高效液相色谱法标准操作规程

精选全文完整版可编辑修改高效液相色谱法含量测定1检验方法高效液相色谱法2检验原理高效液相色谱法系采用高压输液泵，将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对样品进行测定的色谱方法。

注入样品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依此进入检测器，由数据处理系统记录和处理色谱信号。

3检验试剂甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、纯水（高纯水）、磷酸等。

4供试品溶液制备取要测试的供试品适量，参照《药典》及《制剂规范》，用规定的溶剂适宜的提取精制方法，配制成一定浓度的供试品溶液。

供试品溶液注入色谱柱前要经适宜的0.45nm的滤膜滤过。

5对照品溶液制备根据供试品所要测定的成分取相应的对照品，用适宜的溶剂配制成相应浓度的对照品溶液。

6流动相配制用高纯度的试剂配制流动相，水应为新鲜配制的高纯水。

配制好的流动相通过适宜的0.45nm 的滤膜滤过，用前脱气。

7操作7.1打开自动进样器、检测器、泵、柱温箱，进入工作站。

7.2自动进样器排气自动进样器排气用50%甲醇（用前脱气），点击自动进样器界面上的purge键，自动排气25分钟。

7.3泵排气分析界面中，设置方法参数，下载方法参数。

用流动相冲洗吸滤头，再把吸滤头浸入流动相中，逆时针旋转排气阀90-180度，点击purge键，排气3-4分钟，顺时针旋转排气阀90-180度，激活仪器。

7.4进样操作7.4.1.将对照品溶液和供试品溶液分别置于样品瓶中，盖上带有垫片的瓶盖，顺时针旋紧，7.4.2将样品瓶按顺序放置于样品瓶架上。

7.4.3设置方法参数，选择波长、柱温、流速、结束时间等，下载并保存方法文件，待色谱系统充分稳定，基线平直。

7.4.4设置批处理分析表。

分析界面主项目中，点击批处理分析，依次设置样品瓶号、样品瓶架号、样品名、方法文件、数据文件、进样体积，保存批处理分析表，点击批处理分析开始，开始数据采集。

7.4.5不同浓度的对照品溶液和同一浓度的供试品溶液应分别进样不少于5针。

标准操作规程1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。

2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。

3责任：QC人员对本SOP实施负责。

4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。

色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。

超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。

4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。

常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。

常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。

氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。

离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。

有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。

手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。

色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。

温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。

为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。

残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2〜8之间。

残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。

目的：建立高效液相色谱仪的标准操作程序，以使操作者正确使用。

范围：本文件适用于高效液相色谱仪的标准操作。

职责：质量管理部QC化验员负责本文件的起草、修订及实施。

程序：1接通电源，打开电脑。

按LC-20AT 上“POWER”键及RID-10A上“POWER”键，接通电源。

接通柱温箱的电源，并设置柱温箱温度为40℃。

2 双击电脑桌面上“LC Solution”，点击“1”进入采集窗口。

3 点击“Advanced”进行高级设置。

在“Pump”项中选择“Flow”模式；流速设置为0.5ml/min，泵压0～1.5MPa；在“Detector A”中选择“Analytical”模式，柱温设置为40℃。

设置完成后点击保存图标。

4 点击“Download”下载该方法。

5 将LC-20AT上旋钮“Draw”逆时针旋转180°，按Purge键，仪器自动清洗泵头，约3分钟后听到提示音（轻微长鸣声）后，顺时针旋转“Draw”180°至原位。

6 按LC-20AT上“Pump”键启动泵。

7 点击“R Flow ON/OFF”图标，系统开始运行，约20—30分钟后，点击“Balance RID （Detector A）”平衡系统。

8 基线平稳后，点击“◇”进行样品信息设置，设置完成后点击“确定”。

9 在进样器中吸入样品后插入手动进样口，将进样阀手柄调至“Load”位置，迅速将样品注入液相色谱仪，再将进样阀手柄调至“Inject”位置，开始采集数据。

10 分析完成后，点击红色的“〇”停止分析。

11 分析不同样品时，可重复“8-10”的操作，直至所有的样品均分析完毕。

12 所有的样品均分析完毕后，将流动相换成水继续运行至基线平稳，将色谱柱及系统中残留的物质清洗干净。

13 点击“R Flow ON/OFF”图标，系统停止运行，关闭采集页面。

按LC-20AT上“POWER”键及RID-10A上“POWER”键，关闭电源。

上海伍丰LC-100标准操作规程1．目的规范LC-100型高效液相色谱系统的使用和维护。

2．范围本规程LC-100型高效液相色谱系统的使用和维护。

3．职责质检室仪器分析员负责LC-100型高效液相色谱系统的日常使用和维护。

4．规程4.1 系统组成：本系统由1个LC-100溶剂输送泵，Rheodyne 7725i手动进样阀、LC-100紫外检测器、WS-100工作站和台式电脑等组成。

