Micro-Tom番茄转基因植株再生体系的优化

番茄农杆菌介导基因转化技术体系的优化与番茄LeJA2基因的功能研究目前,杀虫剂和除草剂的大剂量应用对环境造成了很大的破坏,对人类的身体和生活质量也造成了不好的影响。

高等植物在长期的进化过程中形成了复杂而精细的抗性反应机制以抵抗昆虫的侵害。

深入认识植物对昆虫抗性的的分子机理将会为利用植物自身的抗性建立环境友好的控制农业害虫的策略提供理论依据。

目前所鉴定的信号分子主要包括多肽信号分子系统素(Systemin)以及来源于不饱和脂肪酸的植物激素茉莉酸(JA),从分子水平对二者所介导的抗性反应过程进行遗传学解析,鉴定其中的重要组分(功能基因)并对其功能进行深入研究。

本研究优化了番茄遗传转化体系;同时利用反向遗传学原理,构建了LeJA2(Lycopersicon es-culentum jasmonic acid 2)的过量表达载体和RNAi 表达载体,通过农杆菌介导的转基因技术,获得两种类型的转基因苗,通过对两种类型的转基因苗的性状鉴定和PPO活性的测定,对LeJA2的功能进行了初步的预测。

主要研究的结果如下:1.建立了农杆菌介导的番茄遗传转化体系对农杆菌介导的番茄转化LeJA2基因系统进行了优化,研究了农杆菌侵染时间、侵染温度和侵染浓度三个因素对番茄愈伤组织形成的影响,寻求影响基因转化的主要因素,获得了较好的番茄农杆菌侵染体系。

2.获得了转基因番茄植株以子叶为转化受体,使用高效农杆菌介导遗传转化体系将LeJA2基因和LeJA2-RANi基因导入番茄,获得了20株LeJA2过量表达的番茄抗性植株和35株LeJA2基因沉默抗性植株,PCR检测结果表明卡那抗性株均能扩增出1050和517bp的目的条带,证明基因已经整合到番茄基因组中。

3.功能验证对转基因番茄植株PPO活性进行了初步检测。

通过PPO活性测定结果得出:植株机械损伤处理前,过量表达LeJA2基因的转基因植株PPO染色后呈现深褐色,而对照和转LeJA2-RNAi基因植株PPO染色后仍然呈现正常的汁液的绿色。

番茄植株再生体系的建立
赵燕;刘清波;杜元正;任春梅
【期刊名称】《北方园艺》
【年(卷),期】2010(000)023
【摘要】选用杂交番茄早丰(07-13)为材料,以下胚轴、子叶作为外植体,根据控制单一变量与多重比较的原则,设计添加不同种类和不同浓度的植物生长物质的培养基配方,建立了一套简便有效地番茄再生体系.结果表明:愈伤组织的诱导及增殖,以配方MS+6-BA 2.0 mg/L+IAA 0.3 mg/L 为佳;诱导不定芽的分化,以培养基MS+6-BA 2.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L为佳;生根培养基以MS+NAA 0.1 mg/L+IAA 0.1 mg/L为佳,生根率高且根粗壮.
【总页数】4页(P129-132)
【作者】赵燕;刘清波;杜元正;任春梅
【作者单位】湖南农业大学,生物科学技术学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学,生物科学技术学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学,生物科学技术学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学,生物科学技术学院,湖南,长沙,410128
【正文语种】中文
【中图分类】S641.2
【相关文献】
1.Micro-Tom番茄转基因植株再生体系的优化 [J], 邱实;张文举;许馥慧;邓志瑞
2.樱桃番茄植株再生体系的研究 [J], 蔡小宁;周芸;朱进;贲爱玲;张边江
3.番茄高效植株再生体系及基因转化体系的建立 [J], 姜国勇;金德敏
4.‘黑珍珠’番茄植株再生体系的研究 [J], 许飞云;张赵男;侯雨辰;王英正;王龙;王珂;徐进;赵宇
5.番茄子叶、下胚轴植株再生体系的建立 [J], 苏彩霞;霍秀文;庆海;刘杰才
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阔叶猕猴桃GalDH基因植物表达载体的构建及转化番茄的研究抗坏血酸(ascorbic acid, AsA)在生物体中具有重要的代谢功能和抗氧化作用。

研究表明AsA不仅是保证人类健康所必需的营养物质之一,而且对于植物自身的抗氧化、光合保护以及调节生长发育等都具有非常重要的作用。

L-半乳糖脱氢酶(L-galactose dehydrogenase,GalDH)是植物抗坏血酸L-半乳糖合成途径中关键酶之一,它可能是L-半乳糖合成途径中的调控位点。

本试验在获得阔叶猕猴桃(Actinidia latifolia Merr.)GalDH基因全长cDNA的基础上,构建GalDH的过量植物表达载pCSB/GalDH和RNA表达载体pHGRV/GalDH,并将过量表达载体pCSB/GalDH转入根癌农杆菌EHA105中,然后通过农杆菌介导法将pCSB/GalDH基因导入番茄(Solanum lycopersicum L)Micro-Tom,筛选获得抗性植株,对GalDH基因功能进行验证,并为高等植物抗坏血酸合成奠定材料基础。

获得的主要结论如下:1.建立了Micro-Tom番茄高频再生体系试验探讨了不同激素浓度配比、暗培养时间、头孢霉素浓度等条件对再生影响,探讨了IAA对生根的影响,结果表明不定芽再生最佳的培养基配方为:MS+ZT 2.0mg/L+IAA 0.2mg/L;在MS+0.3mg/LIAA的培养基上可以再生出高质量的根,移栽成活率在80%。

预培养2d,头孢霉素200mg/L可以再生出高频率的愈伤组织和不定芽。

2.构建了GalDH基因过量植物表达载体pCSB/GalDH和RNAi表达载体pHGRV/GalDH用限制性内切酶BamHI和KpnI将已克隆的阔叶猕猴桃GalDH基因从克隆载体pMD-19T上切下,定向插入到植物表达载体pCSB,成功构建了阔叶猕猴桃GalDH基因植物过量表达载体pCSB/GalDH。

