饲料中牛羊源性成分的定性检测

牛羊类反刍动物饲料的营养成分评定1 饲料营养成分评定方法1.1 常规成分分析法我国目前沿用的饲料成分常规分析法是德国人Hennebery和Stohmann于1862年在Weende实验站提出的概略养分分析方法。

该方法将饲料成分划分为水分、粗蛋白质、粗纤维、粗脂肪、粗灰分、无氮浸出物6大营养成分来评定饲料的营养价值。

由于每一类都可细分且结构复杂，所以称为“粗养分”。

Weende分析方法是饲料营养价值评定的基础，自诞生以来就在饲料的营养价值评定中起着十分重要的作用，但该方法对纤维成分的划分很不明确，不能很好地区分纤维素、半纤维素和木质素。

1.2 范式纤维分析法范氏（Van Soest）分析方法是在Weende分析方法的基础上建立起来的，对粗纤维和无氮浸出物这两个指标进行了修正和重新划分。

对于反刍动物来讲，仅用常规营养成分来评价粗饲料的营养价值是不够的，因为粗饲料的消化率与纤维物质关系密切，而粗纤维并不能完全代表所有的纤维物质，粗纤维除了包含所有的纤维素外，还包含部分半纤维素和木质素。

在评定饲草和纤维性饲料时，一旦测出饲料的NDS（中性洗涤可溶物）、ADF（酸性洗涤纤维）、NDF（中性洗涤纤维）、ADL（酸性洗涤木质素），就可以单独或配合使用这些测定值来评定饲料的营养价值。

邓卫东等研究表明，饲料干物质体外消化率与NDF呈极显著负相关(P<0.01)，与CP含量呈显著正相关，而且粗饲料干物质体外消化率（IVDMD）与CP、ADF和ADL含量之间存在显著的回归关系，回归方程分别为：Y=103.678-1.981×ADF+2034×ADL(R2=0.897)；Y=18.083+1.650×CP(R2=0.813)。

VanSoest分析方法对动物纤维性物质营养研究和高产奶牛饲料营养价值评定的发展和进步作出了历史性贡献。

但是由于反刍动物具有特殊的消化道结构及消化生理，因此仅根据化学分析很难说明反刍动物对饲料的消化和利用情况，因而不能较好地反映饲料的营养价值，在使用过程中存在一定的局限性。

随着人们生活水平的不断提高，越来越多的肉类制品被摆上了餐桌。

为了利益最大化，有不发商贩掺假销售，更有甚者把不可食用动物的肉添加到商品中出售，严重损害消费者利益。

同时，动物源性饲料中违规掺杂禁用成分的情况也很严重。

如果动物源性饲料细菌超标或者违法添加了禁用物质，就有可能使饲养的禽畜生病，甚至导致食用者患病。

为了保障人们的食品安全，保障动物源性饲料的质量安全，对肉类食品及饲料进行动物源性鉴定是非常必要的。

1　动物源性成分检测技术研究进展有资料表明20世纪80年代，国外学者开始研究肉的种属鉴定检测，到目前为止国内外均由很多相关报道。

其中国内外动物源性成分检验方法主要有两种：核酸检测和蛋白质检测。

核酸检测方法主要包括普通PCR、实时荧光PCR、数字PCR、环介导等温扩增（LAMP）、重组酶介导链替换核酸扩增法（RAA法）、试纸片法、基因芯片检测、膜芯片法、液相芯片法、显微镜法与二代测序等。

每一种检测方法都有各自的特点及优势，可以从不同方面反映材料的真实情况。

在实际检测工作中，由于食品或原材料的加工方法不同，还应根据样品的不同加工方式选择适用的检测方法进行检测。

众多的研究资料表明最为快速准确的方法是PCR方法[1]，其中探针法实时荧光PCR检测的准确性和便捷性在所有的检测方法中最为突出，对检测设备和检测人员的要求也不高，容易掌握。

目前现行有效的检测方法中以实时荧光PCR方法最多。

2　现行动物源性成分检测标准方法目前，我国已发布的现行有效的动物源性成分检测方法主要有：国家标准18项（表1），行业标准35项（表2），地方标准及其他标准20项（表3）。

