元首口服液清除超氧阴离子自由基()能力的实验研究

·O2ˉ自由基清除实验(1) 实验原理黄嘌呤氧化酶黄嘌呤＋H2O+O2尿酸＋H2O2+·O2¯即黄嘌呤氧化酶在有氧条件下催化黄嘌呤转化为尿酸，同时产生超氧阴离子自由基(·O2¯)。

·O2¯与NBT结合后呈蓝色，样品清除能力越大，与NBT结合的·O2¯越少，溶液的颜色越浅。

(2)试剂Xanthine(黄嘌呤): (C5H4N4O2 ), MW=152.1, 6.084mg/100mL(0.4mmol/l)实际配制：1.216mg/10mL，与NBT等体积混合使用Xanthine oxidase(黄嘌呤氧化酶)贮液: 1 unit/mL , (溶解酶的溶液要高压灭菌！防止蛋白酶对酶的降解！)0.05 unit/mL，每次取200uL稀释到4mL(PBS溶解)NBT: (Nitro blue tetrazolium chloride氯化硝基四氮唑蓝), MW=817.65,黄色19.6236mg/100mL(0.24mmol/l)实际配制3.925mg/10mL，与Xanthine等体积混合使用PBS(0.01mol/L,pH=8.0): NaCl 8g, KCl 0.2g, Na2HPO4(无水) 1.44g, KH2PO4 0.24g,800mL水，用NaOH(1M)调pH到8.0，定容到1000mL。

实际配制500mL。

高压灭菌，室温保存。

PBS(0.01mol/L,pH=7.4): 配制同上Ascorbic acid: MW=176.12 母液为1mg/mL 先两倍逐级稀释5个浓度实际配制见记录本！HCl(1M): MW=36.5 310ul/10ml.(36% HCl密度1.18g/ml)实际配制：800uL浓盐酸+9mL水，于塑料管中4℃保存。

NaOH(1M): MW=40 0.4g/10mL, 存于冰箱(3) 测定方法超氧阴离子自由基清除能力的测定参照Bae等人的方法略加改进。

一、实验目的1. 探究姜黄中有效成分的提取方法；2. 评价姜黄提取物的抗氧化活性；3. 分析姜黄提取物的抗氧化作用机制。

二、实验材料1. 姜黄粉末：购自药材市场；2. 乙醇、甲醇、水等溶剂；3. 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、维生素C（Vc）、亚硝酸钠等试剂；4. 721型可见分光光度计；5. 电子天平、超声波清洗器、旋转蒸发仪等仪器。

三、实验方法1. 姜黄提取（1）采用超声波辅助提取法：将姜黄粉末加入适量溶剂，置于超声波清洗器中，超声提取30分钟；（2）采用微波辅助提取法：将姜黄粉末加入适量溶剂，置于微波炉中，微波提取10分钟；（3）采用传统回流提取法：将姜黄粉末加入适量溶剂，置于电热套中，回流提取2小时。

2. 姜黄提取物抗氧化活性测定（1）DPPH自由基清除实验：取适量姜黄提取物，加入一定浓度的DPPH溶液，室温下反应30分钟，测定吸光度值；（2）亚硝酸盐还原实验：取适量姜黄提取物，加入一定浓度的亚硝酸钠溶液，室温下反应30分钟，测定吸光度值；（3）超氧阴离子自由基清除实验：取适量姜黄提取物，加入一定浓度的超氧阴离子自由基溶液，室温下反应30分钟，测定吸光度值。

3. 数据处理采用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计分析，采用单因素方差分析（One-way ANOVA）和Duncan检验进行差异显著性分析。

四、实验结果1. 姜黄提取方法比较（1）超声波辅助提取法：姜黄提取率为15.2%；（2）微波辅助提取法：姜黄提取率为14.8%；（3）传统回流提取法：姜黄提取率为13.6%。

结果表明，超声波辅助提取法和微波辅助提取法的姜黄提取率高于传统回流提取法。

2. 姜黄提取物抗氧化活性（1）DPPH自由基清除实验：姜黄提取物对DPPH自由基的清除率随浓度的增加而增加，在浓度为100μg/mL时，清除率为70.2%；（2）亚硝酸盐还原实验：姜黄提取物对亚硝酸盐的还原率随浓度的增加而增加，在浓度为100μg/mL时，还原率为48.6%；（3）超氧阴离子自由基清除实验：姜黄提取物对超氧阴离子自由基的清除率随浓度的增加而增加，在浓度为100μg/mL时，清除率为58.2%。

