%二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液,用四氯化碳萃取提纯。
4.1EDTA-柠檬酸铵溶液:将5g乙二胺四乙酸二钠二水合物(Na2-EDTA•2H2O)20g柠檬酸铵[(NH4)3•C6H5O7]溶于水中并稀释至100ml,加入4滴甲酚红指示液,用1+1氨水调至PH=8~8.5(由黄色变为浅紫色),加入少量0.2%二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液,用四氯化碳萃取提纯。
5.氯化铵-氢氧化铵缓冲溶液将70g氯化铵(NH4Cl)溶于适量水中,加入570ml浓氨水,用水稀释至1L。
6.甲酚红指示液0.4g/L:称取0.02克甲酚红(C21H18O5S)溶于50ml195%(v/v)乙醇中。
7.碘溶液C=0.05mol/L:称12.7g碘片,加到含有25g碘化钾+少量水中,研磨溶解后用水稀释至1000mL。
8.丁二酮肟[(CH3)2C2(NOH)2]溶液5g/L:称取0.5g丁二酮肟溶解于50mL浓氨水中,用水稀释至100mL9.丁二酮肟乙醇溶液,10g/L:称取1g丁二酮肟,溶解于100mL乙醇(3.4)中。
实验室所需溶液配制1.费休氏试液,购买;2.氢氧化钠溶液,C=0.01mol/l。
氢氧化钠分子量40.0,准确称取氢氧化钠固体0.4g溶于200ml蒸馏水中,并在1L容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;3.中性红溶液,C=1%。
准确称取中性红固体1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;4.溴百里香酚蓝溶液,C=1%。
准确称取溴百里香酚蓝固体1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;5.碘化钾溶液,C=10%。
准确称取KI固体50g溶于50ml蒸馏水中,并在500ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;6.硫代硫酸钠溶液,C=0.1mol/l。
硫代硫酸钠分子量158.11,准确称取硫代硫酸钠固体15.811g溶于200ml蒸馏水中,并在1000ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;7.硫酸溶液,C=2mol/l,硫酸分子量98.08,浓度98%时密度约1.84g/ml,准确量取硫酸液体108.78ml稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入硫酸而非向硫酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液;8.淀粉溶液,C=0.5%。
准确称取可溶性淀粉0.5g,溶于50ml水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;9.铬酸钾溶液,C=50g/L。
准确称取铬酸钾固体50g,溶于500ml水中,并在1000ml容量瓶中定容,搅拌下逐滴加入10%的硝酸银溶液,直至溶液出现棕红的悬浮物为止.静置1昼夜,用干净的滤纸漏斗过滤即可,不一定用饱和硝酸银溶液,用10%硝酸银溶液即可.配制方法:1克硝酸银+10毫升纯水溶解,置于棕色瓶中;10.氯化钠基准试剂,C=0.1mol/l,氯化钠分子量58.5,准确称取氯化钠固,5.85g溶于500ml蒸馏水中,并在1000ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;11.硝酸银溶液,C=0.1mol/l,硝酸银分子量169.87,准确称取硝酸银固体8.49g溶于200ml蒸馏水中,并在500ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液,用前采用基准氯化钠试剂(10)标定,需保存于棕色试剂瓶中;12.酚酞指示剂,C=0.1%,准确称取酚酞固体0.1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;13.氯化钡溶液,C=10%,准确称取氯化钡固体10g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液;14.乙醇溶液,C=1%,准确移取乙醇(AR)1ml与100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液;15.盐酸标准溶液,C=1mol/l,分子量36.46,D154=1.20(39.11%),1.15(29.57%)、1.10(20%)、1.05(10.17%)。
