POCT及免疫比浊体外诊断试剂

乳胶增强免疫散射比浊法检测血清淀粉样蛋白A的应用评价姜剑巍;杨宇;应春妹【摘要】目的：建立乳胶增强散射免疫比浊法检测血清淀粉样蛋白A（SAA）的即时检验（POCT）方法，并对该法的精密度、线性、准确度等进行评价。

方法建立乳胶增强免疫比浊法测定SAA的POCT方法，并根据美国临床实验室标准化协会（CLSI ）相关文件对建立的 POCT方法进行方法学评价。

结果本法的分析灵敏度为3．52 mg／L；批内变异系数（CV）＜8％、日间CV＜10％；抗干扰性较强，血红蛋白≤4．0 g／L、胆红素≤400μmol／L、类风湿因子≤1621 U／L、甘油三酯≤10 mmol／L 对测定无影响；与进口 N Latex SAA 试剂相关性良好（Y＝1．0521X＋0．0015，r＝0．9983）；线性范围为5～200 mg／L。

结论本法具有简单、快速（3 min内完成检测）的特点，各项分析指标均符合要求，可用于临床患者血清标本的检测。

%Objective To establish the analysis performance of serum amyloid A (SAA ) detected by latex-enhanced immunonephelometry method with point-of-care test (POCT),and to evaluateprecision,linearity,accuracy and so on.Methods According to relevant documents of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI),the methodological evaluation was performed.Results The sensitivity of this method was 3.52 mg/L.The within-run and inter-day coefficients of variation (CV) of this method were <8% and <10%,respectively,with strong anti-interference ability.When the level of hemoglobin was ≤4.0 g/L,the level of bilirubin was ≤400 μmol/L,the level of rheumatoid factor was ≤1 621 U/L,and the level of triglyceride was ≤10 mmol/L,there was no influence on the results.There was a good correlation with that of importedN Latex SAA assay (Y=1.052 1X+0.001 5,r=0.998 3). The detection linear range of this method was 5-200 mg/L.Conclusions The latex-enhanced immunonephelometry method for SAA is convenient,and it can be finished within 3 min.Its performance meets the requirements for in vitro diagnostic reagents,and it is suitable for the detection of serum samples in clinical use.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】4页(P49-52)【关键词】淀粉样蛋白A;血清;乳胶增强免疫比浊法;即时检验【作者】姜剑巍;杨宇;应春妹【作者单位】上海交通大学医学院附属仁济医院检验科，上海200127;上海奥普生物医药有限公司，上海201203;复旦大学附属妇产科医院，上海200011【正文语种】中文【中图分类】R446.1Application evaluation of latex-enhanced immunonephelometry method to determine serum amyloid A JIANG Jianwei1， YANG Yu2， YING Chunmei3. (1.Department of Clinical Laboratory， Renji Hospital，Shanghai Jiaotong University School of Medicine，Shanghai 200127，China; 2.Shanghai Upper Bio-Tech Pharma Co.，Ltd.，Shanghai 201201, China; 3.Obstetrics and Gynecology Hospital of Fudan University, Shanghai200011, China )Key words: Amyloid A；Serum；Latex-enhanced immunonephelometry method；Point-of-care test血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein ，SAA)是一种急性时相反应蛋白，属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质，相对分子质量约为12 000。

体外诊断医疗器械标准体外诊断用检测仪器和设备标准仪器和器具通用标准体外诊断用检测仪器除基本性能应符合相应的标准要求外，其安全性也应满足相关安全标准要求,通用标准为GB/T18268.26、YY0648oGB/T18268.26根据体外诊断设备的特性及其电磁环境，规定了其电磁兼容性的抗扰度和发射的基本要求。

同常规医用电气设备一样,体外诊断设备也被广泛应用于各种电磁环境中，除了应在典型的医用环境（医院、诊所等）中正常工作外，也应在家庭环境中正常、安全地工作。

也就是说,体外诊断设备应有与这些环境相适应的基本抗扰度等级。

YY0648是强制性国家标准GB4793.1的专用标准之一，适用于预期用作体外诊断医用目的的医用实验室仪器。

基于体外诊断设备预期用途特殊性，操作人员可能接触各类具有生化危险的人体样本、化学试剂等。

为保护操作人员安全,YY0648等同转化了IEC61010—2—101,为安全性标准，提示操作人员操作设备可能产生的生化危险、电气危险等，以保护操作人员防电击、防生化危险等。

