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1.细胞培养的概念指从体内取出组织、细胞制成单个细胞悬液在体外模拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定的营养条件下,使其生存和生长,并维持其结构和功能特性,继续存活与增殖。
培养过程中细胞不再形成组织。
也可用已建系的细胞株复苏后继续培养,多是癌细胞。
目的:进行后续的生命科学研究—细胞操作2.利用细胞培养技术进行生命科学研究的优点1.研究的对象是活的细胞:在实验过程中,根据要求可始终保持细胞的活力,并可长时期的监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况。
2.研究的条件可以人为控制:根据需要人为控制实验条件,方便观察与分析。
3.研究的样本,可以达到均一性:通过细胞培养所得到的细胞系属同一类型的细胞;实验条件均一。
4.研究的内容便于观察、检测和记录。
5.研究的范围比较广泛:1.多种学科均可利用细胞培养进行研究。
2.可供实验的组织来源众多。
6.研究的费用相对较经济:细胞培养可以大量提供在同一时期、条件相同、性状相似的样本。
3.试述影响体外培养细胞生长的各种因素。
(一)无毒无污染细胞培养环境:离体细胞缺乏防御能力,在有污染物和毒性物质的环境中生存可造成细胞生物学特性改变,甚至中毒死亡。
(二)恒定的生长温度:组织和细胞培养的最适温度为35~37℃,培养细胞对低温的耐受力比对高温强。
(三)合适的气体环境:开放培养时一般把细胞置于95%空气加5% CO2混合气体环境中(四)pH缓冲系统:培养环境需保持pH值恒定,大多数细胞的适宜pH值为7.2~7.4。
(五)理想的渗透压:细胞必须生活在等渗环境中,大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。
(六)湿度和光:开放培养相对湿度控制在95%以上。
细胞培养需避光。
(七)其他因素:放射线、机械振动、接触橡胶用品、细胞接种密度的大小都会对细胞产生影响,培养细胞、培养液或其它培养试剂应放在固定的位置,收集细胞时离心速度不宜过大,细胞接种密度对细胞的生长也有影响。
4.细胞培养过程中常见的污染来源和污染类型有哪些?叙述各污染类型的特征。
1.蛋白质的四级结构一级：氨基酸经肽键连成的多肽链。
二级：α-螺旋和β-片层，氢键维持二级结构的稳定三级：多肽链在二级结构的基础上，由于氨基酸残基侧链相互作用而使多肽链进一步盘旋折叠而形成不规则的特定构象。
氢键，盐键，二硫键。
四级：有两个或两个以上结构域或功能域相互作用聚合而成更复杂的空间构象。
疏水键2.核酸的基本结构、分类核酸可分为DNA和RNA，RNA可分为mRNA，tRNA，rRNA，snRNADNA的结构：双螺旋结构，即DNA有两条走向相反的互补核苷酸链构成，一条为3′到5′，另一条为5′到3′两条链均按同一中心轴呈右手螺旋。
维持DNA双螺旋结构主要是靠碱基间的氢键RNA的结构：大多数RNA是单链，但其分子可通过自身回折而形成许多短的双股螺旋区，在这些区域内A与U，G与C配对形成氢键3.真核细胞和原核细胞的区别核膜、线粒体、内质网、溶酶体细胞骨架、高尔基复合体、核仁原核细胞没有，真核细胞都有。
原核细胞仅有一条DNA，DNA裸露不与组蛋白但与类组蛋白结合、量少，呈环状。
基因结构无内含子，无大量的DNA重复序列，转录与翻译同时在胞质内进行，转录与翻译后无大分子的加工与修饰。
真核：有2个以上DNA分子，DNA分子与组蛋白部分酸性蛋白结合，以核小体及各级结构构成染色质或染色体，DNA量多，呈线状。
基因有内含子和大量的DNA重复序列，核内转录，胞质内翻译，转录与翻译后有大分子的加工与修饰。
4.单位膜：在电镜下生物膜呈现“两暗夹一明”的三层结构，即电子致密度高的内外两层之间夹着厚约3.5nm的电子致密度低得中间层。