其中以PCR和实时荧光PCR检测方法为主。

这些标准方法可以检测出不同种类的动物源性成分，适用范围也各不相同，检测人员可以根据需求自主选择。

目前颁布的这些标准方法基本涵盖了常见的动物源性成分，可以检测日常食品及饲料中可能会遇到的肉源性种类。

食品及饲料中动物源性成分检测方法及标准概述□ 刘彦泓　大连市检验检测认证技术服务中心摘　要：本文分析列举目前食品及饲料中动物源性成分的检测方法，探讨目前动物源性检测的研究进展。

牧产品检测项目、检测方法及结果判定牧产品检测是指对牛、羊等牧畜动物的产品进行质量和安全方面的检测，以保障消费者的健康和利益。

常见的牧产品检测项目包括：营养成分检测、农药残留检测、重金属含量检测、病原微生物检测等。

营养成分检测是指对牧产品中的营养成分含量进行测定，如蛋白质含量、脂肪含量、维生素含量等。

这可以帮助消费者了解产品的营养价值，选择更加健康的食品。

检测方法一般是通过化学分析的方式进行，如高效液相色谱法、气相色谱法等。

农药残留检测是指对牧畜动物产品中的农药残留进行检测，以确保产品没有超过国家标准规定的残留限值。

农药残留检测一般采用色谱法、质谱法等分析方法，通过测定残留物的浓度来判断是否符合安全标准。

重金属含量检测是对牧产品中重金属元素如铅、镉、汞等的含量进行检测，以保证产品的安全性。

常用的检测方法有原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光谱法等。

病原微生物检测是指检测牧产品中是否存在致病微生物，如沙门氏菌、大肠杆菌等。

这些微生物可能对人体健康产生危害，因此，病原微生物检测是保障产品安全的重要环节。

常用的检测方法有PCR法、蛋白质酶切法等。

对于牧产品的检测结果判定，一般会与国家或地区的相关标准进行对比。

如果检测结果超过了标准规定的限值，产品将被认定为不合格，不得上市销售。

否则，产品被认定为合格，可以放心食用。

综上所述，牧产品的检测项目涵盖了营养成分、农药残留、重金属含量和病原微生物等方面的检测。

这些检测项目能够全面评估牧产品的质量和安全性，为消费者提供可靠的产品。

同时，检测结果的判定基于国家或地区的标准，确保产品的合法性和安全性。

牧产品检测在现代畜牧业中起着至关重要的作用，它可以确保牧产品的质量和安全，维护消费者的健康和利益。

不同的检测项目和检测方法可以提供不同方面的信息，从而全面评估牧产品的品质。

营养成分是评估牧产品品质的关键指标之一。

牧产品中的蛋白质、脂肪、维生素等营养成分对人体健康有着重要影响。

肉及肉制品中猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅、兔源性成分的快速鉴定实时PCR法编制说明一、任务来源本标准由中华人民共和国商务部提出并归口，由商务部流通产业促进中心实验室生物检测室研究小组完成方法的建立优化、标准的起草制定工作。

二、编制依据本标准遵循GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》、GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的编写规则、GB/T6379《测量方法与结果的准确度（正确度与精密度》第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的方法》。

三、目的和意义随着市场经济的不断深入发展，部分不法商贩为了谋求不正当利益，在肉（制）品中掺杂其他价格便宜的肉种，在肉（制）品市场出现了一种“以次充好、以假乱真”的现象。

通过实验室前期大量的调查研究分析，我们发现肉（制）品中掺杂、掺假的现象已经十分普遍，大部分肉（制）品中掺有标称以外的其他价格便宜的动物源性成分，有的甚至全部为标称以外的其他价格便宜的动物源性成分。

这极大地损害了消费者的利益，扰乱了流通市场秩序和健康发展，同时也对民族宗教信仰造成一定的潜在冲突。

但目前，相应的检测鉴定方法标准的缺失，使得检测监测机构对此无标可依，无法可循，难于判断和裁决。

为了规范国内市场流通秩序，保证市场的正当竞争，保护消费者的经济利益和对所购买商品的选择权、知情权及宗教信仰归属，制定本检测标准。

四、编制过程《肉及肉制品中猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅、兔源性成分的快速鉴定实时PCR法》该方法标准由商务部流通产业促进中心起草编写。

