凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析

线粒体膜电位变化检测细胞凋亡实验原理JC-1（5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide）是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想荧光探针。

可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。

在线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光（FL-2 通道）；在线粒体膜电位较低时，JC-1 不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1 为单体(monomer)，可以产生绿色荧光（FL-1 通道）。

这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。

常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。

线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。

通过JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。

JC-1 单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为527nm；JC-1 聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。

实验用品1.12⨯75mm 的Falcon 管和15ml 聚苯乙烯离心管2.微量加样器和加样头3.线粒体检测试剂盒（货号551302，100tests），包括JC-1和10 ⨯ Assay Buffer, 注：每个KIT 包括 4 小瓶JC-1 试剂，每小瓶试剂足够检测25 个样本4.离心机5.CO2 培养箱6.流式细胞仪样本制备图1：试剂准备和JC-1 染色步骤总揽1.在JC-1粉末中加入125ulDMSO使其充分溶解，配成JC-1 Stock Solution，需根据实验的量分装-20度保存。

2.根据样本量配制JC-1 Working Solution，每个样品500ul 1×Assay Buffer + 5ulJC-1 Stock Solution。

凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析细胞凋亡是一种自然过程，它在维护细胞稳态中发挥着至关重要的作用，在凋亡过程中可以发生一系列变化，如细胞形状及自噬过程的改变。

现今，改变细胞凋亡的流行病学及其相关性的研究正受到越来越多的关注。

这种变化的研究可以帮助我们更好地了解细胞凋亡的机制，并可能有助于开发疾病的治疗方案。

因此，研究开发准确的、便捷的技术以及可以用于定量监测细胞凋亡过程的技术，对医学研究具有重要意义。

细胞凋亡过程中，线粒体膜电位也可能发生变化，这可以作为一种凋亡指标来衡量细胞变化的程度。

线粒体膜电位的变化可以用流式细胞技术进行定量检测，并作为一种有效的凋亡指标来研究细胞凋亡的机制和抑制细胞凋亡的活性。

然而，人们对细胞凋亡线粒体膜电位的流式细胞分析还缺乏足够的认识，因此有必要对其进行更深入的研究。

首先，研究人员可以建立一个实验室模型，在这个模型中，使用稳定且可重复的条件来控制细胞凋亡过程，并确定影响细胞凋亡的因素，例如细胞类型、pH值、材料种类等。

其次，使用流式细胞技术对凋亡细胞的线粒体膜电位进行定性和定量分析，检测和研究细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。

通过此种技术，研究人员可以准确检测细胞的凋亡水平并定量衡量细胞凋亡的程度。

此外，研究人员可以研究细胞凋亡及其线粒体膜电位变化的调节机制，例如细胞内外环境因素，以及细胞间胁迫和细胞激活相关的基因调控机制。

通过研究这些机制，可以进一步了解细胞凋亡的机制，从而为未来的药物研发提供有效的技术支持。

最后，随着科学技术的发展，凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析也能越来越精确。

研究人员可以建立数据库，对凋亡细胞线粒体膜电位的变化进行全面性的统计分析，以用于诊断和治疗疾病。

同时，也可以研究凋亡细胞线粒体膜电位变化的系统生物学机制，进行药物研发或预防疾病的研究。

总之，细胞凋亡线粒体膜电位的流式细胞术分析是一种值得深入研究的技术。

研究人员可以使用该技术，准确定量检测细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化，为诊断和治疗疾病提供数据支持。

流式细胞技术分析细胞凋亡方法
流式细胞仪检测凋亡细胞是通过检查其光射特征及荧光参数时行的。

细胞穿过流式细胞仪的激光束集点时使激光发生散射，分析散射光可以提供细胞大小及结构的信息。

散射光包括前向散射光和左向角散射光两种，前向散射光的强度与细胞大小、体积相产，右向角射光的强度与细胞结构的析射性、颗粒性（granu-larity）有关。

细胞凋亡过程中出现的形态改变如细胞皱缩、胞膜起泡、核浓缩和碎裂等可以使光散射特性发生改变。

早期凋亡细胞主要表现为前向散射光减弱而右向角散射光增强或不变，前者反映了细胞的皱缩，后者反映了细胞的核逐缩及碎裂。

晚期凋亡细胞的前向散射光和右向角散射光均减弱。

由于光散射牧场生并非凋亡细胞的特异性指标，细胞的机械性损伤和细胞坏死也可以使前向散射光减弱。

因此，只有将光散射特性的检测与荧光参数的检测结合起来才能准确地辨认凋亡细胞。

细胞凋亡过程中核酸内切酶在DNA分子核小体间的降解，导致小分子DNA漏出，核DNA含量下降，细胞荧光染色后作流式细胞仪分析，可以发现在DNA直方图上正常二倍体细胞的Go/G1峰前出现一个亚二倍体峰（xub-G1峰，即AP峰--apoptotic peak）,代表凋亡细胞。