该标准的全部内容都与强制性国家标准GB4793.1相关。

血液学和流式细胞学检测仪器标准血细胞分析是临床常规检验之一。

血细胞分析仪集成了生物、化学、光学、流体力学、电子电路、计算机软件等多学科技术，自20世纪50年代以来，经过多年发展和技术革新，不仅能对血液中的红细胞、白细胞、血小板等有形成分进行计数和定量分析，还能对细胞群进行识别、区分和分析。

同时，利用计算机强大的信号采集、分析和运算能力，更多具有临床意义的参数也被发掘出来。

随着高性能计算机、高精密度和快速图像获取设备及大数据库的诞生，自动化细胞图像分析设备正在以准确度高、速度快、网络俯口人性化走进临床实验室。

流式细胞术是利用流式细胞仪对人体样本中的有形成分，包括细胞、血小板、细胞器、精子、微生物以及人工合成微球等的多种生物和物理、生化特性进行计数和定量分析，并能对特定细胞群体加以分选的细胞参量分析技术。

一文读懂体外诊断试剂IVD现如今去医院看病基本上都是医生未见，诊断先行，血检、尿检早已习以为常，而这些检查都是基于体外诊断试剂。

体外诊断试剂也以其精准性、便易性和高效性在整个医疗过程中占据越来越重要的位置，在现代医疗彳本系中不仅能大大降低医生的工作量，同时也极大的提高了诊断的准确性以及对疾病的预防性，因此，体外诊断又有着“医生的眼镜”之美誉。

今天的每日课堂栏目就一起来学习下体外诊断试剂IVD是什么。

IVD定义业内人士俗称其为IVD也就是英文InVitroDiagnostic。

体外诊断试剂和器械在国外统一称为体外诊断医疗器械。

属于医疗器械的一部分。

在我国，体外诊断试剂是指：可单独使用或与仪器、器具、设备或系统组合使用,在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中,用于对人体样本（各种体液、细胞、组织样本等）进行体外检测的试剂、试剂盒、校准品（物）、质控品（物）等。

内涵及市场分类彳本外诊断产品包括对人彳本样本（包括彳本液、细胞、组织样本等）进行收集、制备（定向处理）、检测的试剂仪器及分析系统。

通常体外诊断市场主要分为四大类：生化试剂、免疫诊断、分子诊断、即时检验（POCT）。

据《蓝皮书》数据:2014年，体外诊断细分领域占其总体市场比例前三位：占比接近四成的免疫诊断（38%）、占比接近两成的生化试剂（19%）和占比为15%的分子诊断。

目前市场份额占比最大的是免疫诊断。

其中生化试剂类产品主要以国产品牌为主；免疫诊断类产品以进口为主导，国产品牌占有一定份额；分子诊断类产品则是进口和国产品牌鱼龙混杂；而在POCT类产品方面，是以进口为主，国产尚处于起步阶段。

国内体外诊断产业现状中国医药工业信息中心发布的《蓝皮书》显示：2014年我国医疗器械市场总量达到2760亿元，依据市场占比来看，前三位的依次是:市场占比接近两成的医学影像设备（19%）、市场占比为16%的体外诊断产品和市场占比为13%的高值医用耗材及植入物。

【产品名称】通用名称：超敏C反应蛋白检测试剂盒（免疫比浊法）【包装规格】规格1300人份/盒，600人份/盒规格2100人份/盒规格3R1：1×1000ml R2：1×500ml规格4200人份/盒规格5R1：2×32ml R2：2×16ml（300人份/盒）质控品（选配）：3×500μl水平1：1×500μl，水平2：1×500μl，水平3：1×500μl【预期用途】本试剂用于体外定量检测人全血中C反应蛋白（CRP）的含量。

CRP是机体的一种重要急性期蛋白，其具体的病理作用目前还不完全明确。

在各种急、慢性感染以及组织损伤时，CRP在数小时内迅速升高，病变消退时又迅速降到正常水平，与其他已知的急性相蛋白相比，CRP含量最高，在发病时变化最明显。

定量检测人全血中的C反应蛋白，适用于感染、炎性疾病、组织损伤、手术创伤及组织坏死等病变情况的辅助诊断；低浓度C反应蛋白的变化还是区分低水平炎症状态的灵敏指标，其水平与动脉粥样硬化及急性脑梗死等心脑血管疾病的发生、炎症程度及预后密切相关。

