实验二 环境中微生物的检测

检测不同环境中的细菌和真菌实验报告一、实验目的本实验的目的是通过对不同环境中的样本进行检测，了解不同环境中细菌和真菌的分布情况，探究环境对菌群的影响，为环境监测提供科学依据。

二、实验方法1. 实验材料•不同环境中的样本：沙土、水、空气、人体皮肤•培养基：营养琼脂平板、麦康凯平板、青霉素葡萄糖琼脂平板、分解蛋白琼脂平板、利福平琼脂平板•器材：移液器、无菌牵引针、灭菌铁锤、无菌移液管、灭菌恒温培养箱、显微镜2. 实验步骤1.取不同环境中的样本，分别取样制备不同培养基的平板。

2.用无菌的牵引针或移液器取样并沿制作好的培养基平板中划线均匀分布。

空气样本需用暴露法取样，将板子直接置于空气中，进行杂菌检测（需注意无法控制检测范围）。

3.将已涂制样本的培养基平板倒置放入灭菌恒温培养箱中，在适当的温度下培养。

4.观察培养基平板的菌落形态、颜色，并进行初步分类鉴定，进行纯化。

5.取纯化后的菌株进行后续实验，如细菌菌株的致病性测试、真菌菌株的发酵等。

三、实验结果及分析通过对不同环境中的样本进行检测，我们观察到了不同的细菌和真菌菌株生长在各自培养基上的繁殖情况。

在沙土样本中检测到了多种细菌菌株和真菌菌株，包括链球菌、大肠杆菌、芽孢杆菌、表皮葡萄球菌等。

这表明沙土中生物数量丰富，成分复杂。

在水样本中检测到了较多的芽孢杆菌、肠球菌、绿脓杆菌等细菌菌株，同时也检出了一些真菌菌株，如曲霉、真菌等。

在空气样本中检测到了多种细菌菌株，主要包括链球菌、葡萄球菌、沙眼衣原体等。

空气中的细菌数量相比沙土和水要少得多，种类也相对单一。

在人体皮肤样本中，检测到了多种细菌菌株和真菌菌株，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、马拉色葡萄球菌等。

这表明人体皮肤表面存在着大量的微生物。

通过观察不同环境中的菌落繁殖情况，我们可以发现，细菌和真菌的分布受到环境的影响很大，不同环境中的微生物组成差异很大。

在进行环境监测时，我们需要考虑到不同环境中微生物的分布情况，制定合理的采样方案和检测方法。

实验二实验室环境和人体表面微生物的检查生科15.2周罡201500181104【实验目的】1.证实实验室环境与人体表面存在微生物。

2.体会无菌操作的重要性。

3.了解高压蒸汽灭菌的原理和应用范围，学习高压蒸汽灭菌的操作技术。

4.观察不同类群微生物的菌落形态特征。

5.比较不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。

6.掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。

【实验原理】通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个聚集在一起的肉眼可见的菌落。

平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。

每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点。

因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。

每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。

因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类。

值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。

因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征等综合考虑。

有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种鉴定方能得到。

从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为分离与纯化。

【实验器材】1.溶液和试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH溶液、HCl溶液2.仪器和其他用品试管，培养皿，500mL锥形瓶，500mL烧杯，500mL量筒、玻璃棒、胶头滴管、电子秤？、药匙、棉花、纱布、牛皮纸、记号笔、橡皮筋、纸绳、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸【实验步骤】1.配制300mL牛肉膏培养基（1）在烧杯中加入300mL蒸馏水（2）依次称量0.9g牛肉膏，3.0g蛋白胨，1.5gNaCl放入烧杯中（3）待其溶解后，调节pH，使其pH值达到7.4~7.6（4）向烧杯中加入6.0g琼脂粉，并将配好的培养基倒入锥形瓶中，并塞上棉塞，瓶口及棉塞用牛皮纸包好2.高温蒸汽灭菌在3支试管中加入蒸馏水，用棉塞塞好，3支试管口用牛皮纸包在一起。

