离心机使用步骤和离心机使用注意事项
- 格式:doc
- 大小:29.50 KB
- 文档页数:3
离心机的操作及注意事项离心机是一种常用于生物化学、医学、生物技术等领域的实验仪器,主要用于分离和纯化生物学样品中的细胞、细胞器、蛋白质、核酸等物质。
正确操作离心机是确保实验结果准确性和个人安全的重要环节,以下是离心机的操作及注意事项:操作步骤:1. 首先,将离心机放置在水平、稳定的台面上,并确保离心机的电源线已正确插入并接通电源。
2. 打开离心机的盖子,根据实验需求选择合适的转子并正确安装在离心机的转子槽中。
3. 将待离心的样品装入离心机转子的样品管中,并确保样品管内的样品均匀分布。
4. 关上离心机的盖子,并根据实验需要设定好离心机的转速和离心时间。
5. 启动离心机,待离心机达到设定的转速后开始计时,离心结束后关闭离心机并停止转子的旋转。
6. 打开离心机的盖子,小心取出样品管,注意避免离心机停止后样品管内的离心沉淀混合。
7. 根据实验需要将样品进行后续处理,如取上清液、废弃离心沉淀等。
注意事项:1. 在操作离心机时,应注意离心机的转子和样品管的最大转速,不得超出其额定转速范围,以免发生事故。
2. 离心机转子的平衡性很重要,应确保离心样品的重量均匀分布在转子的两侧,避免转子的偏心现象。
3. 在离心机工作时,应注意离心机的噪音和振动情况,如发现异常应立即停机检查。
4. 在取出离心机转子内的样品时,应小心轻放,避免碰撞造成离心机转子的损坏。
5. 离心机转子内的样品管在离心时会受到离心力的作用,离心结束后取出时应小心,以免离心样品的沉淀被扰动。
6. 在离心机停止工作后,应及时清洁离心机的转子和离心机内部,确保离心机的干净和卫生。
7. 离心机的使用和维护应按照离心机的使用说明书进行,避免误操作和损坏离心机。
总的来说,正确的操作离心机和严格遵守离心机的使用规范是保证实验准确性和个人安全的重要保障,离心机的操作及注意事项需要严格遵守和重视,以确保离心机的正常运转和实验的顺利进行。
离心机的使用方法和注意事项离心机,这个名字听起来有点高大上,但其实它在我们日常实验中用得非常广泛。
它的主要功能就是通过高速旋转,将液体中的固体或不同密度的成分分离开来。
就像是把水和沙子分开一样简单。
但别小看这个小家伙,它使用起来可得注意些细节,不然可能会出问题哦。
1. 使用前的准备1.1 检查离心机状态在开工之前,首先得检查一下离心机的状态。
看看它有没有什么损坏的地方,尤其是转子和盖子这些重要部件。
动手之前,最好把机器上的尘土擦拭干净,保持干爽。
如果发现有不正常的噪音,或者机器的震动很大,那就得赶紧找人维修了。
要是机器坏了,实验可就白做了。
1.2 确认离心管离心管的选择也很关键。
选用的离心管必须是干净的,不能有裂缝或者污染。
每次使用后都要认真清洗,保持卫生。
放置液体的时候,要注意液体的量要均匀,不要装得太满,也不能太少。
否则在高速旋转时可能会出现不平衡的情况,这对离心机是个大挑战。
2. 离心操作步骤2.1 装载样品把装好样品的离心管放进离心机的转子里,要确保每根管子都放得稳稳的。
一般来说,离心机的转子上都有指示,告诉你如何合理地放置样品。
有些离心机是根据样品的重量自动调整转速的,但大部分还是需要手动设置。
2.2 设定参数接下来,要设定离心机的参数,包括转速和时间。
记得根据实验要求,选择合适的转速和时间。
比如,分离血液成分时,可能需要3000转/分钟的速度,而分离某些细胞时,可能需要6000转/分钟。
根据需要进行调整,但千万别乱调,按照说明书上的参数操作是最稳妥的。
2.3 启动和监控一切准备就绪后,就可以启动离心机了。
启动后,要时刻关注离心机的运行状态。
如果机器出现异常的响声或震动,立马停止操作,检查原因。