免疫比浊法灵敏度高，特异性好，测定速度快，适用于各类型生化自动分析仪或特定蛋白仪，现已在临床上普遍采用。

[3]【检验原理】本试剂采用羊抗人C反应蛋白多克隆抗体，定向偶联在胶乳表面，样本中的C反应蛋白与试剂中的抗体特异性结合，形成抗原抗体免疫复合物，使乳胶微球的交联度发生改变，从而使反应体系的浊度发生变化，胶乳试剂可以特异的增大该浊度变化，增大试剂的灵敏度，该浊度变化的高低与样本中C反应蛋白的含量成正比，通过测定特定波长处的吸光度值，按照多点定标校准曲线即可得出样本中C反应蛋白的含量。

【主要组成成分】试剂盒组成R1试剂组分包括：3-双(2-羟乙基)氨基-2-羟基丙磺酸(DIPSO)缓冲液，pH7.50.05mol/L氯化钠0.15mol/L曲拉通X-100（Triton X-100）0.1%聚乙二醇6000（PEG6000）1%R2：羊抗人C反应蛋白多克隆抗体致敏胶乳0.1%定标IC卡：溯源至ERM-DA4701说明书1质控品（选配）：3×500μl 水平1：PBS缓冲液，pH7.5，小牛血清20%，C反应蛋白标准品1.0mg/L1水平2：PBS缓冲液，pH7.5，小牛血清20%，C反应蛋白标准品8.2mg/L1水平3：PBS缓冲液，pH7.5，小牛血清20%，C反应蛋白标准品24.1mg/L1不同批号试剂盒中各组分请勿互换使用。

.4中国医疗器械信息 | China Medical Device Information中国体外诊断行业始于20世纪80年代，经历了30多年的发展，目前已被公认为拥有广阔的市场空间、巨大的发展潜力、高速的发展趋势。

作为一个医疗器械行业的朝阳产业，体外诊断产品的更新换代非常迅速。

目前，我国体外诊断试剂市场大体由8个部分构成，其中免疫学诊断试剂用量最大，市场份额37%，接下来依次为临床化学29%、血糖检测12%、分子检测8%、血液学5%、微生物学4%、其他5%。

随着科学进步的突飞猛进，传统的检验医学实现了自动化仪器的发展和普及，虽然在质量和速度上有了明显的进步，但是自动化仪器由于分析前、分析后许多复杂的步骤耗费大量时间，不能短时间内获得检验报告等因素，仍难解决传统检验医学的弱点——时效性欠佳，即既要做到短时间反馈，又要做到与复杂技术和大型检验设备的测定结果一致。

目前社会的发展对体外诊断提出了更高的要求。

未来体外诊断技术的发展方向主要有以下三大趋势：一是自动化、一体化；二是小型化、即时化；三是分子化、个性化。

POCT 类医疗器械凭借便捷、快速的优势，在体外诊断领域中迅速发展，已被全世界广泛应用。

体外诊断行业之POCT陈寒柏 上海奥普生物医药有限公司 （上海 201203）内容摘要： 本文简要的分析了POCT 行业的国内外的发展方向和趋势。

国内发展的趋势是国产化、临床化、社区化和民用化。

关 键 词： POCT 发展趋势The Poct of in Viero Diagnostic LindustryCHEN Han-bo Vice General Manager, shanghai upper bio-tech pharma co.,ltd. (Shanghai 201203)Abstract: In this paper, brief overview of the national and international development trends of POCT field is put forward. The nationaldevelopment trend of POCT is localization, clinic, communitization and civilianization.Key words:POCT, development trends文章编号：1006-6586(2014)10-0004-04 中图分类号：R446.1 文献标识码：A收稿日期：2014-06-02作者简介：陈寒柏，上海奥普生物医药有限公司副总经理1.POCT的兴起所谓POCT （Point of Care Testing ），即在病人身边快速诊断，又称为即时检测，是从2000年开始在美国临床化学委员会（AACC ）会议上发起，在2003年的杜塞尔多夫国际医院及医疗设备博IVD · Thematic Forum览会也增加了一项技术报告和现场演示报告——POCT，从此POCT概念在国际上开始被认可并成为检验医疗器械中增长率最高的项目。

