PCR防污染措施

PCR实验室污染与对策PCR（Polymerase Chain Reaction）实验室是进行核酸分析和生物学研究的重要场所。

然而，由于PCR实验室使用高灵敏度的技术，可能会受到外源性DNA污染的影响，导致结果的失真甚至错误。

因此，PCR实验室污染的问题需要引起重视，并采取相应的对策来减少对实验结果的影响。

外源性污染主要指的是在实验室环境中引入外部DNA污染源。

这些污染源可能包括实验室用具（如罗氏管、管盖、显微镜片等）、实验材料（如引物、模板DNA等）、工作人员（如手部皮肤上的DNA）以及空气中的微生物等。

为了减少外源性污染，可以采取以下对策：1.消毒和清洁实验室：实验室应定期进行彻底的清洁和消毒，包括工作台、工具和设备等。

使用消毒剂对工作台和设备进行彻底的消毒，防止污染源的交叉感染。

3.使用无DNA污染的试剂和材料：选用经过严格筛选和检测的PCR试剂和材料，确保其无DNA污染。

同时，使用专门为PCR实验设计和包装的罗氏管和管盖，减少外源性DNA污染的可能。

4.严格的实验室操作规范：建立和执行严格的实验室操作规范，包括实验室的通风设施、培训工作人员、制定标准操作流程等。

工作人员应按照规范操作，遵守实验室操作规程，确保实验的准确性和可靠性。

内源性污染是指实验过程中引入的内源性DNA污染。

内源性污染通常是由前一PCR扩增反应的产物污染了下一PCR反应。

1.严格控制实验操作的顺序：按照从低到高浓度的样品进行PCR扩增。

首先进行阴性对照，检测PCR反应体系中是否存在污染。

然后进行低浓度样品的扩增，最后进行高浓度样品的扩增，以减少内源性污染的可能。

2.应用反转录酶酶和RNA不是DNA模板：在RNA模板的PCR扩增反应中，可以使用反转录酶酶将RNA转录成cDNA。

由于RNA是DNA的模板，反转录过程不会引入外部DNA污染，从而减少内源性污染的可能。

3.使用消除污染酶：在每一PCR扩增反应中加入消除污染酶，可以在扩增反应结束后对DNA污染进行降解。

如何避免和预防PCR污染PCR污染是在聚合酶链反应（PCR）实验中经常遇到的问题。

它可能导致错误的结果，干扰实验的准确性和可重复性。

下面是一些预防和避免PCR污染的方法：1.分开PCR前和PCR后的实验区域：PCR前和PCR后的实验区域要有明显的分离，确保样品处理和扩增区域的物品不混在一起。

这样可以避免PCR反应过程中的污染物接触到未扩增的样品。

2. 使用专用试剂和实验器材：使用经过严格验证的无核酸酶或经过特殊处理的试剂和实验器材，例如使用新酶切片或带有DNase的试剂盒，以确保没有外源性DNA污染。

3.清洗和消毒实验区域：每次实验前都要仔细清洗实验区域，并使用酒精或其他消毒剂进行彻底消毒。

这样可以减少无意中将外源性DNA引入PCR反应体系的机会。

4.严格使用正控和空白对照：每次进行PCR实验时都要使用正控和空白对照。

正控可以验证实验条件是否正确，空白对照可以检测是否存在外源性DNA污染。

5.分装试剂和样品：将试剂和样品分装成小份，使用一次性耐污染的试管或器皿，避免交叉污染。

6.搭建风罩或使用避光罩：在PCR反应过程中，使用风罩或避光罩可以减少样品暴露在外界环境中的机会，降低污染的可能性。

7.避免频繁开盖：在扩增反应过程中尽量避免频繁开盖，以防止空气中的污染物进入PCR反应体系。

8.使用滤芯和屏蔽盖：在制备PCR反应混合物时，可以使用滤芯和屏蔽盖，以防止酶切片、试剂盒或其他实验器材中的DNA污染进入PCR反应体系。

9.定期更换实验工作区域和器皿：定期更换实验工作区域和器皿，避免由于反复使用导致的DNA污染。

10.使用低能量紫外线消毒器进行消毒：在消毒实验器材时，可以使用低能量紫外线消毒器进行消毒。

低能量紫外线可以杀灭细菌和病毒，减少污染的风险。

总结起来，预防和避免PCR污染需要严格控制实验条件、配备专用试剂和实验器材、分装试剂和样品、避免频繁开盖以及定期更换实验工作区域和器皿。

这些方法可以减少PCR污染的发生，并保证实验结果的准确性和可重复性。

PCR实验室主要污染源与防污染措施1. PCR实验室主要污染源（1）临床样本中存在的⼤量待测微⽣物；（2）科研中得到的质粒克隆；（3）以前分析研究的特定微⽣物；（4）⼤量存在于实验环境中的特定微⽣物；（5）以前扩增产物的残留污染。

