红掌快繁技术优化研究

红掌快繁技术优化研究【摘要】本研究以红掌的三个品种（alabama、dakota、pink champion）的叶片和叶柄为外植体，进行多种条件下的愈伤组织诱导、不定芽的分化、生根诱导进行试验，为工厂化生产提供技术支持。

愈伤组织诱导适宜的诱导激素组合和浓度配比为：6-ba1.0mg/l+naa0.15mg/l。

当激素配比为6-ba2.0mg/l+naa0.2mg/l时，对诱导产生不定芽的效果最好。

生根的组培苗高3～4cm时，小叶3～4枚，有3条以上粗壮根时进行炼苗移栽，基质的ph值以5.5为宜，温室内要求空气湿度80%～100%。

【关键词】红掌；品种；离体培养；快繁红掌（anthurium andraeanum lindl.）别名大叶花烛、安祖花等。

为天南星科花烛属多年生附生常绿草本植物，其叶色亮绿，革质，长心型。

花葶自叶腋抽出，花梗超出叶上，佛焰苞直立开展，革质，阔心脏形，其颜色随品种不同而异，均具蜡质光泽且光滑艳丽。

红掌是天南星科红掌属植物中较为珍稀的观花观叶两者兼宜的观赏植物，是现今最为名贵的切花品种之一，具有较高的观赏价值和经济价值，很具市场开发前景。

国外生产上大量繁殖采用组织培养法。

在对红掌组培苗生产技术的研究和开发中，生根难和成活率低一直是红掌工厂化生产的最大问题。

本人通过对原有培养基配方进行两年的实验，结果不太理想，存在的问题有：（1）试管苗移植后平均成活率不高；（2）生长速度缓慢，瓶苗培养周期长：（3）移植后较容易感病。

为了突破这几个难题，特进行本次研究，一方面，对红掌离体培养时的外部条件温度、光照、进行调控，同时对红掌愈伤组织诱导和不定芽分化、增殖的培养基及激素浓度配比进行改良与优化，找出适合红掌愈伤组织诱导和不定芽分化、增殖的配方和培养条件，加速红掌种苗的生产，以优化红掌生产技术，解决红掌快速繁殖过程中存在的难题，实现红掌组培苗生产的工厂化。

1 材料与方法1.1 材料本次实验所用的外植体材料均来自云南昆明安祖公司基地从荷兰引进的温室盆栽红掌苗，共3个品种，分别为阿拉巴马（alabama）、粉冠军（pink champion）、大哥大（dakota）。

1.2 试验方法1.2.1 外植体材料的选取选取3个品种红掌的展开二周的叶片及叶柄作为供试材料。

1.2.2 外植体表面消毒取上述品种健壮植株（高2.5cm左右）的叶片及叶柄，作为组织培养材料。

将培养材料消毒后置于消毒瓶中备用。

培养基在1.2kg/cm2压力下121℃灭菌18min，接种时先在无菌纸上将叶片切为带主叶脉大小为1.5cm×1cm长方块，茎、叶柄切为1cm左右的小段，叶面朝上接种在灭过菌的培养基上。

1.2.3 培养条件在试验中，如无特殊说明，培养条件均为温度25±2℃，ph值5.8，光照强度1000lx，每日14h光照，10h黑暗。

1.2.4 初代培养1）激素种类及浓度配比对愈伤组织诱导的影响在筛选出的基本培养基上，选择6-ba和naa两种对红掌的愈伤组织诱导效果显著的植物生长调节物质，进行激素组合筛选。