广东工业大学实验报告实验 二 题目： 沉降法检测空气中微生物数量 第16周 星期 三 第 10-12 节（一） 实验目的1．学习并掌握用沉降法检测空气中的微生物2．了解空气中微生物的分布状况（二）实验原理在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。

空气中也不例外。

虽然空气不是微生物栖息的良好环境。

但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。

当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。

观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。

（三)实验器材1、 试剂牛肉蛋白胨培养基配方：牛肉膏 1.0g, 蛋白胨 2g ，NaCl 1g, 琼脂粉 4g 水200mL ，pH 7.2~7.42、仪器及其他用品高压灭菌锅，操作工作台，三角瓶，培养皿，酒精灯，培养箱等（四）实验方法1、倒平板：按常法配置上述培养基，装于500mL 三角瓶中，高压灭菌备用。

冷却至45-47℃左右，在超净工作台，倒8个平板备用。

2、暴露取样在指定的地点各放2皿，将平板皿盖打开，在空气中暴露5min 和10min,时间一到，立即合上皿盖。

3、培养观察： 细菌置于37℃培养，培养48h 计数平板上的菌落，观察各种菌落的形态、大小、颜色等特征。

4、计算1m 3空气中微生物的数目奥梅染斯基（Омелянский）曾建议：如面积为100㎝2的平板培养基，暴露在空气中5分钟，置于37℃培养24小时后所生长的菌落数，相当于10L 空气中的细菌数。

X=2100100r N π⨯⨯ X ：每m 3空气中的细菌数N ：平板暴露5分钟，置37℃培养24小时后生长的菌落数r ：平皿底半径（㎝）（五）实验结果1、列表比较不同放置地点空气菌落种类以及数量的差异？X=01001002=π⨯⨯rN （六）思考题1．对沉降测定法的结果，进行分析。

环境中微生物的检测和分离纯化一．实验原理1.微生物的分离与纯化土壤中含有丰富的微生物，可以从中分离纯化得到很多有价值的菌株。

微生物常用的分离方法是平板分离法，根据某种微生物对生长条件的不同要求供给它适宜的培养环境，再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直到得到纯菌株。

2.平板菌落计数法将待测样品经适当稀释后，其中微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。

统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中含的菌落数。

二．实验材料与试剂1.土壤稀释溶液2.取液器（1000ml 1支），培养箱，培养皿（12个），无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，1000ml无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架。

三．实验步骤（一）.无菌平板制备1.采用叠皿法把牛肉冻蛋白膏培养基倒入灭好菌的培养皿中，制作无菌平板（二）.周围环境中微生物的检测2.取一平板，分成6个区，做好标记。

同一个人同一根手指头按如下要求用力一致进行操作：分别用未洗过的手指头，自来水打湿的手指头，自来水认真洗过的手指头，洗手液洗过一遍的手指头，洗过两遍的，洗手液洗过又用酒精棉球消毒后的手指头在六个区上涂抹。

（平板1）3.取一平板，分区，分别用使用过的纸巾，硬币，旧纸币，餐卡在不同区拖动。

（平板2）4.在培养基上方抖动头发数次。

（平板3）5.取一平板，分区，用无菌接种环分别蘸一滴自来水，河水，豆浆在不同区划线。

（平板4）6.用无菌牙签取一点牙垢在培养基上划线。

（平板5）7.取两个平板，一个打开在实验台上放置30分钟，另一个在酒精灯火焰边打开皿盖1分钟。

（平板6）8.取一平板，打开盖，咳几下。

（平板7）（三）.从土壤中分离微生物1.采土样2.制备土壤稀溶液3.涂布吸取100ml稀释好的土壤稀溶液，较均匀地滴在平板上，再用无菌涂棒涂布均匀，涂1—2分钟4.培养将培养基平板倒置于37℃下培养24小时5.菌落计数四．实验结果1.平板1：从未洗到用酒精消毒总体趋势是菌落数越来越少，用自来水洗过和用洗手液洗过一遍的菌落数差不多；平板2：旧纸币和硬币的菌落数要多；平板3：抖头发的地方附近长出许多菌落；平板4：自来水菌落最多，其次是河水，河水的菌落分布成“牛”字形，和当时划线的形状一样，再其次是豆浆；平板5：划线的地方长出许多菌落；平板6：放在试验台上的平板长出各种形状的菌斑菌块，在酒精灯旁的基本没有菌落；平板7：咳几下的基本没有菌落。