这也是PCR实验室最容易产⽣的将造成假阳性的污染。

PCR扩增可以引起实验室中扩增产物的积累，通常，⼀次典型的PCR扩增可以产⽣10^9拷贝的靶序列，如果⽓溶胶化，甚⾄最⼩的⽓溶胶都会含有10^6拷贝的扩增产物。

如果不加以控制，在短期内累积的⽓溶胶化的扩增产物即会污染实验室中的试剂、仪器设备和通风系统，从⽽造成严重的实验室污染，出现⼤量的假阳性结果。

⼀些RNA扩增技术如基于核酸序列的扩增（NASBA）、转录介导的扩增（TMA）和Qbeta复制酶等不易产⽣扩增产物的污染，这是由于它们的扩增产物为RNA，可以被环境中的RNA酶迅速地降解。

2. 防污染措施（1）严格分区实验室及严格遵守⼯作程序基因扩增实验室分为试剂准备区、样本准备区、PCR扩增区、产物分析区等，必需备有各⾃必需的仪器设、⼯作服、⼿套、加样器和通风系统。

在每个区使⽤的试剂和废物，必需直接在其各⾃的区域内分装或包装。

操作⼈员必需注意防⽌通过他们的头发、眼睛和⾐服将扩增产物从污染区携带⾄清洁区的可能性。

（2）化学清污实验台⾯可使⽤10%的次氯酸钠（漂⽩剂）清洗，然后再⽤70%⼄醇或清⽔洗去次氯酸钠。

次氯酸钠具有氧化损伤核酸的作⽤，从⽽使可能留在实验台⾯的扩增产物被破坏掉。

要注意的是，次氯酸钠不能区分提取的DNA和PCR扩增产物，⽤次氯酸钠处理的样本不能⽤于核酸扩增检测。

在实际⼯作中，有些物品⽐如放置扩增反应管的盘必需从污染区转回清洁区时，在转回之前，应将其置于2-10%的次氯酸钠溶液中过夜，并充分冲洗。

（3）扩增产物的修饰临床PCR检测通常由3或4个步骤组成：核酸提取和扩增检测试剂的配制。

使⽤商品试剂盒时，试剂的配制量可⼤⼤减少；样本的处理即靶核酸的提取；PCR扩增；扩增产物的分析。

第三方检验检测机构PCR检测室防核酸污染措施PCR检测室是进行核酸检测的重要环节，为保证结果准确可靠，必须采取一系列防核酸污染措施。

以下是第三方检验检测机构PCR检测室的常见措施：1. 流程隔离：检测室与其他区域要有良好的隔离，最好设置独立的进出通道和洗手间，确保人员流动的单向性。

2. 穿戴个人防护装备：进入检测室的人员必须穿戴适当的个人防护装备，包括帽子、口罩、手套、防护服等。

进入检测室前要进行洗手消毒。

3. 实验器具防污染：所有实验器具必须经过严格的清洗和消毒，确保无核酸污染。

使用高温高压灭菌或者专业的消毒剂进行消毒。

4. 无菌操作：所有的操作都必须在无菌工作台上进行，避免细菌污染。

无菌操作台常常使用紫外线灯进行消毒，确保操作环境无菌。

5. 校验防污染：在PCR检测室中，必须进行核酸污染校验。

校验时需要准备一个不含核酸的负样本，在所使用的工作台、试剂、仪器中进行检测，确保无核酸污染。

6. 试剂防污染：所有试剂都必须进行严格的管理和保存，避免污染。

试剂的取用应当遵循标准操作程序，避免交叉感染和污染。

7. 废物处理：检测室产生的所有废物必须按照相关规定进行分类和处理。

核酸废弃物必须经过安全封装并送交专业处理单位，确保无风险地处理。

8. 定期清理和维护：检测室应定期进行彻底清理和维护，清洁工作台、工作仪器和其他区域，以确保无污染。

除了上述措施，还应注意PCR检测室的空气质量和环境温湿度的调节。

定期对室内空气进行消毒和净化，保持恒温恒湿的环境，以提供最佳的检测条件。

第三方检验检测机构PCR检测室应严格遵守防核酸污染的各项措施，确保检测结果的准确性和可靠性，为防控疾病做出积极的贡献。

