常规HE病理切片制作流程

• 脱蜡 组织切片脱蜡应彻底，主要取决于二甲苯的温度和 时间，需要根据环境条件的不用做出相应的改变，脱蜡不 净是影响染色不良的重要原因之一。
• 染色 石蜡切片经水后放入Harris苏木精染色，在新配的染 液中只需染1min分钟左右，根据染片的多少逐步延长染色 时间。苏木素的染色属于一种过染法，胞核胞质都会被染 色，但细胞核中的带负电荷的染色质与带正电荷的苏木精 结合的更为牢固，因此当用盐酸酒精进行分化，改变组织 蛋白质的PH值，使胞质的苏木精被洗脱下来，所以分化 的程度决定了染色的好坏，需要严格控制分化的时间。
处理步骤 二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
处理时间（min） 各60
• 浸蜡：
• 置换出组织中的透明剂，使石蜡浸入组织 ，便于之后的包埋工作。
处理步骤 56~58℃石蜡Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
处理时间（min） 各90
• 组织的包埋：
• 组织经过上述一系列的浸透剂浸透，用包 埋剂（石蜡）包起的过程。主要目的是给 予组织一个承载介质，使其达到一定的硬 度，利于切片。
常规HE病理切片制作流程
• 制作优良的病理切片是以充分的固定为前 提的。
• 常规的固定方法是用10％的中性福尔马林 ，固定时间一般为24h，原则上组织与固定 液的最佳比例是1:10，组织的厚度≤ 3mm
• 组织脱水：
• 乙醇是最常用的脱水剂，可以硬化组织，有明显收缩 作用。为了避免组织过度的收缩，脱水过程应从低浓 度向高浓度过渡，在无水乙醇中的时间不应过长，防 止组织过度硬化。
• 脱水 切片染色后通过各级乙醇脱水，浓度应从低到高， ，低浓度的乙醇对伊红有分化作用，在高浓度的乙醇中时 间应相应延长，否则切片会有雾化的现象，在显微镜下组 织结构模糊不清。
HE染色的质量标准： 染色核质分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美 观
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• 通常使用56~60 ℃石蜡
• 熔点高的石蜡会使蜡块硬度更高，不易于 切片，但能使切片更薄；反之熔点低的石 蜡使得蜡块硬度较低，易于切片，但切片 较厚。
• 切片： • 要求切片完整，厚度4~6 μm，厚薄均匀，
无褶皱无刀痕。
• 烤片： • 一般在60 ℃左右烤箱内烤30min即可。
• 染色：
1.二甲苯Ⅰ5min 2.二甲苯Ⅱ5min 3.二甲苯Ⅲ5min 4.无水乙醇1min 5.95%乙醇Ⅰ1min 6.95%乙醇Ⅱ1min 7.75%乙醇1min 8.水洗1min 9.苏木精染色1~5min 10.水洗1min 11.1%盐酸酒精分化5~8s 12.水洗5min返蓝 13.95%乙醇1min
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14.伊红染色15~30s
15.95%乙醇Ⅰ30s 16.95%乙醇Ⅱ30s 17.95%乙醇Ⅲ30s 18.无水乙醇Ⅰ1min 19.无水乙醇Ⅱ1min 20.无水乙醇Ⅲ1min 21.二甲苯Ⅰ（可加苯酚）1min 22.二甲苯Ⅱ1min 23.二甲苯Ⅲ1min 24.中性树胶封片
• 染色中注意事项：
处理步骤
1. 75%乙醇 2. 85%乙醇 3. 95%乙醇 4. 无水乙醇Ⅰ、Ⅱ
处理时间（min）
60 90 90 各60
• 组织的透明：
• 二甲苯是常用的透明剂，对组织收缩性强，易使组织 变脆变硬，因此时间不宜过长。其既与乙醇混合，又 能溶解石蜡，可以达到使石蜡浸入组织的目的，折射 指数接近组织蛋白折光指数，使组织细胞变透亮。