根据此亚二倍体峰可以计算凋亡细胞的百分率。

此外，流式细胞术还可以通过测定线粒体膜的电位、溶酶体质子泵的活性及细胞DNA/总蛋白质比例等方法辨认凋亡细胞。

检测方法：获取密度1×106细胞/ml左右的细胞悬液，精洗，固定，荧光染料染色，上流式细胞仪分析。

凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析近年来，研究表明细胞凋亡是一种正常的细胞生理过程，参与细胞正常的生长、分化和凋亡循环。

细胞凋亡的研究对于理解细胞生物学、病理生理学以及癌症发生机制等都十分重要。

研究发现细胞凋亡过程中伴随着细胞能量代谢的变化。

其中，线粒体膜电位(MMP)是一项重要的细胞能量生物化学参数，可用于表征细胞凋亡程度，因此，流式细胞术分析凋亡细胞线粒体膜电位变化已成为一种重要的细胞凋亡检测方法。

细胞凋亡流式细胞术分析仪在检测细胞凋亡过程中MMP变化方面具有重要意义，它不仅可以快速准确地检测目标细胞的凋亡，而且可以快速精确地测量凋亡细胞的线粒体膜电位。

根据细胞能量代谢的特征，流式细胞术分析仪可以检测细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化，进而准确定量测定凋亡细胞的MMP。

流式细胞术分析仪的原理是通过检测凋亡细胞线粒体膜电位的变化来辨别凋亡细胞状态，特别是熵值的变化。

熵值是指凋亡细胞线粒体膜电位变化的幅度，其值越高，表明凋亡细胞状态越严重，因此可以用来准确表征凋亡细胞的程度。

在流式细胞术中，熵值的变化可以通过曲线图的形式显示，来准确体现凋亡的程度。

此外，通过计算熵值变化率，也可以获得凋亡细胞线粒体膜电位变化的时间轴，从而更好地解释凋亡细胞状态。

因此，流式细胞术分析仪可以快速、准确地检测凋亡细胞线粒体膜电位的变化，为细胞凋亡研究提供了可靠、客观的依据。

流式细胞术可以准确了解凋亡细胞状态，从而预测细胞凋亡过程，为细胞凋亡研究提供重要的实验数据。

此外，该技术还可以解决许多其他的细胞生物学问题，如肿瘤细胞的去分化以及蛋白质组学分析等。

综上所述，流式细胞术分析仪可以快速、准确地检测凋亡细胞线粒体膜电位变化，为细胞凋亡研究提供了重要的依据。

该技术可以准确了解凋亡细胞状态，从而预测细胞凋亡的进程，为细胞凋亡的研究提供重要的研究依据。

此外，流式细胞术分析仪还可以用于解决许多其他的细胞生物学问题，从而促进细胞的生物学和药物科学的发展。

摘自北京大学人类疾病基因研究中心/news/apoptosis.htm细胞凋亡的检测北京大学人类疾病基因研究中心陈英玉细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。

细胞凋亡的检测方法有很多，下面介绍几种常用的测定方法。

一、细胞凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。

1 光学显微镜和倒置显微镜（1）未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。

贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。

（2）染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。

凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。

2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。

常用的DNA特异性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。

三种染料与 DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DN A的A-T碱基区。

紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。

Hoechst是与DNA特异结合的活性染料，储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。

DAPI为半通透性，用于常规固定细胞的染色。

储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。

结果评判：细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样（creased），部分染色质出现浓缩状态；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；Ⅱb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体(图1)。

3 透射电子显微镜观察结果评判：凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。

凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象（cavitations）的空泡结构(图2)；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。

