抑菌试验步骤

牛津杯法抑菌试验1. 原理将加有牛津杯的双层平板置于培养箱中培养，一方面试验菌（病原菌）开始生长繁殖，另一方面抑菌物质呈球面扩散，形成递减的梯度浓度。

牛津杯周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈，抑菌圈的大小反映抑菌物质对指示菌的抑制程度。

2. 仪器、设备2.1 超净工作台2.2恒温培养箱：36±1℃。

2.3恒温水浴锅：50±1℃。

2.4高压灭菌锅。

2.5平皿：直径为9 cm。

2.6 移液器（20~200μL，100~1000μL，1~5mL）及配套无菌枪头。

2.7试管：15×150 mm。

2.8 酒精灯。

2.9试管架。

2.10涡旋混匀器。

2.11摇床：36±1℃。

2.12牛津杯。

3. 病原菌、培养基及其他3.1病原菌：大肠杆菌：ATCC25922、沙门氏菌: ATCC14028、金黄色葡萄糖球菌：ATCC6538。

3.2 抑菌物质：益生菌（乳酸菌、芽孢菌）、抗生素或其它抑菌物质。

3.3 培养基：（1）大肠埃希菌：营养肉汤、营养琼脂半固体（琼脂粉含量：1%）、营养琼脂（琼脂粉含量：2%）。

（2）金黄色葡萄球菌：营养肉汤、营养琼脂半固体（琼脂粉含量：1%）、营养琼脂（琼脂粉含量：2%）。

（3）沙门氏菌：营养肉汤、营养琼脂半固体（琼脂粉含量：1%）、营养琼脂（琼脂粉含量：2%）。

（4）乳酸菌：MRS肉汤。

（5）芽孢菌：营养肉汤。

3.4 其它：0.85%灭菌生理盐水，灭菌蒸馏水。

4 测定流程4.1病原菌扩培：在超净工作台内，挑取新鲜的斜面保藏病原菌1环，接种于100mL无菌的营养肉汤培养基中，接种完毕，将三角瓶置于摇床内固定，37℃，200rpm，培养16-20h。

将培养好的病原菌菌悬液用空白营养肉汤培养基稀释10倍，若OD600在0.30-0.36之间，则为有效病原菌菌悬液，此时病原菌菌悬液原液中病原菌含量约为109cfu /ml。

