大肠杆菌的代谢途径和生理生化特性

一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生长特性。

2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。

3. 学习使用显微镜观察大肠杆菌的形态。

4. 熟悉大肠杆菌的生理生化特性。

二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性、无芽孢、兼性厌氧的细菌，广泛存在于自然界和人体肠道中。

大肠杆菌的培养和鉴定是微生物学实验中的重要内容。

本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生长特性，为后续研究提供基础。

三、实验材料与仪器1. 材料：普通琼脂、营养肉汤、乳糖、胆盐、伊红、美蓝、无菌水、无菌棉签、酒精灯、培养皿、显微镜等。

2. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、电子天平、无菌操作台、移液器、试管等。

四、实验步骤1. 分离大肠杆菌（1）取少量疑似大肠杆菌的样品，用无菌棉签涂抹于营养肉汤中。

（2）将营养肉汤置于恒温培养箱中培养24小时。

（3）取培养后的肉汤，用无菌移液器吸取少量，涂布于普通琼脂平板上。

（4）将平板置于恒温培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况。

2. 纯化大肠杆菌（1）挑取单菌落，接种于新的营养肉汤中。

（2）将培养后的肉汤置于恒温培养箱中培养24小时。

（3）取培养后的肉汤，用无菌移液器吸取少量，涂布于新的普通琼脂平板上。

（4）重复上述步骤，直至获得纯化的大肠杆菌。

3. 鉴定大肠杆菌（1）革兰氏染色：取纯化的大肠杆菌，制作革兰氏染色片，观察细菌形态。

（2）生化试验：进行乳糖发酵试验、硫化氢试验、吲哚试验等，鉴定大肠杆菌的生理生化特性。

4. 观察大肠杆菌形态（1）将纯化的大肠杆菌接种于营养肉汤中。

（2）将培养后的肉汤置于恒温培养箱中培养24小时。

（3）取培养后的肉汤，制作涂片，置于显微镜下观察细菌形态。

五、实验结果与分析1. 分离大肠杆菌在涂布有疑似大肠杆菌样品的琼脂平板上，观察到典型的圆形、湿润、边缘整齐的菌落。

2. 纯化大肠杆菌经过多次纯化，获得纯化的大肠杆菌。

3. 鉴定大肠杆菌革兰氏染色结果显示，大肠杆菌为革兰氏阴性菌。

第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。

二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。

某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。

微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。

乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。

三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。

2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。

四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。

2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。

五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。

2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。

六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。

七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。

第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。

2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。

3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。

二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。

一、实验目的1. 掌握肠道杆菌的生理生化特性。

2. 熟悉并掌握肠杆菌科细菌的鉴定方法，如IMViC试验等。

3. 通过实验，提高对微生物学实验技能的运用和操作能力。

二、实验原理肠杆菌科细菌是一类革兰氏阴性、无芽孢、无荚膜的杆菌，广泛分布于自然界、人和动物的肠道中。