试剂配制(1)液体LB培养基(-) 1000ml蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g去离子水溶解并定容至1000ml高压灭菌,4℃保存。
(2)氨苄青霉素溶液(100mg/ml) 10ml氨苄青霉素1g去离子水溶解并定容至10ml过滤除菌,-20℃分装保存。
(3)卡那霉素溶液(100mg/ml) 10ml卡那霉素1g去离子水溶解并定容至10ml过滤除菌,-20℃分装保存。
(4)固体LB培养基(-) 1000ml蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g琼脂糖粉15g去离子水溶解并定容至1000ml高压灭菌后铺平板(6cm培养皿),冷却后4℃保存。
(5)含抗生素LB固体培养基1000ml固体LB培养基溶液1000ml高压灭菌,当培养基降温至50℃左右,加入终浓度为100Rg/ml的氨苄青霉素或100Rg/ml卡那霉素,并铺平板(6cm培养皿),冷却后,4℃保存。
(6)0.1M CaCl2溶液一制备感受态1000ml氯化钙11.099g去离子水溶解,定容至1000ml高压灭菌后4℃保存。
(7)0.1M MgCl2溶液一制备感受态1000ml氯化镁9.521g去离子水溶解,定容至1000ml高压灭菌后4℃保存。
(8)0.1M CaCl2-15%甘油溶液---制备感受态1000ml氯化钙9.521g50%甘油300ml去离子水溶解,定容至1000ml高压灭菌后4℃保存。
(9)50%甘油溶液100ml甘油50ml去离子水50ml(10)0.5M EDTA 溶液(PH=8.0) 500mlEDTA 93.05g去离子水溶解,NaOH调PH至8.0,定容至500ml。
(11)10%SDS 溶液100mlSDS 10g去离子水溶解,定容至100ml。
(12)5M乙酸钾溶液100ml5M乙酸钾49.07g去离子水溶解,定容至100ml,室温保存。
(13)1MTris-HCl 溶液(pH=8.0) 100mlTris 碱12.1g去离子水溶解,定容至100ml,浓盐酸调pH值至8.0,室温保存。
实验室常用溶液及试剂配制表一普通酸碱溶液的配制表二常用酸碱指示剂表三混合酸碱指示剂表四容量分析基准物质的干燥表五缓冲溶液的配制实验室常用试验方法2九、柠檬酸(C6H8O7·H2O)称取试样1.5g(精确到0.0002g)于三角瓶内,加入水50ml溶解,加酚酞指示剂3滴,用1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至粉红色为终点,同时做空白试验。
计算:X%(一水)= (V1-V0)×C×0.06404x m×(1-0.08566)×100X%(无水)= (V1-V0)×C×0.06404x m×100V1-----消耗氢氧化钠标准溶液的体积,ml;V0-----空白所消耗氢氧化钠标准溶液的体积,ml;C------氢氧化钠标准溶液浓度,mol/L;m---样品质量。
十、钙含量测定(磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca(H2PO4)2·H2O、钙粉等)称取2g(精确到0.0002g)样品,用10ml盐酸(1+1)溶解,转移至100ml容量瓶中定溶,用移液管吸取10ml于250ml锥形瓶中,加50ml水,5ml蔗糖溶液(25g/L),2ml三乙酸胺(1+1),1ml乙二胺(1+1),1滴孔雀绿指示液(1g/L),滴加氢氧化钾溶液(200g/L)至无色,再过量10ml,加0.1g盐酸羟胺(每加一种试剂都要摇匀),加钙黄绿素少许,在黑色背景下用0.05mol/L的EDTA标准溶液滴定至绿色荧光消失呈现紫红色为滴定终点。
Ca%= C×V×0.4008x m ×100C------EDTA标准溶液的浓度,mol/L;V-----消耗EDTA标准溶液的体积,ml;m----样品质量。
