Akt 抑制剂对氧诱导视网膜新生血管形成的作用

IGF-I对视网膜新生血管形成的调控及其信号转导机制
李养军;惠延年
【期刊名称】《国际眼科杂志》
【年(卷),期】2005(5)5
【摘要】视网膜新生血管形成是多种眼病的共同病理过程.IGF-1及其相关因子和信号转导机制对视网膜新生血管的形成和发展起重要的调控作用.IGF-I是一种结构和功能都与胰岛素类似的多肽类神经营养因子,具有广泛的生物学活性,与其受体结合后,能激活酪氨酸蛋白激酶,磷酸化特异性底物,激活PI-3K/Akt和MAP-K依赖信号途径后导致HIF-1α、JNK/AP-1激活和VEGF mRNA表达,调控细胞的生长、增生、分化、迁移、抑制细胞凋亡,通过对IGF-I的干预,可能是预防视网膜新生血管的一个新途径.
【总页数】7页(P999-1005)
【作者】李养军;惠延年
【作者单位】710032,中国陕西省西安市,第四军医大学西京医院眼科,全军眼科研究所;710032,中国陕西省西安市,第四军医大学西京医院眼科,全军眼科研究所【正文语种】中文
【中图分类】R77
【相关文献】
1.Delta样配体4单克隆抗体对视网膜新生血管形成和血管内皮生长因子表达的影响 [J], 史少阳;李迅;裴存文;陈晓隆;
2.Delta样配体4单克隆抗体对视网膜新生血管形成和血管内皮生长因子表达的影响 [J], 史少阳;李迅;裴存文;陈晓隆
3.泛素-蛋白酶体通路在实验性视网膜脱离后早期对视网膜细胞凋亡的调控作用 [J], 徐珊;王雯秋;宫媛媛;汪枫桦;顾青;孙晓东
4.炎症调控因子在糖尿病视网膜病变新生血管形成中的作用 [J], 陈加玉;滕岩;杨明明
5.尼莫地平与生长因子对视网膜新生血管形成的相互作用 [J], 孔屹;韩丽荣;彭亚军;唐莉;陈昌秀
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β-榄香烯对高氧诱导下新生小鼠视网膜新生血管凋
亡的影响的开题报告
标题：β-榄香烯对高氧诱导下新生小鼠视网膜新生血管凋亡的影响
研究背景和意义：
视网膜新生血管生成是一种主要的病理生理现象，在许多眼部疾病中都存在。

高氧暴露可以导致新生血管萎缩和细胞凋亡，是许多视网膜疾病的共同因素。

β-榄香烯是一种天然产物，可以通过抗氧化和抗炎作用来减轻组织损伤。

因此，本研究旨在探讨β-榄香烯对高氧诱导下新生小鼠视网膜新生血管凋亡的影响。

研究方法：
将新生小鼠随机分组，每组10只。

在高氧条件下诱导视网膜新生血管生成。

将正常组和模型组分别接受等量的生理盐水和β-榄香烯，治疗期为10天。

采用组织学和细胞学方法评估β-榄香烯对视网膜小血管生成和凋亡的影响。

预期结果：
预计β-榄香烯治疗组较模型组有更少的新生血管生成和更低的血管凋亡率。

这表明β-榄香烯可以减轻高氧诱导下新生小鼠视网膜新生血管生成的影响，并提供了潜在的治疗选项。

结论：
本研究将有助于深入了解β-榄香烯在视网膜疾病治疗中的作用。

通过探索β-榄香烯抗氧化和抗炎作用在视网膜新生血管生成中的作用，可能为发展有效的治疗策略提供新思路。

PI3K／Akt 信号通路介导电针促进血管生成的研究进展魏庆双;孙忠人;杨添淞;李佳;郭恒瑞;杨佳鹏【摘要】Effective wound healing has been a lasting and challenging topic in health care.Various strategies have been used to accelerate and perfect the healing process.One such strategy has involved the application of an exogenous electrical stimulus to chronic wounds with the aim of stimulating healing responses.The biology of electric stimulation to instigate healing,however,is very poorly understood.This study provides theoretical support to the treatment of diabetic skin lesions,senile and refractory ulcer with electric stimulation.%有效的促进损伤的愈合是一项有意义且具有挑战性的工程，许多临床工作者提出了不同的治疗手段，其中，电针傍刺是简便易行且行之有效的一种方法，并且电针被认为可通过活化 PI3K／AKT 信号通路达到加速损伤组织愈合目的，本文对 PI3K／Akt 信号通路介导电针促进血管生成进行了深入的研究。

此研究将对糖尿病性皮肤损害，老年性，难治性溃疡等的中医电针治疗提供理论帮助。

【期刊名称】《世界中医药》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】3页(P461-463)【关键词】电针;PI3K/AKT 信号通路;损伤修复;血管再生【作者】魏庆双;孙忠人;杨添淞;李佳;郭恒瑞;杨佳鹏【作者单位】黑龙江中医药大学，哈尔滨，150040;黑龙江中医药大学附属第一医院，哈尔滨，150040;黑龙江中医药大学附属第一医院，哈尔滨，150040;黑龙江中医药大学，哈尔滨，150040;黑龙江中医药大学，哈尔滨，150040;黑龙江中医药大学，哈尔滨，150040【正文语种】中文【中图分类】R245.31+9电针刺激已被广泛应用于创伤的修复[1-2],临床上也取得了一定的疗效,然而其作用的细胞机制需要我们进一步探索。

β-榄香烯抑制高氧诱导小鼠视网膜新生血管的实验研究的开题报告一、研究背景糖尿病视网膜病变是糖尿病的一种常见并发症，临床上表现为视力下降、眼底出现微血管病变、新生血管以及渗出等症状。

高氧是一种重要的诱因，可以促进新生血管的形成，并使其破裂，造成出血和视力丧失。

目前，临床上采用激光和手术等方法治疗糖尿病视网膜病变的效果并不理想，因此寻求一种更有效、安全的治疗方法非常必要。

β-榄香烯是一种从天然植物中提取的化合物，具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等多种保健功效。

近年来，研究发现β-榄香烯对于糖尿病和其并发症的治疗具有非常潜在的作用。

此外，一些初步的研究数据显示β-榄香烯还可以抑制体内血管生成和肿瘤细胞的增殖，但对其抑制高氧诱导小鼠视网膜新生血管的作用尚未明确。

因此，本研究旨在探讨β-榄香烯是否可以作为一种治疗糖尿病视网膜病变的有效药物来应用。

二、研究目的本研究的主要目的是探讨β-榄香烯对于高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成的作用，并探讨其可能的作用机制和可行性。

通过评估β-榄香烯的治疗效果和安全性，为开发治疗糖尿病视网膜病变的有效药物提供科学依据。

三、研究方法1、实验动物：选用6周龄C57BL/6J小鼠50只，随机分为5组，每组10只小鼠。

2、实验设计：对于每组小鼠，分别注射高氧处理1周，然后用β-榄香烯治疗2周。

其中，注射高氧组为阴性对照组；注射高氧+β-榄香烯（10、20、50 mg/kg）的分别为各组实验组；注射高氧+吉非替尼组为阳性对照组。

3、实验方法：采用Western blot和Immunohistochemistry等技术测定眼球组织中VEGF（血管内皮生长因子）、CD31（内皮细胞标志物）等指标的表达水平，同时观察小鼠视网膜新生血管的形成和眼底图像学变化。