4.2 抑菌物质（抗生素或益生菌菌悬液）的制备：（1）抗生素：抗生素或其它药物用无菌水稀释至所需要的浓度。

牛津杯法抑菌试验步骤
一、准备试剂和器材
试剂：待测试的抑菌剂、无菌水、培养基（如LB、麦芽糖等）。

器材：移液管、无菌棉签、牛津杯、试管、培养箱、天平等。

二、制备菌液
从保存的菌种中取适量菌种，接种于无菌培养基中。

将培养基放入培养箱中，在适宜的温度和湿度条件下培养至菌种生长至对数期。

将培养好的菌液用无菌棉签轻轻涂布于无菌平板上，观察菌落的形态和大小。

用移液管取适量的菌液，制备成一定浓度的菌悬液。

三、准备牛津杯
取一块无菌滤纸片，将其放入牛津杯中，使其贴紧杯壁。

用移液管将适量的抑菌剂加入牛津杯中，使其高度达到滤纸片上端边缘。

记录抑菌剂的种类和浓度。

四、加样
取适量的测试样品放入无菌试管中。

用移液管将样品溶液加入牛津杯中，使其高度达到滤纸片上端边缘。

记录样品溶液的种类和浓度。

五、加菌液
用移液管将制备好的菌悬液加入牛津杯中，使其高度达到滤纸片上端边缘。

轻轻摇晃牛津杯，使菌悬液和样品溶液充分混合。

六、培养
将牛津杯放入培养箱中，在适宜的温度和湿度条件下培养一定时间（如24小时）。

观察培养结果，记录细菌的生长情况。

七、结果观察
取出生长至对数期的细菌，用无菌棉签涂布于无菌平板上。

将无菌平板放入培养箱中，在适宜的温度和湿度条件下培养一定时间（如24小时）。

观察细菌的生长情况，记录细菌的数目和形态。

最小抑菌浓度实验步骤嘿，朋友们！今天咱来聊聊最小抑菌浓度实验，这可是个超有意思的事儿呢！首先呢，咱得准备好各种各样的家伙什儿。

就好比要去打仗，咱得把刀枪剑戟都准备齐全咯！那些培养皿啊、细菌混悬液啊、不同浓度的药液啊，一个都不能少。

然后呢，把培养皿摆得整整齐齐的，就像士兵排队一样。

再把细菌混悬液小心翼翼地倒进去，可别洒出来啦，那可就前功尽弃喽！这就好比给士兵们发武器，让它们准备好战斗。

接下来，就是重头戏啦！把那些不同浓度的药液依次加进去，就好像给细菌们设置不同难度的关卡。

低浓度的可能就是小打小闹，高浓度的那可就是大难关啦！这时候你可能会问啦，那怎么知道哪个浓度能抑菌呢？嘿嘿，这就需要我们耐心等待啦！等一段时间后，去观察那些培养皿，看看哪个里面的细菌没那么嚣张，乖乖地不怎么长啦，那这个浓度可能就是最小抑菌浓度咯！你想想看，这是不是就像一场和细菌的战斗游戏呀！我们是指挥官，指挥着药液去和细菌作战，看谁能赢。

有时候可能会有惊喜，有时候也可能会遇到挫折，但这就是实验的乐趣呀！在做这个实验的时候，可千万要仔细哦，不能马虎大意。

就像走钢丝一样，得一步一步稳稳当当的。

要是不小心弄错了一个步骤，那可能得到的结果就不准确啦，那不就白忙活啦！而且哦，这个实验还特别考验我们的耐心呢！不能着急，得慢慢来。

就像炖一锅好汤，得小火慢慢炖，才能出味道。

总之呢，最小抑菌浓度实验虽然有点麻烦，但真的很有趣也很有意义。

它能让我们更了解细菌，也能帮助我们找到更好的抗菌药物。

所以呀，大家可别小瞧了这个实验哦！让我们一起好好去探索这个神奇的细菌世界吧！。

一、菌种(一)、细菌：大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）；(二)、真菌：啤酒酵母（Saccgaromyces cerevisiae）、米曲霉（Aspergillusoryzae）3402、黑曲霉（Aspergillus niger）、叶点霉（Phyllosticta maydis ）和刺盘孢霉（Colletotrichum musae）二、培养基（一）细菌培养液：LB液体：胰蛋白胨10.0g酵母提取物 5.0gNaCl 10.0g10mol/LNaOH 100μL蒸馏水定溶至1.0LpH 7.0~7.4如要配置固体LB培养基，加15.0g琼脂糖/L(二)、真菌培养液：马铃薯培养基(PDA)马铃薯(去皮切块) 200.0g葡萄糖 20.0g琼脂 18.0g，蒸馏水 1000mLpH 自然三、器材培养皿（90mm）、滤纸、三角耙、接种环、试管四、实验步骤(一)、抑菌圈的测定(滤纸片法)1、菌种接种将保存菌种反复转种2次，使菌种新鲜，细菌置30℃，温箱培养1d，霉菌置27℃，温箱培养3d，备抗菌实验用。

2、菌悬液制备在超净台里将转接后生长良好的菌种试管斜面注入适量无菌水(约5mL)，接种环轻刮菌落，摇晃，置旋涡混合器混匀。

3、倒平板在超净台里将培养基倒入平板，每板约15mL左右，水平放置，凝固后倒置放入30℃温箱中，2d后观察是否有菌落生长，若没有则可供下一步实验使用，否则需重新倒平板。

4、涂布在超净台里用枪取0.1ml菌悬液注入平板，放置5min左右后用三角耙涂布均匀，每种菌设置两个重复平板。

5、贴片在超净台里将平板平均分为6个区，对角设置平行组，同时用无菌水做对照组,硫酸链霉素(10U)作阳性对照。

每两张滤纸片(直径1.1cm或0.6cm)为一贴，用镊子夹着滤纸片在样品中轻轻蘸一下后，取出贴在平板的指定位置，轻摁一下使滤纸片牢固，置(正放)4℃冰箱中放24h。