不同番茄品种再生体系的比较
赵明珠;张美萍
【期刊名称】《北方园艺》
【年(卷),期】2011(000)009
【摘要】以"大红番茄"、"红牛奶番茄""粉冠888"3种番茄为试材,选取7d苗龄无菌苗的子叶和胚轴为外植体,对外植体基因型、分化培养基及生根培养基进行筛选,建立番茄再生体系,以期为进一步进行人参大片段DNA转化番茄的研究莫定基础.结果表明:"粉冠888"可为遗传转化提供大量稳定的外植体来源,适宜的分化培养基为MS+6-BA1.0～2.0mg/L+IAA0.2mg/L,生根培养基为MS+IAA0.5mg/L.【总页数】3页(P127-129)
【作者】赵明珠;张美萍
【作者单位】吉林农业大学生命科学学院,吉林,长春,130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林,长春,130118
【正文语种】中文
【中图分类】S641.203.6
【相关文献】
1.不同苜蓿栽培品种再生体系的差异性比较 [J], 张春燕;祝建波;倪娜娜;陈创夫
2.不同品种类型番茄的离体再生体系研究 [J], 贺玺强;徐恒戬;赵汝凤
3.不同甜瓜品种再生体系的比较研究 [J], 付秋实;谭明明;王烨;王怀松
4.不同苜蓿品种再生体系的差异性比较 [J], 王娟;师尚礼
5.新疆地区不同番茄品种的光合特异性比较及高光效品种筛选 [J], 李玉姗; 宋羽; 马艳; 吴晓
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加工番茄遗传转化再生体系的建立张录霞;郝青南;马超;段小瑜;牛建新;马兵钢【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2008(017)003【摘要】加工番茄种子出芽后7～8d,子叶剪成约0.2～0.4cm,0.3～0.5cm的小块,以MS+B5为基本培养基,附加IAA0.2mg/L分别与0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mg/L的6-BA/ZT/TDZ组合;6-BA2.0mg/L分别与0.0,0.05,0.1,0.2,0.5,1.0mg/L的IAA/IBA/NAA组合.经诱芽比较,在不同浓度6-BA/ZT/TDZ与0.2mg/LIAA组合中,出芽率最高的培养基为MS+ZTl.0mg/L+IAA0.2mg/L和MS+TDZ2.0mg/L+IAA0.2mg/L.在不同浓度的IAA/IBA/NAA与6-BA2.0mg/L 组合中,IAA明显优于NAA和IBA,筛选出MS+2.0mg/L6-BA+1.0mg/LIAA为最佳生芽培养基.以l/2MS添加NAA//BAO.0,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L进行生根比较,再生芽在MS+0.5mg/L IBA生根培养基上生根最好,并发育成完整的小植株.【总页数】6页(P236-241)【作者】张录霞;郝青南;马超;段小瑜;牛建新;马兵钢【作者单位】石河子大学农学院园艺系,新疆,832000;石河子大学农学院园艺系,新疆,832000;石河子大学农学院园艺系,新疆,832000;石河子大学农学院园艺系,新疆,832000;石河子大学农学院园艺系,新疆,832000;石河子大学农学院园艺系,新疆,832000【正文语种】中文【中图分类】S641.2【相关文献】1.蝴蝶兰高效再生体系与遗传转化体系的建立 [J], 盛慧2.红掌高效再生体系及遗传转化体系的建立 [J], 盛慧;杜伟玲3.红番3号加工番茄遗传转化再生体系的建立 [J], 乔亚红;郑银英;李诗林;田桂英;张丽丽;林涛;向本春4.甘蓝型油菜带节子叶再生体系的建立及遗传转化应用 [J], 廖志强;王小武;孙亮;魏志英5.罗汉果遗传转化受体再生体系的建立及发根农杆菌转化初探 [J], 曾黎辉;吴金寿;柯石山;刘芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

番茄叶片胞壁转化酶cDNA克隆及反义沉默表达分析吴正景;程智慧;孟焕文【摘要】Total RNA was isolated from tomato (cv. 'Zhongshu No. 4') leaves using the specific primers designed according to the sequence of cell wall invertase gene in GenBank. A fragment about 416bp was amplified by reverse transcription and polymerase chain reaction. Sequence analysis showed the amplified fragment was the LIN6 cDNA fragment of the cell wall invertase gene. The fragment was inserted into plant expression vector pBinAR between CaMV 35S promoter and OCS terminator to form an antisense plant expression vector pBinAR-aLIN6. Five transgenic tomato plants (cv. MicroTom) , identified by PCR and Southern hybrids detection, were obtained through transferring of EHA105/pBinAR-aLIN6. The activity of cell-wall invertase in the leaves of those five antisense plants was found decreasing by 67. 9%, 13. 4%, 73. 5%,85. 6% and 58. 0% ,respectively.%参考GenBank登录的植物胞壁转化酶基因序列,设计1对PCR引物,以番茄(‘中蔬四号’)叶片总RNA的反转录产物为模板,扩增出长为416 bp的cDNA片段,Blast 结果表明,其为番茄胞壁转化酶基因LIN6片段；将其反向插入双元载体pBinAR的CaMV 35S启动子和OCS终止子间,构建反义植物表达载体pBinAR-aLIN6.通过农杆菌EHA105介导转化番茄MicroTom,PCR和Southern斑点杂交检测表明,共获得5株转基因番茄；生化检测表明,5个转化植株叶片胞壁转化酶活性分别比未转化植株下降67.9％、13.4％、73.5％、85.6％和58.0％.【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2012(032)002【总页数】5页(P241-245)【关键词】番茄;胞壁转化酶;RT-PCR;反义沉默【作者】吴正景;程智慧;孟焕文【作者单位】西北农林科技大学园艺学院,陕西杨陵712100;河南科技大学林学院,河南洛阳451003;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨陵712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨陵712100【正文语种】中文【中图分类】Q786当植物遭受胁迫，例如受伤或病菌侵染，有许多基因参与的一系列防御反应受到诱导。

农杆菌介导的番茄Micro-Tom遗传转化体系的建立陈双臣;刘爱荣;王凤华;王菲;周洲【摘要】Micro-Tom番茄植株矮小,生长密度高,生命周期短,转化效率高,成为功能基因组学研究的新型模式植物.对影响Micro-Tom遗传转化频率的共培养时间、AS的添加、工程菌液浓度和抑制农杆菌所用抗生素种类进行了分析,建立了Micro-Tom稳定高效的遗传转化体系.以bar基因设计引物对转化群体进行PCR 检测,阳性率为72.3%,平均插入位点数为1.8个.遗传体系的建立为Micro-Tom在植物生物学研究中提供理论基础.【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2010(025)002【总页数】4页(P112-115)【关键词】Micro-Tom;番茄;模式植物;根癌农杆菌;遗传转化【作者】陈双臣;刘爱荣;王凤华;王菲;周洲【作者单位】河南科技大学,林学院,河南,洛阳,471003;河南科技大学,林学院,河南,洛阳,471003;河南科技大学,林学院,河南,洛阳,471003;河南科技大学,林学院,河南,洛阳,471003;河南科技大学,林学院,河南,洛阳,471003【正文语种】中文【中图分类】S641.03作为重要的模式经济作物，番茄基因组较小(950 Mb，编码35 000个基因，大部分基因位于占整个基因组25%的常染色质部分)，遗传学基础雄厚，并且具有许多拟南芥、水稻等模式植物所不具备的生物学现象(如果实的发育、成熟过程等)[1]。

番茄突变体库的建立将为具有重要农艺性状基因的克隆及具有自主知识产权的相关基因的获得奠定基础。

Micro-Tom是一种番茄突变体，它保留了普通番茄作为模式植物的基本特征。

与普通番茄相比，Micro-Tom更适合应用于高通量诱变，其植株矮小的特征节省了植株培育所需的空间和管理用工，生命周期较短的特点可加快研究进程，易于遗传转化的优势利于T-DNA或Ac/Ds转座子插入突变研究的开展[2，3]。

农杆菌介导的番茄遗传转化的研究进展苗青;李正国;杨迎伍【摘要】番茄(Lycopersicon esculentum)传转化体系对其功能基因的研究和基因工程育种有重要影响,对农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的番茄遗传转化的研究进展进行了综述,主要包括影响番茄遗传转化效率的几个因素,如番茄的基因型、外植体状态、预培养和侵染过程、分化培养基中的激素和抗生素配比以及不同的外源基因等问题.并对今后的番茄遗传转化研究进行了展望.【期刊名称】《热带亚热带植物学报》【年(卷),期】2011(019)006【总页数】6页(P585-590)【关键词】番茄;遗传转化;农杆菌;研究进展【作者】苗青;李正国;杨迎伍【作者单位】重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆市高校功能基因与调控新技术重点实验室,重庆400030;重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆市高校功能基因与调控新技术重点实验室,重庆400030;重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆市高校功能基因与调控新技术重点实验室,重庆400030【正文语种】中文【中图分类】Q785植物遗传转化是将外源遗传物质导入植物受体细胞，使其在受体细胞中整合表达并且能够稳定遗传。

目前植物的遗传转化是植物基因工程的核心技术，该技术的建立和发展，使人们能够根据需求将特定的基因在不同种属植物之间进行表达，为植物改良提供了新的途径。

目前常见的植物遗传转化技术有以下几种：农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化法、基因枪法、显微注射法、PEG 法、花粉管通道法和超声波法等。