5.内膜系统：位于细胞内，在结构、功能以及发生上具有一定联系的膜性结构，统称为内膜系统6.膜性结构：细胞膜，内质网，高尔基复合体，线粒体，细胞核，溶酶体，过氧化氢酶体7.非膜性结构：核糖体，中心体，微管，微丝，核仁和染色质等8.细胞膜的化学组成①脂质：磷脂（最多）、胆固醇、糖脂——双亲媒性分子②蛋白质：1°镶嵌蛋白：细胞膜功能的主要承担者，占膜蛋白的70％-80％2°边周蛋白：与运动有关③糖类：在细胞膜表面起保护过滤作用9.细胞膜的分子结构：流动镶嵌模型：构成膜的磷脂双分子层具有液晶态的特性，它既有晶体的分子排列有序性，又有液体的流动性，即流动脂质双分子层构成膜的连续主体；球形的膜蛋白质以各种镶嵌形式与脂质双分子层相结合，有的“镶”附于膜的内表面，有的全部或部分嵌入膜中，有的贯穿膜的全层，这些大多是功能蛋白。
细胞工程考试总结细胞工程是近年来兴起的一个研究领域，其涉及分子生物学、细胞生物学、生物化工等多个学科的交叉与融合。
细胞工程在医药、食品、能源等领域有着广泛的应用。
考试是检验学习成果的一个重要方式，通过总结细胞工程考试可以更好地发现自己的不足，提高学习水平。
一、考试形式细胞工程考试通常采用笔试形式，试卷包括选择题、填空题和简答题。
选择题占比较大，通常是单选题和多选题，试题涵盖了细胞工程的基本概念、实验技术和应用等方面。
填空题考察对实验数据的分析和理解能力，而简答题则需要考生掌握基本理论知识并能够结合实际进行分析和解决问题。
二、考试知识点1. 细胞基础知识：细胞生物学基础知识、细胞培养、细胞的生理和代谢等方面。
2. 分子生物学：DNA结构与功能、基因调控、基因克隆等。
3. 技术与方法：基因工程、PCR、蛋白质纯化、细胞流式分析等。
4. 细胞工程应用：生物药物、生物制品、生物能源等。
三、注意事项1. 模拟考试：在考试前可以进行模拟考试，模拟考试可以让我们更好地感受到考试的难度，同时也可以预测自己的得分情况，对知识掌握情况有一个比较清晰的了解。
2. 补充知识：细胞工程的内容比较广泛，考试可能会涉及到一些我们没学过或者没有掌握的知识，那么考试之前需要对一些基础知识进行巩固，同时也可以通过阅读相关的文献、视频或者向老师请教等方式来补充知识。
3. 做好笔记：在学习过程中，应尽可能的记录下自己的笔记，对于一些重要的知识点、公式、实验名称等也要做好标注，这有助于我们在考试时快速找到相关知识点，减少遗漏。
4. 做好时间规划：在考试时，应该根据试卷题目难易程度、所占分值大小、自己的掌握程度来做好时间规划，尽可能地把握好答题时间，并避免在最后没有时间答题的情况出现。
总之，细胞工程考试虽然难度较大，但只要我们掌握好基本知识并紧密结合实践，认真备考，制定好合理的考试策略，突破自我，就可以取得优良的成绩。
细胞工程知识点总结细胞工程的知识点主要涵盖细胞生物学、生物医学工程、材料科学、化学等多个领域的内容，下面将对一些重要的知识点进行总结和介绍。
一、细胞生物学1. 细胞结构和功能：细胞是生物体的基本单位，包括细胞质、细胞核、细胞膜等结构组成，具有营养吸收、代谢、生长繁殖、分化等功能。
2. 细胞信号传导：细胞通过受体、信号分子等进行信号传导，调控生物功能和代谢活动。
3. 细胞分化：在不同环境条件下，细胞可以分化成不同类型的细胞，如干细胞可以分化成心肌细胞、神经细胞等。
4. 细胞凋亡和增殖：细胞在受到损伤或者环境刺激时，会发生凋亡或者增殖，维持细胞组织的稳态。
二、生物医学工程1. 细胞培养技术：包括细胞分离、培养基配制、细胞传代、细胞冻存等技术，用于大规模的生物制品的生产。
2. 细胞毒性和安全性评价：评估材料或者药物对细胞的毒性和安全性，保证产品的安全性和有效性。
3. 细胞治疗和干细胞技术：通过干细胞移植、基因修复等技术，用于治疗各种疾病和损伤。
4. 人工器官和组织工程：将细胞和生物材料结合，构建人工器官和组织，用于替代受损的组织和器官。
三、材料科学1. 生物材料的设计和制备：设计和制备适合细胞生长的生物材料，如生物降解材料、生物亲和材料等。