抑菌试验方法一、引言抑菌试验是一种常用的实验方法，用于评估不同物质对微生物生长的影响。

该试验可用于评估抗菌剂的效果、食品、药品和化妆品的微生物安全性，以及环境中抗菌材料的性能等。

本文将介绍抑菌试验的一般步骤和常用方法。

二、试验步骤1. 试验前准备在进行抑菌试验前，首先要准备好所需的试验材料和设备。

包括培养基、试验物质、细菌菌株、培养皿、试管、移液器等。

同时，要保持实验环境的清洁和无菌。

2. 菌种培养选择合适的细菌菌株，将其接种到含有适当培养基的试管中，并在37℃恒温培养箱中培养过夜，使其达到指定的细菌浓度。

3. 制备菌液将过夜培养的菌株转移到新的培养基中，通过菌液稀释法，制备出所需的菌液浓度。

菌液的浓度应根据试验要求进行调整。

4. 试验组装将试验物质分别添加到培养基或培养皿中，使其与菌液充分接触。

同时，设置对照组，用无抑菌物质的培养基或培养皿进行对照。

5. 培养条件将试验组和对照组置于适当的培养条件下，如温度、湿度等。

根据不同的试验要求，可选择不同的培养时间和培养条件。

6. 菌落计数在培养结束后，使用显微镜或肉眼观察试验组和对照组的菌落情况，并进行菌落计数。

菌落计数可通过平板计数法或滴定法进行。

7. 数据分析根据菌落计数结果，对试验组的抑菌效果进行评估。

常用的评估指标包括菌落形成率、抑菌率、最小抑菌浓度等。

三、常用方法1. 纸片扩散法该方法常用于评估固体试样的抑菌效果。

将试验物质涂布于纸片上，然后将纸片放置在含菌液的培养基表面上，通过观察菌落的生长情况来评估抑菌效果。

2. 悬浮液法该方法常用于评估液体试样的抑菌效果。

将试验物质与菌液混合，通过培养一定时间后，观察菌液的浑浊度或使用菌落计数法来评估抑菌效果。

3. 筛选法该方法常用于筛选具有抑菌活性的试验物质。

将试验物质与菌液混合后，通过培养一定时间后，观察菌落情况，筛选出对菌株有明显抑制作用的试验物质。

4. 斑点法该方法常用于评估试验物质对特定细菌菌株的抑菌效果。

抑菌圈实验步骤样品洗涤一、所用器皿及稀释液：1、检验中所用玻璃器皿，如培养皿，吸管、试管等必须是完全灭菌的，并在灭菌前彻底洗涤干净，不得残留有抑菌物质。

2、用作样品稀释的液体，每批都要有空白对照。

如果在琼脂对照平板上出现几个菌落时，要追加对照平板，以判定是空白稀释液，用于倾注平皿的培养基，还是平皿吸管或空气可能存在的污染。

3、检样的稀释液虽可用生理盐水或磷酸盐缓冲液，但以用磷酸缓冲盐水为合适，因为磷酸盐缓冲液对细菌细胞有更好的保护作用，不会因为在稀释过程中而使食品检样中原已受损伤的细菌细胞导致死亡。

如果对含盐量较高的食品(如，酱品等)进行稀释，则宜采用蒸馏水。

二、检样稀释：1、检样稀释时，应以无菌操作称取(或量取)有代表性的样品25g(或mL)剪碎放于含有225ml灭菌稀释液的玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇作成l：10的稀释液。

如，系肉、鱼等固体样品，最好剪细于灭菌乳钵内与稀释液研匀，或与稀释液同置于灭菌均质器杯或拍击式均质袋中，使做成均匀的1：10稀释液。

2、根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，将上述1:10的检样稀释液再做成几个适当的10倍递增稀释液。

即取1：10稀释液1mL与9mL稀释液混和做成l：100的稀释液，然后依次递增稀释，做成1：1000、1：10000等稀释液。

注意每递增稀释一次，必须另换1支l mL灭菌吸管，这样所得检样的稀释倍数方为准确。

3、从吸管筒内取出灭菌吸管时，不要将吸管尖端碰着其他仍留在容器内的吸管的外露部分；而且吸管在进出装有稀释液的玻璃瓶和试管时，也不要触及瓶口及试管口的外侧部分；因为这些部分都可能接触过手或其他沾污物。