收稿日期：2003-01-05 通讯联系人：周春喜第19卷第5期 分析科学学报2003年10月Voi.19 No.5 JOURNAL OF ANALYTICA L SCIENCE Oct. 2003文章编号：1006-6144（2003）05-0431-02凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析周春喜，梁学颖，李 宁，王 珊，于力方，廖 杰（中国人民解放军总医院医学实验测试中心，北京100853）摘 要：采用流式细胞术与特异荧光探针JC-1相结合，在单细胞水平对X 射线和化疗药物处理后的食管癌EC6细胞线粒体膜电位的变化进行了分析，凋亡细胞的线粒体膜电位下降，红色荧光减弱，随着剂量的增加，凋亡细胞的比例增大。

关键词：流式细胞术；线粒体；膜电位；JC-1中图分类号：O657.1；@257 文献标识码：A细胞凋亡是细胞对所处环境中的某些特定信息的一种应答反应，贯穿于全部细胞活动中。

线粒体是促进能量转换，参与细胞凋亡的重要细胞器。

在细胞凋亡过程中，线粒体膜电位发生变化［1］。

本文采用多参数流式细胞分析术，应用新型荧光探针JC-1对X 射线和化疗药物处理后的食管癌EC6细胞线粒体膜电位的变化进行了分析。

1 实验部分1.1 细胞培养EC6细胞（EC6细胞株由河南省肿瘤病理重点实验室惠赠）培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640液中，贴壁生长至对数生长期。

一部分采用X 射线垂直照射1次，剂量分别为5gy 与15gy ；另一部分细胞中加入化疗药物顺铂，终浓度分别为10!g /mL 与20!g /mL 。

37C ，5%CO 2继续培养181。

将培养液上清转移入离心管（其中含有处理后脱落的凋亡细胞），再用0.25%胰酶将贴于培养瓶壁上的EC6细胞消化下来，与上清一起1000r /min 离心5min ，收集细胞，弃上清液，用冰预冷的PBS 洗1次，待用。

1.2 流式细胞术分析膜电位用PBS 调整细胞浓度至1X 106/mL ，加入终浓度为10!g /mL 的JC-1（美国，Moiecuiar Probe 公司），室温避光温育10min ，1000r /min 离心5min ，弃上清液，用400!L PBS 重悬沉淀。

凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析细胞凋亡是细胞生命周期中不可避免的现象。

它可以治疗许多疾病，但是过度的凋亡可能会导致细胞功能失调，危害人体健康。

因此，研究凋亡细胞的膜电位变化可以为凋亡的调节提供理论依据。

流式细胞技术是一种快速、精确的凋亡监测方法，可以实时监测大量细胞中的线粒体膜电位变化，同时降低实验室研究凋亡细胞膜电位及其活动性的试验成本。

线粒体膜电位(mP)是一个精密的细胞生理过程，它反映了细胞膜的经典活动，包括氧化磷酸化和离子交换等。

研究显示，细胞凋亡中的线粒体膜电位变化可以预测凋亡的活跃程度。

但研究线粒体膜电位变化受到实验条件受限的瓶颈，这就需要一种新的技术能够精确的测量线粒体膜电位的变化。

流式细胞技术是一种以微流控技术为基础，能够实时监测大量细胞中线粒体膜电位变化的技术。

在实验室中，流式细胞仪可以将细胞连续排列，以便更好地分析细胞的凋亡行为。

在连续流动的循环系统中，研究人员可以测量细胞核、细胞质和线粒体膜电位、指标等，诱导细胞凋亡后，细胞核、细胞质和线粒体膜电位等参数的变化情况，实现流式细胞技术分析凋亡细胞的准确监测。

流式细胞技术不仅可以测量细胞内的凋亡程度，还可以测量凋亡细胞膜电位的变化。

这种技术可以快速、精确的分析凋亡细胞的状态，为研究人员提供有用的实验数据，促进凋亡细胞相关疾病的研究和治疗。

因此，利用流式细胞技术研究凋亡细胞线粒体膜电位变化具有重要的意义。

在运用流式细胞技术分析凋亡细胞线粒体膜电位变化的实验中，研究人员可以观察到细胞核、细胞质和线粒体膜电位的变化。

这种技术可以用来测量凋亡细胞中线粒体膜电位的变化，评估细胞凋亡的活跃性。

此外，研究还可以利用流式细胞仪测量可能诱导凋亡的细胞因子及其他蛋白质的表达变化，以更好地理解凋亡机制。

总之，凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析是一种新型的技术，它可以利用流式细胞技术实时监测细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化及其与其他相关细胞因子的相关性。

凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析近年来，细胞凋亡作为一种重要的细胞衰老和细胞死亡机制受到广泛关注。

为了研究凋亡细胞机制，研究人员需要准确有效地检测和识别凋亡细胞。

对细胞凋亡的研究已经发展了几种常用的方法，其中包括光学显微镜、荧光染色、流式细胞术、细胞膜电位分析等。

其中，流式细胞术是目前用于研究凋亡细胞的最为常用的方法。

流式细胞术是一种利用荧光染色技术和血液细胞分离技术检测细胞凋亡的方法。

该技术通过检测细胞膜电位变化，识别凋亡细胞及不同凋亡阶段的细胞。

在流式细胞术中，通过检测细胞膜电位的变化来识别凋亡细胞。

当细胞进入凋亡状态时，细胞膜电位会发生一定的变化，而流式细胞术可以通过检测细胞膜电位的变化来识别细胞的凋亡。

细胞膜电位的流式细胞术分析主要分为四个步骤：制备样品、检测细胞膜电位、识别凋亡细胞和统计凋亡细胞比例。

首先，将血液样品放入细胞分离器中，在较高的离心力下分离细胞；然后，将分离的细胞放入染色液中染色，然后根据不同的特征来分离凋亡细胞；接下来，在检测细胞膜电位时，首先需要对细胞单独放入孔板中；最后，测量离子通道变化和细胞膜电位变化，将它们转换成数字值，以获取凋亡细胞的活动状态，以用于衡量凋亡细胞的比率。

另外，线粒体膜电位分析是一种有效检测凋亡细胞的新方法。

线粒体膜电位是一种生物细胞内可检测的重要生物参数，是细胞凋亡中关键的生物参数之一，因此，它可以有效地检测凋亡细胞的活动状态和数量。

线粒体膜电位分析仪（MOPA）是一种专门用于研究凋亡细胞的新技术，它可以通过检测细胞线粒体膜电位的变化，准确地识别凋亡细胞，可大大提高凋亡细胞的检测灵敏度。

综上所述，凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析是一种有效的凋亡细胞检测技术，通过流式细胞术识别凋亡细胞，并通过线粒体膜电位分析仪检测细胞线粒体膜电位的变化，可以高效、准确地检测凋亡细胞的活动状态及数量。

此外，该技术还可以研究细胞凋亡的机制，并用于进一步研究细胞的衰老和死亡机制，以期获得更多的科学发现。

凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析细胞凋亡是细胞的生物学程序，它的发生是维持肿瘤恶性发展和移植排斥的重要因素。

研究凋亡细胞的特征及其机制对于深入了解癌症的发生发展过程而言，具有重要的意义。

目前，研究凋亡细胞特征的常用方法为细胞形态学观察、流式细胞术检测各种凋亡指标等。

流式细胞术分析是目前研究凋亡细胞特征的最常用方法之一，用于定量检测凋亡细胞的线粒体膜电位（MMP）及其相关的细胞表面抗原的变化。

线粒体膜电位是指线粒体中的膜的电位，是一种特定的电势，是细胞正常运行的必要条件之一。

线粒体膜电位的变化是细胞凋亡的重要指标，可以反映线粒体功能的改变。

线粒体膜电位的改变会导致细胞周期节奏的失调，促进细胞凋亡的发生。

细胞凋亡可以通过细胞分裂周期节奏的破坏来诊断，其调节因子主要是线粒体膜电位（MMP）。

凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析是一种工艺简单、灵敏度高的技术，可以快速、准确地检测凋亡细胞的线粒体膜电位及其相关的细胞表面抗原。

首先，细胞标记为流式细胞检测用的特定抗原，如细胞凋亡标记的细胞表面抗原（e.g., phosphatidylserine）；接着，将标记的细胞移植到流式细胞分析仪中，然后用流式细胞仪扫描凋亡细胞及其相关标志，最后检测线粒体膜电位及其他细胞表面抗原。

此外，利用流式细胞术可以观察不同细胞凋亡表型之间线粒体膜电位的差异，反映细胞凋亡性质的变化，从而深入了解凋亡机制。

凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析非常有用，它可以定量检测特定细胞凋亡的标志，从而提供明确的诊断依据。