(二)氟(Fˉ)含量的测定:1、标准曲线的绘制;2、试样含量的测定:称取0.5g(精确到0.0002g)置于50ml纳氏比色管中,加1mol/L盐酸10ml,密闭提取1h (不时摇动),避免粘于管壁,提取后加总离子强度缓冲液25ml,加水至刻度,以滤纸过滤。
常规实验所用溶液配方大全常规实验所用溶液配方大全1.0.5mol/LEDTA 配制组分浓度: 0.5mol/l EDTA, PH=8配制量:500ml配制方法(1)称取93.06克EDTA.Na2.2H2O,置于500 ml烧杯中(2)加入约400ml dd H2O.用热磁力搅拌器充分搅拌(3)用NaOH调节PH值到8,约用10克固体NaOH(4)在溶液冷却后,再用NaOH调节至PH=8(5)加dd H2O将溶液定容到500 ml(6)高温高压灭菌后,室温保存2.NaOH溶液的配制组分浓度:5 mol/l NaOH配制量:100 ml配制方法(1)称取固体NaOH20克于容器中(2)加入dd H2O定容到100 ml3.100 mmol/l Tris-HCl的配制组分浓度: mmol/l Tris-HCl, PH=6.4配制量:250 ml配制方法(1)称取3.025克Tris于250 ml烧杯中.(2)加入约200ml dd H2O充分搅拌溶解.(3)用浓盐酸调节PH值到6.4.所用浓盐酸约3 ml(4)将溶液定容至250ml(5)用棕色瓶分装于4度冰箱中(6)如使用,用水浴加热溶解.4.氯仿-异戊醇的配制:配制方法(1)简单的体积混合,既要求比例为24:1即可(2)储存于棕色玻璃瓶子中(3)置于4度冰箱以便日后使用5.去污剂:CTAB:可将细胞膜裂解,使DNA释放到提取液中,同时也使组织匀浆中的蛋白质变性.EDTA:能与DNase的辅助因子Mg2+结合,使DNase失去活性,不能降解从细胞中释放的DNA.6.还原剂巯基乙醇:它抑制从细胞中释放的多酚氧仿.防止植物组织发黄变褐.7.氯仿—异戊醇:它可把组织匀浆中变性的蛋白质除去,将DNA与细胞中的蛋白质、碳水化合物等分开除去.8.RNase:它可去除核酸中的RNA,只留下DNA.9.硅珠悬浮液的配制(1)称取1.2g硅珠粉,溶解于10ml无菌水中.(2)放入4℃冰箱备用.(3)使用时先涡旋使其混合均匀10. 10×TE,500ml配制如下:将100mM Tris-Hcl(PH=8.0)6.057g与10mM EDTA(PH=8.0)1.8612g溶于400ddH2O 中,调PH=8.0,定容到500ml。
化验室常用溶液的配制1.碘化钾试液取碘化钾0.14g与碘酸钾90mg,加水125ml使溶解,再加盐酸125ml,即得。
本液应置玻璃瓶内,密闭,在凉处保存。
2.N-乙酰-L-酪氨酸乙酯试液取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯24.0mg,加乙醇0.2ml使溶解,加磷酸盐缓冲液(取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.6ml,混合,pH值为7.0)2ml,加指示液(取等量的0.1%甲基红的乙醇溶液与0.05%亚甲蓝的乙醇溶液,混匀)1ml,用水稀释至10ml,即得。
3.乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液取对二甲氨基苯甲醛1g,加乙醇9.0ml与盐酸2.3ml使溶解,再加乙醇至100ml,即得。
4.乙醇制氢氧化钾试液可取用乙醇制氢氧化钾滴定液(0.5mol/L)。
5.乙醇制氨试液取无水乙醇,加浓氨溶液使每100ml中含NH3 9~11g,即得。
本液应置橡皮塞瓶中保存。
6.乙醇制硝酸银试液取硝酸银4g,加水10ml溶解后,加乙醇使成100ml,即得。
乙醇制溴化汞试液取溴化汞2.5g,加乙醇50ml,微热使溶解,即得。
本液应置玻璃塞瓶内,在暗处保存。
7.二乙基二硫代氨基甲酸钠试液取二乙基二硫代氨基甲酸钠0.1g,加水100ml溶解后,滤过,即得。
8.二乙基二硫代氨基甲酸银试液取二乙基二硫代氨基甲酸银0.25g,加氯仿适量与三乙胺1.8ml,加氯仿至100ml,搅拌使溶解,放置过夜,用脱脂棉滤过,即得。
本液应置棕色玻璃瓶中,密塞,置阴凉处保存。
9.二苯胺试液取二苯胺1g,加硫酸100ml使溶解,即得。