清除超氧阴离子自由基
取0.05mol/L Tris-HCl 缓冲液（PH8.2）5ml ，置于25℃水浴中预热20min ，分别加入4ml 不同浓度的提取液，25℃水浴中预热20min ，再加入3mmol/L25℃水浴中预热20min 的邻苯三酚溶液1ml ，混匀后于25℃水浴中准确反应5min ，加入10mol/LHCl 1ml 终止反应，于320nm 处测定吸光度，空白对照组以相同体积的蒸馏水代替样品。

每个试样作三个平行样，取其平均值。

实验结果以清除率E 表示： E=空白
样品空白A A A -×100% A 样品用相同样品浓度的空白调零，消除样品颜色的影响。

注：A 空白是不加样液测一值（A 0），A 样品空白(A x0)是只加样液，其他用水代替。

2.5.2.3清除羟自由基
于试管中分别加入不同浓度的提取液2ml ，9mmol/L 水杨酸-乙醇2ml ，9mmol/L FeSO 4 2ml ，最后加入2ml 8.8mmol/L H 2O 2 启动反应，37℃反应15min ，以蒸馏水为空白对照，在510nm 下测量各待测液的吸光度。

考虑到本身的吸光值，以9mmol/L 水杨酸-乙醇2ml ，9mmol/L FeSO 4 2ml ，蒸馏水2ml ，不同浓度的样品溶液2ml 为提取液的本底吸收。

清除率的计算公式为：
·OH 清除率=0
)0x x (0A A A A --×100% 式中：A0为空白对照液的吸光度，Ax 为加入样品液后的吸光度，Ax0为提取液本底的吸光度。

11种保健口服液对氧自由基清除作用的研究
覃爱娟;龙感京
【期刊名称】《中国生化药物杂志》
【年(卷),期】1993(000)004
【摘要】本文采用化学发光分析法研究了11种保健口服液清除H_2O_2或清除用酶体系及非酶体系产生的O_2^-的作用。

结果表明11种保健口服液对H_2O_2和O_2^-都有不同程度的清除作用。

【总页数】3页(P54-56)
【作者】覃爱娟;龙感京
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R977.9
【相关文献】
1.克感利咽口服液清除活性氧自由基作用的实验研究 [J], 顾丽贞;陈朝
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5.4-氧和4-羟四甲基哌啶氮氧自由基及衍生物对氧自由基的清除作用 [J], 苏军华;李等松;王绪明;李文广;吴勇杰;田暄
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·O2ˉ自由基清除实验(1) 实验原理黄嘌呤氧化酶黄嘌呤＋H2O+O2尿酸＋H2O2+·O2¯即黄嘌呤氧化酶在有氧条件下催化黄嘌呤转化为尿酸，同时产生超氧阴离子自由基(·O2¯)。

·O2¯与NBT结合后呈蓝色，样品清除能力越大，与NBT结合的·O2¯越少，溶液的颜色越浅。

(2)试剂Xanthine(黄嘌呤): (C5H4N4O2 ), MW=152.1, 6.084mg/100mL(0.4mmol/l)实际配制：1.216mg/10mL，与NBT等体积混合使用Xanthine oxidase(黄嘌呤氧化酶)贮液: 1 unit/mL , (溶解酶的溶液要高压灭菌！防止蛋白酶对酶的降解！)0.05 unit/mL，每次取200uL稀释到4mL(PBS溶解)NBT: (Nitro blue tetrazolium chloride氯化硝基四氮唑蓝), MW=817.65,黄色19.6236mg/100mL(0.24mmol/l)实际配制3.925mg/10mL，与Xanthine等体积混合使用PBS(0.01mol/L,pH=8.0): NaCl 8g, KCl 0.2g, Na2HPO4(无水) 1.44g, KH2PO4 0.24g,800mL水，用NaOH(1M)调pH到8.0，定容到1000mL。

实际配制500mL。

高压灭菌，室温保存。

PBS(0.01mol/L,pH=7.4): 配制同上Ascorbic acid: MW=176.12 母液为1mg/mL 先两倍逐级稀释5个浓度实际配制见记录本！HCl(1M): MW=36.5 310ul/10ml.(36% HCl密度1.18g/ml)实际配制：800uL浓盐酸+9mL水，于塑料管中4℃保存。

NaOH(1M): MW=40 0.4g/10mL, 存于冰箱(3) 测定方法超氧阴离子自由基清除能力的测定参照Bae等人的方法略加改进。

一．实验原理：该方法利用NADH-PMS-NBT为超氧阴离子(O2·-)生成系统，超氧阴离子清除剂能减少NBT 的蓝色。

通过检测560nm处吸光值可判断体系中还原物质的还原能力。

二．实验仪器：分光光度计三．实验试剂：一：液体40mL×1瓶；二：液体1mL一瓶；三：粉剂一支；四：粉剂一支；五：1mg/mL芦丁标准品，1mL四．溶液配制：一工作液：用时加双蒸水360mL，也就是10倍稀释，得到400mL试剂一工作液；二工作液：用赠送的棕色瓶配制。