截至目前，研究者们已经实现了利用流式细胞术来检测细胞凋亡状态的变化，包括检测线粒体膜电位及其他细胞表面抗原的变化。

流式细胞仪的分析和检测方法不仅可以定量检测凋亡细胞的线粒体膜电位，而且可以检测凋亡细胞的形态特征，如细胞大小、形状、色素沉积等。

总之，凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析是一种实用的技术，可以快速、准确地检测凋亡细胞的线粒体膜电位及其相关的细胞表面抗原。

流式细胞术检测线粒体膜电位的方法English:Flow cytometry is a powerful technique that can be used to measure mitochondrial membrane potential. One commonly used method is to use a fluorescent dye, such as tetramethylrhodamine ethyl ester (TMRE) or JC-1, which accumulates in the mitochondria in a membrane potential-dependent manner. The dye can then be excited with a laser and its fluorescence can be measured using flow cytometry. By comparing the fluorescence intensity of treated and untreated cells, the changes in mitochondrial membrane potential can be quantified. Another method is to use a potentiometric fluorescent dye, such as safranin or rhodamine 123, which changes its fluorescence intensity in response to changes in membrane potential. These dyes can also be excited with a laser and their fluorescence can be detected using flow cytometry. Both of these methods allow for the rapid and quantitative measurement of mitochondrial membrane potential in a population of cells.中文翻译:流式细胞术是一种强大的技术，可用于测量线粒体膜电位。

jc1线粒体膜电位流式
jc1线粒体膜电位流式（JC-1 mitochondrial membrane potential flow cytometry）是一种用于定量分析细胞线粒体膜电位的流
式细胞术方法。

线粒体膜电位是指线粒体内外膜之间的电势差，是反映线粒体功能状态的重要指标之一。

线粒体膜电位的降低可以表示线粒体膜的受损或功能障碍，与细胞凋亡、氧化应激等疾病和生理过程密切相关。

JC-1是一种荧光探针，可通过荧光变色来反映线粒体膜电位
的变化。

在正常的线粒体膜电位条件下，JC-1会聚集在线粒
体内部形成聚集态（红色荧光信号），而在线粒体膜电位降低时，JC-1会从线粒体释放出来形成分散态（绿色荧光信号）。

使用流式细胞术，可以通过检测细胞中JC-1的荧光信号来定
量分析细胞内线粒体膜电位的变化情况。

通过流式细胞术进行JC-1线粒体膜电位分析，可以在单个细
胞水平上研究细胞群中线粒体功能的变化，并且可以同时分析大量样本，提高分析效率和准确性。

这种方法在疾病诊断、药物研发和细胞生物学研究中具有重要的应用价值。

流式检测细胞凋亡Annexin V检测细胞凋亡Annexin V (2)实验原理 (2)实验用品 (2)操作步骤 (3)Annexin V Blocking (5)凋亡细胞的断裂片段分析 (7)DNA实验原理 (7)实验用品 (8)操作步骤 (9)BrdU Flow Kits检测细胞增殖BrdU Flow (12)实验原理 (12)BrdU Flow Kits试剂盒 (12)结果分析 (17)流式仪器设置指南 (18)线粒体膜电位变化检测细胞凋亡 (22)实验原理 (22)实验用品 (22)样本制备 (23)结果分析 (24)注意事项 (24)Active Caspase-3检测细胞凋亡Active (26)实验原理 (26)实验步骤 (27)结果分析 (28)A n n e x i n V检测细胞凋亡实验原理Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。

它是一种磷脂结合蛋白，可以与早期凋亡细胞的胞膜结合，而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时最早的改变之一。

在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸(PS)由质膜内侧翻向外侧。

Annexin V与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，因而与细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸结合。

由于在发生凋亡时，磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的改变，因此，与DNA碎片检测比较，使用Annexin V可以更早地检测到凋亡细胞。

因为细胞坏死时也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，所以Annexin V常与鉴定细胞死活的核酸染料(如PI或7-AAD)合并使用，来区分凋亡细胞(Annexin V+/核酸染料-)与死亡细胞(Annexin V+/核酸染料+)。

实验用品1. 一次性12×75mm Falcon试管。

2. PBS缓冲液：含0.1%NaN3，过滤后2-8°C保存。

3. 微量加样器和加样头。

4. Annexin V Binding Buffer缓冲液（Cat. No. 66121E）：浓度为10×，使用时，用稀释为1×浓度的应用液。