2. 生物材料的表征和评价：通过表面形貌、力学性能、生物相容性等评价生物材料的性能。
3. 细胞-材料相互作用：研究细胞和材料之间的相互作用机制，改善生物材料的生物相容性和使用性能。
四、化学1. 细胞药物递送系统：设计纳米级的载体或者纳米颗粒，用于细胞内的靶向递送和释放药物。
2. 细胞标记和成像技术：利用高灵敏度的成像设备和生物标记物，在活细胞和组织中进行细胞成像和追踪。
3. 细胞信号调控：通过合成化学的方法来调控和干预细胞信号传导系统，研究细胞功能和代谢途径。
细胞工程的发展趋势主要包括以下几个方向：1. “定制化医疗”：根据个体的基因组信息和生理状态，设计和生产个性化的治疗产品和医疗器械，提高治疗效果。
word格式-可编辑-感谢下载支持细胞培养的基本方法1、无菌操作技术：是细胞培养的基本技术，包括实验器具和材料的准备、培养室和超净工作台的消毒、洗手和着装、无菌培养操作等。
2、无菌培养室每天都要用0.1%新洁尔灭拖洗地面一次，紫外线照射消毒30~50min，超净工作台台面每次实验前要用75%酒精擦洗，然后紫外线消毒30min。
3、已吸过培养液的吸管不能再用火焰灼烧。
4、无菌操作要求：动作准确敏捷；不用手触及已消毒品；操作面布局合理；操作保持一定顺序；培养用瓶和吸管的放置；防止各种用液的交叉污染；不向操作者讲话或咳嗽。
5、超净工作台使用注意事项：P256、光波在折射率打的物体中比在折射率小的物体中前进的距离较短，此距离差异叫光程差7、将普通光学显微镜的物镜、聚光器和光源的位置倒置过来的显微镜称倒置显微镜。
特点：光源和聚光器安装在载物台上方，物镜在载物台下方，载物台上可以放置培养皿，便于观察贴附在培养瓶皿底壁上的活细胞。
8、细胞计数法：是用血细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数目，以测定细胞增殖和调整细胞浓度的一种方法。
9、细胞生长曲线：是观察细胞在一代生存期内的增生过程的重要指标，以培养时间为横坐标，细胞密度为纵坐标作坐标图。
10、细胞分裂指数：是指分裂期细胞在全部细胞中所占的百分率，用以表示细胞的增殖旺盛程度。
11、细胞贴壁率：又称接种存活率，用于观察贴壁附着生长细胞，主要反映细胞的生存能力和部分底物材料的生物相容性。
血细胞不贴壁，塑料材料贴壁率较高。
12、倍增时间是指在对数生长期细胞数量增加一倍所用的时间。
13、细胞周期是时间测定有两种方法：（1）同位素标记测定法（2）流式细胞仪测定法。
14、MTT比色法测定细胞活力：（原理）活细胞的线粒体脱氢酶能将染料MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，经酸性异丙醇溶解后呈现的色度可反映出活细胞的代谢水平，死细胞无此酶活性。
15、体外活体染色：就是在体外条件下用某种染色剂对活的组织或细胞进行染色，而不影响活细胞的生命活动的一种方法。
名词解释：1.群体倍增时间：细胞指数增长期时，细胞群倍增所需的时间。
是由于表示群体细胞指数生长期内细胞分裂活动的程度，是判断细胞生长是否旺盛的重要指标。
2.接触抑制〔contact inhibition〕：细胞相互接触后失去运动的现象。
3.密度抑制〔density inhibition〕：由于细胞密度过大，培养液营养耗尽，代谢产物过多和生存空间消失所引起的细胞增殖的抑制现象。
4.肿瘤干细胞(tu mor stem cells，TSC)表现为一种特殊类型的干细胞，具备高度增殖能力与自我更新能力，也具备多向分化的潜能。
TSC 增殖过程中，通过不均一分裂，一个TSC分裂形成一个新的TSC和另一个可最终分化为包括肿瘤细胞在内的各种细胞的子细胞，其结果是维持TSC数目稳定并产生肿瘤。
5.细胞集合(Confluent)：指细胞增殖生长相互连接成片占据所有底物面积现象。
6.饱和密度(Saturation density)：在特殊培养条件下，每平方厘米(单层培养)或每毫升细胞悬液内可到达的最大细胞数。