4.2 准备4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。

4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。

4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。

4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

4.3 开机4.3.1接通电源，依次开启泵、检测器前面板右下角电源开关，待泵和检测器自检结束后（检测器自检需3-5分钟），打开电脑显示器、主机。

4.3.2启动工作站4.3.2.1确认仪器自检通过后，打开计算机电源，双击电脑桌面WS-100图标。

4.3.2.2 进入实时控制及采样画面：4.3.2.3 打开泵的排液阀（逆时针旋180度），排气泡1-2分钟。

再关闭排液阀，待基线平稳（大约需要30分钟左右）数据采集参数设置请单击工具条按钮，进入数据采集参数设置对话框，如图所示：请您输入采集的自动停止时间，各项屏显参数，数据采集的文件名称，采集文件自动保存路径。

文件名称的设置：用户可以自定义文件的命名规则，请鼠标单击名称设置按钮，系统弹出文件命名规则对话框，如图所示：系统会以“前缀+时间”或“前缀+序列号”方式自动命名采样文件。

您还可以在数据采样中更改自动生成的文件名称。

保存路径设置：用户可以自定义文件的保存路径，请鼠标单击保存路径设置按钮，系统弹出保存路径选择对话框，如图所示：开始进样分析：待基线在零点走平后和数据采集参数设置好后即可进样分析。

高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。

为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。

b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。

c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。

2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。

b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。

3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。

b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。

4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。

b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。

5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。

b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。

6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。

b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。

7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。

b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。

8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。

b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。

总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。

遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。

高效液相色谱法标准操作规程1. 目的建立高效液相色谱法标准操作规程，规范高效液相色谱法检验操作，保证检验操作规范化。

2. 范围适用于高效液相色谱法检验操作。

3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。

5. 程序5.1依据《中国药典》2020年四部及2019年版《中国药品检验标准操作规范》。

5.2 简述高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

5.3 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。

5.3.1色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等) 也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂; 分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。

填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。

孔径在15nm(lnm=10A)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。

除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10μm之间。

粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm) 。

使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。

当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。

高效液相操作规程一、目的本操作规程旨在规范高效液相色谱（HPLC）的使用流程，确保实验的准确性和重复性，同时保障操作人员的安全。

二、适用范围本规程适用于所有使用高效液相色谱仪进行分析的实验室人员。

三、操作步骤1. 准备工作a. 确保所有使用的试剂纯度符合要求，且无污染。

b. 检查并清洁色谱柱，保证无残留物影响分析结果。

c. 根据实验要求准备流动相，并调整至适当比例。

2. 仪器开机a. 打开电源，预热仪器至工作温度。

b. 检查并确保所有管道连接正确无漏液现象。

c. 启动色谱软件，进行系统自检。

3. 样品准备a. 根据实验要求，准确称量并溶解样品。

b. 通过适当方式（如过滤或离心）去除样品中的不溶物。

4. 样品注射a. 使用适当的注射器抽取样品。

b. 打开注射口，准确注射样品，然后封闭注射口。

5. 分析运行a. 根据实验方法设置流动相流速、柱温等参数。

b. 启动分析程序，实时监控色谱图谱。

c. 记录并保存分析数据。

6. 结束操作a. 关闭分析程序，停止流动相输送。

b. 清洗系统，包括色谱柱和注射器。

c. 关闭仪器电源，清理工作台面。

四、注意事项1. 在操作过程中应穿戴适当的实验室防护装备。

2. 避免直接接触有毒或腐蚀性的试剂和样品。

3. 定期对仪器进行维护和校准，确保分析结果的准确性。

4. 遇到任何异常情况，应立即停止操作并报告给实验室负责人。

五、安全措施1. 熟悉并遵守实验室安全规程。

2. 操作过程中应使用防护眼镜、实验服和手套。

3. 对于易挥发或有毒溶剂，应在通风良好的环境下操作。

4. 紧急情况下，立即启动紧急冲淋设备，并寻求医疗救助。

六、记录与报告1. 记录所有操作参数和样品分析结果。

2. 对于任何偏离标准操作的情况，应详细记录并报告。

3. 定期对操作记录进行审核，以优化操作流程和提高分析质量。

WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）1流动相的处理1.1过滤溶剂溶剂在使用前要用过滤器过滤，有机相和纯水相通常可以不过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。

同时一些缓冲盐溶液过夜后易生菌，使用前要抽滤或者重新配制。

实验室应有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水相时，要先用1-2ml 水润湿过滤膜，有助于快速抽滤。

1.2保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。

流动相瓶子要保持清洁。

1.3保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。

1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。

可试用下列方法解决问题：a、流动相再脱气；b、采用更有效的脱气方法（如抽滤）或两种方法配合使用；c、改系统内混合为系统外预混合。

1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。

应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。

输液管道上装滤头沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。

过滤器阻塞会引起管道和泵腔进气泡，压力不稳。

压力不稳时，如果已经排除流动相混合不均匀的状况，则观察滤头外部是否长毛（一般水相滤头易长毛），去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，是过滤器被微粒所阻塞或长霉。