采用ELISA等技术测定小鼠血浆中TNF-α（肿瘤坏死因子α）、IL-6（白细胞介素6）等炎症指标的含量。

四、研究意义本研究将为进一步认识β-榄香烯在糖尿病视网膜病变中的作用提供实验依据，为探索和开发新型治疗糖尿病视网膜病变的药物提供参考。

血管抑素对视网膜新生血管的抑制作用及机制毕宏生;崔彦;解孝锋;王兴荣;袁明俊【期刊名称】《中国中医眼科杂志》【年(卷),期】2006(16)3【摘要】目的研究血管抑素对视网膜新生血管的抑制作用及可能的机制.方法选用Wistar大鼠21只,随机分为3组:A组:IL-1α组,B组:血管抑素组,C组:正常对照组,每组各7只大鼠.A、B两组通过玻璃体腔注入重组鼠IL-1α建立视网膜新生血管模型.通过组织切片及免疫组化方法观察血管抑素对视网膜新生血管的抑制作用.并检测血清中一氧化氮、一氧化氮合酶及诱导型一氧化氮合酶的含量,初步探讨血管抑素抑制视网膜新生血管的机制.结果玻璃体腔注入重组鼠IL-1α可以建立视网膜新生血管模型;B组突破内界膜的血管内皮细胞核数较A组少,分别为7.85±0.58及24.49±2.70,两组相比差异有显著性(P＜0.05).视网膜组织切片经用CD34抗体检测,证明这些细胞为血管内皮细胞.A、B两组血清N0含量分别为30.69±3.62及21.47±3.23,两组比较差异有显著性(P＜0.05),两组诱导型一氧化氮含量分别为18.44±2.41及14.37±1.98,两组比较差异有显著性(P＜0.05).结论血管抑素具有抑制视网膜新生血管的作用,其作用可能与抑制诱导型一氧化氮合酶的表达及降低一氧化氮的浓度有关.【总页数】4页(P168-171)【作者】毕宏生;崔彦;解孝锋;王兴荣;袁明俊【作者单位】山东中医药大学眼科中心,济南施尔明眼科医院,济南,250002;山东中医药大学眼科中心,济南施尔明眼科医院,济南,250002;山东中医药大学眼科中心,济南施尔明眼科医院,济南,250002;山东中医药大学眼科中心,济南施尔明眼科医院,济南,250002;山东中医药大学眼科中心,济南施尔明眼科医院,济南,250002【正文语种】中文【中图分类】R-33【相关文献】1.干扰素-α、干扰素-γ对视网膜新生血管抑制作用的对比研究 [J], 李亚萍;孙大军;刘早霞;张晓光;拱中华2.不同批次的重组诱饵型受体创新药物RC28-E1与RC28-E2对视网膜新生血管的药效学比较及机制 [J], 谷中秀;姜静;黄敏;吴绵绵;郭芳;李慎军;房健民;赵少贞;张琰3.基质金属蛋白酶抑制剂对视网膜新生血管化抑制作用的实验研究 [J], 聂晓怡;陈盛举;金婉蓉;张文芳4.VEGF165单克隆抗体对视网膜新生血管的抑制作用 [J], 李亚萍;刘早霞;孙大军;苏冠方;张晓光5.NTF2对视网膜新生血管的抑制作用 [J], 李斌;赵敏红;李贵刚;徐玲娟;向艳;毛晓春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

夜间光照对氧诱导的视网膜病变小鼠视网膜新生血管形成的影响孙荣;陈长征;邢怡桥;许玲;王玲丽;周霞【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2012(030)007【摘要】背景氧诱导的视网膜新生血管形成是多种视网膜血管性疾病的病理学基础，预防视网膜新生血管的形成可缓解视网膜病变对视网膜的损害程度。

研究表明夜间睡眠时给予光照可能对早期糖尿病视网膜病变（DR）患者有利，但其对早产儿视网膜病变（ROP）患者视网膜新生血管有无影响报道较少。

目的观察夜间光照对氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜新生血管形成的影响。

方法将64只SPF级新生C57BL／6J小鼠按随机数字表法随机分为正常对照组、单纯夜间光照组、OIR模型组、OIR联合夜间光照组，每组16只小鼠。

正常对照组和单纯夜间光照组小鼠生长于正常空气（氧体积分数21％）；OIR模型组和OIR模型联合夜间光照组小鼠于出生后第7天置于高氧环境（75％±2％）生长，出生第12天调整氧体积分数为正常；OIR联合夜间光照组和单纯夜间光照组于出生后第12～17天给予夜间光照，光照度为100lx。

各组小鼠均于出生后第17天摘除眼球，采用ADP酶法制备视网膜铺片，了解视网膜血管的改变情况；视网膜组织切片行苏木精一伊红染色并计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数；免疫组织化学法观察各组小鼠视网膜中血管内皮生长因子（VEGF）的表达，实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测各组视网膜中VEGFmRNA的表达。

实验动物的使用和喂养遵循ARVO声明。

结果正常对照组和单纯夜间光照组小鼠视网膜血管形态均无明显差异。

OIR模型组视网膜铺片显示视网膜中央部大片无血管区，大量结构异常的新生血管形成。

与OIR模型组相比，OIR模型联合夜间光照组视网膜中央无血管区面积以及新生血管分布密度减少。

在实验后第17天时，正常对照组和单纯夜间光照组视网膜新生血管内皮细胞核数分别为（0．97±0．83）个和（1．00±0．72）个，OIR模型组为（38．57±5．01）个，而OIR联合夜问光照组小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数为（16．92±3．39）个，总体差异有统计学意义（F=78．767，P=0．000），OIR联合夜间光照组视网膜新生血管内皮细胞核数明显少于OIR模型组，差异有统计学意义（t=20．446，P〈O．01）。

抗血管内皮生长因子对氧诱导视网膜新生血管病变模型小鼠视网膜多巴胺含量的影响崔钰莹;邱宇;高洪莲;张磊【期刊名称】《眼科新进展》【年(卷),期】2022(42)6【摘要】目的研究抗血管内皮生长因子(VEGF)融合蛋白康柏西普(Conbercept)玻璃体内注射对小鼠氧诱导视网膜新生血管病变(OIR)模型中视网膜多巴胺(DA)含量的影响。

方法普通级7 d龄C57BL/6小鼠100只,随机分为空白对照组、OIR组、OIR+生理盐水(NS)组及OIR+Conbercept组,每组25只。

其中空白对照组小鼠在常氧环境中饲养至17 d龄。

OIR组、OIR+NS组及OIR+Conbercept组小鼠通过高流量吸氧建立OIR模型,并在此环境中饲养至12 d龄,OIR+NS组和OIR+Conbercept组小鼠分别行右眼玻璃体内注射1μL NS、1μL Conbercept后,在常氧环境中饲养至17 d龄,处死。

取各组小鼠右眼眼球行HE染色及视网膜铺片,观察突破内界膜的视网膜血管内皮细胞核数及血管分布;行Western blot检测各组小鼠视网膜中酪氨酸羟化酶(TH)、血管内皮生长因子(VEGF)表达量;行高效液相色谱仪检测各组小鼠视网膜DA含量。

结果空白对照组小鼠视网膜各层清晰,未见明显无灌注区及新生血管。

与空白对照组相比,OIR组小鼠视网膜各层排列紊乱,视盘周围可见大片无灌注区,突破内界膜的血管内皮细胞核数、VEGF相对表达量均增加,TH相对表达量、DA含量均减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05);OIR+NS组与OIR组相比,小鼠视网膜中突破内界膜的血管内皮细胞核数、DA含量及VEGF、TH相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05);与OIR组及OIR+NS组相比,OIR+Conbercept组小鼠视网膜各层排列较清晰,视盘周围可见小片状无灌注区,突破内界膜的内皮细胞核数、DA含量及VEGF、TH相对表达量均减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。