PCR做了很多，根据论坛和自己的经验总结了一下几点，算是抛砖引玉吧，呵呵：
1）PCR实验一定要保管好试剂，防止交叉污染，尤其是ddH2O2的交叉使用，极易引起污染（惨痛的教训）！
2)NA处理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上，所有缓冲液吸头、离心管等用前必须高压处理，常规消耗用品用后作一次性处理，避免反复使用造成污染。

3)PCR在超净台内进行，操作前后紫外灯消毒。

（不一定需要）
4)超净台内设内供PCR用微量离心机、一次性手套、整套移液器和其它必须品；移液品用一次性吸头和活塞的正向排液器，防止移液器基部污染。

5)PCR操作应戴手套并勤于更换。

5)成套试剂，小量分装，专一保存，防止它用。

配制试剂用新器具，用后作一次性处理。

6)试剂管用前先瞬时离心（10s），使液体沉于管底，减少污染手套与加样器机会。

7)最后加模板DNA（包括在石蜡油后），马上盖好，混匀，瞬时离心（10s），使水相与有机相分开。

加入模板且忌喷雾污染，所有非即用管都应盖严。

加模板DNA后应更换手套。

8)引物稀释时，要首先瞬时离心，以避免粉末状引物在开盖时弹出管外。

9)实验设阳性、阴性对照。

PCR实验室生物安全防护措施PCR实验室是进行聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）实验的地方，因为PCR实验涉及到复制、扩增和分析核酸，所以需要一系列生物安全防护措施来确保实验过程的安全性。

下面是PCR实验室生物安全防护措施的一些建议：1.实验室空间设计：-实验室应有独立的房间，尽可能远离其他实验室，以减少交叉污染的风险。

-实验室应具备良好的通风和空气循环系统，确保空气质量，降低潜在的生物危险物质的浓度。

2.设备和仪器选择：-根据实验需求，选择符合标准的PCR工作站、环境PCR仪、显微镜和其他必要的设备和仪器。

-确保这些设备和仪器在正常操作中没有漏电或故障，并且有定期维护和消毒的计划。

3.实验操作规范：-实验室应建立操作规范和标准操作流程（SOP），详细描述PCR实验的操作步骤以及相关的生物安全措施。

-操作人员应该接受专门的培训，了解PCR实验的原理、操作方法和可能遇到的风险。

-实验室应该限制进入人员的数量，仅允许有资质、接受过培训的人员进入PCR实验室。

4.个人防护装备（PPE）：-操作人员应佩戴符合要求的个人防护装备，包括实验服、手套、口罩和护目镜等，以保护操作人员免受潜在的生物危险物质的污染和伤害。

-操作人员应定期更换手套，并在使用后正确处理和处置。

5.受污染物处理：-准备一个专门的区域用于处理受污染物，如废液、废液垃圾和废弃设备等。

-废液应正确处置，可以通过灭菌、化学处理或者热处理来处理。

-废弃物应放置在专门的容器中，密封并正确标记，以便后续处理和处置。

6.实验操作区域消毒：-实验室的操作区域应定期进行消毒处理，以减少环境中的生物污染物的数量。

-废液和污染物的处理区域也应进行定期的消毒处理，以杀灭任何潜在的生物危险物质。

7.废物和污染物管理：-实验室应建立正确的废物和污染物管理程序，包括正确的收集、储存和运输方式。

-废物和污染物应正确分类并进行妥善封存，以防止环境污染和人员暴露。

PCR操作规程1. PCR试剂要做好预混和分装：所有的PCR试剂都应进行小量分装，PCR反应液应尽可能预先配制好，然后再小量分装，在-20℃下保存，以减少重复加样次数，从而避免污染机会。