60d 后统计愈伤组织诱导率。

a1：ms+6-ba0.5mg/l+naa0.05mg/la2：ms+6-ba0.5mg/l+naa0.1mg/la3：ms+6-ba0.5mg/l+naa0.15mg/la4：ms+6-ba0.5mg/l+naa0.2mg/la5：ms+6-ba1mg/l+naa0.05mg/la6：ms+6-ba1mg/l+naa0.1mg/la7：ms+6-ba1mg/l+naa0.15mg/la8：ms+6-ba1mg/l+naa0.2mg/la9：ms+6-ba2mg/l+naa0.05mg/la10：ms+6-ba2mg/l+naa0.1mg/la11：ms+6-ba2mg/l+naa0.15mg/la12：ms+6-ba2mg/l+naa0.2mg/la13：ms+6-ba2mg/l+naa0.05mg/la14：ms+6-ba2mg/l+naa0.1mg/la15：ms+6-ba2mg/l+naa0.15mg/la16：ms+6-ba2mg/l+naa0.2mg/l2）不同品种、不同部位、不同成熟度的红掌外植体愈伤组织的诱导将三个红掌品种经消毒处理外植体分别接种在最佳培养基上，检测各品种的愈伤组织诱导率及愈伤组织质量。

同时，对不同成熟度的红掌叶片和叶柄在最佳培养基上愈伤组织诱导情况进行观察。

1.2.5 不定芽的增殖和分化1）基本培养基对不定芽诱导的影响选择将三个品种所得到的生长一致、直径5～8mm大小的愈伤组织块，分别接种在ms、1/2ms、b5、n6四种基本培养基上，研究培养基对不定芽诱导的影响。

2）不同激素组合对不定芽分化及增殖的影响愈伤组织诱导90天后，将诱导出来的愈伤组织切成5～8mm大小接入诱导不定芽的培养基中，进行不定芽的诱导。

选择6-ba、naa 为主要植物生长调节物质，进行不同激素组合配比试验，选择出最佳诱导、增殖及高生长培养基。

b1：ms+6-ba0.5mg/l+naa0.2mg/lb2：ms+6-ba0.5mg/l+naa0.5mg/lb3：ms+6-ba1.0mg/l+naa0.2mg/lb4：ms+6-ba1.0mg/l+naa0.5mg/lb5：ms+6-ba2.0mg/l+naa0.2mg/lb6：ms+6-ba2.0mg/l+naa0.5mg/l1.2.6 生根培养红掌不定芽切割为带3～4枚叶片的小块，接种到含有不同浓度的naa的生根培养基上，进行培养。

一个月后，统计生根率和生根系数。

1.2.7 组培苗的移栽试验基质为泥炭+珍珠岩+砻糠灰（2∶2∶1）的混合物。

2 结果与分析2.1 初代培养2.1.1 基本培养基中不同的碳源及碳源浓度对红掌愈伤组织诱导的影响本试验取切好的红掌品种的叶片及叶柄为外植体，经表面消毒后接种于不同碳源（蔗糖、葡萄糖）和不同糖浓度（15g/l，30g/l，45g/l）的培养基中对红掌的愈伤组织诱导进行试验。

从试验结果可知，对于红掌的愈伤组织诱导结果来说，葡萄糖作为碳源对愈伤组织的诱导效果要显著高于蔗糖，而且葡萄糖的愈伤组织诱导率要明显高于蔗糖。

以葡萄糖做为碳源30g/l的葡萄糖浓度用于诱导愈伤组织效果最好，诱导率较高，愈伤组织块较大。

2.1.2 激素种类及浓度配比对愈伤组织诱导的影响根据试验所确定的最佳培养条件为基础，选择6-ba和naa两种对红掌的愈伤组织诱导效果显著的植物生长调节物质，进行激素组合筛选。

综合表1、表2的实验结果可见，单独使用6-ba能明显促进外植体体积增大，但外植体质地较硬。

在6-ba浓度不变的情况下，加入naa有利于提高愈伤组织诱导率，也可以减少愈伤组织发生时间。

表1 不同浓度6-ba和naa对愈伤组织分化的影响表2 不同浓度梯度6-ba的培养基中愈伤组织分化及生长情况不同溶度配比的6-ba和naa组合对红掌愈伤组织诱导和分化影响比较明显。