三七总皂苷经VEGF-A抑制OIR新生血管的形成叶天航;彭芬;吴素英【摘要】目的在氧诱导的新生小鼠视网膜病变(OIR)模型中,观察三七总皂苷经PI3K/Akt调节血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子(FGF2)对视网膜新生血管的抑制作用及相关机制.方法将80只7 d龄C57BL/6J小鼠采用双盲随机对照法平均分为正常对照组、OIR对照组、三七总皂苷(PNS)组和雷珠单抗组,每组各20只小鼠.正常对照组从第7 d到第17 d在正常空气环境中饲养,余下3组第7 d到第11 d在氧浓度为75％±1％的饲养箱中饲养,之后在正常空气中饲养至第17 d,PNS组第12 d玻璃体腔注射PNS 1μL,雷珠单抗组第12 d玻璃体腔注射雷珠单抗1μL,所有小鼠在第17 d处死.免疫组织化学染色法检测VEGF的阳性表达;HE染色计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数;实时荧光定量PCR检测PI3k,Akt,VEGF-A,FGF2 mRNA的表达.结果OIR组可见大量内皮细胞核突破视网膜内界膜进入玻璃体;PNS组和雷珠单抗组见少量突破的内皮细胞核;OIR组突破视网膜内界膜新生血管内皮细胞核的数量显著高于正常对照组(P<0.05),PNS组和雷珠单抗组明显低于OIR组(P<0.05);免疫组化结果显示OIR组VEGF在视网膜血管内皮细胞中表达增多,PNS组和雷珠单抗组VEGF的表达明显降低;与正常对照组比较,OIR组VEGF-A,FGF2,PI3K,Akt的表达上调(P<0.05),与OIR组比较,PNS组和雷珠单抗组VEGF-A,FGF2,PI3K,Akt的表达下调(P<0.05),PNS组与雷珠单抗组VEGF-A,FGF2,PI3K,Akt的表达无明显变化(P>0.05).结论 PNS经PI3K/Akt能够调节VEGF和FGF2抑制氧诱导的新生小鼠OIR新生血管的形成.【期刊名称】《湖北民族学院学报（医学版）》【年(卷),期】2019(036)001【总页数】5页(P1-5)【关键词】三七总皂苷;早产儿视网膜病变;视网膜新生血管;雷珠单抗【作者】叶天航;彭芬;吴素英【作者单位】湖北民族大学医学院湖北恩施445000;湖北民族大学附属民大医院湖北恩施445000;湖北民族大学附属民大医院湖北恩施445000【正文语种】中文【中图分类】R285早产儿视网膜病变(Retinopathy of Prematurity，ROP)在1942年因发现低体质量患儿晶状体有白色纤维组织，被命名为晶状体后纤维增生症，表现为视网膜缺血，缺氧，新生血管迂曲，异常增生，严重者甚至牵拉视网膜引起视网膜脱落，是导致早产儿和低出生儿致残的主要原因[1]。

γ-分泌酶抑制剂对视网膜新生血管形成的抑制作用及Nocth1信号通路调控机制程志兴;谢洁;孟倩丽【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2022(40)11【摘要】目的研究Notch1信号通路抑制剂γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用及其可能机制。

方法将SPF级出生后第7天(P7)的幼鼠与C57BL/6J母鼠共同饲养于含75%氧气的氧箱中5 d,然后放回正常氧气环境下饲养,以制备OIR模型。

采用随机数表法将54只OIR小鼠分为OIR组、OIR+DMSO组和OIR+DAPT组,每组18只,所有小鼠右眼作为实验眼。

OIR+DAPT组和OIR+DMSO组在P14小鼠玻璃体腔内分别注射10mmol/L DAPT和DMSO溶液1μl,OIR组不予注射。

P17时处死各组小鼠,摘出眼球后分离视网膜,采用Western blot法测定Notch1信号通路蛋白及其下游Hes1蛋白、视网膜小胶质细胞M1型标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和M2型标志物精氨酸酶-1(Arg-1)蛋白的相对表达量;制备视网膜铺片,采用同工凝集素(IB4)染色视网膜血管,计算小鼠视网膜新生血管相对面积,定义为新生血管面积/视网膜总面积×100%;采用苏木素-伊红染色法观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数量。

结果OIR+DAPT组、OIR组和OIR+DMSO组小鼠视网膜中Notch1蛋白相对表达量分别为0.68±0.06、1.00±0.00和1.03±0.08,Hes1蛋白相对表达量分别为0.70±0.08、1.00±0.00和1.02±0.07,组间总体比较差异有统计学意义(F=70.62、53.65,均P<0.01)。

OIR+DAPT组小鼠视网膜中Notch1和Hes1蛋白相对表达量均明显低于OIR组和OIR+DMSO组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。

欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁氉氉氉氉引文格式：何静，谢平，欧阳君，肖婷婷，徐琰瑛，袁晴．ｍｉＲ １４６ａ对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞增殖和新生血管生成的影响及其机制［Ｊ］．眼科新进展，２０２２，４２（１）：２５ ２８．ｄｏｉ：１０．１３３８９／ｊ．ｃｎｋｉ．ｒａｏ．２０２２．０００６【实验研究】ｍｉＲ １４６ａ对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞增殖和新生血管生成的影响及其机制△何　静　谢　平　欧阳君　肖婷婷　徐琰瑛　袁　晴欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁氉氉氉氉作者简介：何静（ＯＲＣＩＤ：００００ ０００３ ０５３９ ５２４３），女，１９８３年７月出生，江西九江人，主治医师。

研究方向：白内障和眼底病。

Ｅ ｍａｉｌ：ｈｅ８９６２５＠１６３．ｃｏｍ收稿日期：２０２１ ０５ ２１修回日期：２０２１ ０８ ２３本文编辑：董建军△基金项目：江西省卫计委科技计划面上项目（编号：２０１７５１１６）作者单位：３３２０００　江西省九江市，九江市第一人民医院眼科【摘要】　目的　探讨ｍｉＲ １４６ａ对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞（ＨＲＭＥＣ）增殖和新生血管生成的影响及其机制。

方法　选取对数生长期的ＨＲＭＥＣ，将细胞分为正常组、高渗组、高糖组、阴性对照组、ｍｉＲ １４６ａｍｉｍｉｃｓ组、ｍｉＲ １４６ａｍｉｍｉｃｓ＋ＩＬ １７Ａ组。

正常组细胞用含５．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｄ 葡萄糖的培养基培养２４ｈ，高渗组细胞用含５．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｄ 葡萄糖和５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１甘露醇的培养基培养２４ｈ；其余各组细胞先用含３０ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｄ 葡萄糖的培养基培养２４ｈ后，阴性对照组、ｍｉＲ １４６ａｍｉｍｉｃｓ组、ｍｉＲ １４６ａｍｉｍｉｃｓ＋ＩＬ １７Ａ组分别转染阴性对照序列＋ｐｃＤＮＡ３．１空质粒、ｍｉＲ １４６ａｍｉｍｉｃｓ质粒、ｍｉＲ １４６ａｍｉｍｉｃｓ＋ｐｃＤＮＡ３．１ ＩＬ １７Ａ质粒。

Avastin玻璃体腔注射对小鼠氧诱导视网膜病变新生血管的抑制作用付浴东;周占宇;万金娥;丰慧;李松涛【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2011(029)011【摘要】背景早产儿视网膜病变（ROP）主要源于视网膜新生血管的形成，avastin可以同血管内皮生长因子（VEGF）的所有异构体发生高亲和力结合，拮抗其生理活性。