在这些方法中，农杆菌介导的遗传转化目前在植物中应用最广泛[1-2]。

番茄(Lycopersicon esculentum)是一种世界性种植的最重要的鲜食和加工原料。

它的基因组较小，是一种理想的模式植物[3]。

另外，番茄还具有自花授粉易于纯合、生长周期短(45～100 d)、在温室内可周年生长等优点，因而其遗传转化研究备受关注。

提高农杆菌介导番茄遗传转化效率的研究曹慧颖;夏润玺;吕淑霞;马镝;姜义仁;秦萍【期刊名称】《北方园艺》【年(卷),期】2008(000)001【摘要】利用农杆菌介导法对番茄进行遗传转化,比较了不同的农杆菌种类、农杆菌侵染时间、外植体种类及番茄品种对农杆菌侵染效率的影响.转化后得到的再生植株,利用PCR、Southern杂交检测GUS基因是否整和进入基因组.结果表明:农杆菌介导法成功介导了GUS基因导入番茄.农杆菌EHA105侵染番茄的效率明显高于LBA4404,侵染时间3 min较好.子叶外植体的转化明显优于下胚轴,黄色串珠樱桃番茄的遗传转化效率高于中蔬5号;优化的转化条件可以使番茄获得较高的遗传转化效率.【总页数】3页(P178-180)【作者】曹慧颖;夏润玺;吕淑霞;马镝;姜义仁;秦萍【作者单位】沈阳农业大学,生物科技学院,辽宁,沈阳,110161;沈阳农业大学,生物科技学院,辽宁,沈阳,110161;沈阳农业大学,生物科技学院,辽宁,沈阳,110161;沈阳农业大学,生物科技学院,辽宁,沈阳,110161;沈阳农业大学,生物科技学院,辽宁,沈阳,110161;沈阳农业大学,生物科技学院,辽宁,沈阳,110161【正文语种】中文【中图分类】S154.38+3;S641.203.2【相关文献】1.根癌农杆菌介导fw2．2和PL基因对Micro-Tom番茄的遗传转化研究 [J], 孙瑶;田嘉;林静;李疆2.农杆菌介导番茄"美粉1号"遗传转化体系优化研究 [J], 李立芹3.提高根癌农杆菌介导的香石竹遗传转化效率的研究 [J], 林荣呈;陈龙清;包满珠;孙振元4.超声波与表面活性剂协同处理显著提高农杆菌介导大豆遗传转化的抗性丛生芽率和瞬时表达效率 [J], 郭兵福; 郭勇; 王俊; 张丽娟; 金龙国; 洪慧龙; 常汝镇; 邱丽娟5.提高农杆菌介导小麦遗传转化效率的几个因素 [J], 于惠敏;夏光敏;侯丙凯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

番茄micro-TOM活体再生体系的建立曹慧颖;王玉莹;孙建坤;刘玲莉;张立军;阮燕晔;夏润玺【摘要】Tomato (Solanum lycopersicum L.)micro-TOM is a model organism for biology study. Its regeneration system in vitro is of vital importance for genetic transformation and developmental biology study. But tomato micro-TOM tissue culture is not only time-consuming and tedious, but also frequently polluted by microorganism. This experiment introduces a new method of regeneration system in vivo by removing axillary and apical buds of tomato. The method has high speed and efficiency, and does not rely on exogenous hormone. It has layed a foundation for simplifying tomato genetic transformation and provided a good material for plant regeneration mechanism study.%番茄micro-TOM 是生物学研究的模式植物，它的离体再生体系对遗传转化及发育生物学研究至关重要。

但是micro-TOM组培再生体系费时费力，容易污染。

本试验通过对活体植株进行去头去腋芽诱导，建立了高效快捷、不依赖外源激素的番茄micro-TOM 活体再生体系，为简化番茄遗传转化奠定了基础，也为植物再生机理研究提供了良好的实验材料。