本实验通过对肠杆菌进行一系列生理生化试验，包括吲哚试验（I）、甲基红试验（M）、V.P试验（V）、柠檬酸盐利用试验（C）等，以鉴定和区分不同肠杆菌科细菌。

三、实验材料1. 菌株：大肠杆菌、产气肠杆菌、变形杆菌等。

2. 培养基：蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、柠檬酸盐培养基、双糖铁培养基等。

3. 试剂：吲哚试剂、甲基红试剂、V.P试剂、40%KOH、-茶酚、溴麝香草酚蓝、苯酚红等。

4. 仪器：酒精灯、试管、试管架、烧杯、量筒、接种环、接种针、无菌玻片、显微镜等。

四、实验方法1. 吲哚试验（I）（1）将试验菌接种于蛋白胨水培养基，37℃培养24小时。

（2）取1 mL培养液，加入1 mL乙醚，充分振荡，使乙醚层浮于培养液表面。

（3）沿管壁加入吲哚试剂10滴，静置片刻。

（4）观察培养液颜色变化，呈玫瑰红色为阳性，不变色为阴性。

2. 甲基红试验（M）（1）将试验菌接种于葡萄糖蛋白胨培养基，37℃培养24小时。

（2）沿管壁加入甲基红试剂3-4滴。

（3）观察培养液颜色变化，呈红色为阳性，黄色为阴性。

3. V.P试验（V）（1）将试验菌接种于葡萄糖蛋白胨培养基，37℃培养24小时。

（2）加入40%KOH 10-20滴，再加入等量-茶酚，用力振荡。

（3）37℃培养4小时后观察，仍无色产生为阴性。

4. 柠檬酸盐利用试验（C）（1）将试验菌接种于柠檬酸盐培养基斜面上，37℃培养24-28小时。

（2）观察培养基颜色变化，若含有溴麝香草酚蓝的斜面呈现蓝色为阳性，呈绿色为阴性；含苯酚红的斜面呈现红色为阳性，呈黄色为阴性。

五、实验结果1. 吲哚试验：大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。

一、实验目的1. 了解肠道细菌的生理生化特性。

2. 掌握肠道细菌生化实验的基本原理和方法。

3. 通过实验，鉴别肠道细菌的种类。

二、实验原理肠道细菌生化实验是通过观察细菌对特定底物的代谢反应，如糖类、蛋白质、脂肪等的分解能力，以及产生某些特定代谢产物的能力，来鉴别细菌种类的一种方法。

实验中常用的生化反应包括糖发酵实验、吲哚试验、甲基红试验、V-P试验等。

三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌等。

2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、吲哚试剂、甲基红试剂、V-P试剂等。

3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管等。

四、实验方法1. 糖发酵实验：将待测菌接种于糖发酵培养基中，37℃恒温培养24小时，观察菌落周围是否出现红色圈，红色圈表示该菌能够发酵该糖类。

2. 吲哚试验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃恒温培养24小时，加入吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀。

3. 甲基红试验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃恒温培养24小时，加入甲基红试剂，观察培养基颜色变化。

4. V-P试验：将待测菌接种于V-P试剂中，37℃恒温培养24小时，观察是否产生红色沉淀。

五、实验结果与分析1. 糖发酵实验：大肠杆菌发酵葡萄糖，产酸产气；产气肠杆菌发酵乳糖，产酸产气；普通变形杆菌发酵葡萄糖，产酸产气；枯草芽孢杆菌不发酵葡萄糖。

2. 吲哚试验：大肠杆菌产生吲哚，呈阳性；产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌不产生吲哚，呈阴性。

3. 甲基红试验：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性。

4. V-P试验：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性。

根据实验结果，可以初步判断待测菌为大肠杆菌。

六、实验结论通过肠道细菌生化实验，我们掌握了肠道细菌生化实验的基本原理和方法，成功鉴别了待测菌为大肠杆菌。

【关键字】报告大肠杆菌培养实验报告篇一：大肠杆菌检测实验报告国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml 量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。

灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。

用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二：1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。