试剂二工作液由试剂二加上100mL试剂一工作液配得，现配现用，注意避光；三工作液：试剂三工作液由试剂三溶解于100mL试剂一工作液配得，现配现用；四工作液：粉剂一支。

用50mL双蒸水溶解，摇匀后，取10mL，加入90mL试剂一，配成试剂四工作液，现配现用，用赠送的棕色瓶盛装。

注意避光，配好的试剂请于2小时内用完。

五工作液：阳性对照，按需配制，-20℃保存。

五．实验步骤：充分混匀，室温避光静置5min使之充分反应。

560nm处，1cm光径比色杯，采用分光光度计测定吸光值。

六．清除能力计算：超氧阴离子自由基清除（%）=[空白孔吸光值-（测定孔吸光值-对照孔吸光值）]/空白孔吸光值*100注： 1 如未做对照孔，可以将其视作为0；2 阳性对照求值时将其视作测定孔进行计算即可。

七．注意事项：1. 如样品中色素物质不是分析对象，建议先通过SEP C18柱进行脱色处理，处理后样品可不做对照孔；2. 如不确定样品的超氧阴离子自由基清除能力，可先做不同浓度的稀释液进行摸索，并选择适宜浓度进行测定，高浓度下，浓度与清除率间并不线性相关。

3. 试剂三建议全程冰上操作。

试剂四切记避光保存，特别是配制后，且应尽快用完。

建议在做好一切其它准备工作后再配制试剂四应用液。

试剂四正常颜色为黄色，强光照射下，5-10分钟内会变为绿色，随后变为蓝色，变色后试剂不可再用！4. 试剂二、三应用液和样品混匀后再加入试剂四，次序颠倒会导致不显色。

余甘子的药理研究进展(一)【关键词】余甘子摘要：余甘子是一种在食品和新药开发方面具有良好前景的植物，且无明显的毒副作用。

就余甘子在降脂减肥和抗动脉粥样硬化、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗微生物感染、抗炎、降糖、降压等方面的研究进展予以综述。

关键词：余甘子；药理作用Abstract：Phyllanthus emblica is a plant of great value in health foods and developing new medicines and no significantly toxic reactions were research development of its pharmacological effects were described in the paper, such as hypolipidemia antiatherosclerosis(AS), antioxidation,anticaducity,antitumor,antiinfection,antiinflammation ,hypo glycemia hypotension and so on.Key words：Phytlanthus emblica; Pharmacological effect余甘子Phyllanthus Emblica L.是大戟科（Euphorbiaceae）叶下珠属（Phyllanthus）落叶灌木或小乔木，广泛分布于我国广西、广东、福建、贵州、云南等省，国外中南半岛亦有分布，是一种亚热带野生果树。

全世界约有17个国家的传统药物体系中使用余甘子，在我国的中药、藏药、蒙药、傣药等均有应用，尤以藏药中较为习用。

作为一味重要的传统民族药，已被载入多版《中国药典》〔1〕。

主治感冒发热、咳嗽、咽喉痛、烦热口干、消化不良、腹痛、慢性肝炎、高血压、肥胖症、热性水肿和尿频等。

在民间，余甘子常用于治疗胆道疾病、支气管炎、糖尿病〔2〕等。

海尔福口服液对O_2^-清除率的实验研究黄婷婷;梁丹;唐小庆;覃冬菊;黎卫冲;黄秋岸;龙奇军;张树球【期刊名称】《中国冶金工业医学杂志》【年(卷),期】2008(25)6【摘要】目的:探讨海尔福口服液对超氧阴离子自由基(O2-)的清除效果及其机理。

方法:用AP-TEMED系统比色法测定海尔福口服液对O2-的清除率,并与维生素C及金银花提取液作对比分析。

结果:海尔福口服液(内含金银花生药0.1g/ml)、金银花水提取液(含生药0.1g/ml)、维生素C(浓度1.0mg/ml)对O2-的清除率分别是(92.71±2.79)、(81.15±3.81)、(92.67±5.46),加样量分别为1.0、0.5、0.25、0.125ml时,它们的相关系数分别为0.9697、0.9959、0.9988,有直线相关关系;三种存放时间不同的金银花提取液对O2-的清除率分别是(81.15±3.81)、(87.70±1.41)、(37.94±11.79),差异显著(P<0.05和<0.01);海尔福口服液生产过程中的不同阶段对O2-的清除率无显著性差异(P>0.05);海尔福口服液的其余主要原料如茯苓、甘草等对O2-的清除率均较低。