10.二氨基萘试液取2,3-二氨基萘0.1g与盐酸羟胺0.5g,加0.1mol/L盐酸溶液100ml,必要时加热使溶解,放冷滤过,即得。
本液应临用新配,避光保存。
11.二硝基苯试液取间二硝基苯2g,加乙醇使溶解成100ml,即得。
12.二硝基苯甲酸试液取3,5-二硝基苯甲酸1g,加乙醇使溶解成100ml,即得。
实验室常用溶液配制一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V 或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g 的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH 调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
常用试剂的配制一、常用试剂的配制:1、100g/L钼酸铵溶液:称取100克钼酸铵于500毫升烧杯中加水溶液、移入1升,稀释至刻度,混匀。
(如溶液浑浊,应过滤)。
2、200g/L硫氰酸钾溶液:称取200克硫氰酸钾于500毫升烧杯中,溶解于水,移入1升容量瓶中,稀释至1升体积。
3、50g/L氯化钡溶液:称取50克二氯化钡于500毫升烧杯中,溶解于水,移入1升容量瓶中,稀释至1升体积。
4、100g/L酒石酸溶液:称取100克酒石酸溶于水中,移入1升容量瓶中,稀释至刻度。
5、150g/L氢氧化钾溶液:称取150克氢氧化钾溶于水中,移入1升容量瓶中,稀释至刻度。
6、20g/L二安替比林甲烷(DAM)溶液:称取出20克二安替比林甲烷于烧杯中加水约200毫升,再加1+1盐酸333毫升,搅拌溶解,继续加水稀至1升,混匀,此溶液酸度为2mol/L。
保存于棕色瓶中。
7、氨性缓冲液(PH=10):称取67.5克氯化铵溶于200毫升水中,加入570毫升浓氨水、稀释至1升。
8、醋酸——醋酸钠缓冲液(PH=5.2~5.9)。
O)溶解于水,称取无水乙酸钠79克(或称取150克结晶醋酸钠NaAC˙3H2加7.7毫升乙酸、稀至1升,用间隔为0.2的PH试纸检验其PH值。
9、硫酸——草酸——硫酸亚铁铵混合液:称取30克硫酸亚铁铵于1升烧杯中,加150毫升水,缓缓加入166毫升1+1的硫酸,搅拌使其溶解。
冷却后移入1升的容量瓶中,再称30克草酸于另一烧杯中,加热水溶解,冷却后移入上述容量瓶中,稀释至刻度、混匀。
10、邻菲啰啉—盐酸羟胺—醋酸—醋酸钠缓冲混合液。
称取100克无水醋酸钠(或150克结晶醋酸钠)和5克盐酸羟胺,分别溶于水,另称0.25克邻啡啰啉溶于15毫升醋酸中,将三溶液混合,用水稀释1升、混匀。
11、酒石酸钾钠—三乙醇胺混合液:称取200克酒石酸钾钠,溶解于水,加入100毫升三乙醇胺,稀释至1升。
12、硫酸铜—EDTA溶液:称取2.5克结晶硫酸铜和6.3克EDTA,加入10毫升1+1氢氧化铵,加水溶解后,稀释至1升。
实验室常用溶液配方常用溶液配方(细胞培养)PBS配制一、PBS配方配1L 25倍PBSNaCl 200gNa2HPO4-2H2O 36g 最难溶最后加或Na2HPO4-12H2O 72.4g NaH2PO4-2H2O 6.5g 或NaH2PO4 5g搅拌,1000ml定容,调PH值至7.2—7.4(细胞培养)1倍PBS配方NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.44g 或者Na2HPO4-12H2O 3.57gKH2PO4 0.24g加水定容至1L,调PH值7.2-7.4(细胞培养)10倍PBS配方NaCl 80gKCl 2gNa2HPO4 14.4g 或者Na2HPO4-12H2O 35.7gKH2PO4 2.4g(组化用)PBS配方配1L 10 倍PBSNaHPO4 10.9g 或Na2HPO4-12H2O 27.50gNaCl 90gNaH2PO4 3.2g 或NaH2PO4-2H2O 4.16g搅拌,1000ml定容,调PH至7.2,分装,常温保存配1倍PBS(0.01PBS)1.取50ml 10倍PBS,倒入容量瓶2.定容至500ml,摇匀,分装二、胰酶的配制:0.25%胰酶1倍PBS 1000ml胰酶粉(trypsin)2.5gEDTA 0.4g搅拌后4摄氏度过夜,然后用NaOH调PH值至7.2-7.4;用0.22um滤器(绿色滤器)过滤分装保存。
