药物长期毒性实验设计原则

兽药慢性毒性和致癌试验指导原则一、概述（一）定义与目的慢性毒性和致癌试验是预测药物在临床应用中诱发癌症危险性的评价方法。

在动物的大部分生命期间，经过反复给予受试药物后观察其呈现的慢性毒性作用及其剂量－反应关系，尤其是进行性和不可逆毒性作用及肿瘤疾患。

确定受试药物的无作用剂量(NOEL)，作为最终评定受试药物能否应用于动物尤其是食品动物的依据。

为了确保慢性毒性和致癌试验结果的真实性、可靠性和可追溯性，根据新兽药研究的规律，结合国内兽药毒理学评价的实际情况制定了本指导原则。

（二）适用范围本指导原则适用于评价兽用化学药品、中兽药、消毒剂及饲料药物添加剂对动物的慢性毒性和/或致癌性的测定。

长期毒性试验发现有可疑肿瘤发生，某些器官组织细胞异常、药物结果与已知致癌物有关或代谢物与已知致癌物有关、作用机制为细胞毒类等情况下，要求进行致癌试验。

二、试验设计（一）材料与方法1.实验动物（1）实验动物种类选择一般要求选用两个种属的实验动物，即啮齿类和非啮齿类，目前已掌握大白鼠和小白鼠各品系的特点及诱发肿瘤的敏感性，故可优先将其用于慢性毒性和致癌试验。

对活性不明的受试药物，则应选用两种性别的啮齿类和非啮齿类动物。

（2）动物的起始周龄和体重慢性毒性试验期长，故一般用刚断乳的大鼠或小鼠。

大鼠50～70g（出生3～4周），小鼠10～15g（出生3周）。

动物个体体重的变动范围不超出各性别平均体重的20%。

（3）动物的性别和数量每个剂量组的动物数应满足试验结束时进行统计学处理的要求，如大鼠40～60只（小鼠数应据此适当增加），一般雌雄各半，雌鼠应为非经产鼠、非孕鼠。

如果将慢性毒性试验与致癌试验结合进行，每组雌雄动物数均应在50只以上。

如计划在试验过程中定期剖杀动物，则动物数应相应增加。

（4）肿瘤自发率实验动物的自然肿瘤发生率原则是控制到越低越好，但试验结果评价时主要是以在相同条件下观察对照组与各剂量组的肿瘤发生率及其剂量-反应关系作为判定依据。

中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则二OO五年三月指导原则编号: 【Z】GPT3-1目录一、概述二、基本原则（一）实验管理（二）具体问题具体分析（三）整体性（四）试验设计三、基本容（一）受试物（二）试验动物（三）给药途径（五）给药期限（六）给药剂量（七）观察指标（八）观察指标的时间和次数（九）结果及分析（十）综合评价（十一）其他考虑四、不同情况的中药、天然药物长期毒性试验的要求五、参考文献六、附录（一）长期毒性试验的给药期限（二）长期毒性试验中一般需检测的指标（三）毒性药材七、著者. . . .中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则一、概述：长期毒性试验是重复给药的毒性试验的总称，描述动物重复接受受试物后的毒性特征，它是非临床安全性评价的重要容。

中华人民国卫生部于1994年颁发的《中药新药研究指南》和国家药品监督管理局 1999年颁发的《中药新药药理毒理研究的技术要求》，对于统一、规中药长期毒性试验，推动我国中药的研究和开发起到了积极的作用。

但随着新药研究手段的不断改进，对中药、天然药物认识的进一步深入，这些要求越来越表现出它的局限性。

长期毒性试验的主要目的应包括以下五个方面：①预测受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、剂量-反应和时间-反应关系、可逆性等；②推测受试物重复给药的临床毒性靶器官或靶组织；③预测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量围；④提示临床试验中需重点监测的指标；⑤为临床试验中的解毒或解救措施提供参考信息。

中药在我国已有几千年的应用历史，有丰富的临床应用经验，相对化学药而言多数中药具有毒性较低的特点。

但是，中药的低毒和无毒是相对的。

当前，各种新技术、新工艺不断应用于中药新药的开发，而且从中药、天然药物中提取的有效成分、有效部位及其制剂日益增多，已不完全等同于传统意义上的中药，因此对其非临床安全性评价应给予足够的重视。