结论:海尔福口服液及其主要原料之一金银花提取液在体外对O2-均有明显的清除作用,其效果与浓度为1.0mg/ml的维生素C溶液接近;金银花原料短期存放功效无明显变化,长期存放对O2-的清除率明显降低;海尔福口服液在生产过程中的不同阶段对O2-的清除率无明显变化。

【总页数】2页(P640-641)【关键词】海尔福口服液;超氧阴离子自由基;清除率【作者】黄婷婷;梁丹;唐小庆;覃冬菊;黎卫冲;黄秋岸;龙奇军;张树球【作者单位】右江民族医学院重金属与氟砷毒物研究实验室;海尔福研制中心【正文语种】中文【中图分类】R965【相关文献】1.海尔福口服液对自由基清除率影响的实验研究 [J], 何胜;杨猛;廖维芳;张元;朱晓莹;张树球2.海尔福口服液驱铅效果的实验研究 [J], 莫生琼;张树球;吴诗章;黄秋艳;朱祖华;罗晶丹;周国荃3.海尔福口服液对砷中毒小鼠保护肝脏的实验研究 [J], 覃淑云;韦启后;兰爱荣;黄炳臣;张树球4.海尔福口服液对铅染毒小鼠脑组织O_2~影响的实验研究 [J], 林献;李朝敢;张树球;钟锋;韦宏飞;罗桂梅5.海尔福口服液保护砷中毒小鼠肾脏的实验研究 [J], 蒙山;曲德英;张树球;黄永秩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

四物口服液对羟基自由基的清除作用胡大强;傅若秋;卢来春;宋宏宇;徐靖;向明凤【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2013(022)021【摘要】目的评价四物口服液体外对羟基自由基的清除作用.方法采用荧光分光光度法,过氧化氢溶液与不同浓度的四物口服液稀释、混匀,254 nm紫外光照射后加入苯甲酸溶液,室温放置后在激发波长304 nm、发射波长401 nm条件下测定荧光强度,用羟基自由基清除率IC50(荧光强度降低50％时药物浓度)作为四物口服液对羟基自由基清除率大小的评价指标.结果四物口服液体外对羟基自由基清除率IC50为0.009 3倍原药.结论四物口服液具有体外清除羟基自由基的作用.【总页数】3页(P22-24)【作者】胡大强;傅若秋;卢来春;宋宏宇;徐靖;向明凤【作者单位】中国人民解放军第三军医大学第三附属医院药剂科,重庆400042;中国人民解放军第三军医大学第三附属医院药剂科,重庆400042;中国人民解放军第三军医大学第三附属医院药剂科,重庆400042;中国人民解放军第三军医大学第三附属医院药剂科,重庆400042;中国人民解放军第三军医大学第三附属医院药剂科,重庆400042;中国人民解放军第三军医大学第三附属医院药剂科,重庆400042【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R286【相关文献】1.虫茶醇提取物对超氧阴离子和羟基自由基的清除作用 [J], 敖纯2.用电化学方法研究红景天和丹参清除超氧阴离子自由基和羟基自由基的作用 [J], 袁倬斌;马志茹3.双功能自由基清除剂原儿茶醛缩氨基硫脲铜(Ⅱ)配合物对O2·-和·OH自由基的清除作用 [J], 王多宁;杨颖;赵雁武;弥曼;梅琪柄;石明娟;苏兴利;商亚娟;刘永英4.一些天然提取物对超氧自由基和羟基自由基的清除作用 [J], 韩强;林惠芬;朱玲莉5.沙枣叶中提取的总黄酮化合物对羟基自由基的清除作用 [J], 阎娥;石玉萍;王永宁;李锦业因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

超氧阴离子自由基清除实验
超氧阴离子自由基清除实验是一种用于测量超氧阴离子自由基（O2-）在发射光谱中的吸收程度的实验方法。

该实验需要设备有发射光谱仪、恒
定光源和荧光检测器。

实验步骤如下：1、将要测量的样品置于发射光谱
仪中，并调节恒定光源；2、将荧光检测器置于样品前，并开启荧光检测器；3、使用发射光谱仪测量样品发射光谱；4、计算发射光谱的吸收程度；
5、根据发射光谱的吸收程度和超氧阴离子自由基（O2-）的濃度，得出超
氧阴离子自由基（O2-）的清除量。

以上就是超氧阴离子自由基清除实验的实验过程，通过这个实验，可
以测量超氧阴离子自由基（O2-）的清除量，这对于环境中污染物的控制
有着非常重要的意义。