别让它继续运行下去,否则可能会对样品产生影响,甚至可能损坏机器。
3. 使用后的处理3.1 取出样品离心结束后,千万别急着打开离心机的盖子,等它完全停止旋转后再打开。
否则,样品可能会因为惯性晃动,导致结果不准确。
离心机操作规程和注意事项离心机是一种常用的实验室仪器,用于分离混合物中的固体颗粒或液体。
正确操作离心机是保证实验结果准确性的重要环节。
本文将介绍离心机的操作规程和注意事项,以帮助读者正确、安全地使用离心机。
一、离心机操作规程1. 准备工作:a. 检查离心机是否处于良好工作状态,如有异常现象应及时报修;b. 检查离心机转子的完整性和干净程度,如有损坏或污垢应及时更换或清洗;c. 选择合适的离心管和转子,确保离心管与转子匹配;d. 将待离心的样品放入离心管中,并确保离心管内液体体积不超过离心管容量的80%。
2. 设置参数:a. 根据实验要求选择合适的转速和离心时间;b. 将离心机转速和离心时间设定到所需数值,注意单位的正确使用;c. 在设置参数后,再次检查参数是否正确。
3. 关闭离心机盖:a. 将离心管放入转子孔中,确保离心管垂直放置;b. 轻轻合上离心机盖,确保盖子牢固关闭;c. 确保离心机盖上的安全锁扣牢固锁定。
4. 启动离心机:a. 按下启动按钮,离心机开始工作;b. 观察离心机是否正常运转,如有异常应立即停止离心机并检查原因;c. 在离心机运转过程中,不得随意打开离心机盖或停止离心机。
5. 离心结束:a. 离心时间结束后,按下停止按钮,离心机停止运转;b. 等待离心机完全停止后,才能打开离心机盖;c. 将离心管从转子中取出,注意避免碰撞或溅出液体;d. 对离心管内的样品进行处理或分析。
二、离心机注意事项1. 安全第一:a. 操作离心机时应佩戴实验室安全防护用品,如实验手套和防护眼镜;b. 在离心机工作时,不要将手指或其他物体伸入离心机;c. 离心机工作时产生的高速旋转力会产生离心力,离心管内的样品可能会溅出,因此应保持安全距离。
2. 转速控制:a. 设置离心机转速时,应根据离心管和样品的特性选择合适的转速范围;b. 高速离心时,应注意转子和离心管的平衡性,避免转子偏心或离心管松动。
3. 离心时间控制:a. 根据样品的性质和离心的目的,选择合适的离心时间;b. 长时间离心可能会对样品造成热损伤或干燥,因此应根据实验要求控制离心时间。
工业离心机的操作及注意事项
一、操作准备
1.检查电源是否正常,确保电源电压与离心机铭牌上标示的电压相符,避免
因电压不匹配导致离心机无法正常运转或损坏。
2.检查离心机各部件是否完好,包括转子、电机、控制面板等,确保没有破
损或异常。
3.确保离心机放置平稳,避免因地面不平导致离心机运转时产生振动或移位。
4.检查转子上的样品是否放置正确,确保没有超载或放置不均匀的情况,以
免影响离心效果和损坏离心机。
5.关闭离心机盖子,确保盖子密封良好,以免造成样品溅出或仪器损坏。
二、操作步骤
1.打开离心机电源开关,等待电机正常运转后,开始加速。
根据样品和实验
需求设定离心时间和转速等参数。
2.离心过程中要保持安静,不要在离心机附近放置杂物,以免影响离心机的
正常运转。
3.离心过程中如出现异常声音或振动,应立即关闭离心机并检查问题。
如无
法解决,应联系专业人员进行维修。
4.离心结束后,先关闭离心机,再关闭电源开关。
等待一段时间后,打开离
心机盖子,取出样品。
5.使用酒精或乙醚等清洁溶剂擦拭离心机表面,保持仪器清洁干燥。
三、注意事项
1.使用前应仔细阅读说明书和安全注意事项,确保正确操作和使用。
2.操作时应避免触碰高速旋转的转子部分,以免发生意外伤害。
3.在进行危险性实验时,应佩戴防护眼镜、实验服等安全防护用品。
