ff22免疫学讲义检测技术的基本原理

本科免疫学POWERPOINT讲稿 免 疫 诊 断
1. 直接凝集：玻片和试管凝集 直接凝集： 2 间接凝集： 正相间接凝集和反向间接凝集。 间接凝集： 正相间接凝集和反向间接凝集 间接凝集和反向间接凝集。 补充介绍： 补充介绍： 3. 协同凝集：以SPA为载体的反向间接ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ集。 协同凝集： 为载体的反向间接凝集。 为载体的反向间接凝集 在微生物检测中常用。 在微生物检测中常用。 4. 间接凝集抑制试验： 间接凝集抑制试验：
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生物素-抗生物素蛋白系统 （2） BAS-ELISA:生物素 抗生物素蛋白系统（biotin） 生物素 抗生物素蛋白系统（ avidin system, BAS）, 放大系统。 ） 放大系统。 （3）微粒捕获酶免疫分析技术：用于检测微量可溶性抗 ）微粒捕获酶免疫分析技术： 原。 (4) 酶免疫组化法： 酶免疫组化法： 对抗原进行定性、定量、定位检测。 对抗原进行定性、定量、定位检测。 3 放射免疫测定法： 放射免疫测定法： 敏感度可达pg水平 常用于检测微量物质， 水平。 敏感度可达 水平。常用于检测微量物质，如胰岛 素、生长激素、甲状腺素、吗啡、地高辛药物和IgE等。 生长激素、甲状腺素、吗啡、地高辛药物和 等
5 免疫比浊 （immunoephelometry） ） 在一定量抗体中分别加入递增量的 抗原，经一定时间形成IC，液体浑浊， 抗原，经一定时间形成 ，液体浑浊， 用浊度计测反应体系的浊度， 用浊度计测反应体系的浊度，据标准曲 线推算样品中抗原含量。 线推算样品中抗原含量。
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环境污染检测
探讨免疫学检测技术在环境污染监测中的应 用，如检测水中的污染物。
生物医学研究
了解免疫学检测技术在研究领域的应用，如 免疫组织化学和流式细胞术。
食品安全监测
介绍免疫学检测技术在食品安全监测中的作 用，如快速检测食品中的有害物质。
免疫学检测技术的前景展望
展望免疫学检测技术未来的发展方向和应用 前景。
述
3 免疫学检测技术分
类
介绍免疫学检测的基本 原理，如抗原-抗体相互 作用和信号放大。
探讨不同类型的免疫学 检测技术，如免疫层析、 免疫荧光和酶联免疫吸 附实验。
免疫学检测技术的应用
临床诊断
探索免疫学检测技术在疾病诊断和监测中的 广泛应用，如病毒检测和肿瘤标志物。
生物工业
探索免疫学检测技术在生物工业中的应用， 如生物制药和工业发酵。
免疫学检测技术基本原理 及其应用课件
欢迎来到免疫学检测技术基本原理及其应用的课件！本课程将带您深入了解 免疫学检测技术的基本原理以及广泛的应用领域。让我们开始这段令人兴奋 的学习旅程吧！
免疫学检测技术基本原理1 来自疫学基础知识回顾回顾免疫学的基本概念 和原理，为后续的技术 解释提供基础。
2 免疫学检测原理概
免疫学检测技术的挑战与改进
1 技术难点
探讨当前免疫学检测技术所面临的挑战，如灵敏度、特异性和自动化。
2 改进方向
讨论改进免疫学检测技术的可能方向，如新的标记方法和数据分析技术。

用于可溶性抗原和抗体的检测。
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* 间接法：用于检测抗体
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* 双抗体夹心法：用于检测抗原。
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B 免疫组化技术—检测组织中或细胞表面的抗原。 对抗原进行定性、定量、定位检测。
C 酶联免疫斑点试验（ELISPOT）
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（三）免疫标记技术
用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标记抗体
（或抗原）进行抗原-抗体反应。
标记物质与抗体（或抗原）的化学连接未改变 抗体（或抗原）的免疫学特性，且极大的提高了 反应的灵敏度，可以对微量物质进行定量、定性 或定位检测。
免疫标记技术主要有三种基本类型： 免疫荧光技术
该法是将凝胶电泳与固相免疫相接合的检测技术，即将电泳 分区的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、放射免疫技术测定 。
常用于检测多种病毒的抗原或抗体。如检测HIV抗体。
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免疫学检测技术的基本原理演 示文稿
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免疫学检测技术的基本原理
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抗原抗体比例对反应现象的影响
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三. 检测抗原和抗体的体外试验
（一）凝集反应
颗粒性抗原（RBC、细菌等）与相应抗体
结合形成肉眼可见凝集物的现象或反应。 1．直接凝集试验
（1）玻片凝集试验：用于定性测抗原。
如ABO血型鉴定，细菌的鉴定、分型等。