环境微生物实验报告概述：微生物是地球上最为广泛存在的生物类群之一，它们在环境中扮演着重要的角色。

本实验旨在通过对环境微生物的采集和分析，了解其种类组成及其对生态系统的功能影响。

一、实验方法1. 采集样品：我们选择了不同生态环境中的样品进行采集，并分别选择了土壤、水样以及空气中的微生物。

采集样品的过程中，我们注意避免对样品产生污染，并尽量保持样品的原始状态。

2. 样品处理：在采集完样品后，我们对其进行了处理，包括使用试管进行样品的离心和过滤，以分离微生物并消除杂质。

处理后的样品分别保存在培养皿和离心管中。

3. 培养和观察：我们将处理后的样品接种到含有相应培养基的培养皿，并进行培养观察。

培养过程中，我们关注微生物的生长情况和形态特征，并利用显微镜进行观察和拍摄。

4. 遗传分析：为了更细致地研究微生物的种类和功能，我们对部分样品进行了遗传分析，包括PCR扩增、凝胶电泳和序列测定等。

通过这些方法，我们获得了微生物的遗传信息，并与数据库进行比对以进行种属鉴定。

二、实验结果1. 种类组成：经过培养和观察，我们发现土壤样品中的微生物种类最为丰富，包括细菌、真菌和藻类等。

水样中的微生物种类次之，以藻类为主，而空气中的微生物种类相对较少，以细菌为主。

遗传分析结果进一步确认了各样品中微生物的种类组成，也发现了一些罕见的微生物。

2. 功能影响：根据遗传分析结果，我们得知一些微生物具有对环境的功能影响。

例如，土壤中的某些细菌具有分解有机物的功能，对环境中的有机质降解有重要作用；而水中的藻类则能进行光合作用，通过吸收二氧化碳释放氧气，对水体中的氧气含量和水质有一定的改善作用。