2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。

3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。

4：灭完菌后放入超净台中备用。

三：1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。

3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。

6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。

9：取4只平皿，编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。

缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。

生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。

本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。

二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。

三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。

四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。

结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。

若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。

2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。

结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。

3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。

结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。

4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。

结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。

大肠杆菌的鉴定方法大肠杆菌是常见的肠道细菌，广泛存在于自然环境中，包括土壤、水体和动植物体内。

它是引起人类肠道感染和食源性疾病的重要致病菌之一、准确鉴定大肠杆菌的方法对于食品安全和公共卫生至关重要。

下面将介绍常见的大肠杆菌鉴定方法。

1.外观和生理鉴定大肠杆菌形态特征为革兰阴性，为短杆状细菌，常产生单一或双子。

在艾柯培养基上，大肠杆菌形成典型的金黄色、大且圆形的菌落，使用其可以初步鉴定大肠杆菌。

大肠杆菌是革兰阴性细菌，可以通过革兰氏染色进行鉴定。

大肠杆菌的细胞壁含有脂多糖，染色后呈现红色。

2.纯培养和典型菌落的选择将样品接种于含有葡萄糖和肉汤的液体营养培养基中，经过16-24小时的培养后，利用墨汁培养基将菌液分带于增菌板表面，进行分离纯化。

然后选择培养在巴斯德固体琼脂培养基上呈金黄色，并有金属光泽的典型菌落。

3.酶活性测试大肠杆菌具有多种酶活性，常用的酶活性测试有氧化/发酵测试、甲基红松解试验和呈色反应等。

（1）氧化/发酵测试：大肠杆菌通常以无氧产酸为代谢途径进行葡萄糖发酵。

将菌液接种于以葡萄糖为唯一碳源的气泡管中，通过产酸后的颜色变化来鉴定大肠杆菌。

气泡管中产生黄色的酸性底部，说明转化为酸性，即为大肠杆菌。

（2）甲基红松解试验：大肠杆菌代谢糖酸，产生酸性代谢产物，导致菌落周围的甲基红转为黄色。

通过添加甲基红指示剂，观察溶解指示剂颜色的变化，由红色转为黄色可以初步鉴定大肠杆菌。

（3）呈色反应：大肠杆菌产生酶活性，能够将一些酶底物转化为有颜色的产物。

例如，大肠杆菌在聚糖中生成酶胆红素琼脂糖，呈现金黄色。

这种特征可以用于大肠杆菌的鉴定。

4.生化和生理特性鉴定（1）靛酚蓝糖蛋白胱氨酸琼脂糖（Ipv）试验：肠道杆菌能产生硫化氢，将外源底物半胱氨酸转化为硫化氢，使琼脂糖中的靛酚蓝变为铁蓝色，可以通过这个试验鉴定大肠杆菌。

（2）铁蛋白试验：大肠杆菌可以利用铁蛋白作为唯一的铁源进行生长，将铁蛋白分解为铁和胆红素，使培养基呈现深绿色，可通过这个试验鉴定大肠杆菌。

1、氧化酶巴氏杆菌1、原理：氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。

2、试剂盐酸二甲基对苯撑二胺(或四甲基对苯撑二胺)1%水溶液于茶色瓶中在冰箱中贮存。

3、方法在干净培养皿里放一张滤纸，滴上二甲基对苯撑二胺的1%水溶液，仅使滤纸湿润即可，不可过湿，用金丝接种环(不可用镍铬丝)取18~24 h的菌苔，涂沫在湿润的滤纸上，在10 s内涂抹的菌苔现红色者为阳性，（四甲基对苯撑二胺为蓝色）10~60 s现红色者为延迟反应，60 s以上现红色者不计，按阴性处理。

4、注意事项：a.盐酸二甲基对苯撑二胺溶液容易氧化，溶液应装在棕色瓶中，并在冰箱内保存，如溶液变为红褐色，即不宜使用。

b.铁、镍铬丝等金属可催化二甲基对苯撑二胺呈红色反应，若用它来挑取菌苔，会出现假阳性，故必须用白金丝或玻璃棒（或牙签）来挑取菌苔。

c.在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜，如滤纸过湿，会防碍空气与菌苔接触，从而延长了反应时间，造成假阴性。

2、苯丙氨酸脱氨酶变形杆菌1、原理：某些细菌（如变形杆菌）具有苯丙氨酸脱氨酶，能将苯丙氨酸氧化脱氨，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸遇到三氯化铁呈蓝绿色。

本试验用于肠肝菌科和某些芽孢杆菌属的鉴定。

2、培养基酵母膏3gNaCl 5gNa2HPO4 1gDL-苯丙氨酸2g(或L-苯丙氨酸) 1g蒸馏水1000 mlpH为7.0，分装试管，121℃蒸气灭菌10min,摆成长斜面。

3、试剂10%(W/V)的FeCl3溶液4、方法适当浓度接种，37℃培养4h或8~24h测定。

将试剂4~5滴滴到生长菌的斜面上，当斜面上和冷凝水中产生绿色时为阳性反应，即表明己形成了苯丙酮酸，不变则为阴性。

3、H2S(TSI) 变形杆菌鸡白痢沙门氏1、原理：有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。