2.沉淀反应－单向免疫扩散，双向免疫扩散，
免疫电泳，免疫比浊
3.补体参与的反应－补体结合试验，溶血空斑试
验
4.用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应
用标记抗体或抗原进行的 抗原抗体反应
免疫荧光技术(immunofluorescence) 酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA) 放射免疫测定(radioimmunoassay,RIA) 化学发光免疫分析(chemiluminescence
ELISA 双抗体夹心法
淋巴细胞的分离与类型鉴定
免疫荧光法 磁珠分离法 流式细胞术(FlΒιβλιοθήκη w cytometry)/荧光激活
的 细胞分选器(Fluorescence activated cell sorter,FACS)
淋巴细胞功能测定
T细胞功能测定
T细胞增殖试验 细胞毒试验 细胞因子检测 皮肤试验
immunoassay,CLIA)
免疫印迹法(immunoblotting)
酶联免疫吸附试验(enzyme-linked
immunosorbent assay,ELISA)
双抗体夹心法 间接法 BAS—ELISA 酶联斑点试验（enzyme-linked immunospot
assay,ELISPOT)
免疫学检测技术的基本原理
掌握 检测抗原或抗体常用的方法、原 理及其应用、T 细胞功能测定的方法
熟悉 免疫印迹法、免疫PCR的原理、吞 噬细胞功能的测定方法
了解 免疫学检测方法的评估与选择
第一节 抗原或抗体的检测
抗原抗体反应的原理—特异性，可见性
抗原或抗体的检测方法
1.凝集反应－直接凝集，间接凝集
B细胞功能测定

2.沉淀反应
毒素、组织浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后,出现肉眼可见的沉淀 物,称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行,也可在半固体琼脂凝胶中进行。
Ab in gel
单向免疫扩散
Ag
Ag
Ag
Ag
用于确定 抗原浓度
免疫比浊
过量Ab Ab
Ab
Ab
双向免疫扩散
Ag1 Ag2
Ag3
Ag4
Ab
鉴定多种抗原是完全相同、 部分相同或完全不同
荧光素标记抗体染胞内细胞因子,FACS分析
酶联免疫斑点试验-ELISpot
检测B细胞 产生的抗体
检测T细胞 产生的CK
谢谢
免疫细胞 功能测定
T细胞功 B细胞功 能测定 能测定
细胞毒 试验
吞噬功 能测定
细胞因 子检测
T细胞增 殖试验
迟发型超 敏反应的
检测
抗体含 量测定
溶血空 斑试验
51Cr释放法
乳酸脱氢 酶释放法
细胞染 色法
凋亡细胞 检测法
硝基蓝四 氮唑试验
巨噬细胞 吞噬试验
生物活性 检测法
免疫学检 测法
外周血单个核细胞的分离
⑥免疫印迹法-Western blotting
4.蛋白质芯片技术
又称为蛋白质微列阵,指固定于支持介质上的大量蛋白质构成的微列阵。根 据蛋白质分子间特异性结合的原理,可实现快速、准确、高通量的检测。
第三节 免疫细胞功能的检测
淋巴细胞及其 亚群的分离
磁珠分 离法
免疫吸附 分离法
流式细 胞术 肽—MHC四聚 体技术
凝集反应常用于溶血性疾病的诊断：
+
病人的RBC 体内anti-Rh

2．间接凝集反应
概念：将可溶性抗原/抗体先结合于一种
与免疫无关的颗粒状载体表面，成为致敏颗 粒，再与相应抗体/抗原结合，出现的凝集现 象。
载体颗粒：红细胞、乳胶颗粒、活性炭 颗粒等。
正向间接凝集反应如：类风湿因子的检测
可溶性 载体 抗原
抗体
间接凝集
反向间接凝集反应：若将抗体结 合于载体微球上检测抗原。
淋巴细胞转化试验 （形态计数法）
• 原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体，T细 胞在体外受PHA或ConA的刺激后能转化为体 积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞， 以此测定T细胞的功能。
PHA刺激
48~72小时
mitogens small T lymphocyte
lymphoblast
免
疫 测
( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物
定
法
分离Ag*-Ab 和游离Ag*
(RIA)
示
测定Ag*-Ab和/或游离Ag*放射性
意
图
从标准曲线上读知含量
第二节 免疫细胞功能的测定
免疫细胞的分离与鉴定 免疫细胞功能测定
一、淋巴细胞的分离与鉴定
• 根据细胞的密度、粘附性能、表面标志 等，采用不同方法分离外周血单个核细 胞、淋巴细胞及不同亚群。
免疫荧光显微技术
间 接 免 疫 荧 光 法 示 意 图
抗核抗体(FITC-IgG）)
(2)酶免疫测定法（EIA):
常用酶：HRP、ALP • ELISA：双抗夹心法、间接法、竞争法等。
基本步骤
底物
显色
二抗 一抗
不同Ag
to detect Ab to detect Ag

免疫学检测的应用领域
医学诊断
免疫学检测可以用于早期疾病诊断、感染病毒和细 菌的检测，以及血型鉴定等。
生物学研究
在生物学研究中，免疫学检测可用于研究蛋白质的 表达、细胞信号传导和免疫系统功能。
免疫学检测的优势和局ຫໍສະໝຸດ 性高灵敏度与特异性免疫学检测具有高度敏感性和特异性，可准确识别和定量多种分子。
操作简便
免疫学检测方法简单易行，不需要复杂的设备和操作步骤。
免疫学检测技术的基本原 理
免疫学检测技术是通过检测抗体和抗原之间的相互作用，来识别和量化特定 分子的方法。
常见的免疫学检测方法
酶联免疫吸附试验（ELISA）
常用于检测抗体和特定抗原之间的结合，可应 用于医学诊断和生物学研究。
免疫印迹（Western blot）
通过将蛋白质分离并与特异性抗体结合，检测 目标蛋白的存在和浓度。
免疫荧光染色
利用荧光标记的抗体来定位和检测细胞内的特 定抗原和抗体。
免疫组织化学
将抗体标记物应用于组织切片，用于研究细胞 和组织中特定抗原的表达。
免疫学检测的工作原理
1 抗原-抗体反应
免疫学检测基于抗原与抗体之间的特异性结合，形成可观察的信号。
2 特异性识别与结合
通过选择性地使用特定抗体来识别和结合目标分子，达到特异性检测的目的。