西北农业学报㊀２０１９,２８(４):５７８Ｇ５８５A c t aA gr i c u l t u r a eB o r e a l i Ｇo c c i d e n t a l i sS i n i c a 网络出版日期:２０１９Ｇ０４Ｇ１７㊀d o i :１０．７６０６/j．i s s n ．１００４Ｇ１３８９．２０１９．０４．０１０网络出版地址:h t t p ://kn s ．c n k i ．n e t /k c m s /d e t a i l /６１．１２２０．S ．２０１９０４１６．１６２１．０１１．h t m l S l S P ５G ３基因对 M i c r o ＧT o m 番茄开花和产量的影响收稿日期:２０１８Ｇ０９Ｇ１３㊀㊀修回日期:２０１８Ｇ１１Ｇ２０基金项目:节能日光温室结构优化与配套技术开发研究项目(２０１７Z D X M ＧN Y Ｇ０５７);国家自然科学基金青年项目(３１８０１９０３).第一作者:许达为,男,硕士研究生,从事光质调控和番茄开花基因功能研究.E Ｇm a i l :１３７７２０５０３８５＠１６３．c o m通信作者:邹志荣,男,教授,博士生导师,主要从事温室环境和温室作物栽培方面的研究.E Ｇm a i l :z o u z h i r o n g２００５＠h o t m a i l ．c o m 许达为１,曹㊀凯１,２,邹佳宁１,王昊天１,邹志荣１(１．西北农林科技大学园艺学院,农业部西北设施园艺工程重点实验室,陕西杨凌㊀７１２１００;２．江苏省农业科学院,农业部长江中下游设施农业工程重点实验室,南京㊀２１００１４)摘㊀要㊀番茄(S o l a n u ml y c o pe r s i c u m L ．)开花时间直接决定后期的产量和经济效益.为了探讨番茄S l ＧS P ５G ３基因功能,以 M i c r o ＧT o m 番茄为试验材料,观察S l S P ５G ３基因时间和空间的变化规律及对番茄开花和产量的影响.结果发现S l S P ５G ３的表达响应光周期变化,主要在叶片中表达,且表达量不受生长发育时期的影响.在 M i c r o ＧT o m 番茄中过表达S l S P ５G ３,获得过表达植株L ８和L １２.与野生型植株相比,L ８和L １２植株开花所需叶片数分别增加２．３４和２．６７片;叶片鲜质量分别增加９８．４３％和７６．８９％;叶片干质量分别增加６２．７９％和４１．８６％;果实单果质量分别增加４９．６５％和３６．１３％;单株产量分别增加３４．５０％和２６．７４％,并且S l S P ５G ３过表达植株还显著提升了上游开花转录因子S l C D F ３的表达量.S l S P ５G ３通过调控开花时间,改变植株生长形态,对提升植株产量产生重要影响.关键词㊀番茄;S l S P ５G ３;开花;单果质量;产量中图分类号㊀S ６４１．２㊀㊀㊀文献标志码㊀A㊀㊀㊀㊀㊀文章编号㊀１００４Ｇ１３８９(２０１９)０４Ｇ０５７８Ｇ０８㊀㊀开花是植物从营养生长到生殖生长过渡的重要阶段.在被子植物和裸子植物中均发现磷脂酰乙醇胺结合蛋白(p h o s p h a t i d yl e t h a n o l a m i n e b i n d i n gp r o t e i n ,P E B P ),它们是一类既能促进开花又能抑制开花的因子,可以分为３个亚家族,分别为F T Ｇl i k e 亚家族㊁T F L １Ｇl i k e 亚家族和M F T Ｇl i k e 亚家族[１Ｇ２].F T Ｇl i k e 亚家族作为P E B P 家族中的重要成员,在控制开花时间㊁花序发育和产量方面产生重要影响.F T Ｇl i k e 蛋白促进植物开花已经在多个物种中得到证实,如杨树(P o pu l u s s p p )[３]㊁苹果(M a l u s d o m e s t i c a )[４]㊁甜菜(B e t av u l g a r i s )[５]㊁马铃薯(S o l a n u mt u b e r o s u m )[６]㊁烟草(N i c o t i a n a t a b a c u m )[７]和水稻(O r yz a s a t i v a )[８].虽然几乎所有F T Ｇl i k e 蛋白都作为开花促进因子起作用,但在甜菜和烟草中,有的促进开花,有的抑制开花.甜菜中B v F T １蛋白在开花中起抑制作用,B v F T ２蛋白起促进作用[５].在烟草的４个F T Ｇl i k e 蛋白中,N t F T １㊁N t F T ２和N t F T ３蛋白抑制开花,N t F T ４蛋白促进开花[７].F T Ｇl i k e 蛋白还会影响花的发育,番茄S F T 基因是拟南芥F T 的同源基因,番茄s ft 突变体只有１~２朵花,且花萼叶片化.番茄中过表达S F T 基因,番茄合轴分枝的叶片数从３片降低到２片[９Ｇ１０].F T Ｇl i k e 蛋白通过参与源库调控改变果实性状和产量指标,在大豆(G l yc i n em a x L ．)中,开花促进因子G m ＧF T 和开花抑制因子G m T F L １的相对含量协调了营养生长与生殖生长的关系,从而调控了开花时间和开花后荚果的发育[１１Ｇ１３].番茄成熟叶片中S F T 基因合成的成花素物质,可以通过筛管细胞转运到库器官尤其幼叶中,影响库器官的形成[１４].目前,在番茄中已鉴定出４个表达的F T Ｇl i k e蛋白分别为S F T ㊁S l S P ５G ㊁S l S P ５G ２和S l ＧS P ５G ３[１５].其中S l S P ５G ３蛋白在番茄中与开花和果实产量相关的功能未知,为明确其生物学功能,本试验分析了S l S P ５G ３在番茄 M i c r o ＧT o m 中的表达规律,并通过转基因分析初步发现S l ＧS P５G３在调控番茄开花和产量方面发挥了重要作用,为揭示F TＧl i k e蛋白在调节植物生长发育过程中的作用机制提供了理论依据.１㊀材料与方法１．１㊀试材样品的获得试验材料为矮生番茄(S o l a n u ml y c o p e r s iＧc u m L．) M i c r oＧT o m 和S l S P５G３基因过表达株系.试验材料在西北农林科技大学农业部设施工程重点实验室人工气候箱(R D NＧ１０００DＧ４,宁波东南仪器有限公司)中培养,栽培环境设定为:光照时长１２h,光照强度１００μm o l m－２ s－１,昼夜温度２５ħ/１８ħ,相对湿度６０％~７０％.取野生型幼苗的根㊁茎㊁茎尖㊁花㊁子叶和真叶,用液氮速冻保存,用于R N A的提取.１．２㊀植株总R N A的提取及S l S P５G３基因的表达水平分析采用R N A试剂盒(O m e g a公司,中国广州)提取番茄组织总R N A,采用P r i m eS c r i p t T M R T r e a g e n tK i tw i t h g D N A E r a s e r(T a k a r a公司,中国大连)完成反转录c D N A的合成.q R TＧP C R采用S Y B RʻR P r e m i xE xT a q T MⅡ(T l iR N a s e H P l u s)(T a k a r a公司,中国大连), q R TＧP C R的反应程序为:预变性９５ħ３０s;变性９５ħ５s,退火６０ħ３４s,共４０个循环;融解曲线９５ħ５s,６０ħ１m i n,冷却４０ħ１s,可以适当地增加循环数,获得融解曲线数据,以番茄A c t i n基因作为内参[１６],重复３次,然后采用公式计算基因的相对表达量.引物(表１)的合成及目的基因测序均由奥科鼎盛生物科技公司(中国杨凌)完成.１．３㊀质粒的构建和遗传转化在番茄基因组数据库(h t t p s://s o l g e n o m i c s．n e t)里找到S l S P５G３(S o l y c１１g００８６５０)的C D S 序列,利用V e c t o rN T I设计引物S l S P５G３ＧF１㊁S l S P５G３ＧR１通过P C R扩增,两端分别加入同源重组序列(图１),以番茄嫩叶的c D N A为模板进行P C R扩增.P C R的反应程序为:９５ħ预变性５m i n,９５ħ变性３０s,５５ħ退火３０s,３５个循环;７２ħ延伸１０m i n,４ħ保存.P C R产物用１２g/L 的琼脂糖凝胶电泳并切胶回收目的条带.利用同源重组的方法连接到过表达载体p H e l l s g a t e８(泽叶生物科技有限公司,中国上海)中进行测序,测序正确的质粒用于转化农杆菌.将野生型番茄 M i c r oＧT o m 种子置于超净工作台上,清水浸泡１０m i n,用体积分数为７５％酒精清洗种子３０s,体积分数为２％次氯酸钠溶液震荡１５m i n,灭菌水清洗种子２~３次.清洗过的种子接种到培养基中,移入西北农林科技大学园艺学院组织培养室,培养条件为光照时间１２h,昼夜温度为２５ħ/１８ħ,培养７~９d至２片子叶完全展平后进行目的基因的转化.参照叶志彪等[１７]建立的番茄转化体系并略有改动,经过侵染㊁筛选培养和继代培养㊁生根培养等过程获得卡那霉素抗性植株.结合抗生素筛选㊁P C R和实时荧光定量P C R检测阳性苗目的基因表达水平,鉴定过表达植株.１．４㊀转基因植株开花时间和上游基因的测定选取野生型番茄 M i c r oＧT o m (WT)和过表达株系(L８㊁L１２)移入光照培养箱培养(培养条件同上),开花后随机选取３株作为一组记录开花所需的叶片数,取平均值.在番茄基因组数据库(h t t p s://s o l g e n o m i c s．n e t)里找到编码F TＧl i k e基因上游转录因子基因S l S P C D F１(S o l y c０３g１１５９４０)㊁S l S P C D F２(S o l y c０５g００７８８０)㊁S l S P C D F３(S o l y c０６g ０６９７６０)㊁S l S P C D F４(S o l y c０６g０６９７６０)㊁S l S P C D F５(S o l y c０２g０８８０７０)㊁T C O L１(S o l y c０２g０８９５４０)㊁T C O L２(S o l y c０２g８９５０００)和T C O L３(S o l y c０２g０８９５２０)[１８Ｇ１９]的C D S序列,利用V e c t o rN T I设计实时荧光定量P C R引物(表１),操作方法同上.１．５㊀转基因植株地上部干鲜质量及产量的测定在野生型番茄 M i c r oＧT o m (WT)和T２代过表达株系(L８㊁L１２)中随机选取５株植株挂牌标记,每株留３穗果打顶.试验结束后将植株地上部分按茎叶分开,采用万分之一天平称量其鲜质量.然后将称量后的茎叶放在烘箱中８０ħ下７２h烘至恒量,采用万分之一天平称量茎叶干质量.果实成熟后,统计每株番茄的果实数量及单果质量,计算单株产量.１．