目的观察玻璃体腔注射avastin对氧诱导视网膜病变模型新生血管的作用。

方法取7日龄清洁级C57BL／6J小鼠90只，用随机数字表法随机分为6组：空气对照组、高氧对照组、高氧BSS组和低、中、高剂量avastin组，每组15只。

空气对照组小鼠在空气中喂养，其他各组均置于体积分数75％±2％O，的高氧环境中饲养，连续5d，高氧BSS组大鼠玻璃体腔注射无菌BSS液0．5μl，3个avastin处理组小鼠分别玻璃体腔注射1．25、2．50、5．00g／Lavastin各0．5μl。

17日龄时过量麻醉处死小鼠，摘除眼球制备视网膜组织切片，苏木精一伊红染色后计数突破内界膜的新生血管内皮细胞核数目；应用免疫组织化学染色法检测视网膜中CD34分子的表达；利用视网膜铺片技术观察低、中、高剂量avastin组大鼠视网膜新生血管的形态并进行比较。

结果苏木精一伊红染色发现，高氧对照组小鼠视网膜突破内界膜的新生血管内皮细胞核数目明显多于空气对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）；不同剂量的avastin组小鼠视网膜中突破内界膜的新生血管内皮细胞核数明显少于高氧BSS组和高氧对照组，差异均有统计学意义（P〈0．01）；高剂量avastin组与低剂量avastin组比较，突破内界膜的新生血管内皮细胞核数明显减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。

免疫组织化学检测显示，高氧对照组视网膜突破内界膜的内皮细胞CD34分子呈阳性表达。

视网膜铺片可见空气对照组的血管自视盘向四周均匀放射，分支良好，结构清晰；高氧对照组、高氧BBS组可见大量新生血管，其结构紊乱，分布不均；各剂量avastin组随着剂量的增加，视网膜血管分布和走行接近空气对照组。

·全科医学·三七总皂苷对氧诱导新生小鼠 视网膜病变新生血管的作用研究卫 冬1，周福波2*（1.牡丹江医学院红旗医院眼科，黑龙江 牡丹江 157011； 2.牡丹江医学院药理教研室，黑龙江 牡丹江 157011）【摘要】目的 主要分析三七总皂苷对氧诱导新生小鼠视网膜病变新生血管的作用。

方法 选取新生小鼠60只，将其分为A 组、B 组，其中A 组小鼠24只，为正常环境下饲养的小鼠，B 组为氧诱导视网膜病变组，其中B 组小鼠接受三七总皂苷治疗，评价三七总皂苷对氧诱导新生小鼠视网膜病变新生血管的影响。

结果 统计两组小鼠的视网膜内界膜血管内皮细胞核计数情况，B 组小鼠治疗前后数据差异显著，与A 组小鼠相比，数据差异无统计学意义（P ＞0.05）。

结论 三七总皂苷对氧诱导新生小鼠视网膜病变新生血管中的作用显著，证明该物质对视网膜新生血管的形成具有影响。

【关键词】三七总皂苷；新生小鼠；视网膜病变；新生血管【中图分类号】R77 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8803.2019.16.142.02早产儿视网膜病变主要是因为早产儿本身身体机能变化而产生的致盲性眼部疾病后遗症，被认为是婴幼儿致盲的最主要原因。

中医在早产儿视网膜病变中，将其归纳为“暴盲”范畴，临床上以活血化瘀、促进眼部出血为主要治疗思路，且现有临床治疗经验发现，三七总皂苷在改善视网膜静脉壅塞中的效果显著，证明该药物在改善视网膜病变的血流循环中意义重大，因此值得关注。

1 资料与方法1.1 一般资料选取本地医科大学比较医学中心提供的小鼠为研究对象，共有小鼠60只，根据小鼠的具体情况，将其划分为A 组、B 组，其中A 组小鼠共24只，为正常组，小鼠平均体重为（5.3±0.6）g ；B 组小鼠共36只，为氧诱导视网膜病变组，小鼠平均体重为（5.1±0.7）g 。