7.二倍体细胞系或株(Diploid cell line or strain)：具有二倍体染色体数的细胞系或株。
8.二倍体(Diploid)：指双倍数的染色体数或具有此数的细胞系。
9.组织工程：是应用生命科学和工程学的原那么及方法，在正确认识正常及病理两种状态下的组织构造与功能关系的根底上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。
10.细胞融合(Cell fusion)：指两个独立的细胞借媒介物(PEG等)融合成杂种细胞的过程。
11.细胞富集：当细胞别离纯化并不完全彻底，培养物中能到达以某种细胞为主〔占绝大多数〕的程度。
12.三维培养：把细胞悬液接种在一定立体形态的支架上，使细胞生长在三维环境中的培养方法。
13.平衡盐溶液〔balanced salt solution, BSS〕：简称盐溶液，集缓冲液的缓冲能力、生量盐水的等渗性以及培养液的营养供给特点于一体。
细胞培养相关知识点
细胞培养是指将细胞从体内或体外来源中采集到培养基中，通过提供合适的营养物质和环境条件使其在体外无限制地生长和繁殖的一种生物学实验技术。
常见的细胞培养技术包括原代细胞培养和细胞系培养。
1. 培养基：细胞培养中使用的培养基是包含多种营养物质的液体或固体培养基。
常见的培养基种类包括DMEM、RPMI-1640、MEM等，并根据细胞的类型和特殊需要进行相应的改制。
2. 细胞分离：通过一系列的操作将组织中的细胞分离出来，常用的方法有机械剪切、酶消化和离心等。
3. 细胞传代：细胞的传代是指将细胞从旧的培养皿中转移到新的培养皿中，以保持细胞的生长状态和增殖能力。
细胞传代的方法有裂解法、胶原酶法和选择性黏附法等。
4. 培养条件：细胞的生长需要适宜的温度、湿度、pH值和气体环境。
常见的培养条件为37℃、5% CO2和95%湿度。
5. 防止细胞污染：细胞培养中常见的污染源有细菌、真菌和支原体等。
常用的防止污染的方法包括消毒培养器具和介质、使用无菌操作等。
6. 细胞检测：常用的检测方法包括细胞形态观察、细胞数量计
数、细胞活力测定、染色体核型分析和细胞分化等。
7. 细胞培养的应用：细胞培养技术在生物医学研究中有广泛的应用，如药物筛选、疾病模型建立、组织工程和基因工程等。
注：以上所列举的知识点为细胞培养的基本内容，具体的细胞培养操作方法和技巧可根据具体实验需求和细胞类型进行进一步学习。
细胞培养考试重点整理第一章绪论体外培养（IN VITRO CULTURE）：是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或活体器官等）甚或活的个体从体或其寄生体取出，模拟体的生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下使之存活和生长发育的方法。
按照体外培养的结构成分，可将体外培养人为分为：组织培养（tissue culture）指从生物体取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。
细胞培养（cell culture）指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。
器官培养（organ culture）指从生物体取出活的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或者器官原基在体外进行培养的方法。
单一化现象组织培养过程中，培养组织不能在体外长期维持其结构和功能，培养的时间长，经过反复传代，细胞出现单一化现象——趋向单一类型的细胞——最终成为细胞培养。
体培养（IN VIVO CULTURE)：将活体结构成分（如活体组织、活体细胞、活体器官等）甚至活的个体从体或其寄生体取出，放在其他生物体让其生长和发育的方法。
最常见的体培养方式就是移植（trans-plantation）。