4.离心过程中应避免打开盖子或触摸离心机内部,以免发生意外伤害或损坏
仪器。
离心机的操作步骤及注意事项离心机是一种常用的实验室设备,广泛应用于生物医学研究、生物化学分析、蛋白质纯化等领域。
正确的操作离心机可以确保实验结果的准确性和可靠性。
本文将介绍离心机的操作步骤以及使用时需要注意的事项。
一、离心机的操作步骤1. 准备工作在开始操作离心机之前,需要完成以下准备工作:•检查离心机:确保离心机处于正常工作状态,所有部件完好无损。
•准备离心管:选择合适的离心管,并确保离心管干净无污染。
•标记离心管:如果需要进行多个样品的离心,可以在离心管上标记编号或其他信息,以便识别样品。
2. 载入样品根据实验需求,将需要离心的样品放入离心管中。
注意以下几点:•样品量:确保离心管中的样品量不超过离心管的容量,避免样品溢出。
•平衡:将离心管放入离心机转盘上时,要确保各个离心管的位置分布均匀,保持平衡。
3. 设定离心参数根据实验需求,设定合适的离心参数,包括转速和离心时间。
•转速:根据样品性质和离心机的规格,选择合适的转速。
一般来说,离心机的转速范围广泛,可以根据需要进行调节。
•离心时间:根据样品类型和离心机的规格,设定合适的离心时间。
不同样品的沉降速度不同,离心时间的长短也会有所不同。
4. 启动离心机关闭离心机的盖子,确保离心机盖子牢固关闭。
按下启动按钮,启动离心机。
离心机开始旋转,样品被离心力分离。
5. 完成离心过程等待设定的离心时间结束。
离心机会自动停止转动,并发出提示音。
在打开离心机盖子之前,务必确认离心机已经完全停止。
6. 取出样品小心地打开离心机盖子,将离心管取出。
注意以下几点:•小心操作:离心管内的样品可能会有液体残留,取出离心管时要小心,避免样品溅出。
•分辨样品:如果进行了多个样品的离心,要记住各个样品的编号或其他信息,避免混淆。
二、离心机使用注意事项在操作离心机时,需要特别注意以下事项:•安全第一:离心机的操作需要保持安全,避免意外发生。
启动离心机前,确认样品已安全放置在离心机转盘上,并确认盖子已经牢固关闭。
离心机的使用方法一、概述离心机是一种常见的实验室设备,主要用于分离混合物中的固体和液体。
在科研、医药、生物等领域中都有广泛的应用。
本文将介绍离心机的使用方法,包括准备工作、操作步骤、注意事项等。
二、准备工作1.检查设备:在使用离心机之前,需要检查设备是否正常运转。
检查电源线是否连接牢固,旋钮是否灵活等。
2.选择离心管:根据实验需要选择合适的离心管。
一般来说,离心管材质分为玻璃和塑料两种,选择时要根据实验需要进行判断。
3.调整转速:根据实验需要调整转速。
一般来说,低速转速适用于分离较轻的物质,高速转速适用于分离较重的物质。
4.平衡样品:将样品放入离心管中,并确保各个样品的重量相等,以保证样品在旋转过程中平衡。
三、操作步骤1.打开盖子:打开离心机盖子,并将样品放入相应位置中。
2.关闭盖子:关闭盖子,并调整离心机的转速和时间。
3.启动离心机:按下启动按钮,离心机开始旋转。
4.等待分离:根据实验需要,等待一定时间让样品分离。
在此期间,可以观察离心管中的样品状态。
5.停止离心机:当分离完成后,按下停止按钮,离心机停止旋转。
6.取出样品:打开盖子,取出分离后的样品,并进行后续处理。
四、注意事项1.注意安全:在使用离心机时,要注意安全。
不要将手伸入正在旋转的设备中,并确保设备稳定运行。
2.选择合适的转速和时间:根据实验需要选择合适的转速和时间。
不要超过设备规定的最大容量和最大速度。
3.平衡样品:放置样品时要平衡,并确保各个样品重量相等。
如果不平衡会导致设备震动和噪音增加。
4.清洁设备:使用完毕后及时清洁设备,并保持干燥。