将两组小鼠均放置在相同的动物房内饲养，平均光照时间为12 h ，动物房内的温度为（24±3.0）℃。

AKT／eNOS信号途径在脑源性神经营养因子诱导内皮细胞血管新生中的作用中华血液学杂志2006年8月第27卷第8期ChinJHemato|,August2006,V0127,No.8 AKT/eNOS信号途径在脑源性神经营养因子诱导内皮细胞血管新生中的作用王雅丹胡豫孙春艳何文娟张小平【摘要】目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)促进内皮细胞血管新生的机制及其参与的信号通路,为抗多发性骨髓瘤血管生成的研究提供新的实验依据.方法以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为对象,采用Westernblot印迹法检测细胞内磷酸化丝/苏氨酸激酶(AKT),内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)蛋白质的表达;采用Transwell小室迁移实验,小管形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力,小鼠体内Matrigelplug实验评估体内内皮细胞血管新生的能力,采用硝酸还原酶法检测HUVEC上清中内皮细胞源性一氧化氮(eNO)的含量,FITC—AnnexinV/PI双染色流式细胞术分析细胞凋亡.结果BDNF以时间一浓度依赖性的方式激活PI3K/AKrr/eN0s信号通路,应用PI3K激酶抑制剂Ly294002可以明显阻断BDNF刺激后内皮细胞eNO的生成.在体外,BDNF诱导的细胞迁移和小管形成效应均分别能被Ly294002和L—NAME(NOS抑制剂)阻断;而BDNF的抑制凋亡效应与L—NAME无关,仅受Ly294002影响;在体内,经L—NAME喂养的小鼠皮下Matrigel 栓中的新生血管数量与未经L—NAME喂养的小鼠相比显着减少.结论BDNF通过AKT/eNOS途径活化介导血管薪生,这可能成为治疗多发性骨髓瘤血管新生的新靶点.【关键词】脑源性神经营养因子;血管新生;信号通路InvolvementofAKT/eNOSinbraindelvedneurotrophicfactor-inducedangiogenesisW AN GY a—dan,HUYu,SUNChun—yan,加Wen-juan,ZHANGXiao-ping.InstitutionofHematology,UnionHospital AffiliatedtoTongiiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuh an430022,ChinaCorrespondingauthor:HUYu,Email:****************【Abstract】ObjectiveToinvestigatethesignalingpathwaysinvolvedinbrainderivedneurotrophic factor(BDNF)一inducedangiogenesisandtoprovideanovelpathwaytoanti—angiogenesisinmultiplemyelo—ma.MethodsThephosphorylationofAKTandendothelialNOsynthase(eNOS)inhumanum bilicalvenousepithelialcells(HUVEC)weredetectedbyWesternblot.Theangiogenicactivityinvitrowase valuatedbytr—answellmigrationassayandtubeformationassay.BDNF—inducedinvivoangiogenicactivitywasevaluatedbyMatrigelplugassay.TheconcentrationofNOwasdetectedbynitricaciddeoxidizaseassay.C ellapoptosiswasdetectedbyFITC—AnnexinV/PIdoublestainingandflowcytometry.ResultsBDNFactivatedthephos—phatidylinositol一3一kinase(PI3K)/AKT/eNOSpathwayinHUVECinatime—anddose —dependentmanner.BDNF—stimulatedNOproductionwasblockedbyL Y294002.aPI3Kinhibitor.Invitro.BDNFinduc edHUVECmigrationandtubeformationonMatrige1.whichcouldbesignificantlyblockedbyLY294002andN"一nitro—L—argininemethylester(L—NAME)respectively:butBDNFinducedHUVECapoptosiscouldbe blockedonlybyLY294002.Invivo.BDNFincreasedcapillaryingrowthintosubcutaneouslv implantedMatri—gelplugsinmice,whichcouldbesignificantlyreducedinL—NAMEtreatedmice.ConclusionBDNFin—ducesangiogenesisthroughtheAKT/eNOSsignalingkinasepathway.Itmaybeanoveltarget fortheanti—an—giogenesistherapyformultiplemyeloma.【Keywords】Brainderivedneurotrophicfactor;Angiogenesis;Signalpathway脑源性神经营养因子(brainderivedneuro—trophicfactor,BDNF)参与多种内皮细胞生长,分基金项目:湖北省青年杰出人才基金资助项目(2003ABB017)作者单位:430022武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所通信作者:胡豫,Email:****************529?论着?化的调节.卫j.我们研究发现BDNF可促进体内外人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的血管新生,可能是一种新的促血管新生因子Ⅲ3,并参与骨髓瘤细胞诱导的血管新生.有报道指出,丝/苏氨酸激酶(AKT)/内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)通路的活化可最终导致内皮;il1¨;^^j中华血液学杂志2006年8月第27卷第8期ChinJHematol,August2006.v0127.No.8 LSDS—PAGE分离,转移至硝酸纤维素膜;室温下50L牛血清白蛋白(BSA)封闭1h;抗p-AKT(1:1000)或抗p-eNOS(1:1000)以及相应HRP标记的二抗结合;ECL发光;常规显影.抗体经缓冲液洗脱后,再以相应的抗总激酶抗体二次检测总的AKT,eNOS作为激酶总量的评估.8NO的检测HUVEC经饥饿培养12h后,更换至不含酚红的培养基中,经过不同处理后BDNF刺激1h,收集细胞培养上清,一20℃保存.采用硝酸还原酶法检测上清中eNO的含量.实验设3个复孔,重复3次.9统计学处理应用SPSS11.5软件进行统计学分析,结果以元-4-S表示,组问分析采用Student.New.man—keuls检验.结果1Ly294002抑制BDNF诱导的AKT,eNOS的磷酸化和eNO的释放不同浓度的BDNF刺激HUVEC10min,其磷酸化AKT和eNOS的效应呈浓度依赖性(图1),BDNF100ng/ml时的效应与125ng/ml时差异无统计学意义,故选定100rig/ml为后续实验BDNF的使用浓度.100ng/ml的BDNF刺激HUVEC不同时间,AKT和eNOS的激活于30min时作用最强,60min恢复至基础水平(图2).使用20p~molfL的Ly294002预处理HUVEC1h后.加入100.g/ml的BDNF孵育20min,BDNF诱导的P.AKT,p-eNOS的表达几乎完全被阻断(抑制率分别为96%,97%)(图3).另外,HUVEC在BDNF的作用下其培养上清中的eNO含量明显增加.而2Op~mol/LLy~4OO2可削弱这一效应(与BDNF组相比减少约35.6%,P&lt;0.05)(图4).2PI3K/AKT/eNOS信号途径在BDNF诱导的体外小管形成和细胞迁移中的作用我们将20p~molfL123456-AKT÷■PNos蛳镉薯斓蛹蛹eNOS瞬《|l瓣一掣-i营1:对照组;2:25ng/mlBDNF;3:50ng/mlBDNF;4:75ng/mlBDNF;5:100ng/mlBDNF;6:125ng/mlBDNF图1不同浓度的BDNF刺激HUVEC10min后AKT,eNOS的磷酸化分析123456p-AKT镧p-eNOS-一一-—--__-__—-——-?--____-eNOS___?.'',.'1:对照组;2:刺激5min;3:刺激20min;4:刺激30min;5:刺激45 min;6:刺激60min图2100ng/ml的BDNF刺激HUVEC不同时间AKT,eNOS的磷酸化分析1234p-AKTAKT_-_—一—-_0p-eNOS删槲哪_嗍_●1:对照组;2:BDNF刺激;3:20ixmoL/LLy294002预处理1h后,未经BDNF刺激;4:20txmoL/LLy294002预处理1h后,经BDNF刺激图3Ly294002对BDNF介导的AKT和eNOS的磷酸化的影响弓吕一母唰缸Z对照BDNFBDNF+20Hmol/LLy294002与对照组相比,P&lt;0.05;#与BI)NF组相比,P&lt;0.05图4Ly294002对BDNF介导的eNO释放的影响Ly294002,3mmoL/LL—NAME预处理HUVEC1h后,再检测BDNF促内皮细胞迁移和小管形成效应.BDNF促进内皮细胞在Matrigel上形成毛细管状结构(每视野小管数约为对照组的2.61倍),Ly294002或L—NAME可不同程度阻断此效应(每视野小管数分别为对照组的1.03,1.23倍,P&lt;0.01).