三、培养基配制L-DMEM配制1L培养液:L-DMEM 10gNaHCO3 2.2g双抗1%(11ml)胎牛血清110ml注:国产胎牛血清需要56℃,30min灭活加完混合后,用0.22um的滤器过滤除菌,4摄氏度保存。
低糖冻存液的保存冻存液:L—DMEM:血清:DMSO=6:3:1注:(DMSO要缓慢加入,以防散热不均,下面要垫上冰块,助散热。
配好后用0.22微米滤器过滤,分装,4℃保存1640培养液配制1L体系:1640干粉10.3g/LNaHCO3 2g双抗1%100倍谷氨酰胺10mlβ-巯基乙醇3.5 uL胎牛血清10%(灭活)0.22微米滤器过滤,4℃保存。
常规实验所用溶液配方大全配制组分浓度: 0.5mol/l EDTA, PH=8配制量:500ml配制方法(1)称取93.06克,置于500 ml烧杯中(2)加入约400ml dd H2O.用热磁力搅拌器充分搅拌(3)用NaOH调节PH值到8,约用10克固体NaOH(4)在溶液冷却后,再用NaOH调节至PH=8(5)加dd H2O将溶液定容到500 ml(6)高温高压灭菌后,室温保存2.NaOH溶液的配制组分浓度:5 mol/l NaOH配制量:100 ml配制方法(1)称取固体NaOH20克于容器中(2)加入dd H2O定容到100 ml3.100 mmol/l Tris-HCl的配制组分浓度: mmol/l Tris-HCl, PH=6.4配制量:250 ml配制方法(1)称取3.025克Tris于250 ml烧杯中.(2)加入约200ml dd H2O充分搅拌溶解.(3)用浓盐酸调节PH值到6.4.所用浓盐酸约3 ml(4)将溶液定容至250ml(5)用棕色瓶分装于4度冰箱中(6)如使用,用水浴加热溶解.4.氯仿-异戊醇的配制:配制方法(1)简单的体积混合,既要求比例为24:1即可(2)储存于棕色玻璃瓶子中(3)置于4度冰箱以便日后使用5.去污剂:CTAB:可将细胞膜裂解,使DNA释放到提取液中,同时也使组织匀浆中的蛋白质变性.EDTA:能与DNase的辅助因子Mg2+结合,使DNase失去活性,不能降解从细胞中释放的DNA.6.还原剂巯基乙醇:它抑制从细胞中释放的多酚氧仿.防止植物组织发黄变褐.7.氯仿—异戊醇:它可把组织匀浆中变性的蛋白质除去,将DNA与细胞中的蛋白质、碳水化合物等分开除去.8.RNase:它可去除核酸中的RNA,只留下DNA.9.硅珠悬浮液的配制(1)称取1.2g硅珠粉,溶解于10ml无菌水中.(2)放入4℃冰箱备用.(3)使用时先涡旋使其混合均匀10. 10×TE,500ml配制如下:将100mM Tris-Hcl(PH=8.0)6.057g与10mM EDTA(PH=8.0)1.8612g溶于400ddH2O 中,调PH=8.0,定容到500ml。
11. 1×TE Buffer组成浓度:10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0配制量:500ml配制方法:量取下列溶液于500ml烧杯中1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml0.5M EDTA PH=8.0 1ml向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合;将溶液定容到500ml后,高温高压灭菌;室温保存.12. 聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGEPAGE操作流程及注意事项:1、涂胶1)将有耳玻片(耳朝下)泡于反硅化剂中,新液25分钟,旧液30分钟.2)涂无耳正面玻片硅化剂.均匀点四滴,轻而匀的沿一个方向涂三次,静10分钟.3)到时间取出.打开通风橱风干30分钟.2、封胶1)将两玻片对贴于橡胶框中,放平,用力拧死,夹住橡胶管.2)溶废琼脂胶,分两次:第一次50秒,第二次10-20秒,防止沸出.3)用小细长枪头通透加胶枪头,便于加样通畅,少起气泡.4)吸2500-3000ul液胶加速沿玻片边缘快速顺下滴,将两面玻片充分封死,防止漏胶.以水平底线面水平高于底为佳,静止凝胶15分钟.(有时可先在封口加一点TBE以润滑玻片,利于胶流下)3、灌胶1) 用长细枪头透开加胶枪头2) 从中间加入,每次不要全部打完,留一点在枪头内.