６㊀数据处理与分析用S P S S２０．０数据处理软件对试验数据进行方差分析及显著性检验,用E x c e l２０１０进行数据分析及图表制作.９７５４期许达为等:S l S P５G３基因对 M i c r oＧT o m 番茄开花和产量的影响表１㊀构建过表达载体㊁实时荧光定量P C R 和阳性苗检验引物序列T a b l e １㊀S e q u e n c e s o f p r i m e r s u s e d i n t h i s s t u d yf o r p l a s m i d c o n s t r u c t i o n ,r e a l Ｇt i m e f l u o r e s c e n t q u a n t i t a t i v eP C Ra n d p o s i t i v e s e e d l i ng ch e c k 基因㊀G e n e引物(５ᶄң３ᶄ)㊀P r i m e r (５ᶄң３ᶄ)构建载体㊀F o r p l a s m i d c o n s t r u c t i o nS l S P ５G ３F １C A A A G T G G T C T C G A G G A A T T A T G A A G T T A T A T G T T A T G A G T C C R １A G C A G G A C T C T A G A C A A G T T T T A T T C G C A A C G A C G A C C A C实时荧光定量㊀F o r r e a l Ｇt i m e f l u o r e s c e n t q u a n t i t a t i v eP C RS l S P ５G ３F ２T C T C T T T A T T T C G T C A A T T G G G R ２A G C A A A T T G C C T T G T A T T G A T C O L １F G A C A G A G A A G C C A G A G T C C T R C C T T G T T T C T G C A T A G G C T TT C O L ２F G G T G T T C T G C C G G G C A G A T T R C G T G A C G C T A A C T T G T T C G C T C O L ３F C T G T G A C G C C C G C A T A C A T G R A A G A A A G G C T G C A G G G G C A C S l C D F １F T C A T G A T T T C T G A A G C C C T TR T C C A T T G G G T T T G A A C A C T G S l C D F ２F G C T G A G A A T T C A C A T A A T A T G C R G A T T G A T C A T T C C C G A T T G TS l C D F ３F A T C T C C A A A T G G G T T A A T T C R A T A G G T T C A C A C A G G G G T A A S l C D F ４F A A C A A T G C A T A A T T G C T C A CR C A T T A T C T C C A A C T A C G T A A C S l C D F ５F C T C C T TG G C C A T A C A T A T G G R G A C A T A G G A A T G C C G G G A A G A c t i nFT C C T A G T A T T G T T G G C C G C C RC T T C A T C T C C C A C A T A G G C G 阳性苗检验㊀F o r p o s i t i v e s e e d l i n g c h e c k S l S P ５G ３F ３A C G C A C A A T C C C A C T A T C C T T C R ３T A T T C G C A A C G A C G A C C AC图１㊀植物超表达载体P h e l l s ga t e ８示意图F i g ．１㊀S c h e m a t i c r e p r e s e n t a t i o no fP h e l l s g a t e ８r e gi o n s o f ３５S ɨS l S P ５G ３２㊀结果与分析２．１㊀ M i c r o ＧT o m 过表达株系中S l S P ５G ３的表达量检测通过根癌农杆菌介导法,将含S l S P ５G ３基因的过表达载体导入番茄中.C T A B 法提取获得的８株再生植株的基因组D N A ,通过阳性苗检验引物S l S P ５G ３ＧF ３㊁S l S P ５G ３ＧR ３进行P C R 扩增,以不含目的基因的空质粒(p H e l l s ga t e ８)作为阳性对照,野生型番茄 M i c r o ＧT o m 植株基因组D N A (WT )为阴性对照,结果显示共有４株扩增出长度为２２２b p 的条带,与目的条带大小一致,即获得４株转基因阳性苗,分别为L ３㊁L ８㊁L １２㊁L １４(图２ＧA ).进一步确定目的基因的表达水平,通过实时荧光定量P C R 分析野生型番茄 M i c r o ＧT o m 和过表达株系L ３㊁L ８㊁L １２㊁L １４中S l S P ５G ３的表达量情况,发现L ８和L １２的表达量明显高于野生型植株,分别增加了４．６２５倍和４倍,进而选取L ８和L １２移入人工气候箱(栽培环境同上)培育T ２代转基因植株进行后续的开花产量指标测定.２．２㊀S l S P ５G ３基因的表达规律在野生型 M i c r o ＧT o m 番茄提取c D N A 中利用引物S l S P ５G ３ＧF 和S l S P ５G ３ＧR ,进行目的基因S l S P ５G ３的实时荧光定量P C R 检测.在日中性条件下,S l S P ５G ３的表达量随光照时间变化,在开始光照时上升,在４h 时达到最大,在进入黑０８５ 西㊀北㊀农㊀业㊀学㊀报２８卷暗后４h达到最低(图３ＧA),推测S l S P５G３可以感受外界光信号.不同叶龄中S l S P５G３的表达量无明显变化趋势,说明其不受生长发育周期的影响(图３ＧB).在番茄植株中,真叶和子叶S lＧS P５G３表达量最高,茎㊁茎尖㊁花和根中基本不表达,说明S l S P５G３的表达具有组织特异性(图３ＧC).㊀㊀A．普通P C R检测转基因植株阳性苗㊀D e t e c t i o no f p o s i t i v e s e e d l i n g i n s t r a n s g e n i c p l a n t b y o r d i n a r y P C R;B．实时荧光定量P C R检测S l S P５G３转基因株系表达量㊀D e t e c t i o no f t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f S l S P５G３i n t r a n s g e n i c l i n e b yq R TＧP C R图２㊀转基因幼苗的P C R检测F i g．２㊀P C Rf o r d e t e c t i o no f t r a n s g e n i c s e e d l i n gs㊀㊀A．S l S P５G３的表达量日变化㊀T h ev a r i a t i o no f t h e e x p r e sＧs i o n l e v e l o f S l S P５G３t h r o u g h o u t t h ed a y;B．植株由上至下８片叶S l S P５G３的表达量变化㊀T h ev a r i a t i o no fe x p r e s s i o no f S lＧS P５G３f r o mt h e t o p８l e a v e s o f p l a n t s;C．不同器官S l S P５G３的表达量变化㊀T h ev a r i a t i o no fe x p r e s s i o no f S l S P５G３i nd i f f e r e n tt i s s u e s图３㊀S l S P５G３表达量变化规律F i g．３㊀T h e v a r i a t i o no f e x p r e s s i o no f S l S P５G３２．３㊀S l S P５G３对开花时间的影响番茄生长发育中每增长一片叶的时间受环境因素影响较小约为４~６d,故番茄的开花时间可以由开花前所需叶片数来衡量[２０].将T２代转基因株系(L８㊁L１２)和野生型番茄 M i c r oＧT o m(WT)催芽后定植于人工气候箱,栽培环境同上,记录开花所需的叶片数.发现L８和L１２开花时间明显晚于WT(图４ＧA,图４ＧB).数据分析L８㊁L１２和WT开花所需叶片数显示,与野生型番茄WT相比,L８和L１２开花所需叶片数明显增加,分别为２．３４和２．６７片.２．４㊀S l S P５G３对上游开花相关基因T C O L s和S l C D F s的影响通过实时荧光定量P C R检测T１代过表达株系(L８㊁L１２)和野生型番茄 M i c r oＧT o m (WT)上游T C O L s和S l C D F s的表达情况.L８㊁L１２和WT中,S l C D F２的表达量最高,S l C D F３的表达量最低.相比于WT,过表达L８㊁L１２明显上调了S l C D F３的表达量,分别增加了４．５０倍和９．６１倍(图５ＧA);在L８㊁L１２和WT中,T C O L１的表达量最高,T C O L３的表达量最低,但与WT相比,L８和L１２并无明显的变化趋势.２．５㊀S l S P５G３对番茄地上部生长和产量的影响S l S P５G３基因过表达对番茄植株地上部形态及产量性状产生了不同程度的影响(表２).与野生型植株(WT)相比,转基因株系L８和L１２叶片鲜质量分别增加９８．４３％和７６．８９％;叶片干质量分别增加６２．７９％和４１．８６％;果实单果质量分别１８５４期许达为等:S l S P５G３基因对 M i c r oＧT o m 番茄开花和产量的影响增加４９．６５％和３６．１３％;单株产量分别增加３４．５０％和２６．７４％,而茎的干鲜质量和单株果数无明显差异.㊀㊀图C 中a 和b 表示各处理间差异显著(P ＜０．０５)㊀a a n dbm e a n s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e (P ＜０．