同样,BDNF介导的内皮细胞迁移效应也能被Ly294002,L—NAME抑制(每视野迁移细胞数分∞∞∞∞∞∞∞∞∞o中华血液学杂志2006年8月第27卷第8期ChinJHematol,August2006,V ol27,No.8 别为对照组的39%,59%,P&lt;0.01)(表1).此结果说明,BDNF介导的体外血管新生是通过PI3K/AKT/eNOS途径的活化实现的.表1Ly294002,L-NAME对BDNF诱导的内皮细胞小管形成和细胞迁移效应的影响(%,面±s,n=15)组别小管数(/视野)迁移细胞数(/视野)注:与BDNF组相比,P&lt;0.01.表中数据为与对照组相比的百分数3eNO在BDNF诱导的体内血管新生中的作用为了解体内NO在BDNF介导的血管新生中的作用,我们将含有或不含有BDNF的Matrigel注射于得到或未得到L—NAME喂养的小鼠皮下.使用的去生长因子Matrigel本身并不具有刺激血管新生的作用.由图5可知,抗小鼠CD34和FⅧ抗体鉴定箭头所指结构为单个内皮细胞形成的微血管结构,不含有BDNF的Matrigel栓几乎无此血管结构(1.0±0.2);未经L—NAME处理的小鼠体内,含有BDNF的Matrigel栓具有大量的血管结构(25.4-6),而经L—NAME处理的小鼠,同样的栓内血管结构的数量较前者明显减少(12-4-5,P&lt;0.01).表明在体内,NO在BDNF介导的血管新生中发挥着重要作用.4eNO不参与PI3K/AKT信号途径调控BDNF介导的内皮细胞存活HUVEC在含1%胎牛血清的M199中培养并按上述方法处理24h后,采用FITC—AnnexinV/PI双染检测细胞的凋亡情况.空白对照组凋亡细胞比例(早期凋亡+晚期凋亡)约为62.6%,且出现较多晚期凋亡细胞;BDNF组凋亡细胞比例约为23.5%,早期凋亡细胞较晚期凋亡细胞多;经20mol//LLy294002处理后,凋亡细胞比例上升为60.5%;而3mmo~LL—NAME处理的约为27.0%(表2).说明在BDNF抑制HUVEC的凋亡中,PI3K/AKT信号途径发挥调节作用,但eNO并不是其下游信号分子.讨论我们已往的研究结果表明,BDNF作为一种新的促血管新生因子,参与骨髓瘤细胞诱导的血管新生_3J,且多发性骨髓瘤患者血浆中BDNF水平明显增高J.然而,BDNF调节血管新生的分子机制和所涉及的信号分子目前并不十分清楚.PI3K/AKT/eNOS通路在诸多血管生成因子促血管新生中均发挥调节作用J.AKT位于此通路的中心环节,其活化与外源性BDNF介导的内皮细胞分化和存活密切相关J.NOS分为结构型(eNOS,nNOS)和诱导型(iNOS).eNOS主要出现于其在钙/钙调蛋白的调节下催化L一精氨酸生成eNO,后者具有扩张血管,抗凝,抑制血小板聚集和促进新生血管形成的作用.体外实验表明,活化的AKT可以和eNOS共定位于细胞膜,并使eNOS磷表2流式细胞术分析BDNF抑制HUVEC凋亡结果(%,±5,n=9)组别存活早期凋亡晚期凋亡对照组BDNF组BDNF+Ly294002组BDNF+L—NAME组36.3士4.124.7士3.437.9士4.275.5±5.618.8±6.54.7±1.134.9±3.634.2±7.426.3±4.572.5±5.121.1士3.45.9士1.3注:与对照组相比,P&lt;0.05;与BDNF组相比,P&lt;O.05箭头所指为迁入Matrigel栓中的血管结构.a:小鼠皮下注射不含有BDNF的Matrigel栓(苏木精一伊红染色,×200);b:小鼠皮下注射含有BDNF的Matrigel栓(苏木精一伊红染色,x200);c:喂食L-NAME饮水小鼠皮下注射含有BDNF的Matrigel栓(苏木精一伊红染色,×200);b,C中插图为使用抗鼠CD34和FⅧ抗体标记血管的内皮细胞(ABC法,x400)图5L—NAME对BDNF诱导的体内血管新生效应的影响中华血液学杂志2006年8月第27卷第8期ChinJHematol,August2006.V0l27,No.8 酸化;另外,血管生成素.1(Ang.1)可激活PI3K/AKT通路,并通过此通路活化eNOS,促进eNO的释放,而PI3K及eNOS的特异性抑制剂Ly294002,L.NAME均可减少eNO的生成,并最终抑制Ang一1诱导的内皮细胞血管新生效应J.本实验结果与上述相符,BDNF可致使HUVEC中的AKT,eNOS磷酸化,应用PI3K的特异性抑制剂可阻断这一效应,同时也阻断了BDNF依赖的eNO的生成;另外,NOS的抑制剂可抑制BDNF诱导的HUVEC迁移,小管形成.这提示AKT/eN0S信号通路是通过内皮细胞生成的eNO来介导BDNF体外促血管新生的活性.Babaei等应用NO基因敲除的小鼠证实了NO在Ang.1促体内血管新生中的作用.Rikitake等¨5亦证实NOS的抑制剂可阻断鞘氨醇.1-磷酸盐(S1P)诱导的体内血管新生效应.由于没有NO基因敲除的小鼠,我们参照文献[5]的方法,使用喂养的小鼠进行Matrigelplug实验.我们发现与未经喂养的小鼠相比,经L.NAME喂养的小鼠皮下Matrigel栓中的新生血管数量显着减少.此结果证实,eNO在BDNF诱导的体内血管新生中同样发挥着重要的作用.然而,NO促进体内外血管新生的精确机制本实验并未阐明.曾有报道指出,PI3K/AKT/eNOS途径活化后,释放的eNO可上调某些细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;也有部分学者指出NO是通过维持,上调整合素ctVI33功能性表达从而调节血管新生;另外,VEGF或S1P诱生的eNO产物可抑制内皮细胞的凋亡.因此,由BDNF诱导的,eNO依赖的血管新生的分子机制尚有待进一步研究.本实验中,Ly294002可阻断BDNF抑制内皮细胞凋亡的效应,而对内皮细胞的存活无明显影响,表明AKT的活化可抑制内皮细胞凋亡,而eNO却不能.过去的研究已阐明,AKT抑制细胞凋亡的一个重要机制为直接磷酸化相关转录因子,负性调节促进细胞凋亡基因,常见的有forkhead家族转录因子,前凋亡蛋白BAD,Caspase9等,或正性调节其他转录因子,如NFKB和环磷腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)12].因此,eNO不能抑制内皮细胞的凋亡,BDNF的促存活效应可能是通过AKT调节下游的以上提及的信号分子介导的.然而Kown等的研究结果与本文不符,他们报道S1P介导的eNO产物在无血清培养的环境中可抑制HUVEC凋亡.两种结果的差异可能是因为使用不同的细胞因子,不同的培养环境(如血清浓度)和不同的细胞品系的缘故.总之,本实验结果证实AKT/eNOS信号转导途径经eNO介导在BDNF诱导的内皮细胞体内外血管新生中占有重要的地位.参考文献1DonovanMJ,LinMI,WiegnP,eta1.Brainderivedneurotrophiefactorisanendothelialcellsurvivalfactorrequiredforintramyocardial vesselstabilization.Development,2000,127:4531-4540.2KimH,LiQ,HempsteadBL,eta1.Paraerineandautoerinefunc—tionsofbrain—derivedneurotrophiefactor(BDNF)andnervegrowth factor(NGF)inbrain—derivedendothelialcells.JBiolChem,2004,279:33538-33546.3胡豫,孙春艳,王雅丹,等.脑源性神经营养因子在多发性骨髓瘤患者血浆中的表达增高及其意义的初步探讨.中国实验血液学杂志,2005,13:104—109.4孙春艳,胡豫,吴涛,等.多发性骨髓瘤细胞脑源性神经营养因子对血管新生作用的研究.中华血液学杂志,2005,26:602-606.5RikitakeY.HirataK.KawashimaS.eta1.Involvementofendotheli—alnitricoxideinsphingosine一1一phosphate—inducedangiogenesis.Ar- teriosclerThmmbV aseBiol,2002,22:108—114.6KawasakiK,SmithRS,HsiehCM,eta1.Activationofthephos—phatidylinositol3-kinase/proteinkinaseAktpathwaymediatesnitric oxide—inducedendothelialcellmigrationandangiogenesis.MolCell Biol,2003,23:5726-5737.,7王雅丹,胡豫,魏文宁,等.脑源性神经营养因子在多发性骨髓瘤患者血浆中的表达.临床血液学杂志,2004,17:82-86.8BabaeiS,Teiehert—KuliszewskaK,ZhangQ,eta1.Angiogenieae—tionsofangiopoietin一1requireendothelium—derivednitricoxide.AmJ Pathol,2003,162:1927—1936.9KimH,LiQ,HempsteadBL,eta1.Paraerineandautoerinefune—tionsofbrain—derivedneurotrophiefactor(BDNF)andnervethfactor(NGF)inbrain—derivedendothelialcells.JBiolChem,2004,279:33538-33546.10DulakJ,JozkowiczA,Dembinska—KiecA,eta1.Nitricoxidein—ducesthesynthesisofvascularendothelialgrowthfaetorbyratv/is—cularsmoothmusclecells.ArteriosclerThrombV aseBiol,2000,20:659-666.11LeePC.KibbeMR,SehuehertMJ,eta1.Nitricoxideinducesan—giogenesisandupregulatesctVB3integrinexpressiononendothelial cells.Miemv~eRes,2000,60:269-280.12MadridLV,WangCY,GuttridgeDC,eta1.Aktsuppressesapopto- sisbystimulatingthetransaetivationpotentialoftheRelA/065sub—unitofNFKB.MolCellBiol.2000,20:1626—1638.(收稿13期:2005—12—12)。