不要使用酸性或碱性溶液清洗设备,以免损坏设备表面。
5.避免重复使用离心管:为了避免交叉感染和误差,不要重复使用离心管。
综上所述,离心机是实验室中常用的设备之一,掌握其正确的使用方法对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
在使用离心机时,要注意安全、选择合适的转速和时间、平衡样品、清洁设备以及避免重复使用离心管等方面。
离心机的使用步骤和注意事项离心机是一种常见的实验仪器,用于分离液体中的固体颗粒或将不同密度的液体分层。
下面是离心机的使用步骤和注意事项。
使用步骤:1. 确定实验目标:在使用离心机之前,先明确实验目标和需求。
根据实验目的来选择离心管的类型和大小,以及离心机的转速和时间。
2. 准备离心管:选择与实验目标相匹配的离心管,并确保其干净无异物,以避免对实验结果的影响。
将需要离心的液体均匀地倒入离心管中,注意不要超过离心管的最大容量。
3. 装载离心机:将装满待离心液体的离心管均匀地放置在离心机的离心转盘上,确保每个离心管的位置平稳可靠,以避免在急速旋转时发生意外。
4. 设置参数:根据实验需要,调整离心机的速度和时间。
通常,离心机的速度以“g-force”或“rpm”(转速每分钟)为单位。
注意在设置参数时选择适当的值,以保证离心过程的准确性和稳定性。
5. 启动离心机:确认好设置参数后,将离心机的盖子盖好,确保盖子安全锁定。
然后按照离心机的启动程序启动离心机。
在离心机开始旋转之后,尽量避免对离心机的干扰,以免影响离心的效果。
6. 结束离心过程:离心时间结束后,离心机会自动停止旋转。
打开离心机盖子时应特别小心,以避免离心管中的溶液溅出或溢出。
用吸管或移液枪谨慎地将上层液体吸掉,再轻轻将离心管取出。
注意事项:1. 严格按照实验指导书或实验设计要求操作离心机,不得随意调整转速和时间,以免对实验结果造成影响并引发安全问题。
2. 高速离心时需注意安全:离心机在高速旋转的过程中,产生的离心力非常强大。
因此,需要确保离心机的盖子牢固且完全锁定,以防止其意外打开。
在离心机运转期间,不得随意打开离心机,以免受伤。
3. 特殊样品处理:某些样品在离心过程中会产生高温、剧烈挥发等特殊情况。
在处理这类样品时,应仔细阅读相关说明书,并采取相应的预防措施,如使用密封的离心管或在其他特殊的离心条件下操作。
4. 离心管选择:根据实验需求选择合适型号和容量的离心管。
离心机的使用方法及注意事项
离心机是一种在分离和分析化学或生物样品时使用的常见实验室设备。
它可以根据样品的密度和分配,在不同的离心速度下分离样品中的不同成分。
以下是使用离心机时需要注意的事项和步骤:
1. 离心机需要平放在实验室的平稳表面上,并保证安装稳定。
2. 样品需按照离心机的容量和离心机的最大负荷装入离心管中,注意离心管盖应完全盖紧以避免液体外溢。
3. 将填充离心管的样品在离心计划表中按照相应的转速和转速时间进行离心。
在离心开始之前请务必检查离心盘和离心杯是否配对并且已经平衡。
4. 离心计划结束后,离心管应慢慢取出。
离心管内的物质要保持离心管的竖直位置捞出,避免倒放。
5. 离心完毕后,离心盘和离心杯需要彻底清洗和消毒,以避免样品的交叉污染。
6. 在使用离心机的操作中,需要注意轻触轻按按钮,并严格遵守实验室安全规程,避免使用不当或导致意外损伤。
7. 不要在离心机中离心含有易燃物质或腐蚀物质的样品。
8. 离心机样品的离心过程应仔细观察,若发现任何异常情况,应立即停止离心并检查原因。
总之,当使用离心机时,需要注意安全操作和正确使用方法,以确保实验过程的良性进行,保证实验结果的准确性和可靠性。
离心机操作规程引言概述:离心机是一种常用的实验设备,广泛应用于生物医学、化学、生物工程等领域。