０５)i nD u n c a n s i n f i gu r eC A．S l S P ５G ３过表达植株L ８和野生型植株的开花对比图㊀F l o w e r i n g c o m p a r i s o n o f S l S P ５G ３o v e r Ｇe x p r e s s i n g s t r a i nL ８a n dw i l d t y pe p l a n t s ;B ．S l S P ５G ３过表达植株L １２和野生型植株的开花对比图㊀F l o w e r i n g c o m p a r i s o n of S l S P ５G ３o v e r Ｇe x p r e s s i ng st r a i nL １２a n dw i l d t y p e p l a n t s ;C ．S l S P ５G ３过表达植株和野生型植株的开花所需叶片数㊀N u m b e r o f l e a v e s t o f l o w e r i n g o f S l S P ５G ３o v e r Ｇe x p r e s s i n gp l a n t s a n dw i l d t y pe p l a n t s 图４㊀S l S P ５G ３过表达植株和野生型株的开花时间F i g ．４㊀F l o w e r i n g t i m e o f S l S P ５G ３o v e r Ｇe x p r e s s i n gp l a n t s a n dw i l d t y pe p l a n ts ㊀㊀A．S l S P ５G ３过表达植株和野生型植株对S l C D F s 表达量的影响㊀E f f e c t s o f S l S P ５G ３o v e r Ｇe x p r e s s i n g p l a n t s a n dw i l d t y pe p l a n t s o n t h e e x p r e s s i o nof S l C D F s ;B ．S l S P ５G ３过表达植株和野生型植株对T C O L s 表达量的影响㊀E f f e c t so f S l S P ５G ３o v e r Ｇe x p r e s s i n gp l a n t s a n dw i l d t y p e p l a n t s o n t h e e x pr e s s i o no f T C O L s 图５㊀S l S P ５G ３过表达植株和野生型植株中S l C D F s 和T C O L s 的表达量F i g ．５㊀T h e e x p r e s s i o no f S l C D F s a n d T C O L s i n S l S P ５G ３o v e r Ｇe x p r e s s i n gp l a n t s a n dw i l d t y pe p l a n t s 表２㊀S l S P ５G ３过表达株系和 M i c r o ＧT o m 的地上部生长和产量指标T a b l e ２㊀O v e r g r o u n d g r o w t ha n d y i e l d c h a r a c t e r i s t i c s of S l S P ５G ３o v e r Ｇe x p r e s s i n gs t r a i n s a n d M i c r o ＧT o m 株系S t r a i n 地上部生长指标O v e r g r o u n d g r o w t h i n d i c a t o r s 叶鲜质量/gL e a f f r e s h m a s s 叶干质量/g L e a f d r y m a s s茎鲜质量/gS t e m f r e s hm a s s茎干质量/gS t e m d r y ma s s 产量参数Y i e l d c h a r a c t e r i s t i c s单果质量/gS i n g l e f r u i tm a s s 单株果数N u m b e r o f f r u i t s p e r p l a n t单株产量/gY i e l d p e r pl a n t M i c r o ＧT o m７．６６ʃ０．８０b １．２９ʃ０．１８b ４．８４ʃ０．５７a ０．７６ʃ０．２１a４．２９ʃ０．２４b ９．３３ʃ１．１５a ３９．９４ʃ２．８７b L ８１５．２０ʃ１．１６a ２．１０ʃ０．２１a ５．４２ʃ０．５９a ０．８７ʃ０．０８a ６．４２ʃ０．６５a ８．３３ʃ０．５８a ５３．７２ʃ９．０９a L １２１３．５５ʃ０．６５a １．８３ʃ０．０６a ５．３５ʃ０．７０a ０．８２ʃ０．１０a５．８４ʃ０．３５a８．６６ʃ０．５８a ５０．６２ʃ４．２０a b注:数据均以 平均值ʃ标准差 表示,同列不同小写字母表示差异显著(P ＜０．０５).N o t e :D a t a i n t h e t a b l e a r e p r e s e n t e d a s m e a n ʃs t a n d a r dd e v i a t i o n ,t h e d i f f e r e n t l o w e r c a s e l e t t e r s i n t h e s a m e c o l u m n i n d i c a t e s s i gn i f i Ｇc a n t d i f f e r e n c e (P ＜０．０５)．２８５ 西㊀北㊀农㊀业㊀学㊀报２８卷３㊀讨论叶片是植物感受光周期的主要部位,光敏色素作为叶片中感受光信号的最初受体与拟南芥F T基因表达的相互作用已经被证明[２１Ｇ２２].本研究发现S l S P５G３能够感受光信号,在光照开始后４h上升至最高,在进入黑暗后４h下降至最低,可能是由于光敏色素传递了光信号,但其与S lＧS P５G３的作用关系还需要进一步的验证.S lＧS P５G３在叶片和子叶中的表达量最高,其他组织基本不表达,且不受发育时期的影响,这与烟草F TＧl i k e基因表达一致[７].㊀㊀F TＧl i k e蛋白的功能很大程度是由其氨基酸序列决定的,曹凯[２３]通过蛋白质序列比对发现,在番茄S l S P３D蛋白的３个关键位置的氨基酸残基分别为酪氨酸(１３３)㊁甘氨酸(１３６)和色氨酸(１３７)与其他的开花活化因子相匹配,如拟南芥中的F T蛋白㊁甜菜的B v F T２蛋白和烟草的N t F T４蛋白.而番茄S l S P５G的氨基酸序列的这３个保守位点与大多数开花抑制因子是一样的,如烟草中F T蛋白N t F T１㊁N t F T２㊁N t F T３.番茄S lＧS P５G２蛋白和S l S P５G３蛋白在相应位点与其他番茄F TＧl i k e蛋白相比都发生了一定改变.本试验通过培育转基因 M i c r oＧT o m 发现过表达S lＧS P５G３可以延迟开花,与对照相比平均晚开花２~３片叶,可能是由于保守位点的基因突变将其功能转变为抑制开花.拟南芥C D F和C O L蛋白是调控F T基因表达的转录因子,番茄存在与拟南芥C D F和C O L高度同源的蛋白分别是S lＧC D F１㊁S l C D F２㊁S l C D F３㊁S l C D F４㊁S l C D F５㊁T C O L１㊁T C O L２和T C O L３.本试验发现在S lＧS P５G３过表达植株中,３个T C O L s基因和４个S l C D F s基因表达量并无明显变化,但对S l C D F３有显著的促进作用,相比于野生型植株表达量上升５~１０倍.笔者推测S l S P５G３基因编码的F TＧl i k e蛋白通过筛管细胞到达顶端分生组织与下游转录因子F D结合之后,反馈调节上游S lＧC D F３基因的表达,具体的作用关系还需进一步验证.开花时间的早晚受外界因素调控并直接影响植株的产量.如在大豆中,花期的早晚与结荚率之间呈显著的相关性,且大豆产量取决于接荚的花数[２４].低纬度地区种植的大豆明显表现出植株矮小,开花成熟期提前,产量降低.赵薇等[２５]研究发现不同春化处理对蚕豆开花和产量产生重要影响,首花时间㊁鲜荚始收时间最早的蚕豆单株产量最高.赤霉素处理的西红花开花时间提前,导致开花数量和花丝产量明显增加[２６].F TＧl i k e 基因编码的成花素是控制植物开花时间的重要因子,可以通过改变其表达量进一步调控产量.在番茄s f t突变体中,没有形成完整的多花序结构,导致s f t突变体植株变大且伴随着极少的花序㊁花和果实[２７].番茄S P基因调节营养生长向生殖生长的转换.s p突变体植株形成较短的合轴分枝,直到出现２个连续的花序后停止生长[２８],与s p突变体植株相比,s p５g s p突变体开花期提前,收获指数上升[２９].本试验发现S l S P５G３基因过表达植株通过延迟开花时间提升了叶片干鲜质量,单果质量和单株产量,与同源基因S l S P５G 在控制产量方面存在类似的功能.延迟开花使植物积累更多的营养物质,推迟从营养生长向生殖生长的转变.叶片中积累了更多的营养物质,提升了地上部生物量.同时建立新的源库关系模式,提升总产量,为转基因育种提供新思路.４㊀结论S l S P５G３受光环境调控,在真叶和子叶中主要表达,且表达量不受生长发育时期的影响;S lＧS P５G３作为开花抑制因子增加 M i c r oＧT o m 的开花所需叶片数,延迟开花时间;S l S P５G３促进上游S l C D F３基因的过量表达,提升 M i c r oＧT o m 番茄的地上部生物量积累㊁单果质量和单株产量.参考文献㊀R e f e r e n c e:[１]㊀G Y L L E N S T R A N D N,C L A P H AM D,KÄL L MA N T,e ta l．An o r w a y s p r u c eF L OW E R I N G L O C U STh o m o l o g i si m p l i c a t e d i nc o n t r o lo f g r o w t hr h y t h m i nc o n i f e r s[J]．P l a n t P h y s i o l o g y,２００７,１４４(１):２４８Ｇ２５７．[２]㊀K A R L G R E N A,G Y L L E N S T R A N D N,KÄL L MA N T,e ta l．E v o l u t i o no f t h eP E B P g e n e f a m i l y i n p l a n t s:f u n c t i o n a ld i ve r s if i c a t i o n i n s e e d p l a n t e v o l u t i o n[J]．