经过中国科学院微生物研究所、中国农业科学院饲料研究所、中国农业大学食品科学与营养工程学院三家单位进行了方法的复核验证实验，并提交了具体的复核验证报告。

根据国家有关标准制定和修订工作的要求，商务部流通产业促进中心在《肉及肉制品中猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅、兔源性成分的快速鉴定实时PCR法》的起草编制过程中，主要工作包括以下几个方面：1、详细查阅了国内、国外有关标准和相关专业期刊上发表过的参考文献等技术资料，如食品、化妆品和饲料中牛、羊、猪源性成分检测方法及动物源性饲料中哺乳动物源性成分定性检测方法等国内已申请的相关检验报告，并对这些资料进行了详细的对比，从方法的先进性、可靠性和实用性等几个方面考虑，选取了几个代表性的参考资料作为标准起草中的主要技术参考文本。

编制说明项目名称：黄牛和猪源性成分同步检测方法实时荧光PCR法项目编号：内质监标函〔2018〕307号编制单位：锡林郭勒职业学院一、工作简况本项目来源于2018年第3批内蒙古自治区地方标准制修订项目（内质监标函〔2018〕307号）。

起草单位为锡林郭勒职业学院，协作单位为锡林郭勒食品检验检测和风险评估中心。

主要起草人：郭梁、雅梅、海小、钱俊平、刘国强、罗建兴。

二、制定标准的必要性和意义牛肉和猪肉深受消费者的喜爱，是农畜产品市场中重要组成部分。

市场中存在用低价肉冒充牛肉等高价肉的欺诈违法行为，而且牛肉和猪肉涉及民族文化和宗教信仰，亟需制定针对肉乳制品的黄牛和猪源性成分同步检测方法。

目前，已经存在八项黄牛和猪源性检测方法标准：饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应（PCR）法（GB/T 20190-2006）；明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法实时荧光PCR法（GB/T 25165-2010）；动物源性饲料中反刍动物源性成分(牛,羊,鹿)定性检测方法PCR方法（GB/T 21104-2007）；饲料中牛羊源性成分检测实时荧光聚合酶链反应法（NY/T 1946-2010）；食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时PCR法（SN/T 2051-2008）；动物产品中牛、山羊和绵羊源性成分三重实时荧光PCR检测方法（SN/T 2980-2011）；动物源性饲料中猪源性成分定性检测方法PCR方法（GB/T 21101-2007）；食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法第8部分：猪成分检测实时荧光PCR法（SN/T 3730.8-2013）。

在采用上述检测标准后发现：目前缺乏基于多重实时荧光PCR法、同管质量控制体系、针对肉乳制品的黄牛和猪源性成分同步检测方法的相关标准。

本标准是基于多重实时荧光PCR法、同管质量控制体系、针对肉乳制品的黄牛和猪源性成分同步检测方法的相关标准，具有快速、高通量以及去除假阴性等特征。

【精选推荐】猪牛羊产品检测项目技术标准与要求
技术标准与要求
供应商相关工作必须严格按照《农产品质量安全监测管理办法》的规定执行。

抽检频率和时间在合同中规定，按时完成合同规定的检测工作并出具检测报告。

每次检测工作必须在10个工作日内完成并提供检测报告给采购方。

其中检出结果不合格的，必须在检测工作完成后48个小时内当面或以快递的方式送达采购方。

供应商对检测不合格的样品要进行确认检测，做好相关质量控制措施。

各种记录和质控要满足计量认证和溯源的要求。

供应商必须保留副样2个月以上。

供应商所有实施的项目及出具检测报告均须接受采购人任何时候的监督及检查。

检测项目、检测依据和判定依据件详见下表：
猪牛羊产品例行（风险）监测检测项目、检测依据和判定依据
1.猪牛羊产品检测（280批次）：
监测品种主要包括猪肉、猪肝、牛肉、羊肉。

2.承检方按照采购人要求完成全部的检测服务任务、数据汇总等任务，出具检测报告、检测结果汇总表、分析报告。

饲料中牛羊源性成分的定性检测【摘要】目的：为防止疯牛病和痒病的传播。

方法：研究提供了一种利用从动物饲料中提取牛羊动物基因组DNA的方法，并依据牛、羊基因组DNA的特异性序列片段，利用种属特异性的引物，通过PCR扩增这一特定的DNA序列，通过电泳分离PCR产物，以长度的PCR产物作对照。