正确的操作离心机可以确保实验的准确性和安全性。
本文将详细介绍离心机的操作规程,包括准备工作、操作步骤、注意事项等内容。
一、准备工作:1.1 清洁离心机:在使用离心机之前,应先清洁离心机的转盘、转子和密封圈等部分。
使用温和的清洁剂和干净的布进行清洁,并确保彻底清除残留物,避免对实验产生污染。
1.2 检查离心机状态:检查离心机的电源线、转子和转盘是否正常,确保没有损坏或松动的部分。
同时检查离心机的平衡性,确保转子能够平稳旋转,避免因不平衡而造成设备损坏或实验失败。
1.3 准备离心管和标本:根据实验需要,选择合适的离心管和标本。
确保离心管无损坏或污染,并按照实验要求正确标注样品信息。
二、操作步骤:2.1 载样:根据实验要求和离心机的载样容量,将样品均匀地分配到离心管中。
确保离心管的盖子紧闭,并保持标本的平衡。
2.2 设定离心参数:根据实验需要,设置离心机的转速和离心时间。
确保选择合适的转速和时间,以获得最佳的离心效果。
2.3 启动离心机:将离心管放入离心机的转子槽中,并确保转子和转盘的对应位置正确。
关闭离心机的盖子,并启动离心机。
在离心过程中,注意观察离心机的运行状态,确保转子平稳旋转。
三、注意事项:3.1 避免超载:在载样时,确保离心管中的样品量不超过离心机的载样容量。
超载可能导致离心机不平衡,造成设备损坏或实验失败。
3.2 避免离心时间过长:离心时间过长可能导致样品过度分离或离心管破裂。
根据实验要求和样品特性,合理设置离心时间。
3.3 注意离心机的使用环境:离心机应放置在通风良好、温度适宜的环境中。
避免阳光直射、潮湿或高温环境。
同时,离心机应放置在平稳的水平台面上,避免震动和摇晃。
四、离心结束:4.1 停止离心机:离心时间到达后,停止离心机的运行。
在打开离心机盖子之前,等待离心机完全停止旋转。
4.2 取出离心管:小心地打开离心机盖子,取出离心管。
离心机操作规程及日常维护离心机是一种常用的分离设备,广泛应用于化工、制药、食品、环境检测和科学研究等领域。
为了确保离心机的正常工作和延长其使用寿命,需要遵守一定的操作规程和进行日常维护。
一、离心机操作规程1.确保设备安全:在使用离心机之前,需检查设备是否牢固稳定,工作台面平整,离心机内无异物,并确保电源接地良好。
2.准备工作:根据离心机的型号及需要分离的物质特性选择合适的转子及离心管,确保离心机能够满足分离物质的要求。
3.样品装入:将待分离的样品均匀装入离心管中,注意每个离心管装入样品的量应相同,并确保离心管的盖子紧闭。
4.转子安装:将转子放入离心机的转子插座内,并紧扣固定螺丝,确保转子与离心机的转子插座完全贴合。
5.参数设置:根据分离物质的性质,设定好离心机的最大转速和离心时间。
并确保离心机设定的参数正确和合适。
6.启动离心机:按下启动按钮,离心机开始工作。
在启动过程中,应观察离心机的运行情况,确保没有异常噪音和振动。
7.离心过程:在离心机运行过程中,不可随意停止、开启或改变离心机的参数设置。
离心结束后,应等离心机完全停止并等离心管内的物质停止旋转后,才能打开离心机盖子。
8.取出离心管:小心取出离心管,避免震动或碰撞,注意离心过程中的温度和化学品的安全性。
二、离心机日常维护1.清洁离心机内外部分:每次使用离心机后,都应将离心机内外部分进行清洁。
可用干净的软布擦拭转子、离心管和离心机外壳,注意不要使用有腐蚀性的溶剂。
2.定期检查和更换易损件:定期检查离心机的耗材,如密封圈、O型圈等,发现损坏或老化应及时更换。
3.保持转子平衡:使用离心机一段时间后,转子可能会因使用磨损而导致不平衡。
定期进行转子平衡调整,可延长离心机的使用寿命。
4.定期检查离心机的电源线和接地线:确保电源线和接地线没有损坏或破裂,以保证设备的正常工作和人身安全。