P l a n tP h y s i o l oＧg y,２０１１,１５６(４):１９６７Ｇ１９７７．[３]㊀B H L E N I U S H,HU A N G T,C HA R B O N N E LＧC AM P A A L,e t a l．C O/F Tr e g u l a t o r y m o d u l e c o n t r o l s t i m i n g o f f l o wＧe r i n g a n ds e a s o n a l g r o w t hc e s s a t i o n i nt r e e s[J]．S c i e n c e,２００６,３１２(５７７６):１０４０Ｇ１０４３．[４]㊀HÄT T A S C H C,F L A C H OW S K Y H,K A P T U R S K A D,e ta l．I s o l a t i o n o ff l o w e r i n gg e n e sa n ds e a s o n a lc h a n g e si nt h e i r t r a n s c r i p t l e v e l s r e l a t e d t o f l o w e r i n d u c t i o n a n d i n i t i aＧt i o ni n a p p l e(M a l u sd o m e s t i c a)[J]．T r e e P h y s i o l o g y,２００８,２８(１０):１４５９．３８５４期许达为等:S l S P５G３基因对 M i c r oＧT o m 番茄开花和产量的影响[５]㊀P I NPA,B E N L L O C H R,B O N N E TD,e t a l．A n a n t a g o n i sＧt i c p a i ro fF Th o m o l o g sm e d i a t e s t h ec o n t r o l o f f l o w e r i n g t i m e i ns u g a rb e e t[J]．S c i e n c e,２０１０,３３０(６００９):１３９７Ｇ１４００．[６]㊀N A V A R R O C,A B E L E N D AJA,C R U ZＧO R E,e t a l．C o nＧt r o l o f f l o w e r i n g a n ds t o r a g eo r g a n f o r m a t i o n i n p o t a t ob yF L OW E R I N GL O C U S T[J]．N a t u r e,２０１１,４７８(７３６７):１１９Ｇ１２２．[７]㊀H A R I GL,B E I N E C K EF A,O l T MA N N SJ,e t a l．P r o t e i n sf r o mt h eF L OW E R I N G L O C U ST‐l i k es u b c l a d eo f t h eP E B P f a m i l y a c t a n t a g o n i s t i c a l l y t o r e g u l a t e f l o r a l i n i t i a t i o ni n t o b a c c o[J]．P l a n t J o u r n a l,２０１２,７２(６):９０８Ｇ９２１．[８]㊀K O J I MA S,T A K A H A S H I Y,K O B A Y A S H I Y,e ta l．H d３a,ar i c eo r t h o l o g o ft h e A r a b i d o p s i s F T g e n e,p r oＧm o t e s t r a n s i t i o nt of l o w e r i n g d o w n s t r e a m o f H d１u n d e r s h o r tＧd a y c o n d i t i o n s[J]．P l a n t&C e l lP h y s i o l o g y,２００２,４３(１０):１０９６Ｇ１１０５．[９]㊀L I F S C H I T ZE,E V I A T A R T,R O Z MA N A,e t a l．T h e t oＧm a t oF T o r t h o l o g t r i g g e r ss y s t e m i cs i g n a l st h a tr e g u l a t eg r o w t ha n df l o w e r i n g a n ds u b s t i t u t ef o rd i v e r s ee n v i r o nＧm e n t a l s t i m u l i[J]．P r o c e e d i n g s o f t h eN a t i o n a lA c a d e m yo f S c i e n c eo f t h e U n i t e d S t a t e so f A m e r i c a,２００６,１０３(１６):６３９８Ｇ６４０３．[１０]㊀M O L I N E R OＧR O S A L E S N,L A T O R R E A,J AM I L E N A M,e t a l．S I N G L EF L OW E RT R U S S r e g u l a t e s t h e t r a n s iＧt i o na n dm a i n t e n a n c e o f f l o w e r i n g i nt o m a t o[J]．P l a n t a,２００４,２１８(３):４２７Ｇ４３４．[１１]㊀J I AZ,WUCX,WA N G M,e t a l．E f f e c t s o f l e a f n u m b e r o f s t o c ko r s c i o n i n g r a f t u n i o n o n s c i o n g r o w t h a n d d e v e l o pＧm e n to fs o y b e a n[J]．A c t a A g r o n o m i c a S i n i c a,２０１１,３７(４):６５０Ｇ６６０．[１２]㊀J I A N GB,Y U E Y,G A O Y,e t a l．G m F T２a p o l y m o r p h i s ma n dm a t u r i t y d i v e r s i t y i ns o yb e a n s[J]．P l o sO n e,２０１３,８(１０):e７７４７４．[１３]㊀Z HA OC,T A K E S H I MA R,Z HUJ,e t a l．Ar e c e s s i v ea lＧl e l e f o rd e l a y e df l o w e r i n g a t t h es o y b e a n m a t u r i t y l o c u sE９i s a l e a k y a l l e l eo fF T２a,aF L OW E R I N G L O C U STo r t h o l o g[J]．B m cP l a n tB i o l o g y,２０１６,１６(１):２０．[１４]㊀S H A L I T A,R O Z MA N A,G O L D S HM I D T A,e t a l．T h ef l o w e r i ngh o r m o n e f l o ri g e n f u n c t i o n s a s a g e n e r a l s y s t e mＧi c r e g u l a t o ro f g r o w t ha n dt e r m i n a t i o n[J]．P r o c e e d i n g so f t h e N a t i o n a l A c a d e m y o f S c i e n c e so f t h e U n i t e dS t a t e s o f A m e r i c a,２００９,１０６(２０):８３９２Ｇ８３９７．[１５]㊀M O L I N E R OＧR O S A L E S N,L A T O R R E A,J AM I L E N A M,e t a l．S I N G L EF L OW E RT R U S S r e g u l a t e s t h e t r a n s iＧt i o na n dm a i n t e n a n c e o f f l o w e r i n g i nt o m a t o[J]．P l a n t a,２００４,２１８(３):４２７Ｇ４３４．[１６]㊀姜㊀静,王银磊,赵丽萍,等．番茄q R TＧP C 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u n c t i o n s i nt h ec o n t r o l o f f l o w e r i n g t i m ea n d ab i o t ic s t r e s s r e s p o n s e s[J]．J o u r n a l o f E x p e r i m e n t a lB o t a n y,２０１４,６５(４):９９５Ｇ１０１２．[２０]㊀K I N E TJM．E f f e c t o f l i g h t c o n d i t i o n s o n t h e d e v e l o p m e n t o f t h e i n f l o r e s c e n c e i n t o m a t o[J]．S c i e n t i aH o r t i c u l t u r a e,１９７７,６(１):１５Ｇ２６．[２１]㊀N A K AMU R AS,A R A K IT,M O C H I Z U K IN,e t a l．P h yＧt o c h r o m e B i n t h em e s o p h y l l d e l a y s f l o w e r i n g b y s u p p r e s sＧi n g F L OW E R I N G L O C U S T e x p r e s s i o ni n A r a b i d o p s i sv a s c u l a r b u n d l e s[J]．P l a n t C e l l,２００５,１７(７):１９４１Ｇ１９５２．[２２]㊀V A L V E R D EF,M O U R A D O V A,S O P P E W,e t a l．