体外培养技术创立代表性的人或者实验H ARRISON的工作，较为完善地建立了体外培养活体组织的培养体系，第一次较为系统地观察了体外培养活体组织的结果。
被公认为是体外培养技术的的开始。
标志着体外培养技术的创立，标志着盖玻片悬滴培养法的建立，标志着神经组织体外培养的开始，也标志着神经突起是由神经细胞长出的这一重论的诞生。
C ARREL对体外培养的贡献：◆将无菌操作观念引入体外培养过程中。
◆将培养组织包埋技术、营养供应以及继续培养（也称传代或继代培养）等许多重要的培养条件和方法引入盖玻片悬滴培养系统，从而完善了Harrison的方法。
◆发现鸡胚浸液能明显地促进多种细胞的体外生长。
◆设计卡氏培养瓶减少了污染，扩大了细胞生存空间。
现在一般认为体外培养技术是从Harrison和Carrel真正开始的。
细胞培养设计知识点细胞培养是生物学和医学领域中的一项重要技术，它是指将细胞体外培养，并为其提供必需的条件来生长、繁殖和维持特定功能。
细胞培养的设计是成功进行细胞培养实验的关键，下面将从培养基的选择、细胞传代、处理细胞的方法以及细胞培养的环境控制等方面介绍细胞培养设计的相关知识点。
一、培养基的选择培养基是细胞培养中最重要的基础，它提供了细胞所需的营养物质、生长因子和环境条件。
培养基的选择应根据具体实验目的来确定。
常见的培养基包括DMEM、RPMI-1640、MEM等，不同类型的细胞常使用不同的培养基。
此外，还需要添加适当的血清、抗生素和缓冲剂等，以确保细胞的正常生长。
二、细胞传代细胞传代是指将细胞从一种培养器皿转移至另一种培养器皿中，以维持细胞生长和细胞系的延续。
在细胞传代中，需要注意以下几个知识点：1. 细胞密度：细胞密度应适当，过低会延长细胞生长周期，过高会导致细胞死亡和凋亡。
通常，当细胞生长至80%至90%的密度时进行传代较为适宜。
2. 去除培养容器中的血清：在细胞传代前，应将培养容器中的血清彻底去除，以免对细胞的生长产生影响。
3. 使用胰蛋白酶消化细胞：胰蛋白酶可以帮助将细胞从培养容器表面解离下来，以进行传代。
消化时间和使用的浓度需要根据不同的细胞类型进行调整。
4. 倍液和重新分装：将胰蛋白酶消化的细胞与新的培养基混合后，需要进行适当的倍液和重新分装，以提供新的生长环境。
三、处理细胞的方法在细胞培养过程中，有时需要对细胞进行处理以满足实验的需要，这涉及到以下几个知识点：1. 细胞冻存：将细胞冷冻保存可以长期保存细胞，并且在需要时可以重新进行细胞培养。
在细胞冻存过程中，需要使用适合的冻存液和冷冻容器，同时控制冻结速度和解冻温度。
2. 细胞分离和纯化：当需要分离细胞亚群或纯化细胞时，可以使用特定的细胞分离方法，如离心、负选择法、正选择法等。
3. 细胞转染：将外源DNA导入细胞内，以实现目标基因的表达或基因沉默。
第一篇细胞工程的基本技术——细胞培养技术第1章细胞培养的基本知识第一节基本概念和名词细胞培养(cell culture)技术即是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术，是广泛应用于医学研究领域的重要技术。
它起源于1885年，德国人Roux用温生理盐水在体外培养鸡胚髓板，并使之存活了数月之久，第一次获得组织块人工培养成功。
1906年，Beebe和Ewing用盖玻片悬滴培养法，以动物血清做培养基，培养狗淋巴细胞存活了72小时，并曾见到细胞生长现象。
1907年，Harrison用淋巴液做悬滴培养，使来自两栖类胚胎神经组织的神经细胞存活了若干天，还观察到神经管细胞分化成了神经元，而且向培养液中伸出了轴突，与脑、脊神经细胞在体内分化的情况很类似。
以后Carrel进行了改进，并十分注意培养中的无菌操作技术。
他用血浆包埋组织块外加胎汁的培养法，通过采用更新培养基和分离组织的传代措施，完善了经典的悬滴培养法。
1923年，他又设计了用骨化瓶培养法，以扩大组织的生存空间。
50年代，组织培养技术有了更快的发展，从改进培养操作技术、培养器皿和培养基方面进行了改进。