4、在作10倍递增稀释中，吸管插入检样稀释液内不能低于液面2、5cm；吸入液体时，应先高于吸管刻度，然后提起吸管尖端离开液面，将尖端贴于玻璃瓶或试管的内壁时吸。

管内液体调至所要求的刻度，这样取样较准确，而且在吸管从稀释液内取出时不会有多余的液体粘附于管外。

初始污染菌计数方法适用性试验方案——供试品释出物的抑菌试验一、试验目的：评估初始污染菌计数方法在供试品释出物的抑菌试验中的适用性。

二、试验原理：初始污染菌计数方法是一种衡量样品中存在的细菌数量的方法。

该方法基于无菌培养基培养出来的菌落数量来评估污染程度。

在该试验中，我们将采用PCDA方法（Plate Count agar Dilution Assay）来测定细菌数量。

三、试验步骤：1.准备培养基：制备PCDA培养基，根据制备指南针对待测菌株适当调整培养基中的成分和浓度。

2.制备细菌悬液：采用细菌培养物或者菌落进行培养，转移到无菌的生理盐水中悬浮液中，均匀搅拌，稀释为一定的浓度。

3.固定试验板：使用已消毒无菌的平板，倒入适量的培养基，等待其凝固。

4.接种菌液：将待测供试品释出物样品取一定体积，在特定条件下和细菌悬液混合，根据需求数量在试验板上均匀涂抹或滴播。

同时设置对照组，不加入供试品释出物，只使用生理盐水或无菌培养基进行涂抹或滴播。

5.培养条件：将试验板置于一定的温度及湿度条件下培养一段时间，通常为24-48小时，根据实际需要在与菌株生长相关培养条件下进行培养。

6.统计菌落数量：根据实验结束后，试验板上形成的菌落数量进行统计，采用比较软件或者手计法进行计数。

7.数据分析：比较供试品释出物样品组和对照组的菌落数量，评估供试品释出物的抑菌效果。

8.重复试验：至少重复3次试验，以确保结果的准确性和可靠性。

四、风险评估与控制：1.使用无菌操作技术和器械，以防止试验过程中的细菌污染。

2.试验区域应保持清洁，避免其他细菌的污染。

3.注意操作培养基和细菌悬液的消耗期限和保存条件。

五、数据处理：比较供试品释出物样品组与对照组的菌落数量，使用适当的统计方法进行数据分析，评估供试品释出物的抑菌效果。

六、结果及讨论：通过对供试品释出物样品组与对照组的菌落数量进行比较，以及对多次试验结果的统计分析，评估初始污染菌计数方法在供试品释出物的抑菌试验中的适用性。

中草药对动物大肠杆菌体外抑菌试验步骤选用27种不同的中草药制剂（煎剂、挥发油、蒸馏液），以平板稀释法和纸片法对同一株肉鸡源的大肠杆菌进行体外抑菌试验。

其试验结果表明，有14种中药对此株大肠杆菌有不同程度的抑制作用。

试验还表明中药制剂的配方工艺不同，其抑菌的效果亦有不同。

一、实验用材料方法1 材料（1）试验菌株肉鸡源大肠杆菌（安徽技术师范学院动物科学系预防兽医教研室提供）。

（2）培养基普通营养琼脂、麦康凯琼脂。

按常规方法制备。

（3）单味中药金银花、防风、板蓝根、白芷、连翘、杏仁、射干、辛夷、贯众、羌活、荆芥、藿香，中草药的煎制与蒸馏由安徽技术师范学院中药实验室完成，每毫升相当于1 g生药。

（4）复方中药银射煎液、麻杏射防煎液、羌藿连防煎液、辛芷荆煎液、辛芷荆蒸馏液、银射蒸馏液、羌藿连防蒸馏液、麻杏射防蒸馏液，每毫升相当于1 g生药。

2。

方法（1）大肠杆菌对中药（单味、复方）敏感性的体外试验-平板稀释法。

取1 ml原药液为第1支试管；在第2支试管中分别加入0.5 ml原药液和0.5 ml生理盐水以倍比稀释法稀释至第4支试管；第5支试管为无药对照管。

先分别把药液倒入无菌的平皿中，后倾入60℃无菌普通营养琼脂或麦康凯琼脂，并迅速混合均匀，制成平板。

以无菌的涂抪棒蘸取试验用细菌均匀涂抪于平板表面，置37℃培养箱内培养24 h，后观察结果。

（2）在第1支试管加入8 ml原药液，第2支试管加入4 ml原药液，第3支试管加入2 ml原药液，第4支试管加入1 ml原药液，第5支试管为无药对照管，在第2支试管至第5支试管中分别加入4 ml、6 ml、7 ml及8 ml生理盐水；按照1 2 1 1项方法制成平板，涂抪细菌后置37 ℃的培养箱中培养24 h后，观察并记录结果。

（3）大肠杆菌对中药（单味、复方）的敏感性试验——纸片法将筛选出的对大肠杆菌有明显抑制作用的复方、单味中药制剂分别制成药敏纸片，测定抑菌圈的大小。

一、实验目的1. 掌握纸片法抑菌试验的基本原理和操作方法。

2. 了解抑菌试验在微生物学研究和临床医学中的应用。

3. 通过实验，学会分析实验结果，为临床用药提供参考。

二、实验原理纸片法抑菌试验是一种常用的微生物学实验方法，用于检测细菌对各种抗生素的敏感性。

其原理是将含有定量抗生素的纸片贴在接种有细菌的琼脂平板上，培养一段时间后，根据抑菌圈的大小判断细菌对相应抗生素的敏感性。

三、实验材料1. 细菌菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。

2. 抗生素纸片：青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等。

3. 琼脂培养基：M-H琼脂培养基。

4. 实验器材：无菌平板、无菌镊子、无菌棉签、酒精灯、游标卡尺等。

四、实验步骤1. 将琼脂培养基融化后，待其冷却至50℃左右，倒入无菌平板中，均匀铺开，待其凝固。

2. 将待检菌接种于M-H琼脂平板上，用无菌棉签均匀涂抹。

3. 待菌液干燥后，用无菌镊子取抗生素纸片，贴在平板上，纸片间距大于24mm。

4. 将平板置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。

5. 观察并测量抑菌圈直径，记录数据。

五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等抗生素均表现为敏感，抑菌圈直径分别为15mm、12mm、18mm、20mm。

