影响大肠杆菌高密度发酵的因素
• 培养基 • 溶氧浓度 • PH • 温度 • 代谢副产物
• 培养基
• 高密度发酵对基质中营养源的种类和含量比要求 较高,如碳源和氮源的比例偏小,会导致菌体生 长旺盛,造成菌体提前衰老自溶;比例偏大,那 么菌体繁殖数量少,细胞代谢不平衡,不利于产 物积累。
• 葡萄糖是高密度发酵中常用的碳源,但浓度过高, 会产生乙酸,因此要保证较低的葡萄糖浓度。
复原糖的测定
复原糖是具有羰基〔> C = O 〕的糖,能将其他 物质复原而其本身被氧化。 (1) 复原糖在碱性条件下加热,在酒石酸钾钠存在 的情况下,可以定量地将二价铜离子复原为一价 铜离子,即产生砖红色的氧化亚铜沉淀,其本身 被氧化。具体反响如下:
(2) 氧化亚铜在酸性条件下,可将钼酸铵复原,复原 型的钼酸铵再与砷酸氢二钠起作用,生成一种蓝 色复合物即砷钼蓝,其颜色深浅在一定范围内与 复原糖含量〔即被复原的 Cu 2 O 量〕成正比, 用标准葡萄糖与砷钼酸作用,比色后用做标准, 就可测得样品中复原糖含量。
• 测定微生物生长曲线的方法很多,有血球计数法 、平板菌落计数法、称重法、比浊法等。
• 本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与 混浊度成正比,因此,可利用光电比色计测定菌 悬液的光密度来推知菌液的浓度,并将所测得的 光密度值〔OD 值〕与其对应的培养时间作图, 即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。现已有 直接用试管就可以测定OD 值的光电比色计,只要 接种一支试管,定期用它测定,便可做出该菌的 生长曲线。
• 本实验采取溶氧反响调节措施,具体操作如下:发酵初始 维持电机转速300rpm以便对菌体维持较小的剪切力,通 气量维持在12L/min左右。由于本实验缺少调节空气流量 的电子阀装置,对空气流量只能采取手动设置,随着菌体 的大量繁殖,溶氧浓度迅速下降,当溶氧低于20%时,手 动调节空气流量直至最大,18L/min。而后采取提高搅拌 转速方法,提高溶氧,具体操作为当溶氧低于20%时,发 酵控制器输出信号,驱动电机每次提高转速20转,直至转 速到达最高转速,1500rpm。