Akt抑制剂对氧诱导视网膜新生血管形成的作用目的：观察Akt抑制剂(1L-6-hydroxymethyl-chiro-inositol2-(R)-2-O-methyl-3-Ooctadecylcarbonate)对低氧环境下视网膜新生血管形成的抑制作用，探讨Akt 活性的抑制对于新生血管抑制的作用。

方法：将鼠龄为7天的C56BL/6小鼠14只置于浓度为75% ± 2%高氧舱环境中生活5天，然后返回正常氧环境中。

小鼠于出氧舱后当日被随机分为实验组和对照组，实验组小鼠玻璃体腔内注射1.5ulAkt抑制剂，对照组小鼠玻璃体腔内注射1.5ulPBS。

在P17天，实验组和对照组小鼠FITC-dextran左心室造影视网膜铺片了解视网膜的血管形态的改变。

结果：视网膜铺片结果显示实验组视网膜新生血管的面积/全视网膜面积为6%，对照组的视网膜新生血管的面积/全视网膜面积为14%，差异具有统计学意义(P<0.01)。

但两组的无灌注区无明显差异(实验组无灌注区面积/全视网膜面积为21%，对照组无灌注区面积/全视网膜面积为22%，P>0.05)结论：在缺氧环境下运用Akt抑制剂能够抑制视网膜新生血管的发生，但不减少无灌注区。

视网膜新生血管性疾病，如早产儿视网膜病变(ROP)、增殖型糖尿病视网膜病变、Eale’s病、继发性的新生血管性青光眼、缺血型的视网膜静脉阻塞等等，在全世界范围内，这些都是最主要的导致眼盲的疾患，已经引起了人们非常广泛注意。

Akt是一种分子量约为57KD的蛋白质，它属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族。

越来越多的证据表明Akt与新生血管的形成之间存在紧密的联系。

内皮一氧化氮合酶(eNOS)是一种已知的Akt的下游靶物质，最近的研究表明Akt能够磷酸化eNOS，导致其持续的激活[1] ，从而促进新生血管的形成[2,3,4]。

而且，新的研究显示Akt能够调节体内或体外缺氧诱导的VEGF的表达[5,6]，并且VEGF 所诱导的血管内皮细胞的移行需要Akt的激活[7]。

加减驻景方对大鼠脉络膜新生血管HIF-1α和Akt表达的影响周志豪;亢泽峰;刘健;邢凯;陶方方;楮文丽【摘要】目的观察中药加减驻景方对脉络膜新生血管(CNV)动物模型眼中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)表达的影响,探讨该组方对CNV的干预作用及其机制.方法将7周龄大雄性BN大鼠84只随机分为4组,空白对照组(A组)12只,模型对照组(B组)24只,中药治疗组(C组)24只,西药治疗组(D 组)24只.B、C、D组大鼠予氪激光右眼眼底光凝,A组常规饲养.造模后第21天时,C组予加减驻景方灌胃,10 ml/(kg·d),共21d,B组予等量生理盐水,D组予右眼眼内注射康柏西普眼用注射液,共1次.造模后第28、35、42天,各组动物行右眼底照相、荧光素眼底血管造影(FFA)检查,同期制作眼后节石蜡切片,苏木精-伊红(HE)染色观察激光斑处病理改变,免疫组织化学法检测视网膜脉络膜中HIF-1α和Akt的表达情况.结果 1.FFA表现.A组各时间点未见异常荧光;B、C、D组模型眼激光斑晚期染色,造模后第28天时,三组模型眼光凝处均可见明显的荧光渗漏,之后C、D 组荧光渗漏逐渐减轻,D组减少更明显,至造模后第42天时,C组仅有部分光斑出现荧光素渗漏,D组无明显荧光素渗漏,B组荧光渗漏始终未见明显变化.2.HE染色表现.各时间点,A组视网膜及脉络膜结构完整连续,B、C、D三组均可见视网膜及脉络膜结构破坏,内、外核层结构不连续.3.HIF-1α和Akt表达.A组各时间点视网膜脉络膜中HIF-1α和Akt表达均为最低(P＜0.05),B组均为最高.C组造模后第35、42天时的HIF-1α和Akt表达低于B组(P＜0.05),但始终高于同期的D组(P＜0.05).结论加减驻景方可降低CNV模型眼脉络膜视网膜中HIF-1α和Akt的表达,从而抑制由氪激光光凝眼底而产生的CNV生长.%OBJECTIVE To observe the effect of modified Zhujing formula on the expression of hypoxia-induciblefactor-1 alpha (HIF-1α) and threonine kinase (Akt) in choroidal neovascularization (CNV) induced by krypton laser and to explore its mechanism.METHODS Eighty-four Brown Norway (BN) rats (seven-week old,male) were randomly divided into four groups,namely normal control group (group A,n=12),model group (group B,n=24),modified Zhujing formula group (group C,n=24) and Conbercept treatment group (group D,n=24).The right eyes of rats in group B,C and D underwent fundus krypton laser photocoagulation.Group C was treated with modified Zhujing formula for 21 days (10ml/kg/d),group B was administrated intragastrically with equivalent physiological saline and group D was treated by intravitreal injection of Conbercept 21 days after photocoagulation.Examination of Fundus photography,fundus fluorescein angiography,HE staining and immunohistochemistry were performed respectively 28 days,35 days and 42 days after model establishment to observe the protein expression at different time points.RESULTS 1.For FFA performance:There was no fluorescence leakage in group A and the fluorescence leakage area in group B was larger than counterparts of group C and group D at each time point.While that in group C was larger than group D.2.For HE staining:At each time point,the retina and choroid structure of group A was complete and continuous,but retina and choroid structure damage were found in group B,C and D.3.Expression of HIF-1 and Akt:The expression of HIF-1α and Akt in the retinal choroidal in group A was the lowest at each time point (P ＜0.05) while their expression in group B was the highest among all groups.The expression of HIF-1α andAkt in group C was lower than that in group B at day 35 and 42 (P ＜0.05),but it was always higher than that in group D (P ＜0.05) at all time points.CONCLUSIONS Modified Zhujing formula prevented the growth of choroidal neovascularization (CNV) induced by krypton laser via inhibiting the expression of HIF-1α and Akt.【期刊名称】《中国中医眼科杂志》【年(卷),期】2017(027)002【总页数】6页(P76-81)【关键词】加减驻景方;脉络膜新生血管;缺氧诱导因子-1α;苏氨酸蛋白激酶;康柏西普眼用注射液【作者】周志豪;亢泽峰;刘健;邢凯;陶方方;楮文丽【作者单位】青海大学研究生院,西宁810001;中国中医科学院眼科医院,北京100040;中国中医科学院眼科医院,北京100040;青海大学研究生院,西宁810001;中国中医科学院眼科医院,北京100040;中国中医科学院眼科医院,北京100040【正文语种】中文【中图分类】R285.5脉络膜新生血管（choroidal neovascularization, CNV）是异常的增殖血管，它来自脉络膜毛细血管，突破脉络膜毛细血管层的基底膜及Bruch膜进入视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE）下，或视网膜神经上皮与RPE之间。

β-榄香烯抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管形成的实验研究耿金; 陈蕾; 柳力敏; 刘宁宁; 刘磊【期刊名称】《《眼科新进展》》【年(卷),期】2013(033)003【摘要】目的探讨β-榄香烯抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管形成的作用。

方法64只鼠龄为7d的C57BL/6J小鼠随机分为4组:A组(空气对照组)、B组(高氧对照组)、C组(玻璃体内注射组)及D组(球后注射组)。

A组在正常环境中饲养,其余3组建立氧诱导视网膜新生血管小鼠模型,造模后C组玻璃体内注射1μLβ-榄香烯、D组球后注射2μLβ-榄香烯。

比较4组HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数,ADP酶法视网膜铺片测量视网膜无灌注区面积和视网膜新生血管数量。

免疫组织化学染色检测VEGF蛋白的表达。

结果 HE染色突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数4组分别为:A组(0.90±1.52)个、B组(27.15±9.83)个、C组(2.90±2.02)个、D组(13.33±4.83)个,4组比较差异有统计学意义(P<0.05);其中C 组与D组相比差异有统计学意义(P<0.05)。

视网膜铺片各组新生血管钟点数:A组未见新生血管、B组(8.00±1.26)个、C组(3.67±0.82)个、D组(6.12±1.17)个,4组比较差异有统计学意义(P<0.05);C组与D组相比差异有统计学意义(P<0.05)。