另外，PCR试剂、PCR反应液应当与样品及PCR产物分开保存，不可放于同一冰盒或冰箱。

2. 吸样枪污染防护：吸样枪是一个非常容易发生污染的设备。

如操作时不慎将样品或模板核酸吸入枪内或粘在枪头上，将会成为一个严重的污染源，因而使用吸样枪时要格外小心，吸样要慢，并尽量一次性完成，忌多次抽吸，避免发生交叉污染或气溶胶污染。

3. 减少PCR循环次数：以PCR产物达到检测水平为宜。

4. 防止操作人员污染：使用一次性手套、吸头、小离心管。

5. PCR产物的电泳检测时间:一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚至消失。

PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。

寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。

实验操作注意事项尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。

因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：1. 戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套；2. 使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；3. 避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。

若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面；4. 操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度；5. 最后加入反应模板，加入后盖紧反应管；6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性；7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，最好使用可替换或高压处理的加样器。

PCR实验室污染的防控、监测与处理PCR实验室的潜在污染来源：①临床标本中存在的大量待测微生物或待测靶核酸；②科研中得到的质粒克隆；③以前分析研究的特定微生物或靶核酸；④大量存在于实验环境中的特定微生物或靶核酸；⑤以前扩增产物的残留污染,这也是PCR实验室最主要的污染来源。

PCR扩增可以引起实验室中扩增产物的累积,通常一次典型的PCR扩增可以产生109拷贝的靶序列,如果气溶胶化,甚至最小的气溶胶都会含有106拷贝的扩增产物。

如果不加以控制,在短期内累积的气溶胶化的扩增产物即会污染实验室中的试剂、仪器设备和通风系统,从而造成严重的实验室“污染”,出现大量的假阳性结果。

PCR实验室污染的防控措施：（一）严格的实验室功能分区原则上新冠病毒核酸检测实验室应当设置以下区域：试剂储存和准备区、样本制备区、扩增和产物分析区。

根据使用仪器的功能，区域可适当合并。

各区域在物理空间上应当是完全相互独立的。

传递窗满足密封性要求，不能有空气的直接相通。

各项检测工作应严格按相应规定在各自的区域内进行，严禁在样本制备区配制试剂。

试剂准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的制备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。

标本制备区：转运箱的开启，样本的灭活（适用时），核酸提取及其加入至扩增反应管等。

PCR扩增区及分析区：核酸扩增和产物分析。

须确保实验室人、物及空气的流向按照试剂储存和准备区→样本制备区→扩增和产物分析区，防止扩增产物随人流、物流及空气进入扩增前的区域。

空气流向应按照从试剂储存和准备区→样本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。

（二）实验室检测安全管理1、人员防护要求：核酸检测应当在生物安全二级实验室进行，并应在生物安全风险评估的基础上，采取适当的个体防护措施，包括手套、口罩和隔离衣等。