2. 大肠杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等抗生素均表现为耐药，抑菌圈直径分别为0mm、0mm、0mm、0mm。

3. 肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等抗生素均表现为耐药，抑菌圈直径分别为0mm、0mm、0mm、0mm。

根据实验结果，金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等抗生素敏感，可作为临床治疗金黄色葡萄球菌感染的首选药物。

大肠杆菌和肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林、头孢唑啉、红霉素等抗生素均表现为耐药，需要根据耐药性选择其他抗生素进行治疗。

六、实验讨论1. 纸片法抑菌试验是一种简单、快速、经济的抑菌试验方法，广泛应用于微生物学研究和临床医学中。

2021年抗生素抑菌实验实验报告探究抗生素抑菌效果试验报告实验报告实验目的:探究丌同种类抗生素的灭菌效果实验器材:培养皿，量筒，滴管，锥形瓶，显微镜等实验药品:琼脂，牛肉膏，蛋白胨，、溶液，菌落培养液，氯霉素，青霉素，硫酸庆大霉素等实验基本原理:一、常用的抗生素的分类:倍他-内酰胺类:(1).V、阿莫西林、哌拉西林针;(2).头孢类:如头孢氨苄、头孢拉定; 大环内酯类(红霉素类):、罗红霉素、阿奇霉素、克拉霉素等; 喹诺酮类:诺氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星等; 氨基糖苷类:四环素类:土霉素、四环素、米诺环素，美满环素等; 氯霉素类抗生素:、甲砜霉素、无味氯霉素等其他类:甲氧苄啶、磺胺嘧啶、克林霉素、呋喃唑酮等。

(本实验中选择生活中最常见的青霉素、氯霉素和硫酸庆大霉素)二、抗生素抗菌的机理分类:阻碍细菌细胞壁的合成。

以这种方式作用的抗生素主要是β-内酰胺类抗生素(头孢菌素类)。

不细菌核糖体或其反应底物相互所用，抑制蛋白质的合成。

以这种方式作用的抗生素包括四环素类抗生素、大环内酯类抗生素、氨基糖苷类抗生素(庆大霉素)、氯霉素等。

不细菌细胞膜相互作用，增强细菌细胞膜的通透性、打开膜上的离子通道，让细菌内部的有用物质漏出菌体或电解质平衡失调而死。

阻碍细菌 DNA 的复制和转录影响叶酸代谢实验步骤:用蒸馏水清洗用具并制作九只培养基。

适当稀释菌落培养基后，各取 0.1ml 菌液，使用涂布平板法分别接种到九只培养基上。

将九只培养基编号，并均分为 A、B、C 三组。

用滤纸剪出 18 个直径 2cm 的圆片，6 个浸泡青霉素，6 个浸泡氯霉素，6 个浸泡硫酸庆大素。

完成后贴在培养基上，每只培养基贴 2 片。

将做好标记的培养基培养一段时间，观察细菌生长情况。

取出平板，测量出抑菌圈的直径大小，并做好记录。

整理数据，得出结论。

结果统计表(注:抑菌圈半径记为 R1;圆片半径 1cm 记为 R2)实验结论: 硫酸庆大霉素抑菌效果最好，青霉素抑菌效果最差。

抑菌效果的检测方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：抑菌效果的检测方法在实际生活中具有重要意义，特别是在医疗、食品加工等领域。