3. 环境变化：通过对不同环境样品中微生物的比较，我们发现环境的变化对微生物群落有重要影响。

例如，在一个受到污染的水源中，我们发现水样中的微生物种类比正常水源中要减少，并且功能多样性也显著下降。

这说明环境的变化会导致微生物群落的改变，从而影响生态系统的稳定性。

实验三环境微生物的检测一、实验目的1.了解周围环境中微生物的分布情况;2.懂得无菌操作在微生物实验中的重要性;3.了解四大类微生物的菌落特征;二、实验原理在我们周围的环境中存在着种类繁多的、数量庞大的微生物;土壤、江河湖海、尘埃、空气、各种物体的表面以及人和动物体的口腔、呼吸道、消化道等都存在着各种微生物;由于它们体积微小,人们用肉眼无法观察到它们个体的存在;但是只要稍加留意,我们就可以在发霉的面包、朽木上看到某些微生物群体;这些现象表明,自然界只要有微生物可以利用的物质和环境条件,微生物就可以在其上生长繁殖;据此,我们在实验室里就可以用培养基来培养微生物;培养基是用人工配制的、适合微生物生长繁殖和产生代谢产物用的混合养料;其中含有微生物所需要的六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、气体和水分;此外,根据不同的微生物的要求,在配制培养基时还需用酸液或碱液调节至适宜的pH;配制好的培养基必须进行灭菌;所谓灭菌是指采用各类的物理或化学因素,使物体内外的所有微生物丧失其生长繁殖能力的措施;经过灭菌后的物体是无菌的;消毒是与灭菌完全不同的概念,它是指用较温和的物理因素杀死物体表面和内部病原微生物的一种常用的卫生措施;灭菌的方法较多,广泛使用的是高温灭菌,其中最常用的是高压蒸汽灭菌法;此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的;在cm2的蒸汽压力下,温度可达121℃;一般只要维持15~20min,就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子;微生物的接种技术是生物科学研究中的一项最基本操作技术;为了确保纯种不被杂菌污染,在整个接种过程中,必须进行严格的无菌操作;在实验过程中必须牢固树立无菌概念,经常保持实验台及周围环境的清洁,严格无菌操作,避免杂菌的污染,这是保证实验成功的必要条件;如将微生物接种到适合其生长的固体培养基表面,在适宜的温度下一般细菌37℃：霉菌等28℃,培养一段时间一般24~48h后,少量分散的菌体或孢子就可生长繁殖成肉眼可见的细胞群体,此即菌落;如平板上的菌落是由单个细胞或单个孢子生长繁殖而成的,就是一个纯种细胞群或克隆；若培养后大量菌落聚集在一起形成的为菌苔;不同种的微生物可形成大小、形态各异的菌落,根据微生物菌落形态的不同,可初步鉴别出四大类微生物：细菌、放线菌、酵母菌和霉菌;细菌的菌落呈圆形、较小而薄、透明或不透明、质地“细腻”,有的具有色泽,有的边缘不整齐,有的表面湿润、光滑,有的表面干燥有褶皱;此外,细菌常因分解含氮化合物而产生臭味;酵母菌的菌落通常比细菌菌落大,圆形、厚、不透明、色素单一,多为乳白,少数为橙或红色;酵母菌因普遍能发酵含碳有机物产醇,故菌落多伴有酒香味;防线菌菌落小而致密,或坚硬、或呈粉状;不少放线菌还产生特殊的土腥味;霉菌菌落大而疏松、或大而紧密;气生菌丝会发育形成一定形状、构造和色泽的子实器官,所以菌落表面往往有肉眼可见的构造和颜色;三、实验材料人体表和空气中的微生物;四、实验器材与试剂1.器材恒温培养箱、无菌平皿、电炉、酒精灯、火柴、无菌棉签和记号笔;2.试剂牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、酵母膏葡萄糖培养基简称YPD、高氏一号培养基和查氏培养基;五、实验操作I.融化培养基将装有无菌培养基的三角瓶置水浴中煮沸,待培养基融化后取出,当冷至50~60℃左右时,进行下一步;II、倒平板有持皿法和叠皿法,操作要点如下：1.持皿法1将无菌培养皿叠放在酒精灯左侧,以便拿取;2点燃酒精灯;3酒精灯旁,左手握三角瓶底部,倾斜三角瓶,右手旋松棉塞,用右手小指与小尾鱼际即小指边缘夹住棉塞并将其拔出切勿将棉塞放在桌上,随之将瓶口在火焰上过一下不可灼烧,以防爆裂,以杀死可能沾在瓶口的杂菌;然后将三角瓶从左手换至右手用拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部;操作中瓶口应保持在火焰2~3cm,瓶口始终向着火焰,以防空气中微生物的污染;左手拿起一套平皿,用无名指和小指托住皿底,用中指和拇指夹住皿盖,食指于皿盖上为支点,在火焰旁,打开皿盖,让三角瓶伸入,随后倒入培养基;一般倒入15ml左右培养基即可铺满整个皿底;盖上皿盖,置水平位置待凝;然后将三角瓶移至左手,瓶口在次过火并塞紧瓶盖;2. 叠皿法此法适于在超干净台上操作,基本步骤同持皿法;不同之处是左手不必持皿,而是将瓶皿叠放在酒精灯的左侧并靠近火焰;按上述方法用右手拿三角瓶,左手打开最上面的皿盖,倒入培养基,盖上皿盖后即移至水平位置待凝;再依次倒下面的平皿;操作中瓶口始终向着火焰,以防空气中微生物的污染;III、贴标签待培养基完全凝固后,在皿底帖上标签,注明检测类型,组别及日期也可用记号笔书写在皿底IV、检测方法环境中微生物种类多样,检测方法也各异,先选几种列举如下：1.空气检测实验室空气中的微生物时,只要打开无菌平板的皿盖,让其暴露在空气中一段时间5~10min然后将皿盖盖上即可;2.桌面检测实验台桌面微生物是,可用一根无菌棉签,先在无菌平板的图4-1 含菌棉签平板划线示意图左：开启皿盖法右：划线示意图一个区域内湿润和试划几下,然后用其擦抹桌面等物体表面,在以此棉签在平板的另一区域作来回划线接种如图4-1;本操作应以无菌操作要求进行,即在火焰旁用左手拿起平板,用中指无名指和小指托住皿底部,用食指和大拇指夹住皿盖并开成一缝,右手持棉签在培养基表面划线接种,无菌棉签湿润和试剂区可作为无菌对照;3.头发移去放在桌面上的无菌平板的皿盖,是头发部位位于平板的上方,并用手指拨动头发数次,在盖上皿盖即可;4.手指可用未洗的手指先在无菌平板的培养基一侧约一半的面积作划线接种,并在皿底作好标记;然后用肥皂、流水洗手,用洗净的手指于平板培养基的另一侧作同样的划线接种,盖好皿盖;待培养后比较两杂菌生长的情况;5.口腔打开无菌平板培养基的皿盖,使口对着平板培养基的表面,以咳嗽或打喷嚏的方式接种,然后盖上皿盖;V、培养将以上各种检测平板倒置于28℃培养箱中培养,至下周实验时观察并计数各平板上的菌落数;VI、观察注意观察不同类型菌落的大小、外形和颜色等特征,将观察结果记录在实验报告上;VII、清洗观察记录完毕后,将含菌平板放在沸水中煮30min以上,杀死培养基表面生长的各种微生物,然后清洗并晾干培养皿;六、思考题1.通过本实验后,谈谈你对微生物的分布以及数量的认识;2.本实验中那些步骤属无菌操作为什么3.如何描述菌落的形态特征。