各种培养瓶、培养基孕育而生。
1957年Dulbecco实验室采用胰蛋白酶消化处理，使成块的组织分散成单个细胞，进行悬液培养，从而开创了细胞培养技术。
用单层细胞培养法可以建立很多细胞系(cell line)，通过单细胞分离培养法又可建立克隆细胞株(clone或cell strain)。
细胞系(cell line)系原代培养经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。
细胞株(cell strain)系通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特定性质或标志的细胞群。
细胞株的这种特定性或标志必须在整个培养期间始终存在。
克隆(clone)系指由同一个祖先细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体。
医学研究中泛指的体外培养包括细胞培养、组织培养和器官培养。
名词解释：1.群体倍增时间：细胞指数增长期时，细胞群倍增所需的时间。
是由于表示群体细胞指数生长期内细胞分裂活动的程度，是判断细胞生长是否旺盛的重要指标。
2.接触抑制（contact inhibition）：细胞相互接触后失去运动的现象。
3.密度抑制（density inhibition）：由于细胞密度过大，培养液营养耗尽，代谢产物过多和生存空间消失所引起的细胞增殖的抑制现象。
4.肿瘤干细胞(tu mor stem cells，TSC)表现为一种特殊类型的干细胞，具备高度增殖能力与自我更新能力，也具备多向分化的潜能。
TSC增殖过程中，通过不均一分裂，一个TSC分裂形成一个新的TSC和另一个可最终分化为包括肿瘤细胞在内的各种细胞的子细胞，其结果是维持TSC数目稳定并产生肿瘤。
5.细胞汇合(Confluent)：指细胞增殖生长相互连接成片占据所有底物面积现象。
6.饱和密度(Saturation density)：在特殊培养条件下，每平方厘米(单层培养)或每毫升细胞悬液内可达到的最大细胞数。
7.二倍体细胞系或株(Diploid cell line or strain)：具有二倍体染色体数的细胞系或株。
8.二倍体(Diploid)：指双倍数的染色体数或具有此数的细胞系。
9.组织工程：是应用生命科学和工程学的原则及方法，在正确认识正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。
10.细胞融合(Cell fusion)：指两个独立的细胞借媒介物(PEG等)融合成杂种细胞的过程。
11.细胞富集：当细胞分离纯化并不完全彻底，培养物中能达到以某种细胞为主（占绝大多数）的程度。
12.三维培养：把细胞悬液接种在一定立体形态的支架上，使细胞生长在三维环境中的培养方法。
13.平衡盐溶液（balanced salt solution, BSS）：简称盐溶液，集缓冲液的缓冲能力、生量盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体。
兼具缓冲和调节溶液的酸碱度、维持渗透压、同时供给细胞生存所需的能量和无机离子成分的作用。
14.生长基质（growth substratum）：培养器皿表面包被的一层能改善生长表面的特性，促进细胞粘附和贴壁的物质。
15.去分化（dedifferentiation）：指已成熟的细胞和组织倒退分化，返回原始幼稚的状态。
16.消化液：在原代细胞培养和细胞传代时，都要用消化液，最常用的是胰蛋白酶和二乙烯四乙酸二钠（EDTA），其次是一些特殊的组织细胞培养用的各型胶原酶。
在原代细胞培养中，使用消化液从组织块中分离（散）出单个的细胞；在进行细胞传代时，消化液使细胞脱离生长表面并离散成单个细胞。
17.消毒 disinfection 杀死物体上病原微生物的方法。