4组视网膜铺片无灌注区面积百分比:A组未见无灌注区、B组(17.11±2.49)%、C 组(9.98±2.44)%、D组(13.66±2.62)%,后3组比较差异有统计学意义(P<0.05);C 组与D组相比差异有统计学意义(P<0.05)。

免疫组织化学染色3组累积光密度值:A组32.17±20.98、B组144.04±65.72、C组55.56±36.69;3组间差异有统计学意义(P<0.05)。

Radixin shRNA对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用王龙梅;杨侠;闫琳;刘廷;董晓光;徐海峰【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2015(033)012【摘要】背景视网膜新生血管性疾病是多种眼科疾病的病理基础,迄今为止新生血管形成的发病机制尚不完全清楚.研究显示,视网膜新生血管形成过程中radixin表达量明显增加,因此推测在视网膜新生血管相关疾病中抑制或沉默radixin基因有望成为治疗的新方法. 目的研究radixin小发卡(shRNA)干扰质粒对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠模型视网膜中radixin基因表达的抑制作用,观察其对小鼠视网膜新生管形成的影响.方法将64只出生后7d的SPF级C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组,其中模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠在体积分数(75±2)％的氧环境中饲养5d,建立OIR动物模型,正常对照组小鼠饲养于正常氧环境下.radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠于出生后第12天分别于玻璃体腔注射1μg radixin shRNA质粒和对照shRNA质粒,小鼠出生后第17天,对各组小鼠行FD-2000S血管造影术,制备视网膜铺片,观察视网膜血管形态和分布;摘取各组小鼠眼球制备视网膜切片,采用视网膜苏木精-伊红染色法观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核和新生血管;应用免疫组织化学染色法检测radixin在视网膜中的表达分布;分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测radixin mRNA及其蛋白在视网膜组织中的表达情况. 结果正常对照组小鼠视网膜铺片显示视网膜血管走行正常,模型对照组小鼠视网膜后极部大片状无灌注区,可见大血管迂曲和血管壁荧光素渗漏和新生血管,shRNA质粒组小鼠视网膜可见无灌注区和微血管瘤,而radixin shRNA质粒组小鼠视网膜后极部无灌注区面积较小,血管迂曲和渗漏现象较模型对照组和shRNA质粒组明显减轻.视网膜组织病理学检查显示,模型对照组和shRNA 质粒组小鼠视网膜内界膜不连续,可见大量血管内皮细胞核和血管管腔突破内界膜,radixin shRNA质粒组视网膜内界膜形态接近正常对照组,有少量血管内皮细胞核和血管管腔突破内界膜.免疫组织化学检查显示,正常对照组和radixin shRNA质粒组radixin表达弱于模型对照组和shRNA质粒组.正常对照组、模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠视网膜中radixin mRNA的相对表达量分别为1.002±0.043,2.236±0.093,0.556±0.015和2.272±0.096,各组间总体比较差异有统计学意义(F=504.545,P=0.000).正常对照组、模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠视网膜中radixin蛋白的相对表达量分别为1.000±0.082、1.193±0.021、0.263±0.016和1.235±0.005,各组间总体比较差异有统计学意义(F=753.522,P=0.000) radixin shRNA质粒组radixin mRNA和蛋白的相对表达量较模型对照组和shRNA质粒组明显减低,差异均有统计学意义(均P＜0.01). 结论 Radixin shRNA能有效沉默OIR动物模型视网膜中radixin基因的表达,抑制视网膜新生血管的形成.%Background Retinal neovascularization is pathological basis of a variety of fundus diseases,but its pathogenesis is unclear.Studies showed that the expression level of radixin in retina is remarkably increased in retinal neovascularization-related diseases.It is presumed that silencing or down-regulating the abnormal expression of radixin is helpful for curing retinal neovascularization-related diseases.Objective This study was to investigate the inhibitory effect of radixin short hairpin RNA (shRNA) plasmid on expression of radixin gene in retina of oxygen-induced retinopathy (OIR) mice.Methods Sixty-four 7-day-old C57BL/6J mice were randomly divided into normal control group, model control group, radixin shRNA plasmid group and shRNA plasmid group by random number table.There were 16 mice in every group.OIR models were established by exposing the mice in an environment of(75±2) ％ oxygen for 5 days and then returned to the normal air in the model control group,radixin shRNA plasmid group and shRNA plasmid group,while the mice of the normal control group were fed in the normal air environment.Radixin shRNA plasmid or control shRNA plasmid at the dose of 1 μg was intravitreally injected in 12-day-old mice of the radixin shRNA plasmid group or shRNA plasmid group, respectively.Five days later, FD-2000S angiography was performed on the mice of each group and then retinal flatmounts were prepared for the observation of retinal vessels.The mice from various groups were sacrificed and retinal sections were prepared.The vascular endothelial nucleus and new blood vessels extending inner limiting membrane (ILM) were examined by hematoxylin and eosin staining;the expression of radixin in the retinas was detected using immunochemistry;the relative expression levels of radixin mRNA and protein were quantitative assayed by real-time quantitative RCR and Western blot, respectively.The use and care of the animals adhered to the Association for Research in Vision and Ophthalmology Statement for the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Research.Results The distribution of retinal vessels was normal in the normal control group.Non-perfusion zone at the posterior pole of retina, circuity of blood vessels,leakage of vessel wall and new blood vessels were found in the mice of the modelcontrol group.Non-perfusion zone and microaneurysms were also exhibited in the shRNA plasmid group.However,these findings were slight in the radixin shRNA plasmid group.The surface of ILM was in discontinuity in the model mice and shRNA-injected mice with more vascular endothelial cell nucleus and more tubes extending ILM than that in the radixin shRNA plasmid group.The immunochemistry results showed that the expressions of radixin in the normal control group and radixin shRNA plasmid group were weaker than those in the model control group and control shRNA plasmid group.The relative expression levels of radixin mRNA were 1.002±0.043,2.236-±0.093,0.556±0.015 and 2.272±0.096 in the normal control group, model control group,radixin shRNA plasmid group and control shRNA plasmid group,and those in the radixin shRNA plasmid group were significantly reduced in comparison with the normal control group, model control group and the shRNA plasmid group (all at P ＜0.01).The relative expression levels were1.000±0.082,1.193±0.021,0.263± 0.016 and 1.235±0.005 in the normal control group,model control group,radixin shRNA plasmid group and shRNA plasmid,with the lowest expression level in the radixin shRNA plasmid group (all at P＜0.01).Conclusions Radixin shRNA can downregulate the expression of radixin gene in the retinas of OIR mice and further inhibit pathological retinal neovascularization.【总页数】6页(P1089-1094)【作者】王龙梅;杨侠;闫琳;刘廷;董晓光;徐海峰【作者单位】日照市中医医院眼科;266071 山东青岛市,山东省眼科研究所;烟台爱尔眼科医院;266071 山东青岛市,山东省眼科研究所;266071 山东青岛市,山东省眼科研究所;266071 山东青岛市,山东省眼科研究所【正文语种】中文【相关文献】1.Radixin shRNA对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用 [J], 王龙梅;杨侠;闫琳;刘延;董晓光;徐海峰;2.Arresten在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的抑制作用及机制 [J], 陈珊珊;杨中伊;李姝蓉;刘桥生;付书华3.组织蛋白酶B与血管内皮生长因子影响高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成的实验研究 [J], 王永瑞;孔丽;王文娟;李宸宇;周国宏4.高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中CA-074Me对JAK2/STAT3信号通路的影响 [J], 王永瑞;孔丽;王文娟;李宸宇;周国宏5.CTSB和bFGF在高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达 [J], 石丽洪; 孔丽; 周国宏; 王文娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。