5.离心机放置注意事项:离心机应放置在干燥、通风良好的地方,避免受潮或受热。
离心机使用步骤和离心机使用注意事项
发布:admin | 发布时间: 2008年10月25日
离心机是借离心力分离液相非均一体系的设备。
根据物质的沉降系数、质量、密度等的不同,应用强大的离心力使物质分离、浓缩和提纯的方法称为离心。
一般说,
离心机转速在20 000r/min以上的称为超速离心。
离心技术,特别是超速离心技术是分子生物学、生物化学研究和工业生产中不可缺少的手段。
1924年T.Svedberg和Rinde研制出世界上第一台涡轮超速离心机以来,发展非常迅速,现在已广泛地应用到科学研究和生产的各个领域。
现在离心机转头最高转速已达100000 r/min,最大离心力达700 000 g。
离心机作为一种手段,具有许多优点。
例如,超速离心可在低温下操作,保护了生物大分子的活性。
制备型的离心机负载量大,一次可分离提纯几克样品,比层析、
电泳上的样品量大得多。
分析离心机不仅可测物质的分子量,还可检验物质的纯度、构象、沉降系数等。
因此离心技术在生物学研究中占有重要的地位,是分离、纯
化细胞、病毒、蛋白、核酸和酶的最方便最有效的工具。
(二) 离心原理
当含有细小颗粒的悬浮液静置不动时,由于重力场的作用使得悬浮的颗粒逐渐下沉。
粒子越重,下沉越快,反之密度比液体小的粒子就会上浮。
微粒在重力场下移
动的速度与微粒的大小、形态和密度有关,并且又与重力场的强度及液体的粘度有关。
象红血球大小的颗粒,直径为数微米,就可以在通常重力作用下观察到它们的
沉降过程。
此外,物质在介质中沉降时还伴随有扩散现象。
扩散是无条件的绝对的。
扩散与物质的质量成反比,颗粒越小扩散越严重。
而沉降是相对的,有条件的,要受到外力
才能运动。
沉降与物体重量成正比,颗粒越大沉降越快。
对小于几微米的微粒如病毒或蛋白质等,它们在溶液中成胶体或半胶体状态,仅仅利用重力是不可能观察到
沉降过程的。
因为颗粒越小沉降越慢,而扩散现象则越严重。
所以需要利用离心机产生强大的离心力,才能迫使这些微粒克服扩散产生沉降运动。
离心就是利用离心机转子高速旋转产生的强大的离心力,加快液体中颗粒的沉降速度,把样品中不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。
离心力(F)的大小取决
于离心转头的角速度(ω,r/min)和物质颗粒距离心轴的距离(r,cm)。
它们的关系是:F=ω2R
为方便起见,F常用相对离心力也就是地心引力的倍数表示。
即把F值除以重力加速度g (约等于9.8m/s2.)得到离心力是重力的多少倍,称作多少个g。
例如离心机转头平均半径是6cm,当转速是60 000
r/min时,离心力是240 000×g,表示此时作用在被离心物质上的离心力是日常地心引力的24万倍。
因此,转速r/min和离心力g值之间并不是成正比关系,还和半径有关。
同样的转速,半径大一倍,离心力(g值)也大一倍。
转速(r/min)和离心力(g值)之间的关系可用下式换算:
式中:r为半径(cm),g为离心力(g值)
(三)超速离心机的离心方法
用离心方法分离生物大分子和亚细胞物质的基本原理是根据它们在液体介质中或者沉降速度不同而形成不同的区带,或者它们的密度
不同而停留在液体介质中不同的位置而把它们一一分开。
前者是沉降速度法,应用该法时液体介质的最大密度要小于样品中最小颗粒的密度,离心时选用高转速和短
时间;后者是沉降平衡法,应用该法时液体介质的最大密度要大于样品中最小颗粒的密度,离心时选用较低转速和较长时间。
实际操作有几种形式:
1.差速离心这种方法是选择不同转速的离心,分别分离各个不同组分。