灭菌 s terilization 杀灭物体上所有微生物的方法，包括病原微生物和非病原微生物、繁殖体和芽胞。
18.转化细胞系：指细胞发生了不可逆转的遗传改变而引起恒定的表型改变的细胞系。
19.杂交瘤技术：又称单克隆抗体制备技术，是指建立杂交瘤细胞系的技术，通常指B淋巴细胞杂交瘤技术，即将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，以建立可以分泌单一性抗体的杂交瘤细胞系的技术。
20.指由一个B淋巴细胞克隆所产生的，只识别一种抗原决定簇的均质抗体。
21.干细胞：是指具有无限或较长期的自我更新能力、多种分化潜能和高度增殖能力的细胞。
22.全能干细胞，如ES细胞。
全能干细胞可以分化成人体的各种细胞，这些细胞构成人体的各种组织和器官。
23.成体干细胞：在胎儿、儿童和成人组织中存在的具有自我更新、多向分化潜能和增殖特性的多能干细胞，统称为“成体干细胞”。
24.融合剂：两个或两个以上的细胞融合过程中，能促使细胞融合并使细胞融合的频率显著增大的物质，如仙台病毒，PEG等。
25.克隆化：专指一般DNA在与载体DNA分子重组后，重组DNA分子由载体导入宿主细胞内，依赖载体的复制能力在宿主细胞中进行扩增，形成一个无性繁殖系的过程。
26.细菌污染：包括所有混入培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物（真菌、细菌、病毒和支原体）、化学物质及细胞。
培养的细胞被细菌污染均会造成细胞受损和死亡，是细胞培养工作的大敌。
细胞发生污染时，常有培养液变浑浊和PH发生改变等现象，镜下观察细胞变形、生长缓慢或分裂相消失，以及细胞圆缩脱落等现象。
常有抗生素预防该污染。
27. iPS：诱导多功能干细胞即诱导多能干细胞，是指体细胞经过基因“重新编排”，回归到胚胎细胞的状态，从而具有类似胚胎干细胞的分化能力。
这种方法可以不需要用人胚胎或卵母细胞，就能制造干细胞。
28.克隆：指通过一定方法获得由单个细胞无性繁殖形成的细胞集落。
简答题：1.简述细胞培养污染的种类及污染的预防措施种类：（1）物理污染：温度、放射线、震动、辐射等；（2）化学污染：水、血清、容器、孵箱等的有毒物质的残留；（3）生物污染（支原体污染）：外界的动物、微生物如霉菌、细菌、支原体和其它类型的细胞都可能侵入培养环境引起污染。
预防措施：（1）良好的规章制度：只有相关人员才可进入细胞培养区，细胞培养区必须和其他区域分开，细胞培养区应布局合理；（2）良好的无菌操作：所有玻璃器皿和培养液与试剂的配制应严格无菌，吸入或吸出液体时避免倾倒，不要触碰细胞培养瓶的瓶口，清洁区和污染区的材料应单独处理；（3）保持工作区清洁：常规清洗地面和台面，定期清洁水浴箱、CO2孵箱、生物安全柜等，及时清理废弃物；（4）合理利用抗生素（5）建立细胞库：消除了隐蔽污染的潜在危害（6）细胞污染的检测2.试述细胞培养的基本概念、原理、优缺点及实际意义1）概念：细胞（组织）培养是指从生物体内取出细胞（组织），模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长并维持其结构和功能的方法。
2) 原理及优缺点：细胞培养是将确定所选组织用剪碎的小组织块或分离的单个细胞进行培养，这种培养失去了原有组织类型及某些生化特征，但它们可以增殖，特性化，获得遗传背景相同的群体，可以保存。
3）实际意义：组织（细胞）培养对医学、生命科学的意义①培养的组织器官或细胞，能再一定范围和程度上反映生命活动规律和机体功能特点。
培养的细胞为生命科学和生物医学各种研究奠定了物质基础。
如药物筛选，疗剂评价，新生物制品研发，研究病毒及其他微生物，发现新的传染因子，组织工程中的支撑技术等。
②细胞培养技术已经成为商品化生物技术产品的核心。
如目前可提供的产品，病毒疫苗：口蹄疫、狂犬疫苗和乙肝疫苗等；非抗体型免疫调节剂：干扰素、白介素和集落刺激因子等；多肽生长因子：表皮生长因子和神经生长因子等；酶类：组织型纤溶酶原激活剂；激素：EPO和促黄体生成素等；杀虫剂：杆状病毒；肿瘤特异抗原；癌胚抗原；通过杂交瘤生产的各种单克隆抗体；细胞本身（如干细胞）；皮肤重植等。
