植物细胞工程培养基配制

植物组织培养实验
实验一植物组织培养培养基的配制
一、实验目的：掌握培养基母液的配制及培 养基的制备与灭菌的操作方法。
二、实验用品： 1、仪器用具：电子天平、高压灭菌锅、试剂
瓶、烧杯、玻棒、移液管、培养瓶、电炉、 pH试纸、量筒等 2、试剂：见MS培养基配方
三、实验步骤：
1、母液的配制： 1）大量元素：配制成10倍液，1000ml；钙盐单独
（2）无机微量(100倍液，配制500ml）
药品名称 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg
MnSO4 ·4H2O
22.3
1150
ZnSO4 ·7H2O
8.6
430
定容于500wenku.baidu.coml
H3BO3
6.2
310 蒸馏水中。每
Na2MoO4 ·2H2O 0.25 12.5 升培养基吸此
KI
0.83
41.5 液10ml
2、培养材料表面灭菌：剥取玉米成熟胚； （此处开始在超净台上操作）75%酒精浸 泡30秒，倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒 出升汞；无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备 用。
四、实验步骤
3、接种：取出玉米胚置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，接种到适当培养基中。重新包扎 好瓶口，写好标签（时间、材料等）
可分装约200-250瓶
准备各种器具等：
洗涤三角烧瓶、移液管、准备器具（枪形镊、 剪刀、解剖刀）、烧杯、搪瓷缸、电炉、 棉线、脱脂棉、滤纸、报纸、（聚丙烯塑 料薄膜）、培养皿、蔗糖、琼脂、吐温-80 或吐温-20等
3.灭菌
• 准备好需要灭菌的物品：培养基分装包扎 并做好标记；滤纸裁剪放入培养皿中包扎； 接种器具一副（剪刀、镊子、解剖刀）包 扎；250ml及100ml小烧杯包扎；蒸馏水装 瓶包扎
实验三 月季的快繁
一、实验目的：对月季茎段进行快繁 ，掌握 利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法
二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验
一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、
75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：植物茎段（月季）
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等；接种 室的准备（超净台的准备）
实验四 玉米成熟胚的培养
一、实验目的：玉米成熟胚培养，掌握胚培 养的方法
二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验
一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、
75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：玉米种子
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备）；材料的 准备（玉米种子次氯酸钠消毒，无菌水冲 洗、浸泡）
注意事项：该母液用棕色瓶保存。
（4）有机化合物 （100倍液，500ml）
药品名称
配方用量mg/L 扩大50倍称量mg
甘氨酸
2.0
100 定容至500ml
盐酸硫胺素(B1) 0.4
盐酸吡哆醇(B6) 0.5
烟酸
0.5
20
每升培养基取
25
此液10ml
25
肌醇
100
5000
生长调节物质的配制
各配成1mg/ml母液100ml（称取0.1g样品，配100ml) ① NAA：先用少许95%酒精或热水溶解后再加水定容。 ② 2,4-D：先用少许1N NaOH溶解后再加水定容。 ③ 6-BA：先用少许1N HCl溶解后再加水定容。
CuSO4 ·5H2O CoCl2· 6H2O
0.025 0.025
1.25 1.25
（3）铁盐 （200倍液，500ml）
药品名称 配方用量mg/L 扩大100倍称量mg
FeSO4 ·7H2O
27.8
2780
Na2 –EDTA
37.3
3730
EDTA：乙二胺四乙酸是最常见的螯合剂
定容至500ml 每次取用5ml
四、实验步骤
3、接种：取出叶片置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的叶片边缘，将 叶片剪成适当大小（3-5mm见方），接种到 适当培养基中。重新包扎好瓶口，写好标签 （时间、材料等）
4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水
三、实验材料：植物叶片（月季或菊花）
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备）
2、培养材料表面灭菌：洗涤、清理；（此处 开始在超净台上操作）75%酒精浸泡30秒， 倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒出升汞； 无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备用。
4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
2、培养材料表面灭菌：选用嫩茎为材料，取带芽的 茎段，一般以顶端以下第3-10节上的芽为好，采 回枝条剪去叶柄，再剥去附在茎上的皮刺，先用 自来水冲洗枝条表面的尘土，然后把枝条段截成 2-3cm小段，每段带1-2个侧芽，（此处开始在超 净台上操作）用70%酒精灭菌20s，再用0.1%氯 化汞溶液浸泡10min，再用无菌水冲洗3-5次，无 菌水浸泡备用。
药品名称 配方用量mg/L 扩大10倍称量mg
KNO3 NH4 NO3 MgSO4 ·7H2O KH2 PO4
1900 1650 370 170
19000 16500 3700 1700
定容于1000ml 蒸馏水中。配 制每升培养基 取此液100ml
CaCl2·2H2O 440 4400 单独配制成10倍1000ml
四、实验步骤
3、接种：取出茎段置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的茎段上下切口， 将茎段剪成适当大小（带茎节，约0.5cm）， 接种到适当培养基中。重新包扎好瓶口，写 好标签（时间、材料等）
4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
配制
2）微量元素：配制成100倍液，500ml； 3）铁盐 200倍液 500ml 4）有机物质100倍液 500ml 5）激素：BA、NAA、2,4 D 各配成1mg/ml母液
100ml 其他还需配制：70%-75%乙醇1000ml；0.1%升汞
500ml
母液的配制
以MS培养基为例，一般配四种母液。配方如下： （1）无机大量 （10倍液，配制1000ml）：
2．培养基配制 以MS1升培养基为例
水 药品 → 配成母液 → 混合 → 调节pH
琼脂 + 水→ 加热溶解 + 糖 玻璃器皿或其他 →分装→ 灭菌→冷却→凝固→接种
配制的培养基配方
• 1、MS+BA 1 mg/L+ NAA 0.1 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • 2、MS+BA 3 mg/L+ NAA 0.1 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • 3、MS+BA 5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • 4、MS+BA 1 mg/L+ 2,4 D 1 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • 5、MS+BA 2 mg/L+ 2,4 D 2 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • 6、MS+BA 2 mg/L+ 2,4 D 3 mg/L +琼脂0.7%+ 蔗糖3% • pH5.8 • 每小组配制1种培养基800ml，配制6种培养基共4800ml，
• 灭菌 ：加水、盖严、0.05MPa(0.5kg/cm2 ) 放气、121摄氏度(1.0kg/cm2)保温灭菌 20min，降压到0，开盖，取出
实验二 植物愈伤组织的诱导
一、实验目的：对植物的叶片诱导愈伤组织 ， 掌握无菌操作方法，学习诱导植物外植体 形成愈伤组织的方法。
二、实验用品：
1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球