C-反应蛋白测定试剂盒－CRP（胶乳免疫比浊法）说明书通用名称：C-反应蛋白测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）包装规格：a)试剂1：1×20mL试剂2:1×5mLb)试剂1：2×40mL试剂2:1×20mLc)试剂1：4×60mL试剂2:2×30mLd)试剂1：2×80mL试剂2:2×20mL预期用途用于体外定量测定人血清中C-反应蛋白的含量。

CRP作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗塞、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高，并有成倍增长之势。

CRP可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断：一旦发生炎症，CRP水平即升高，而病毒性感染CRP大都正常。

脓毒血症CRP迅速升高，而依赖血培养则至少需要48小时，且其阳性率不高。

CRP能快速有效地检测细菌性脑膜炎，其阳性率达99％。

〔1〕临床上测定C-反应蛋白常用于风湿性关节炎、心肌梗塞的辅助诊断。

检验原理本试剂采用胶乳增强免疫透射比浊法测定人血清中的C-反应蛋白。

C-反应蛋白与其相应胶乳抗体在液相中结合，形成抗原抗体复合物产生浊度。

浊度的高低与样本中C-反应蛋白的含量成正比。

主要组成成份试剂1主要组份磷酸盐缓冲液100mmol/L聚乙二醇6000（PEG）60004％表面活性剂及稳定剂试剂2主要组份磷酸盐缓冲液100mmol/L抗体致敏胶乳适量表面活性剂及稳定剂注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。

储存条件及有效期试剂原包装：（2～8）℃储存，有效期为12个月。

开口后的试剂在仪器仓中可稳定30天。

适用仪器日立7020、7600-110，贝克曼AU5400，东芝TBA-120，迈瑞BS-400、迪瑞CS-400B、罗氏MODULE P800、东芝TBA-40、贝克曼DXC-600、西门子RxL Max全自动生化分析仪。

样本要求新鲜不溶血血清，2～8℃可稳定8小时。

体外诊断试剂相关介绍及分析1.体外诊断试剂的简介1.1体外诊断试剂相关概念⏹生物制品是以微生物、寄生虫、动物毒素、生物组织等为起始材料，采用生物学工艺或分离纯化技术制备并以生物学技术和分析技术控制中间产物和成品质量制成的生物活化制剂。

⏹诊断试剂从一般用途来分，可分为体内诊断试剂和体外诊断试剂两大类。

除用于体内诊断的如旧结核菌素、布氏菌素、锡克氏毒素等皮内用的诊断试剂等外，大部分为体外诊断试剂。

⏹体外诊断试剂是指对从人体内提取的样本（包括捐献的血液和组织）在体外进行检查的试剂、组合试剂、校准物品、对照材料等。

体外诊断试剂可单独或与试验工具、仪器、器具、设备或系统组合使用。

1.2体外诊断试剂的原理分类⏹作用原理：体外诊断试剂是化学检测方法中最重要的部分，通过诊断试剂和体内物质在体外的化学反应来判断体内物质的性质和数量，通过和标准品的比较来判断人体的生理状态，主要应用在疾病的诊断上。

1.2.1临床生化试剂临床生化试剂主要有测定酶类、糖类、脂类、蛋白和非蛋白氮类、无机元素类、肝功能、临床化学控制血清等几大类产品，主是用于配合手工、半自动和一般全自动生化分析仪等仪器检测，有单试剂、液体双试剂、干粉双试剂、化学法试剂、标准品等规格，同时各厂家都提供适用于检测室间、室内质控的质控血清系列。

1.2.2免疫诊断试剂免疫诊断试剂在诊断试剂盒中品种最多，根据诊断类别，可分为传染性疾病、内分泌、肿瘤、药物检测、血型鉴定等。

从结果判断的方法学上又可分为EIA、胶体金、化学发光、同位素等不同类型试剂，其中同位素放射免疫的试剂由于对环境污染比较大，目前在国际市场上已经被淘汰，国内还有少量使用。

1.2.3分子诊断试剂分子诊断试剂主要有临床已经使用的核酸扩增技术（PCR）产品和当前国内外正在大力研究开发的基因芯片产品。

PCR产品灵敏度高、特异性强、诊断窗口期短，可进行定性、定量检测，曾广泛用于肝炎、性病、肺感染性疾病、优生优育、遗传病基因、肿瘤等的检测，但由于市场混乱和交叉污染等原因，卫生部严令禁止了荧光电泳定性类PCR试剂在临床的应用，目前国家食品药品监督管理局已经批准了少量已解决了交叉污染的杂交半定量和定量试剂盒。