长期毒性试验周期长，耗资高，工作量大，若因试验设计不合理，或所进行的试验未充分揭示中药的毒性特征，则会造成人力、物力、财力的浪费，也会影响新药的研究速度。

复方补骨脂颗粒长期毒性研究目的研究复方补骨脂颗粒经口服给药途径的长期毒性。

方法以临床成人日用量的60、30、15倍连续灌服3个月，停药2周，分别称量大鼠体重，计算脏器系数，测定血液学和血液生化学指标，并做病理组织学检查。

结果复方补骨脂颗粒三组剂量大鼠均未出现中毒症状，大鼠体质量、摄食、血液学、血液生化学和病理组织学等均未见毒理学意义的异常改变。

结论复方补骨脂颗粒口服长期服用对大鼠无明显毒性反应，其无毒反应剂量为16g/（kg·d），可推荐临床使用。

标签：复方补骨脂颗粒；大鼠；长期毒性复方补骨脂颗粒为治疗骨质疏松的临床经验方，由补骨脂、知母、核桃仁、黄柏、延胡索、怀牛膝、砂仁、薏苡仁组成并对其合成工艺、质量标准、药效学等方面进行了较为系统的研究[1-3]。

经临床验证，其具有良好的治疗骨质疏松的作用。

复方补骨脂颗粒的主要给药方式是口服，为进一步了解复方补骨脂颗粒临床长期用药的安全性，参照《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》的相关规定[4]，进行长期毒性试验。

长期毒性试验可以观察连续反复给药时，实验动物出现的毒性作用、剂量与毒性效应的关系、主要毒性靶器官、毒性反应的性质和程度、毒性反应是否可逆等，是临床前毒性评价的主要内容，是新药审评重点内容之一，它为临床安全用药的剂量设计提供参考依据，为临床毒副作用的监护及生理生化指标检测提供依据[5]。

本实验以大鼠为对象，观察大鼠首先出现的症状和严重程度、毒性反应的靶器官及其恢复和发展情况，确定无毒剂量，为拟定人用安全剂量提供实验依据。

1材料与方法1.1药物复方补骨脂颗粒，由本实验组将补骨脂等八种中草药经煎制浓缩调制而成，批号：060215。

1.2动物SD大鼠（二级），雌雄各半，体重90～100g，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK（冀）2003-1-003。

1.3试剂丙氨酸氨基转换酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆固醇（CHO）、总胆红素（BIL）、血糖（GLU）检测试剂分别由南京建成生物工程研究所，首都医科大学首医临床医学科技中心、保定长城临床试剂公司提供。

指导原则编号:【H】G P T 1-1化学药物急性毒性试验技术指导原则二○○五年三月目 录一、概述 (1)二、基本原则 (1)三、研究内容 (2)四、数据分析及评价 (4)五、名词解释 (5)六、参考文献 (6)七、附录 (7)八、著者 (16)化学药物急性毒性试验技术指导原则一、概述动物急性毒性试验（Acute toxicity test，Single dose toxicity test），研究动物一次或24小时内多次给予受试物后，一定时间内所产生的毒性反应。

拟用于人体的药物通常需要进行动物急性毒性试验[1]。

急性毒性试验处在药物毒理研究的早期阶段，对阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义。

急性毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量急性中毒相关的信息[1，2]。

本技术指导原则适用于化学药物的动物急性毒性试验。

本指导原则重点阐述急性毒性试验中动物、剂量、给药途径选择的基本原则；对所获得数据的分析及评价要求；以及其中所涉及的科学原理与制定本指导原则的背景。

二、基本原则（一）实验管理药物的急性毒性试验属于安全性评价研究，根据《中华人民共和国药品管理法》的规定，必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。

（二）具体问题具体分析急性毒性试验的设计，应该在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。

应根据化合物的结构特点、理化性质、适应症特点和试验目的等选择合理的试验方法，设计适宜的试验方案，并结合其它药理毒理研究信息对试验结果进行全面的评价。

（三）随机、对照、重复急性毒性试验应符合一般动物试验的基本原则，即随机、对照和重复。

三、研究内容（一）受试物急性毒性试验的受试物应采用制备工艺稳定、符合临床试验用质量标准规定的样品，并注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等，并附有研制单位的自检报告。

名解近似致死量：近似致死量（Approximatal Lethal Dose,ALD）是介于最小致死量（Minimum Lethal Dose, MLD)与最大非致死量（Maximum Non-Lethal Dose, MNLD)之间的剂量。

MLD是指药物在最低剂量组的一群实验动物中仅引起个别动物死亡的剂量，在急性毒性试验中可表示为LD10或LD5；MNLD实际上是急性毒性试验中以死亡为毒效应时的一种最大耐受量，指药物不引起实验动物死亡的最大剂量，可表示为LD0。