解决方法：a、换上新的过滤器（滤头）。

b、将滤头拆下，先用纯水超声15min，再换50%甲醇水溶液超声，再换纯甲醇超声，如果是水相的滤头，在安装前还需要用纯水超声。

如果上述还不能解决问题，则使用10%稀硝酸水溶液超声滤头，可起到除去菌类微生物的作用。

1.4.3 检测器和流动相管路被污染由于污染，噪音越来越大，检测器被污染。

高效液相色谱仪操作规程
《高效液相色谱仪操作规程》
一、实验目的
本实验旨在通过高效液相色谱仪分析样品，准确测定目标化合物的含量，并学习高效液相色谱仪的操作方法和技巧。

二、实验设备
1. 高效液相色谱仪
2. 注射器
3. 色谱柱
4. 移液管
5. 色谱仪软件
三、操作步骤
1. 打开高效液相色谱仪的电源并进行系统初始化，启动色谱仪软件。

2. 调整流速，进样量等参数，使得实验条件符合要求。

3. 将样品通过移液管注入色谱柱中，注意避免样品泡沫和气泡的产生。

4. 设置色谱条件，如梯度洗脱，流速等，启动色谱分析。

5. 记录实验数据和结果，并进行数据处理和分析。

6. 清洗色谱仪，保持设备清洁。

四、实验注意事项
1. 在操作色谱仪时，要严格按照操作步骤进行，严禁随意更改参数。

2. 在进行样品进样时，要小心操作，避免产生气泡和样品泡沫。

3. 在进行色谱分析时，注意梯度洗脱条件的设置，保证分析结果准确。

4. 在实验结束后，及时清洗色谱仪，保持设备干净。

五、实验结果
根据实验数据和结果，可以得出目标化合物的含量和纯度，并进行结果的解释和分析。

通过《高效液相色谱仪操作规程》的学习，使我们更加熟悉高效液相色谱仪的操作方法和技巧，能够准确进行样品分析，为科研工作的开展提供了重要的技术支持。

⾼效液相⾊谱法操作规程与注意事项⾼效液相⾊谱法操作规程与注意事项1.程序1.1.仪器及性能要求：所⽤的仪器为⾼效液相⾊谱仪，由泵系统，进样系统，⾊谱柱，检测器和⾊谱数据处理系统组成。

1.1.1.泵系统：HPLC泵系统通过⾼压⼒管和设备从溶剂瓶中吸取计量的流动相到柱⼦中。

现⾏的泵系统有⼀元或多元计算机控制的计量泵组成，这些泵可以按照梯度洗脱的要求改变流动相的⽐例或者是按等度洗脱的要求混合流动相。

1.1.2.进样系统：化合物被溶解在流动相或合适的溶剂中，可以通过⼿动进样器或定量环，或⾃动进样器转移到流动相中。

⾃动进样器由可存放进样瓶的卡盘组成，进样瓶的顶部有⼀个可以刺⼊的隔膜，进样针通过这个隔膜将样品转移到⼀个定量环中然后输送到⾊谱系统中。

1.1.3.⾊谱柱：最常⽤的⾊谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相⾊谱系统使⽤⾮极性填充剂，以⼗⼋烷基硅烷键合硅胶最为常⽤，⾟基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅胶和氨基键合硅胶）也有使⽤。

正相⾊谱系统使⽤极性填充剂，常⽤的填充剂有硅胶等。

离⼦交换⾊谱系统使⽤离⼦交换填充剂量；分⼦排阻⾊谱系统凝胶或系统⾼分⼦多孔微球等；对映异构体的分离通常使⽤⼿性柱。

除另有规定外，柱温为室温。

1.1.4.检测器：常⽤的检测器包括紫外分光检测器，⽰差折光检测器，⼆极管阵列检测器。

固定波长检测器在单⼀波长下运⾏，典型的波长是254nm，通过低压⼒的汞灯发射。

可变波长的检测器包含持续的能源，例如氘灯或⾼压⼒氙灯，通过单⾊器或⼲涉过滤器产⽣⼀定波长的单⾊光。

1.2.系统适⽤性试验1.2.1.为了确定最终运⾏系统的有效性，应当进⾏系统适⽤性试验。

整个系统可以⽤以下指标来评价：信噪⽐、理论塔板数，分离度，重复性，拖尾因⼦，其指标及计算⽅法应在相关分析⽅法中予以规定，如果没有专门的规定，按以下⽅法进⾏计算：信噪⽐：⽤于评价⾊谱系统检测微量物质的能⼒，美国药典的计算公式：S/N=2H/h，H为峰顶到基线的距离，h为基线中噪声峰最⼤值与最⼩值的差，该段基线需取≥5倍半峰⾼宽的距离，如果有可能，⽬标峰两侧取相等的距离（如图1）。