每个区都必须备有各自所需的工作服、手套等等的防护用品。

2、实验前的安全要求：①转运至实验室的标本转运桶应在生物安全柜内开启。

避免PCR实验室交叉污染的预防措施PCR实验室交叉污染是一个常见但严重的问题。

交叉污染可能导致错误的实验结果，并浪费大量的时间和资源。

为了避免PCR实验室交叉污染，以下是一些预防措施：1.设立区域：按照操作流程将实验室划分为不同的区域。

例如，将制备PCR反应体系的区域和扩增反应的区域分隔开来，确保实验者在不同的区域操作。

2.空间隔离：确保设备、试剂和操作区域的有效隔离。

使用独立的PCR工作站，在每个工作站上进行不同的PCR实验，并且在不同的PCR实验之间进行清洁和消毒。

3.重复实验器具：在进行PCR实验之前，确保所有实验器具都进行彻底的清洁和消毒。

最好为每个PCR实验使用新的试剂盒和器具。

4.清洁实验台和仪器：在每次实验之前和之后，对实验台和设备进行彻底的清洁和消毒。

使用含酒精的消毒剂对实验台面、机器表面和仪器的每个部分进行清洁，并确保完全干燥。

5.使用负控制：为了确保结果的准确性，应该在每次PCR实验中设置负对照。

负对照通常是使用无DNA模板的反应体系。

这有助于排除实验中的任何污染。

6.分离样品：在进行PCR实验之前，确保每个样品都在不同的管子中操作，并在操作过程中避免将不同样品的器具接触。

每次更换样品时，应彻底清洁操作区域。

8.操作员培训和规范操作：确保所有操作员都经过PCR实验室的培训，并且了解交叉污染的风险和如何避免。

开展定期的回顾培训，以确保操作员持续遵循规范操作。

9.使用控制措施：避免使用可能产生污染的物品，例如手套、实验室衣、口罩等。

确保动作轻柔，减少颗粒物和污染的产生。

10.定期消毒实验室：除了日常清洁之外，定期对实验室进行消毒，以减少细菌和病毒的存在。

特别应关注常接触的表面，如门把手、操作台面等。

通过采取上述预防措施，实验者可以最大程度地减少PCR实验室交叉污染的风险，准确获取实验结果，并确保实验的可靠性。

2021年第3期（总第284期） 卫生检疫35PCR 实验室的污染及其防范措施陈 永1，杨莲辞2，常定发1（1.云南省泸西县动物疫病预防控制中心，云南 泸西 652400；2.云南省泸西县动物卫生监督所，云南 泸西）中图分类号：S851.2+1 文献标识码：C 文章编号：1007-1733（2021）03-0035-02 随着动物疫病检测需求增加，PCR 基因扩增实验室业务量有所加大。

开展PCR 检测，很可能会出现实验室污染，影响实验质量和效果，造成假阳性，同时也会给实验人员健康造成损害。

1 PCR 实验室污染检测评估（1）因PCR 检测的样品及其产物污染无色无味，主观很难判断，应定期对实验室操作台、地板、设备、器具等采集棉拭子样进行检测，评估是否存在污染。

样品要规范编号记录，以便追溯。

（2）查看实验室最近疑似污染实验检测报告，看阴性对照（水）Ct 值（反应管内营光信号达到设定的值时所经过的循环数）。

阴性对照（水）Ct ＞38，轻微污染；35＜Ct ＜38，中等污染；Ct ＜35，严重污染。

如只是阴性对照污染，样品中仍有阴性，则可能是样品交叉污染或操作不当，通过规范仔细的重复操作以避免污染。

如所有的曲线都呈阳性，而且阴性对照和许多标本的线性相似，则考虑是系统污染，如检测试剂污染或气溶胶污染。

（3）试剂对照:在PCR 试剂中不加模板DNA 或RNA ，进行PCR 扩增，以监测试剂是否污染。

2 污染的来源2.1 阳性样本或阳性样本核酸的污染 此类污染多发生于样品处理间，造成样品间的污染。

在采集的样品中，如存在阳性样品，在样品的采集、放置、运输的过程中，由于封装不严溢出于容器外，导致污染容器、样品的交叉污染等；实验过程中，移液器使用不当，吸液时回枪手速过快导致的移液器枪头部分被阳性样本污染；样品加热裂解核酸后，立即打开仪器热盖，反应管突然遇冷导致崩开，溅出核酸；核酸释放后，未离心，管盖上有液体，溅出导致的污染；吸取阳性对照的枪头，处理不当造成的污染；由于通风不良，病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致交叉污染。