染色体畸变：药物或化合物对遗传物质的影响涉及到整个染色体，表现为染色体结构或数目的变化称为染色体畸变。

S9：肝脏微粒体酶。

指1经酶诱导剂处理后制备的肝匀浆，2再经离心分离所得上清液，3再加上适当的缓冲液和辅助因子。

/ 它主要含有混合功能氧化酶（MFO），是国内常规应用于体外致突变实验的代谢活化系统。

其缺点是S9随实验动物种属或器官不同而有差异；S9含有的大量亲核物质有可能影响实验的敏感性。

选用200g左右的雄性大鼠，ip多氯联苯，500mg/kg。

杀死12小时前开始禁食。

诱导处理后d5断头法处死大鼠，无菌条件下取出肝脏，用冷KCL溶液洗涤后称重。

剪碎肝脏，制备肝匀浆。

肝匀浆以9000xg速度离心，取上清液分装小试管。

置液氮罐内速冻，-80或-20度保存备用，此即S9上清液，简称S9。

促长剂（promoter of carcinoma）：本身并没有致癌性，但可使化学物诱发突变细胞的克隆扩增，与致癌物共同作用or 在致癌物作用之后，这类物质反复作用于细胞，具有促进癌的发生or加速癌细胞发展成为癌瘤的间接致癌作用。

常见的促癌物有佛波酯（TPA），巴豆油（croton oil），煤焦油中的酚类、卤代烃、烟草中的某些成分等。

完全致癌物（complete carcinogen）：指同时具有引发、促长和恶性进展作用的化学致癌物。

致畸指数（teratogeic index）：指药物对母体的LD50与最小致畸剂量之比。

Jung, W. K., & Kim, S. K. (2009). Isolation and characterization of an anticoagulant oligopeptide from blue mussel, Mytilus edulis. Food Chemistry, 117, 687–692.华农大:《海洋生物制药》复习资料《海洋生物制药》复习题型资料一、名词解释：1.海洋生物制药：系指应用海洋药源生物具有明确药理作用的活性物质，按制药工程进行系统研究，研制成为海洋药物的制药工程。

是药物学的分支学科，它标志着医药学与海洋学交叉形成的一门新兴学科。

2.海洋生物新药的中试生产：即中间放大试验，就是依据实验室研究的制备方法，采用尽可能与常规生产近似的设备和工艺路线进行的小批量生产实验。

它是新产品研究过程中评价实验室处方与制备方法是否适合工业化生产的重要环节。

3.药物动力学：也称药代动力学或药物代谢动力学，研究药物在体内的量变过程的规律，采用数学方法定量地研究药在体内的吸收、分布、代谢和排泄消除的量变特征，特别是研究药物在体内房室中的量变规律。

5.药物动力学模型：为了描述一个复杂的体内过程，需要对药物的体内动态变化进行模拟假设，赋予一定模型，并以数学形式来表示，以简单的数学方程式反映出浓度与时间的关系，即用数学模型来拟合药物的吸分布和消除过程。

主要有房室模型、生理模型。

7.药物非临床研究质量管理规范（GLP）：是规范药品非临床研究中实验设计、操作、记录、报告、监督等一系列行为和实验室条件的管理规定，是国际上通行的对药品（人用、动物用）、工业化学品、杀虫剂、食品添加剂、化妆品等进行安全性评价的法规。

二、选择/填空：1.研发海洋生物新药的思路与途径：从海洋生物中筛选天然活性物质，研究活性物质的构效关系，结构改造（分子修饰或人工半合成），转基因生产。

2.海洋生物活性物质：蛋白质、多肽类、氨基酸及海洋生物酶，多糖类；生物碱（河豚毒素等）；不饱和脂肪酸类；不饱和烃。

附件3药物重复给药毒性试验技术指导原则一、概述重复给药毒性试验是描述动物重复接受受试物后的毒性特征，它是非临床安全性评价的重要内容。

重复给药毒性试验可以：①预测受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、量效和时效关系、以及可逆性等；②判断受试物重复给药的毒性靶器官或靶组织；③如果可能，确定未观察到临床不良反应的剂量水平（No Observed Adverse Effect Level，NOAEL）；④推测第一次临床试验（First in Human, FIH)的起始剂量，为后续临床试验提供安全剂量范围；⑤为临床不良反应监测及防治提供参考。

本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物。

二、基本原则药物安全性评价试验必须执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP），药物重复给药毒性试验是药物研发体系的有机组成部分，试验设计要重视与其他药理毒理试验设计和研究结果的关联性，要关注同类药物临床使用情况、临床适应症和用药人群、临床用药方案，还要结合受试物理化性质和作用特点，使得重复给药毒性试验结果与其他药理毒理试验研究互为说明、补充或/和印证。

三、基本内容（一）受试物中药、天然药物：受试物应采用能充分代表临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。