结论：实现了对动物饲料中牛、羊源成分的检测。

【关键词】动物饲料；牛、羊源性；PCR；琼脂糖电泳；凝胶电泳成像疯牛病（BSE）是发生在成年牛的一种慢性进行性高致死性神经系统疾病，属人兽共患病。

自1985年在英国发现以来，现已波及30多个国家和地区。

由疯牛病引发的公共卫生问题、社会经济和政治问题已超过疯牛病本身。

疯牛病以其病原超强的抵抗力、传播方式的特殊性、超长的潜伏期和高致死性正在成为有史以来对人类威胁最大的传染病之一。

疯牛病主要通过食物链传播，是由于牛食用了含有朊病毒的肉骨粉饲料所致，禁止含牛羊源性成分饲料的生产，流通，使用，成为预防疯牛病感染，流行的主要手段之一。

对饲料中牛羊源性成分的检测具有重要的意义[2]。

本方法的最低检出限为0.25%。

1 仪器，试剂与样品1.1 仪器1.1.1 高压灭菌锅1.1.2 离心机（micromax型，美国Thermo公司）1.1.3 迷你旋涡混合器（minishaker）1.1.4 水浴锅1.1.5 PCR仪（T-Gradient Thermoblock，德国Biometra公司）1.1.6 电泳仪（PowerPace universal，Biorad公司）1.1.7 凝胶电泳成像系统（GelDoc XR型，Biorad公司）1.2 试剂[3]除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，水为灭菌双蒸水。

1.2.1 动物源性植1.2.2 物饲料基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）1.2.3 电泳缓冲液：称取54 g Tris，27.5 g硼酸，20 mL EDTA溶液，然后用水定容到1 L，使用时10倍1.2.4 稀释Tris：tris（hydroxymethyl）aminomethane，1.2.5 三（羟甲基）氨基甲烷，EDTA：ethylene diaminetetraacetic acid，1.2.6 乙二胺四乙酸。

浅析饲料中牛、羊源性成分的检测技术曹志玲（广州出入境检验检疫局、广东广州、510623）流行病学调查证明，用患有疯牛病和羊痒病的牛、羊等动物的肉和骨头制成的肉骨粉喂养动物会导致疯牛病和羊痒病的传播，是引起疯牛病发生的最初原因。

因此，用肉骨粉类饲料喂反刍动物就有发生疯牛病的危险，我国把疯牛病列为一类动物疫病，牛、羊源性成分作为导致疯牛病和痒病的危险物质在世界许多国家被禁止添加在动物饲料中，目前许多国家已经颁布法令禁止将牛、羊源性成分作为蛋白质添加到饲料中去，动物性饲料的安全性问题已引起世界各国的高度重视。

因此加强对进口饲料产品中牛羊源成分的检测是防止疯牛病传入我国的一个重要措施，进行饲料中牛、羊源性成分检测，对于保障国内饲料安全以及加强饲料的进出口监督管理，从而保障人民的生命健康具有重要意义。

目前，用于检测饲料中牛、羊源性成分的主要方法有：以检测骨头为基础的显微镜方法；以检测蛋白质为基础的免疫学方法（包括ELISA方法、Western杂交和试纸条方法）和以检测DNA为基础的检测方法（包括DNA指纹分析、核酸探针杂交、PCR-RFLP分析、PCR特异扩增法）；其它方法还包括近红外光谱法等。

在我国，目前使用最多的是PCR方法，我国的国家标准和国家出入境检验检疫局的标准中都采用PCR方法对饲料中的牛、羊源性成分进行检测。

不同的检测方法都有它的优点和缺点，它们之间是互相补充的。

比如，显微镜方法不受饲料高温高压的影响，能够弥补ELISA法和PCR法的缺陷；近红外光谱和ELISA法可以用于初步的筛选，而显微镜法和PCR法则可以对可疑样品做进一步确证。

面对用肉骨粉类饲料喂反刍动物会有发生疯牛病的危险，今后需通过开发更为高效灵敏的检测方法，提高检测水平的结果，不断发展和完善特异性更强、灵敏度更高的新技术和新检测方法。

参考文献「1」黄士新，沈富林，李洁等．荧光PCR法定量检测动物源性饲料中牛、羊成分．上海畜牧兽医通讯，2004,4：12-13「2」金凌艳，顾欣，蔡金华等．应用两种PCR方法检测饲料中牛、羊源性成分．中国农业科技导报，2008，10(S2)：76-80「3」农业部确定今年饲料质量安全监测重点. 农村养殖技术，2007,3：41「4」汤文利，梁萌，任爱丽等.反刍动物饲料中牛羊源性成分的DNA检测. 山东畜牧兽医, 2007, (30):52-55。