综合上述试验可知，在对所用红掌品种的组培试验中适宜的愈伤组织培养的培养基成分为：ms+6-ba1.0mg/l+naa0.15mg/l+葡萄糖30g/l。

2.1.3 不同光照条件对愈伤组织诱导的影响观察中发现，以1000lx-1500lx的散射光对红掌生长很好，愈伤组织诱导率较高，且分化早。

虽然1500lx光照下愈伤组织诱导发生时间上较1000lx光照早，但1500lx光照下的愈伤组织诱导率远比1000lx光照下的诱导率低。

综合考虑，还是以1000lx光照强度作为红掌愈伤组织诱导的光照模式。

2.1.4 不同品种、不同部位、不同成熟度红掌外植体对愈伤组织的诱导的影响将红掌四种成熟度的叶片和叶柄（未展叶片及叶柄、展开一周的叶片及叶柄、展开二周的叶片及叶柄，完全成熟叶片及叶柄）分别接种后培养， 35d后观察愈伤组织发生情况。

结果见表3。

表3 不同成熟度叶片、叶柄对愈伤组织诱导的影响本试验再次证明了外植体不同发育阶段对红掌离体培养的关键作用：未展开叶片可能因过于幼嫩、组织形态发育不完全、不能适应离体培养环境而导致诱导率不高；完全成熟的老叶可能因为细胞老熟，功能下降，污染程度高而影响愈伤组织诱导效果；适度成熟的叶片（展开二周）具有较高的愈伤组织诱导效果。

2.2 不定芽的分化和增殖2.2.1 基本培养基对愈伤组织分化不定芽的影响三种红掌的芽分化效果在ms培养基上表现最好，其芽分化率最高，芽发生时间最短，平均每块愈伤组织分化出的芽数量最多。

n6培养基其次，b5培养基再次，1/2ms培养基分化效果最差。

芽发生时间最长，且分化出的芽数量偏少。

所以，在不定芽的分化和增殖试验中，使用ms培养基作为基本培养基。

2.2.2 不同激素组合对不定芽分化及增殖的影响将红掌外植体诱导出的愈伤组织接种在附加有不同浓度的6-ba 和naa的ms培养基上进行培养，寻求最佳的浓度组合，以获得最佳的诱导率并且植物生长健壮。

结果见表4。

表4 不同浓度6-ba和naa对不定芽分化的影响分化结果表明：红掌愈伤组织分化效果，在ms+6-ba2.0mg/l+naa0.2mg/l+葡萄糖30g/l的培养基组合中，各品种生长分化出芽的时间最短，且不定芽生长良好。

当6-ba浓度在0.5～1.0mg/l范围内，分化率随naa浓度的增加而呈上升趋势，初始分化时间则显著递减；当6-ba浓度上升到2.0mg/l时，分化率随naa浓度的增加而递减，而初始分化时间则显著增加。

在各种浓度配比中，以6-ba2.0mg/l+naa0.2mg/l最好。

另外，在继代增殖培养中发现，随继代次数的增加，从5～6代开始，愈伤组织增殖数开始下降，而前4带培养愈伤组织产生芽的能力比较强。

因此，愈伤组织增殖4代以后，应全部用于芽诱导，而不应继续增殖下去。

2.3 生根培养待幼苗长高到2～3cm，具有4～5片叶时，自底部将已经分化叶片与芽的培养物切割为带3～4枚叶片的小块，转入含不同浓度naa 的生根培养基上，10天后开始观察生根情况，结果见下表。

表5 不同浓度naa对红掌生根的影响在所有浓度组合中，低浓度的naa（0.01～0.05）也能有效诱导根的产生，这可能是外源激素在苗体内累积的效果，但诱导出的根细而长，生长比较缓慢。

而随着naa浓度的逐渐增加（1.0mg/l～2.0mg/l），平均生根时间逐步缩短，根系逐渐变的短而粗壮。

且根周围形成新的愈伤组织，阻碍了根系的进一步生成，且根易与植株脱离。

因此，较高浓度的naa是不利于根的诱导产生。

根据试验结果综合分析，naa浓度在0.5mg/l时，生根时间短，根长而粗壮，生长速度快，诱导率高，是最有利于红掌生根的。

在此时期宜适当增加光照，使苗更为粗壮。

2.4 炼苗移栽所用的基质为泥炭+珍珠岩+砻糠灰（2∶2∶1）的混合物，提前一周用0.1%～0.2%kmno4溶液浇灌灭菌，外用塑料薄膜封住。