应采用工艺路线及关键工艺参数确定后的工艺制备，一般应为中试或中试以上规模的样品，否则应有充分的理由。

应注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件、有效期及配制方法等，并提供质量检验报告。

由于中药的特殊性，建议现用现配，否则应提供数据支持配制后受试物的质量稳定性及均匀性。

当给药时间较长时，应考察配制后体积是否存在随放置时间延长而膨胀造成终浓度不准的因素。

如果由于给药容量或给药方法限制，可采用原料药进行试验。

试验中所用溶媒和/或辅料应标明名称、标准、批号、有效期、规格及生产单位。

化学药物：受试物应采用工艺相对稳定、纯度和杂质含量能反映临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。

文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.1文档收集于互联网，如有不妥请联系删除.化学药物长期毒性试验技术指导原则一、概述长期毒性试验（重复给药毒性试验）是药物非临床安全性评价的核心内容，它与急性毒性、生殖毒性以及致癌性等毒理学研究有着密切的联系，是药物从药学研究进入临床试验的重要环节。

在药物开发的过程中，长期毒性试验的目的是通过重复给药的动物试验表征受试物的毒性作用，预测其可能对人体产生的不良反应，降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险。

具体包括以下五个方面：①预测受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、剂量－反应关系和时间－反应关系、可逆性等；②判断受试物反复给药的毒性靶器官或靶组织；③推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围；④提示临床试验中需重点监测的指标；⑤还可以为临床试验中的解毒或解救措施提供参考。

必须强调的是，长期毒性试验的最终目的是为临床试验和临床用药服务。

本指导原则旨在为长期毒性试验提供技术参考，同时也希望能够对药品的技术审评工作提供帮助，促进药品审评机构与药品注册申请人之间就长期毒性试验达成更为广泛的共识。

本指导原则为化学药物长期毒性试验的一般性原则，仅代表目前对于长期毒性试验的基本认识，其中的内容不完全是进行药物长期毒性试验时必须完成的内容。

具体药物的长期毒性试验应在本指导原则的基础上，根据药物的自身特点制订试验方案。

二、立题原则药物开发的背景和基础研究资料各不相同，在进行长期毒性试验之前应对药物的已有资料进行综合分析，判断是否可以通过已有资料达到长期毒性试验的目的，为临床试验和临床用药提供支持。

原则上，如果已有资料尚不能达到长期毒性试验的目的，从保证临床用药安全的角度就应该进行长期毒性试验；反之，则可以不必进行长期毒性试验。

三、基本原则（一）试验管理根据《中华人民共和国药品管理法》的规定，药物的长期毒性试验必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。

1．常用的药物依赖性实验方法有哪几种（包括精神依赖性和身体依赖性）？一、身体依赖性试验：评价新药的身体依赖性潜力，根据新药所属类别不同，需分别进行以下几方面试验：1、自然戒断试验：自然戒断试验属于慢性实验，对实验动物通常以剂量递增法给于试验药物；有的也采用恒量法。

自然戒断实验的戒断症状发作慢，持续时间长，对戒断症状的定量有一定困难。

但现已能在小鼠，大鼠，狗和猴等多种动物定量评价阿片类药物的身体依赖性潜力。

试验原则是连续给予动物一段时间的受试药后突然停药，观察动物出现的戒断症状，与同类的代表药物作对比，按照戒断症状的严重程度判断受试药的依赖性潜力。

2、替代试验：替代试验是研究受试药物对药物戒断症状的抑制能力，进而评价受试药物与阿片类药物身体依赖性特征和强度的类似性。

但抑制戒断症状试验可能出现假阳性和假阴性。

有些症状仅在某种动物出现,另一些症状则在几种动物中出现。

所以评价受试药物对多种戒断症状的抑制能力是非常重要的。

3、催促试验：试验原则是在短时间内给予动物大剂量受试药，然后注射受体对抗剂，观察和记录是否出现戒断症状及其程度。

此法只适用于竞争性受体对抗剂的阿片类药物。

4、诱导试验：大部分镇静催眠药无竞争性受体对抗剂，因而不可能进行催促试验，可采用诱导试验。

试验原则是判断镇静催眠药的一项重要指标是惊厥。

在自然戒断试验中，动物需进行较长时间给药才有可能在断药后出现自发性惊厥，而诱导试验可以应用各种诱发惊厥的方法如听源性发作（audiogenicseizures）、戊四唑（pentylenetetrazole）惊厥，在试验中只采用阈下刺激强度，它们对正常动物不引起惊厥发作，但对镇静催眠药产生身体依赖性的动物，在断药期间出现反跳性兴奋，原来的阈下刺激就可能诱发惊厥。

二、精神依赖性试验：评价新药的精神依赖性潜力，可采用“自身给药”（selfadministration）试验，这是一种操作式条件行为（operantbehavier）试验，测定静脉注射药物对动物的强化效应（reinforcingeffect），是当前国际上通用的评价药物精神依赖性潜力的试验方法。