如何防止PCR实验室气溶胶污染PCR实验室气溶胶污染是一个严重的问题，因为气溶胶中可能含有目标DNA分子，从而导致PCR结果的假阳性或假阴性。

以下是防止PCR实验室气溶胶污染的一些建议。

1.设计合理的实验室空气流动：PCR实验室应设计为正压实验室，保持空气流动的方向由干净区域向污染区域。

同时，应确保实验室具有足够的空气交换率。

2.安装滤芯：在实验室的空气处理系统中安装高效的HEPA（高效颗粒空气过滤器）滤芯，以去除空气中的细菌和病毒。

滤芯需要定期更换，以确保其有效性。

3.限制实验人员数量：为减少气溶胶体积，限制实验室内人员的数量，并确保实验室的工作区域充足。

4.穿戴合适的实验室服装：PCR实验室工作人员应穿戴合适的实验室服装，包括帽子、口罩、手套和实验室外套。

这些措施可以减少人员对实验室空气的污染。

5.定期清洁实验室：定期清洁实验室工作台面、设备和地面，以确保无尘和清洁的工作环境。

6.分离样品处理区域：将样品处理区域与PCR反应区域分离开，避免PCR样品的处理过程中产生气溶胶。

7.管理实验液体废弃物：正确处理和处置实验液体废弃物，避免气溶胶污染进一步蔓延。

8.使用封闭系统：尽量使用封闭系统进行实验操作，如PCR机的封闭盖，可以减少气溶胶污染的可能性。

9.进行负压实验室：对于特别容易产生气溶胶的实验，可以考虑使用负压实验室。

这种实验室会抽取实验室内的空气，并将其排出到室外，减少了气溶胶污染扩散的可能性。

10.定期测试气溶胶污染：定期测试实验室内的气溶胶污染水平，以评估防控措施的有效性，并采取必要的改进措施。

综上所述，防止PCR实验室气溶胶污染需要综合考虑实验室设计、人员行为、清洁和控制措施等方面的因素。

通过合理的管理和实施相关防护措施，可以有效减少气溶胶污染对PCR实验结果的影响。

PCR实验室发生污染后处理方法PCR实验室是分子生物学研究中非常重要的实验室之一，它用于进行聚合酶链反应（PCR）以扩增DNA序列。

然而，PCR实验室也面临着可能发生污染的风险，这可能会导致实验结果的不准确性或无效性。

因此，识别和处理PCR实验室的污染至关重要。

1.身体保护措施：实验人员应该正确佩戴实验室工作服和个人防护装备，包括手套、眼镜、口罩等，以避免污染的发生和传播。

此外，实验人员在进入和离开实验室之前应该进行正确的手部清洁，以减少外部污染的风险。

2.试剂和物品消毒：实验人员在每次使用试剂之前应该进行试剂瓶口的消毒处理，例如使用70%的乙醇擦拭试剂瓶口。

另外，实验室中的常用仪器和设备也应该进行定期的清洁和消毒，以避免交叉污染的发生。

3.工作区域的清洁：实验人员应该定期清洁工作台和实验室周围的区域，以防止积尘和交叉污染。

工作台表面可以用含酒精的消毒剂擦拭，确保无菌和干燥。

4.废弃物处理：实验室中产生的废弃物（如实验管、尖筒、试剂瓶等）应该正确分类和处理。

有害废弃物应该按照规定进行妥善处理，以避免对环境和健康造成不良影响。

5.污染源的检测和评估：定期对PCR实验室中的污染源进行检测和评估，例如通过真空采样器对空气中的微生物进行采样，通过培养和PCR技术进行分析。

同时，对实验中的常见污染源进行监测，例如试剂、管道水质等。

以上是一些常见的处理PCR实验室污染的方法，但是实际处理污染的具体方法可能会因为污染源的不同而有所不同。

如果发生实验室的污染事件，可以设计一套适合自己实验室的污染应急预案，及时采取相应的措施，包括清洁、消毒、更换试剂等，同时尽可能避免影响实验结果的准确性。

总之，PCR实验室的污染是一种常见的问题，但也是可以预防和处理的。

实验人员应该具备正确的实验操作技能和安全意识，时刻注意实验室的清洁与卫生，采取相应的处理方法，以确保PCR实验的准确性和有效性。

PCR实验室消除污染操作步骤1.开始之前在进行任何实验之前，必须仔细清洗所有使用的器皿、仪器和试剂，并确保其没有任何污染和残留物。

此外，实验人员必须正确佩戴实验枣、手套和仪器保护罩，避免污染发生。

2.工作台清洁在实验室进行任何操作之前，首先要清洁工作台表面。

可以使用酒精和漂白剂溶液来擦拭工作台表面，确保没有任何污染物。

3.试剂和材料所有需要用到的试剂和材料都必须经过检查，确保其未受到任何污染。

如果发现有污染，必须及时更换。

4.DNA污染处理如果实验期间有可能出现DNA污染，能够有效去除DNA污染的方法包括使用紫外线照射、使用DNA降解酶处理、加入DNA脱附剂等等。

根据具体实验情况，选择合适的方法进行处理。

5.试剂复用防止污染为了避免试剂的交叉污染，必须标志清楚试剂的使用记录，避免使用同一管筒或器皿装入不同试剂。

6.使用无菌操作所有实验操作需要在无菌条件下进行，使用无菌工具和试剂，以避免细菌和其他污染物的引入。

7.反应管清洗在进行PCR反应之前，一定要确保反应管内部是干净的，并且没有任何污染。

8.防止交叉污染为了防止不同试剂和样品之间的交叉污染，应该使用单独的试剂和样品管，避免任何接触。

9.废弃物处理所有废弃物必须正确处理，特别是含有DNA和RNA的废弃物。

废弃物应放入相应的容器中，避免对环境造成污染。

10.彻底清洁实验室所有实验结束之后，实验室必须进行彻底清洁，包括擦拭工作台、清洗仪器和试剂瓶等。