4）组织（细胞）培养的局限性：细胞（组织）培养，包括器官培养终归是离体培养，缺少生物整体的严密联系，不能代表整个机体。
在进行医学生物实验过程及对结果的评估都必须考虑这些。
3.简述细胞培养过程中如何进行微生物污染防治1）把好每一个关口，尽可能禁止任何有污染的物品进入培养操作环节；2）抗生素：一般用常用量的5~10倍作冲击疗法。
用药24~48h后，再换常规培养液。
3）加温处理：根据支原体对热敏感的特点，将受支原体污染的细胞放置在41℃作用5~10h，最长不超过18h后，以杀灭支原体。
4）动物体内接种：将支原体污染的细胞接种在同种动物的皮下或腹腔，借动物体内的免疫系统消灭支原体。
待一定时间后取出细胞，做原代培养再进行繁殖。
4.试述目前体外细胞培养中广泛使用最多的天然培养基类型及其作用天然培养基（液）的种类很多，包括生物性体液（如血清、血浆）、组织浸液（胚胎浸液）、水解乳蛋白等。
1）血清：①血清中含有基本的营养物质②血清中含有激素与生长调节因子③血清中含有促进细胞粘附和铺展的因子④血清中含有结合蛋白⑤血清中含有抗机械损害的非特异性保护物质⑥血清中含有pH缓冲物质⑦血清中含有蛋白酶抑制剂2）胚胎浸出液（embryonic extract）是早期动物细胞培养中应用的天然培养基，如鸡胚浸出液、牛胚浸出液等。
胚胎浸出液主要成分为大分子蛋白和小分子氨基酸，有促进细胞生长的作用。
3）水解乳蛋白（lactalbumin hydrolysate）为乳白蛋白经蛋白酶水解的产物，含有富的氨基酸，是常用的天然培养基，可用于许多细胞系和原代细胞的培养。
5.血清的优缺点：1）优点：①血清中含有基本的营养物质②血清中含有激素与生长调节因子③血清中含有促进细胞粘附和铺展的因子④血清中含有结合蛋白⑤血清中含有抗机械损害的非特异性保护物质⑥血清中含有pH缓冲物质⑦血清中含有蛋白酶抑制剂2）缺点：①血清中也存在不少有害于细胞生长和繁殖的物质②血清的成分不明确，影响对结果的分析③对多数动物细胞来讲，血清并不是细胞在体时直接接触的生理性液体，只有在伤口愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态。
④血清也具有潜在的细胞毒作用，除了特异性抑制成分、细菌毒素以及脂类成分之外，还含有多胺氧化酶等。
⑤不同动物、不同批次的血清成分和活性差别较大，使得培养结果不稳定。
需要分批筛选，而且永远不可能保持批次间的一致；⑥在培养液中使用血清会增加成本，尤其是对于动物细胞的大规模培养以及使用胎牛血清培养的情况更如此；⑦血清中有时所含的生长因子水平不足而需要补充，若补充过量会抑制细胞生长。
培养批次与血清批次不同，生长因子水平是难以控制的。
6.简述体外培养细胞的主要生物学特点去分化；贴壁铺陈；接触抑制；密度依赖性生长抑制7.体外培养用液的种类及用途主要包括：培养液（维持体外细胞生存和生长的基本溶液，是组织细胞培养时最重要的条件。
）、缓冲液（中和培养液中的酸性物质）、平衡盐溶液（配抗生素、消化液、洗涤细胞等）、消化液（分离细胞）、血清、pH调整液和抗生素等其它常用液。
8.比较天然和合成培养基的优缺点1）天然培养基：最初的体外细胞培养，均采用天然培养基。
其主要取自动物体液或从动物组织中分离提取。
优点：营养丰富，培养效果良好；缺点：成分复杂，来源受限，影响对某些实验产物的提取和结果的分析，易发生支原体染。
2）合成培养基：细胞在体内生存生长所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定成本低。
缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。
9.试述细胞体外培养的条件体外培养细胞的基本要求主要包括细胞接种、培养液成分、酸碱度、气体条件、温度、水的纯度及无菌条件。