例如先用低速沉降大颗粒和上清液,在高速离心上清沉降中等颗粒,最后超速离心上清沉降小颗粒。
采用逐级提高离心力分离上情液的方法,把不同大小的颗粒分开。
这种方法比较简单,方便。
分离的组份沉到管底,因此可以迅速浓缩所要的组份,减少体积。
但回收率和纯度是有矛盾的,要提高回收率,势必提高转速或延长离心时间,这样大小相近的颗粒也会沉到管底。
因此该法多用于粗提纯或初步浓缩样品。
2.速度区带(或速度梯度)离心本法是将样品放在一个连续的密度梯度液体上,通过离心,大颗粒沉降快,小颗粒沉降慢。
经过一段时间,相同的颗粒就在同一深度
形成一条带子,因此把各种组份分开来。
它适用于分离密度相同、而大小不同的物质,如不同的蛋白质组份密度都差不多,但分子量不一样,用本法很容易将其分
开。
但对密度不同、大小类似的物质则不易分离。
蔗糖梯度是一种常用的介质。
用不同浓度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,用于梯度离心。
再分别进行收集处于不同区带里的各个组份
目前,实验室常用的是电动离心机。
电动离心机转动速度快,要注意安全,特别要防止在离心机运转期间,因不平衡或试管垫老化,而使离心机边工作边移动,一致从实验台上掉下来,或因盖子未盖,离心管因振动而破裂后,玻璃碎片旋转飞出,造成事故。
因此使用离心机时,必须注意以下操作。
(1)离心机套管底部要垫棉花或试管垫。
(2)电动离心机如有噪音或机身振动时,应立即切断电源,即时排除故障。
(3)离心管必须对称放入套管中,防止机身振动,若只有一支样品管另外一支要用等质量的水代替。
(4)启动离心机时,应盖上离心机顶盖后,方可慢慢启动。
(5)分离结束后,先关闭离心机,在离心机停止转动后,方可打开离心机盖,取出样品,不可用外力强制其停止运动。
(6)离心时间一般1~2分钟,在此期间,实验者不得离开去做别的事。
一、凝胶电泳实验注意事项
1. 琼脂糖:不同厂家、不同批号的琼脂糖,其杂质含量不同,影响DNA的迁移及荧光背景的强度,应有选择地使用。
2. 凝胶的制备:凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致,溶解的凝胶应及时倒入板中,避免倒入前凝固结块。
倒入板中的凝胶应避免出现气泡,以免影响电泳结果。
3. 电泳缓冲液:为保持电泳所需的离子强度和pH,应常更新电泳缓冲液。
4. 样品加入量:一般情况下,0.5cm宽的梳子可加0.5μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定。
当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辩认不清;反之则应适当减少加样量,但是上样量过多会造成加样孔超载,从而导致拖尾和弥散,对于较大的DNA此现象更明显。
5. DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率,平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。
DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度,迁移分子的形状及大小。
采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子,制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。
小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。