确保实验室处于干净整洁的状态。

11.实验室空气净化实验室中可以安装空气过滤器和消毒器，以净化实验室的空气，降低污染的风险。

总之，PCR实验室的消除污染操作步骤包括准备实验前清洁、工作台清洁、DNA污染处理、试剂和材料清洁、无菌操作、反应管清洗、防止交叉污染、废弃物处理、实验室清洁和空气净化等。

只有严格按照这些操作步骤进行消除污染操作，才能保证PCR实验的准确性和可靠性。

PCR实验室防污染措施及应急处理方法【精编版】PCR实验室防污染措施及应急处理方法污染，是PCR实验室出现实验假阳性、结果不可信、研发不可靠的重要推手，PCR实验室应当将防污染作为日常管理、实验安排、清洁消毒、实验惯的核心。

PCR 实验污染和细胞污染是有差别的，PCR实验污染主要是核酸而不是细菌和其他入侵者。

因此所有的预防措施都会稍稍有所不同。

“易查不易察”，污染来的悄无声息，我们该如何应对。

今天1、样本间交叉污染:收集样本的被污染或样本密封不严外溢;不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖;移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌;不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。

2、实验试剂污染:主要是在PCR组分试剂加样过程中，因为移液器、、阴性对照及别的试剂被核酸模板或阳性对照污染。

加样过程中，因为PCR试剂对温度十分敏感，需要通过冰浴使得PCR试剂和PCR板/管处于0℃，但这个过程也是充满了污染的风险的。

3、扩增产物污染:大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖，这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。

因为PCR产物拷贝量大，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可形成假阳性。

4、克隆质粒污染:作为阳性质控品的克隆质粒外溢。

PCR尝试室的防污染方法按照尝试室的安全工作制度或安全标准操作程序，一切操作符合《尝试室生物安全通用要求》(GB-2008)。

1、严格执行各区功能划分:试剂储存和准备区:贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。

标本制备区:核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管。

对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。

扩增区:cDNA合成、DNA扩增及检测。

扩增产物分析区:扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。

解放军第三0二医院王海滨写在课前的话近几年在临床检测病毒核酸和细菌核酸上，荧光定量PCR技术越来越广泛。

但是如何进行治疗控制以及出现污染后怎样进行清除污染？本文主要讲述怎样来防止污染的产生.一、荧光PCR定量的概述（一）荧光PCR定量的原理实时荧光定量 PCR 技术，是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

常规的PCR也就是电泳PCR,它是合成一个正向引物和反向引物为目的模板,即DNA或RNA作为一个模板扩增，扩增后通过跑电泳的方式来检测它存在与否，是相对量的变化。

由于跑电泳经常导致产物外泄，因此污染的几率比较高。

近几年 PCR 扩增时在参入一对引物的同时参入单个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸，两端分别标记单个报告荧光基团和单个淬灭荧光基团。

探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR 扩增时， Taq 酶的5'端～3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有单个荧光分子构成,实现了荧光信号的累积与 PCR 产物构成完全同步.通过荧光物质参入和TapMan探针技术来做实时荧光PCR，避免了电泳检测结果的过程，使整个PCR过程从扩增到检测都在一个封闭的状态。

荧光集团目前临床常用的有两个，一个是SYBR green，一个是TapMan探针.SYBR green是一类荧光染料，能与所有的 DNA 双链相结合，对 DNA 模板没有选择性，所以特异性不如 TaqMan 探针。

变性后双螺旋变成单链，然后作为扩增的模板.在扩增的过程中由变性到负性扩出了另一条链和模板DNA进行退火变成双链。

这时SYBR green染料与 DNA 双链结合，发出荧光信号。

用SYBR green荧光染料来作为指示剂时,中间要加一个溶解曲线来证实它的特异性的问题。

PCR实验室防污染措施及应急处理方法PCR（聚合酶链式反应）实验室是进行核酸扩增实验的关键场所，为了保证实验结果的准确性和可靠性，需要采取一系列的防污染措施以及应急处理方法。