为了确保产品的安全性和质量，我们需要对抑菌效果进行有效检测。

本文将介绍一些常用的抑菌效果检测方法及其原理，希望能够为读者提供参考。

一、菌落计数法菌落计数法是一种常用的抑菌效果检测方法，通过计算样品中细菌的数量来评估其抑菌效果。

具体操作步骤如下：1.准备不同浓度的细菌溶液，分别涂抹在含有抑菌物质的培养基上。

2.将培养皿放入恒温培养箱中，培养一定时间后观察细菌的生长情况。

3.根据培养皿上形成的菌落数量，计算出细菌的数量。

4.通过比较不同样品中细菌数量的差异，评估抑菌效果的高低。

菌落计数法的优点是操作简单易行，可以快速获得结果。

但也存在一些局限性，比如只适用于某些特定细菌的检测，对于耗时长的样品测试不太适用。

二、最小抑菌浓度法2.将不同浓度的溶液与含有一定数量细菌的培养基混合。

3.培养一定时间后观察细菌生长情况，确定不同浓度下的最小抑菌浓度。

最小抑菌浓度法的优点是可以准确地确定抑菌物质的抑菌效果，并且可以比较不同抑菌物质之间的差异。

但需要较长时间进行实验，操作相对复杂。

三、透明圈法透明圈法是一种通过测定抑菌物质在琼脂培养基上形成的透明圈直径来评估其抑菌效果的方法。

操作步骤如下：1.将含有一定数量细菌的琼脂培养基均匀涂抹在平板上。

3.培养一定时间后观察琼脂培养基上形成的透明圈直径。

透明圈法的优点是操作简单，能够快速得出结果。

但其仅适用于一些能够形成透明圈的细菌，对于其他细菌可能不太适用。

在实际应用中，以上三种抑菌效果检测方法可以结合使用，以提高检测结果的准确性和可靠性。

还可以根据不同的需求选择合适的检测方法，以更好地评估抑菌效果。

希望本文能够对读者有所帮助，谢谢！第二篇示例：抑菌效果的检测方法是指在实验室环境中，通过一系列的实验方法检测杀菌剂或杀菌产品对细菌、真菌等微生物的杀灭效果。

抑菌圈实验的步骤和原理
抑菌圈实验是指通过测量细菌生长的最小抑菌浓度（MIC）来衡量细菌对供试菌的抑制作用的一种方法。

抑菌圈实验分为平板法和管碟法两种。

平板法：将试验菌（通常是大肠杆菌）接种到含有细菌的营养琼脂培养基中，使菌体繁殖生长形成菌落群，再将菌落群中不同的细菌接种到含有抑菌圈（直径约5 mm）的平板上，培养一定时间后，测量抑菌圈直径。

一般把抑菌圈直径大于5 mm作为阳性。

将此结果与其他菌种进行比较，即可鉴别出试验菌。

管碟法：把试验菌（通常是金黄色葡萄球菌）接种到含有抑菌圈的营养琼脂培养基中，在无菌条件下，使菌体繁殖生长形成菌落群，再将此结果与其他菌种进行比较即可鉴别出试验菌。

抑菌圈实验的步骤如下：
1.灭菌
将经灭菌处理过的试验菌接种到含有营养琼脂培养基的管碟板上。

用接种环套在管碟板外，先把管碟板放入37℃培养箱内培养一天（约24小时）后取出，将管碟板放回灭菌箱内灭菌，再把管碟板放回菌液培养箱中培养。

—— 1 —1 —。

真菌抑菌试验
固体稀释法：1.9mlPDA培养基+1ml药液，无菌水做空白对照，多菌灵做阳性对照2.用6mm打孔器打菌饼3.接种培养，26℃恒温光照培养，一天后把平皿倒置，开始观察，空白对照菌丝长满平板后开始测量4.用十字交叉法测量。