全程C反应蛋白测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)适用范围：用于体外定量测定人血清或血浆中C反应蛋白的含量。

1.1包装规格表1 包装规格试剂1：2×20mL、试剂2：2×20mL试剂1：3×20mL、试剂2：1×20mL试剂1：3×60mL、试剂2：3×20mL试剂1：2×40mL、试剂2：2×20mL试剂1：6×3.8mL、试剂2：6×3.8mL试剂1：7×20mL、试剂2：2×12mL试剂1：2×11mL、试剂2：2×11mL试剂1：2×40mL、试剂2：2×40mL试剂1：1×36mL、试剂2：1×18mL试剂1：2×60mL、试剂2：2×60mL试剂1：6×4.3mL、试剂2：6×4.3mL试剂1：12×4.2mL、试剂2：6×2.9mL试剂1：1×20mL、试剂2：1×20mL试剂1：1×60mL、试剂2：1×20mL试剂1：1×45mL、试剂2：1×15mL试剂1：1×8mL、试剂2：1×8mL试剂1：1×18mL、试剂2：1×6mL320测试/盒（试剂1：2×20mL、试剂2：2×20mL）400测试/盒（试剂1：2×20mL、试剂2：2×20mL）480测试/盒（试剂1：2×20mL、试剂2：2×20mL）240测试/盒（试剂1：3×20mL、试剂2：1×20mL）320测试/盒（试剂1：3×20mL、试剂2：1×20mL）400测试/盒（试剂1：3×20mL、试剂2：1×20mL）480测试/盒（试剂1：3×20mL、试剂2：1×20mL）校准品（液体，5水平）：5×1mL质控品（液体，水平1）：1×3mL；1×1mL质控品（液体，水平2）：1×3mL；1×1mL1.2 主要组成成分表2 主要组成成分试剂成分浓度试剂1：氨基乙酸缓冲液50mmol/L试剂2：乳胶颗粒超敏化的CRP抗体液0.20%（w/v）校准品（液体）：人血清基质C反应蛋白≥70%水平1：0.4～0.8 mg/dL水平2：1.0～3.0 mg/dL水平3：3.5～8.0 mg/dL水平4：15.0～20.0 mg/dL水平5：30.0～40.0 mg/dL 质控品（液体）：人血清基质C反应蛋白≥70%水平1： 0.5～1.0 mg/dL 水平2： 2.0～4.0 mg/dL试剂中含有防腐剂。

C反应蛋白（CRP）测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）1.1包装规格.试剂1：1×40mL、试剂2：1×40mL；.试剂1：1×40mL、试剂2：1×40mL、校准品：6×1mL（6个浓度）、质控品：2×1mL（2个水平）；.试剂1：2×40mL、试剂2：2×40mL；.试剂1：2×40mL、试剂2：2×40mL、校准品：6×1mL（6个浓度）、质控品：2×1mL（2个水平）；.试剂1：2×60mL、试剂2：2×60mL；.试剂1：1×10mL、试剂2：1×10mL；校准品：6×1mL（6个浓度）、质控品：2×1mL（2个水平）；.400测试/盒（试剂1：1×40mL、试剂2：1×40mL）。

1.2主要组成成分1.2.1试剂组成试剂1：Tris-HCl缓冲液0.05mol/L；试剂2：C反应蛋白抗体、具体浓度依据抗体效价确定、聚苯乙烯微球≤1%（w/v）。

1.2.2校准品组成校准品：C反应蛋白抗原、新生牛血清、稳定剂<0.1%。

目标浓度：校准品1：0.00mg/L、校准品2：6.00±1.00mg/L、校准品3：15.00±3.00mg/L、校准品4：30.00±6.00mg/L、校准品5：150.00±30.00mg/L、校准品6：300.00±60.00mg/L批特异，具体定值见标签。

1.2.3质控品的组成质控品：C反应蛋白抗原、新生牛血清、稳定剂<0.1%。

定值范围：质控品1：（2.00～4.00）mg/L、质控品2：（14.00～26.00）mg/L。

批特异，具体定值见标签。

2.1外观2.1.1试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰，无磨损；2.1.2试剂1应为无色或淡黄色澄清溶液，试剂2应为乳白色悬浊液；2.1.3校准品应为无色或淡黄色澄清溶液，质控品应为无色或淡黄色澄清溶液。