营养与食品卫生学课件实验六蔬菜中胡萝卜素的测定

食品检验实验：蔬菜中胡萝卜素的测定(纸层析法)(一)原理蔬菜的植物色素包括叶绿素、叶黄素及胡萝卜素等，它们能被丙酮石油醚溶液提取出来。

将样品提取液进行纸上层析，由于胡萝卜素极性最小，故被石油醚洗走的速度最快，从而可将胡萝卜素与其他色素分开，然后将胡萝卜素层析带洗脱进行比色定量。

(二)器材1．小乳钵。

2．10ml容量瓶。

3．层析缸。

4．层析纸。

5．分液漏斗50ml或100ml6．光电比色计。

(三)试剂1．石油醚(沸程60～90℃分析纯)。

2．丙酮(分析纯)。

3．丙酮-石油醚液(3：7) 以三份丙酮和七份石油醚振摇混合。

4．经过处理的河沙取河沙置于烧杯中，加10％HCl至高出沙面约1cm煮沸(煮时不断搅动)，然后弃去HCl，用蒸馏水洗至无酸为止。

5．无水硫酸钠(分析纯)。

6．β-胡萝卜素标准溶液精确称取纯β-胡萝卜素40mg于几毫升氯仿里，然后以石油醚稀释至100ml容量瓶中定容。

取该溶液5ml用石油醚稀释至50ml容量瓶中定容，即得40μg／ml的胡萝卜素标准应用液，置冷暗处保存。

(四)操作步骤1．在分液漏斗内先放30ml水。

2．称取绿叶蔬菜的均匀样品2g放入乳钵中(备25ml 3：7的丙酮-石油醚溶液)。

加少许河沙和数毫升丙酮-石油醚溶液于乳钵内，将样品研磨成糊状，用滴管吸取提取液至分液漏斗内。

这样，25ml丙酮-石油醚分十数次提取，直至提取液基本无色为止。

3．振摇分液漏斗，使丙酮溶于水中，待分层后，放去水层，加水洗涤3～4次以除尽丙酮。

过滤前，用吸水纸条吸干分液漏斗管口的水分。

4．将提取液通过盛有无水硫酸钠的漏斗，滤入10ml容量瓶内，再加少许石油醚洗涤漏斗及滤纸上附着的色素，并注入容量瓶内，加石油醚至10ml刻度，混匀。

5．层析(1)点样：于滤纸底端距边约3cm处，用铅笔画一基线，以1ml注射器准确吸取石油醚提取液0．5ml，徐徐点在基线的一条(或一点)上。

(2)展开：将点好样的滤纸卷成圆筒状(或呈长条状)，两边用线系牢，但不使两边重叠，放人事先以石油醚饱和的层析缸内，层析纸要放正，不接触缸边，层析纸基线下1／3浸入液面以内，进行上行展开。

总胡萝卜素的测定（比色法）一、原理样品通过石油醚—丙酮（1：0.5V/V）混合液萃取，使之与非类胡萝卜素成分分离，在451nm波长下测定萃取溶液的消光度，可以计算出食品中总胡萝卜素的含量。

二、材料、仪器与试剂（一）材料：胡萝卜、菠菜、油菜等。

（二）仪器：可见分光光度计、分液漏斗(150mL)、容量瓶（50mL）、量筒（100mL）、三角瓶（100mL）、研钵、铁架台、漏斗、铁圈。

（三）试剂：石油醚、丙酮、无水硫酸钠、石英砂、饱和氯化钠溶液。

三、操作步骤（一）样品处理：称取5g已捣碎混匀的样品置研钵内，加石油醚、丙酮（1:0.5）混合溶液10mL,石英砂少量，研磨提取，然后将提取液过滤至100mL三角瓶中。

如此反复提取残渣3~4次。

并过滤，直到提取液无色，将几次滤液从100mL三角瓶移至150mL 梨形分液漏斗中，并用水洗涤石油醚层，出现乳化时，加饱和NaCl溶液3~5mL，剧烈振荡，待液相分层后，弃去下层水相，重复2~3次，将石油醚层定量转移至50mL容量瓶中，用无水硫酸钠过滤，以石油醚定容，摇匀。

置暗处供比色用。

（二）测定：用1cm比色皿以石油醚作空白，在451nm波长处测定消光度。

四、计算以β-胡萝卜素含量计：E×V×100×1000×1000总胡萝卜素（μg/100g）=E1×W×100E×50×100×1000×1000=2500×W×100E= ×20000W式中：E——样品在451nm波长下消光值E1——1%β-胡萝卜素石油醚溶液在451nm波长下的消光值，即2500 V——样品中总胡萝卜素石油醚提取液定溶毫升数W——样品重量（g）。

一、实验目的1、掌握从新鲜菠菜中提取、鉴定胡萝卜素的方法。

2、掌握测定胡萝卜素紫外—可见吸收光谱的计算方法。

二、实验原理绿色植物如菠菜中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。

植物色素中的胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯，有三种异构体，即α-、β-、γ-胡萝卜素，其中β-体含量较多，也最重要。

β-体具有维生素A的生理活性，其结构由两分子的维生素A在链端失去两分子水结合而成。

在生物体内β-体受酶催化氢化作用即形成维生素A。

目前β-体也可由工业生产，可以作为维生素A使用，同时也能作食品工业中的色素。

胡萝卜素不溶于水，可溶于有机溶剂中。

三、仪器与试剂1、仪器：紫外—可见分光光度计、层析柱、玻璃漏斗、分液漏斗、抽滤装置一套、研钵、试管、烧杯；2、试剂：菠菜叶、乙醇、石油醚、丙酮、无水硫酸钠、硅胶GF254、中性三氧化二铝、石英砂。

四、实验步骤a)样品处理：取约5g新鲜菠菜叶，洗干净后用滤纸吸干并用剪刀剪碎，于研钵中捣烂，用30mL2:1的石油醚—乙醇浸取。

抽滤浸取液，滤液转移到分液漏斗中，加等体积的水洗1次，洗涤时要轻轻振荡，以防止乳化，弃去下层的水—乙醇层，石油醚层再用等体积的水洗2次，除去乙醇和其他水溶性物质。

有机相用无水硫酸钠干燥。

蒸除大部分溶剂至体积约为1mL为止，取四分之三作柱层析分离。

b)柱层析分离在层析柱底部垫一点棉花，加入15cm高的石油醚，将中性三氧化二铝从玻璃漏斗中缓慢加入，小心打开柱下活塞，保持石油醚高度不变，必要时用装在玻璃棒上的橡皮塞轻轻地在柱周围敲击，使吸附剂装得平整致密。

柱内溶剂面始终不低于吸附剂。

装完后，再在上面铺一层2—3mm高地石英砂。

打开下端活塞，放出溶剂，直到液面刚好与石英砂平面相切时为止。

将上述所剩的菠菜色素浓缩液用滴管小心的加到柱顶，加完后打开活塞，让液面下降到柱面以下1mm左右，关闭活塞，加数滴石油醚并打开活塞，使液面下降，反复几次，使色素全部进入柱体。