具体操作步骤：
（1）90mm平皿的灭菌准备。

每种药液做四个重复。

（2）培养基的制备。

PDA培养基：20%马铃薯，2%葡萄糖，2%琼脂。

（3）药液的配置。

首先用二甲基亚砜溶解（二甲基亚砜浓度4%），然后用蒸馏水配置成药液。

（4）把准备好的平皿、培养基、药液、病原菌、打孔器、移液枪及枪头放入超净工作台，紫外照射15min、吹风15min。

（5）接种操作。

制备平板，使用移液枪取9mlPDA培养基和1ml药液或对照，振荡混匀，倒入培养皿，静置平放，使其凝固，贴上标签。

使用打孔器把病原菌制成6mm的菌饼。

把病原菌的菌饼接入到凝固的平板上，菌丝面向下。

封口，放入26℃恒温培养箱。

培养12-24h后倒置培养。

（6）抑菌效果检查。

培养5-7d后，取出平板。

用直尺十字交叉法测量菌丝生长直径。

（7）抑制率的计算。

抑制率=（空白对照菌丝-6）-（药剂菌丝-6）/空白对照菌丝-6
注：菌丝直径单位为mm，6为接入的菌饼直径。

实验11-抗生素的抑菌试验实验目的：本实验的目的在于了解抗生素的抑菌作用并学习抗生素敏感性试验的方法。

实验原理：抗生素是广泛用于医生领域以及日常生活中的一种药物。

抗生素可以抑制或杀死致病菌，从而治疗疾病。

不同类型的抗生素作用机制不同，但抗生素大部分作用于细菌的生长和繁殖过程中的关键步骤，如细菌细胞壁的合成或DNA复制等。

不同种类的细菌对抗生素的敏感性也不相同，有些细菌对某些抗生素产生了耐药性，因此了解细菌对抗生素的敏感性是非常重要的。

抗生素敏感性试验是一种常见的实验方法，旨在寻找一种特定的抗生素是否能够杀死或抑制正在生长的细菌。

该实验方法可以采用不同的技术，例如扩散法、筛选法、稀释法等。

在该实验中，我们将采用扩散法来测定细菌对抗生素的敏感性。

扩散法试验包括以下几个步骤：1. 准备培养基：将适量的琼脂糖肉汤（TSA）加入试管中，加热至完全融化，然后立即冷却至50℃左右，以避免其蒸发。

2. 种植细菌：将待测试的细菌菌液转移到琼脂糖肉汤中，并搅拌均匀。

然后，将菌液倒入含有琼脂糖的平板培养基中。

让其在室温下凝固，然后将其在温度适当的培养箱中孵育24小时。

3. 准备抗生素滤纸：将抗生素滤纸切成适当大小，并在其中加入一定量的抗生素药物。

4. 将滤纸放在琼脂糖肉汤的表面上，让其均匀地铺在平板表面上。

然后，将詹森器或其他适当的装置用于压缩滤纸，使其与培养基接触。

5. 将培养板放置于适当的环境中孵育，一般是37℃下的恒温箱。

然后，在24小时后，评估抗生素在细菌生长上的作用。

根据细菌在平板上的生长和抗生素滤纸周围的清晰区域，可以得出抗生素对细菌的敏感性结果。

实验材料：1. 感兴趣的抗生素药物2. 琼脂糖肉汤（TSA）3. 需要测试的细菌菌液实验步骤：1. 准备琼脂糖肉汤培养基。

2. 在试管中接种需要测试的细菌，搅拌均匀。

将其倒入含有琼脂糖肉汤的平板培养基中。

在放置室温下使其平板凝固，然后将其置于适当温度的培养箱中孵育24小时。

抑菌圈法实验流程抑菌圈法（Kirby-Bauer法）是一种常用的抗菌药物敏感性试验方法，用于评估抗菌药物对细菌的抑菌效果和选择性。

实验流程如下：1.材料准备- 霍乱弧菌（Vibrio cholerae）培养基：将霍乱弧菌分离菌落接种到琼脂平板上，培养过夜。

-纯培养的霍乱弧菌菌液：选择一颗单菌落，将其转移到无菌培养基中，培养到对数生长期。

-抗菌药物纸材：将抗生素敏感纸片切成适当大小的圆片。

-灭菌钎子：用于将纸材固定在平板上。

-显微镊子：用于取出抗生素纸片。

2.制备琼脂培养基平板-在无菌条件下，将琼脂培养基加热至溶解。

-将琼脂培养基均匀倒入培养皿中。

-放置琼脂培养基凝固。

3.制备菌液悬液-用无菌生理盐水洗涤培养的霍乱弧菌菌落，使其悬浮在生理盐水中。

-用光度计测量悬浮液的浓度，调整到0.5的麦克斯韦尔稀释系数。

4.菌液接种-用梅林巴赫管（或吸管）吸取菌液悬液，通过刮平盖玻片法将其涂抹在琼脂平板上。

-用无菌棉签将菌液均匀涂抹在琼脂平板上。

5.抗生素纸片覆盖-用灭菌钎子将抗生素纸材固定在琼脂平板表面。

-用无菌镊子将预先标定好的抗生素纸片覆盖在菌液层上。

6.孵育-将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中孵育24小时。

7.测量抑菌圈直径-孵育后，观察平板上的抗生素纸片周围是否出现抑菌圈。

抑菌圈呈透明带状。

-用尺度卡测量抑菌圈的直径。

8.数据分析-根据抑菌圈的直径，查阅相关参考表确定该抗生素对该菌株的敏感性。

注意事项：-所有步骤都要在无菌条件下进行，以避免外部细菌的干扰。

-保持实验环境的洁净和安全，并进行相应的实验室安全措施。

-实验中要保持手部和工具的清洁，避免交叉污染。

-实验后应妥善处置实验废弃物，如纸材和实验用具。

抑菌圈法是一种简单、可靠的药敏试验方法，可用于评估抗生素的抑菌效果和终止治疗浓度建议。

通过该试验可以指导临床医生合理使用抗菌药物，防止药物滥用和耐药菌株的产生。

同时，该方法也可以用于研究新发现的抗生素的抗菌特性和敏感度。

金霉素抑菌试验方案
一、试验目的：检测不同浓度金霉素以及加入代谢物后其最小抑菌浓度。

二、试验方案：共分五组，分别为空白对照组、试验组1（加金霉素原粉）、试验组2（金霉素原粉+代谢物）、试验组3（金霉素预混料）、试验组4（金霉素预混料+代谢物）。

三、试验步骤：以大肠杆菌为指示菌
大肠杆菌菌液稀释50倍待用，配金霉素溶液，浓度从高到底分
别为640ug/ml，320 ug/ml，160 ug/ml，80 ug/ml，40 ug/ml。