有关环境微生物检测的实验设计生命科学与技术学院09级12班李梦宇有关环境微生物检测的实验设计一、实验目的：由于空气中存在各种微生物，而微生物种类、含量是衡量一个地方空气质量好坏的指标，本实验旨在抽测不同环境的空气样本，检测其微生物数目，间接反映其空气质量。

同时学习微生物培养及接种方法，了解不同微生物的菌落形态。

二、实验内容：实验空气样本取实验室，卫生间，楼梯口，室外四个不同场所离地面约70厘米处，接种统一为开盖25分钟。

接种温度为37度恒温，接种时间是48h(注：有通风口的地方平板放置于各通风口等距处)三、实验步骤：1、大组成员分为四个小组，分别对四个场所的空气进行采样。

2、清洗双手，并用酒精棉球擦拭。

领取平板用报纸包好。

3、选好采样本的场所位置，并放置一张凳子，将平板放在上面，统一揭盖接种25分钟。

4、收回平板，贴上标签于37度恒温培养箱中培养，48h后记录并分析。

四、观察结果五、实验样本的采集条件：温度：15.2℃~17℃湿度：70%~79%气压：980~986hPa六、实验结果分析：七、立项意义：在各种微生物的灭菌方法中，紫外杀菌是经常使用的一种常规方法，但是由于空气的流动等原因，超净工作台杀菌后只能保持一段时间的相对洁净。

本实验分别测定紫外杀菌后不同时间段的空气微生物含量，以测定不符合所需无菌条件的临界时间，以此提供一个超净工作台工作的最大时间。

八、参考文献：1、黄秀梨. 微生物学. 北京：高等教育出版社.2、周德庆. 微生物学教程. 北京：高等教育出版社.3、沈萍.微生物学. 北京：高等教育出版社.4、杨汝德. 现代工业微生物学. 广州：华南理工大学出版社.5、杨颐康. 微生物学. 北京：高等教育出版社.6、曹军卫等. 微生物工程. 北京：科学出版社.7、李阜棣胡正嘉. 微生物学（第五版）. 北京：中国农业出版社.8、黄文芳, 张松. 微生物学实验指导. 广州：暨南大学出版社.9、沈萍, 范秀容, 李广斌. 微生物学实验. 北京：高等教育出版社.。