防止断流而导致胶中含有气泡.3) 插梳子时两端平整,梳子紧贴玻板,梳齿头部不可有气泡.4) 拔梳子时先加一倍TBE液将梳子泡透,然后平行用力拔出.5) 在插梳子15分钟内跟踪观察,适当下按,保证孔的深度.6) 等待2小时,以便胶充分凝固.4、吹孔1)向中间槽加入1倍粗制TBE,要淹没过内玻片约1厘米.2)拔梳子,小心平稳,均匀平衡.3)调1000p枪到300-600ul,进行吹孔,将小孔内沉淀物吹打干净,加样中再视时吹5、加样1)用细长专用枪加入DNA 0.5ul.2)一手托另一臂的肘,以保证加样手不抖.3)一定垂直加到孔中去,不脱尾,不吸水,不靠壁,干净利落.4)加完一次.在放于桌旁的吸纸上,将细枪头上余液吸干.5)首、中、尾各留1到2个孔,两面胶孔的Marker不完全一样,以便区分.6)加Marker 0.15ul 一般取0.3ul每孔注如一半,可用两个孔.6、跑胶1) 向两侧槽中加入粗制TBE,至U管线处.2) 打开电源,稳压到120V3) 电泳2h左右4) 当样品跑到底部2cm处,关闭电源.7、撬玻片1)刀片不伸入过深.刀片平行于玻片,稍用力.2)将没有硅化剂的无耳玻片放于水盘中,还有梳子.3)清理琼脂胶,放于烧杯中.4)胶玻片放于盘中,银染.13. 2、TBE电泳母液(10×)的配制1)分别称取54克Tris碱,27.5克硼酸,20ml 0.5mol/EDTA(PH=8.0)2)将各组分别加入1升烧杯中,用ddH2O定容到1升.3)在电泳时使用1倍工作液,按1:4与水混合.4) 1倍液是为了增加电泳工作液的电流的电流量.5)盛于玻璃瓶,在室温保存.14. AgNO3的配制量取AgNO3原液2500ul;将250ml dd H2O和2500ul AgNO3加入胶玻片上. (AgNO3原液的配制:50ml 中含AgNO3 7.5g 浓度为0.15g/ml)15溴化乙锭(10mg/ml)﹡组分浓度 10mg/ml 溴化乙锭﹡配制量 100ml1.称取1.0g溴化乙锭,加入到200ml容器中。
2.加入去离子水100ml,充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。
3.将溶液转入棕色瓶,室温避光保存。
4.溴化乙锭最终工作浓度为0.5μg/ml。
15. 20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
17.10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA 酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。
溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。
用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。
(配制过程中要戴手套)16. 5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。
10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
(稀释液应在临用前配制)2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃17. DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的体积分数为0.1%。
在37℃温浴至少12h,然后在15 psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。
DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
18. TE(用于悬浮和贮存DNA)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris-HCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)98.8ml19. 5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。
分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。