一、实验室防污染措施：1.实验室空间划分：将实验室分成不同区域，包括扩增前处理区、样本DNA提取区、嵌合反应区和扩增产物分析区。

各个区域应设立合适的物理屏障，防止交叉污染。

2.空气处理系统：实验室内应安装高效过滤器和通风系统，确保室内空气质量良好。

减少空气中的DNA和RNA等污染源。

3.无菌操作：在PCR实验室中进行工作时，必须采取无菌操作技术，包括穿戴无菌手套和口罩，避免颗粒、细菌和真菌的污染。

4.设立正常控制组和负空白对照组：对于每个PCR实验批次，应设置正常的样本对照组和无模板反应的负空白对照组，以确保扩增产物的准确性和特异性。

5.实验室设备清洁与消毒：定期对PCR仪、离心机、移液器等实验设备进行清洁和消毒，以减少交叉污染的发生。

6.样本处理区和实验重叠区分离：为了避免扩增前杂交污染，应将样本处理区和实验重叠区分隔开，分别使用不同的工作区域和实验仪器。

二、应急处理方法：1.污染样品的处理：一旦检测到污染样品，应立即停止实验，并将污染的试管和其他实验材料放入注射器中，用10％次氯酸钠溶液彻底清洗。

污染的工作台、仪器等表面也要进行消毒处理。

2. 扩增产物污染的处理：若扩增产物遭受到外源DNA污染，可使用外源DNA降解酶如DNase或Exonuclease I降解外源DNA。

然后，用新的试剂和陶瓷粉、洗涤缓冲液等彻底清洁实验器具。

3.实时监测和紧急停电措施：对PCR实验过程中的机器、电脑和监测设备等进行定期检查，确保正常工作。

同时，应安置备用电源设备，一旦停电时能立即启动备用电源，保证实验的连续性。

4.废液处理：将PCR废液最好两次分离处理，首先将其放入安全密闭的容器中，然后经过高温或化学处理，彻底灭活。

总之，PCR实验室的防污染措施与应急处理方法的实施对于保障实验结果的准确性和可靠性至关重要。

PCR实验室发生污染后处理方法1.环境消毒：将PCR实验室中的每个工作台面、设备、工具等物品进行彻底的清洁和消毒，消毒方法可以使用70%酒精擦拭，对于无法擦拭的设备可用消毒液浸泡消毒。

2.更换耗材：将被污染的耗材（例如：PCR试管、吸嘴、移液器等）清理或隔离，以防止二次污染，同时更换新的耗材。

3.换气处理：开窗通风，确保实验室内外的空气流通，将可能存在的污染物排除。

4.建立严格的规范操作流程：加强对操作人员的培训，确保实验室操作符合规范，减少操作过程中对实验室环境造成的污染。

5.定期检测：定期对PCR实验室进行污染检测，使用空白对照进行负控实验。

如果检测到污染，应及时采取措施清除污染物，并做好记录。

6.样品检测方法：对样品进行进一步分析，确认是否被污染，如果样品已经被污染，应剔除使用，重新采集新的样品进行实验。

7.剔除污染源：如果PCR实验室中存在大量污染源，如陈旧的试剂、过期的耗材等，应及时清除和替换。

8.质量控制：建立质量管控体系，要求实验室人员在每次实验开始前，对PCR实验室的工作台、设备进行检查，确保实验环境符合要求。

9.合理使用实验室设备：合理使用PCR仪器和其他实验室设备，定期对仪器进行维护和保养，确保其正常工作，减少设备对实验室环境的污染。

10.建立实验室安全管理体系：加强实验室安全意识，建立实验室安全管理制度，定期进行实验室安全隐患排查，及时处理储存存在风险的试剂和化学品。

总结：PCR实验室污染的处理方法主要包括环境消毒、更换耗材、换气处理、建立规范操作流程、定期检测、样品检测方法、剔除污染源、质量控制、合理使用实验室设备和建立实验室安全管理体系等。

通过采取合适的处理措施，可以有效避免PCR实验室污染对实验结果的干扰。