P h o t oＧr e c e p t o r r e g u l a t i o n o f C O N S T A N S p r o t e i n i n p h o t o p e r i o dＧi c f l o w e r i n g[J]．S c i e n c e,２００４,３０３(５６６０):１００３Ｇ１００６．[２３]㊀曹㊀凯．红光与远红光对番茄生长发育的影响及开花相关基因功能研究[D]．陕西杨凌:西北农林科技大学,２０１６．C A 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f S l S P ５G ３G e n e o nF l o w e r i n g an dY i e l do f M i c r o ＧT o m P l a n t s X U D a w e i １,C A O K a i １,２,Z O UJ i a n i n g １,WA N G H a o t i a n １a n dZ O UZ h i r o n g１(１．T h eA g r i c u l t u r eM i n i s t r y K e y L a b o r a t o r y o f P r o t e c t e dH o r t i c u l t u r a l E n g i n e e r i n g i nN o r t h w e s t ,D e pa r t m e n t o fH o r t i c u l t u r e ,N o r t h w e s tA&FU n i v e r s i t y ,Y a n g l i n g S h a a n x i ㊀７１２１００,C h i n a ;２．T h eA g r i c u l t u r eM i n i s t r y K e yL a b o r a t o r y o fA g r i c u l t u r a l E n g i n e e r i n g i n t h eM i d d l e a n dL o w e rR e a c h e s o fY a n gz i R i v e r ,J i a n g s uA c a d e m y o fA g r i c u l t u r a l S c i e n c e s ,N a n j i n g㊀２１００１４,C h i n a )A b s t r a c t ㊀T h e f l o w e r i n g t i m e o f t o m a t o (S o l a n u ml y c o pe r s i c u m L ．)d i r e c t l y d e t e r m i n e s t h e y i e l da n d e c o n o m i cb e n ef i t s ．I no r d e r t o i n v e s t ig a t e th e e f f e c t o f t o m a t o S l S P ５G ３g e n e o n f l o w e ri n g ,t h e e x pr e s Ｇs i o no f S l S P ５G ３w a so b s e r v e db y u s i n g M i c r o ＧT o m t o m a t oa se x pe r i m e n t a lm a t e r i a l ．T h er e s u l t s s h o w e d t h a t S l S P ５G ３m a i n l y e x p r e s s e d i n l e a v e s ,w h i c h r e s p o n d e d t o p h o t o p e r i o d c h a n g e s b u t t h e e x Ｇp r e s s i o n l e v e lw a s n o t af f e c t e db y t h eg r o w t ha n dd e v e l o p m e n t p e r i o d ．C o m p a r e dw i t hth ewi l d Ｇt y pe p l a n t s ,t h en u m b e rof l e a v e sr e q u i r e df o rf l o w e r i ng i n c r e a s e db y ２．３４a n d２．６７i no v e r e x p r e s s i n gp l a n t sL ８a n dL １２,r e s p e c t i v e l y ;t h e f r e s h m a s so f l e a v e s i n c r e a s e db y ９８．４３％a n d７６．８９％,r e s pe c Ｇt i v e l y ;t h ed r y m a s s of l e a v e s i n c r e a s e db y ６２．７９％a n d４１．８６％r e s p e c t i v e l y．T h e p e r f r u i tm a s s i n Ｇc r e 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番茄叶片再生系统建立的研究
陆云华;张新;马立新
【期刊名称】《江西农业学报》
【年(卷),期】2005(017)004
【摘要】比较了不同基本培养基、不同激素及其不同浓度组合对4个番茄栽培品种叶片诱导愈伤组织、不定芽分化及其生根的效果.结果表明:MS+6-BA
3.0mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30 mg/L(pH=5.8)对愈伤组织诱导及诱导愈伤组织分化不定芽的效果最佳;MS+IAA 0.1mg/L+蔗糖20mg/L培养基对生根最好.【总页数】4页(P40-43)
【作者】陆云华;张新;马立新
【作者单位】湖北大学,生命科学学院分子微生物与基因工程实验室,湖北,武
汉,430062;江西省宜春学院生物工程系,江西,宜春,336000;江西省宜春学院生物工程系,江西,宜春,336000;湖北大学,生命科学学院分子微生物与基因工程实验室,湖北,武汉,430062
【正文语种】中文
【中图分类】S641.2
【相关文献】
1.潘那利番茄叶片组织培养及植株再生研究 [J], 宗宪春;许向阳;张贺;王傲雪;李景富
2.酿酒葡萄"赤霞珠"叶片和叶柄离体再生系统建立的研究 [J], 王华;崔福君;张继澍
3.番茄宝大906高频再生系统的建立及其潮霉素选择压的测定 [J], 乔宁宁;邹爱兰;陈崇顺
4.番茄离体再生系统的建立及褐化现象调控研究 [J], 王蕾;宿烽
5.番茄外植体诱导直接分化不定芽建立高频再生系统 [J], 李铁松;王关林
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Micro-Tom 番茄矮化微型机制及其在植物功能基因组学研究
中的应用
刘小花;张岚岚;朱长青;陈昆松;徐昌杰
【期刊名称】《遗传》
【年(卷),期】2008(30)10
【摘要】Micro-Tom 番茄植株矮小,生长密度高,生命周期短,容易被高效转化,成为功能基因组学研究的新型模式植物.文章对Micro-Tom 的由来和生物学特征作了概述,重点阐述了Micro-Tom 矮化微型的遗传机制以及该番茄在功能基因组学研究中的应用和遗传转化体系研究的进展.
【总页数】8页(P1257-1264)
【作者】刘小花;张岚岚;朱长青;陈昆松;徐昌杰
【作者单位】浙江大学农业与生物技术学院园艺系,杭州,310029;浙江大学农业与生物技术学院园艺系,杭州,310029;浙江大学农业与生物技术学院园艺系,杭
州,310029;浙江大学农业与生物技术学院园艺系,杭州,310029;浙江大学农业与生物技术学院园艺系,杭州,310029
【正文语种】中文
【中图分类】S6
【相关文献】
1.T-DNA介导的基因诱捕技术及其在植物功能基因组学研究中的应用 [J], 杨珍珍;李萍;王崇英
2.病毒诱导基因沉默技术在茄科植物功能基因组学研究中的应用进展 [J], 蔡文;陈长明;陈国菊;曹必好;雷建军
3.泛基因组及其在植物功能基因组学研究中的应用 [J], 潘佳颖
4.基因激活标签体系及其在植物功能基因组学研究中的应用 [J], 宛淑艳;张治国;赵桂兰
5.功能基因组学和代谢组学技术在植物次生代谢物合成及调控研究中的应用 [J], 王莉;张艳霞;史玲玲;刘玉军
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番茄再生体系的建立
乔永旭
【期刊名称】《北方园艺》
【年(卷),期】2010(000)017
【摘要】以"田园6号"番茄子叶和下胚轴为试材,研究激素的种类和浓度对愈伤组织诱导、愈伤组织继代、不定芽分化及生根的影响,并研究了各因素对番茄愈伤组织褐变的影响.结果表明:MS+IBA 0.8 mg/L+6-BA 2.0 mg/L诱导所得愈伤最好,MS+IBA 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L最适于愈伤组织的继代,MS+IAA 0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L和MS+IAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L分别在诱导外质体直接分化不定芽和愈伤组织分化不定芽上效果最佳,MS+IAA 0.5 mg/L是诱导不定芽生根的理想培养基.外植体种类和光照强度均对愈伤组织的褐化有一定的影响,10 mg/L 的VC和0.3%的活性炭则能减缓愈伤组织的褐化.
【总页数】3页(P174-176)
【作者】乔永旭
【作者单位】唐山师范学院,生命科学系,河北,唐山,063000
【正文语种】中文
【中图分类】S641.2
【相关文献】
1.耐贮型番茄子叶再生体系建立及优化 [J], 李文枫;李景富;许向阳;张贺
2.树番茄高频再生体系的建立 [J], 植爽;吴钰祥;王玉杰;王辉;黄作喜
3.番茄突变体jai1-1高效筛选—再生体系的建立 [J], 范锡麟;王少岭;肖应辉;王志龙
4.番茄micro-TOM活体再生体系的建立 [J], 曹慧颖;王玉莹;孙建坤;刘玲莉;张立军;阮燕晔;夏润玺
5.加工番茄新番72号再生体系的建立 [J], 张西英;刘江娜;张爱萍
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