配制LB培养基：Nacl 10g，酵母粉5g，胰蛋白胨10g，1000ml 水。

将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的LB琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。

配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。

接种后，37℃培养24小时后判断结果，将平板置于暗色、无反
光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。

最低抑菌浓度测定方法一、前言最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）是指一种抗菌药物能够抑制细菌生长的最低浓度。

MIC测定是临床微生物学和药理学中的重要实验方法之一，对于评估抗菌药物的疗效和选择合适的治疗方案具有重要意义。

本文将介绍最低抑菌浓度测定方法，包括试验材料、实验步骤和结果判读等内容。

二、试验材料1. 细菌：需测试的细菌株，可选用革兰氏阳性或阴性细菌。

2. 培养基：可选用Mueller-Hinton琼脂培养基或Brain Heart Infusion琼脂培养基等。

3. 抗生素：需测试的抗生素，可选用氨苄西林、头孢呋辛等常见抗生素。

4. 96孔板：用于进行微量稀释法测定MIC值。

5. 稀释液：可选用双倍稀释液（double-strength broth）或盐水等。

6. 恒温箱：用于控制培养温度为37℃。

7. 显微镜：用于观察细菌生长情况。

三、实验步骤1. 制备菌液：取一支革兰氏染色阳性或阴性细菌，接种于含有适当营养成分的培养基中，进行预培养。

待菌液浑浊度达到0.5 McFarland标准时，可用于后续实验。

2. 稀释菌液：将制备好的菌液按一定比例稀释至10^-4或10^-5倍，得到约10^6 CFU/mL的细菌悬浮液。

3. 制备抗生素溶液：将需测试的抗生素按一定比例加入到稀释液中，制备出不同浓度的抗生素溶液。

4. 测定MIC值：将制备好的抗生素溶液加入到96孔板中，并依次加入稀释好的细菌悬浮液。

每个孔内均应包括对照组和实验组。

将孔板放入恒温箱中，在37℃条件下培养18-24小时。

观察各孔内是否有细胞生长，记录最低浓度呈现无细胞生长情况的孔号，即为MIC值。

四、结果判读1. MIC值的判读应根据不同抗生素和细菌株的敏感性标准进行。

2. 一般来说，MIC值越低，说明抗生素对该细菌株的敏感性越强。

3. 当MIC值等于或低于临床常用浓度时，说明该抗生素对该细菌株具有治疗价值。

抑菌实验基本原理抑菌实验是一种常用的实验方法，用于评价物质对细菌的杀菌或抑制作用。

它可以帮助人们了解物质对细菌的作用机制，以及评估其在医药、食品、环境等领域的应用价值。

本文将详细介绍与抑菌实验原理相关的基本原理。

细菌与抗菌物质在了解抑菌实验的原理之前，我们首先需要了解一些基本概念。

细菌细菌是一类单细胞微生物，它们广泛存在于自然界中的各个环境中，包括土壤、水体、空气以及动植物体内。

有些细菌对人类和其他生物有益，如参与食品发酵和分解有机废弃物等；而另一些细菌则具有致病性，可以引起各种感染和疾病。

抗菌物质抗菌物质是指能够杀灭或抑制细菌生长和繁殖的化学物质。

它们可以通过多种途径发挥作用，如破坏细菌的细胞壁、干扰细菌的代谢过程或抑制细菌的DNA合成等。

常见的抗菌物质包括抗生素、消毒剂和防腐剂等。

抑菌实验原理抑菌实验是一种定性或定量评价物质对细菌生长和繁殖的影响的实验方法。

它可以通过观察培养基上的细菌生长情况来判断物质是否具有抗菌活性，并进一步评估其抑制效果的强弱。

实验步骤一般来说，抑菌实验包括以下几个基本步骤：1.培养基准备：将所需培养基按照一定比例配制好，并进行无菌处理，以确保试验过程中不会引入其他微生物。

2.细菌接种：从培养基上选择适当数量的细菌，进行预培养，使其达到合适的生长状态。

然后将预培养液加入到新鲜培养基中，使其浓度适宜。

3.抗菌物质添加：将要测试的抗菌物质加入到含有细菌的培养基中，使其与细菌充分接触。

4.培养：将含有细菌和抗菌物质的培养基置于适宜的环境条件下，如温度、湿度和氧气含量等。

培养一定时间后，观察细菌的生长情况。

5.结果评估：根据实验结果判断抗菌物质对细菌的抑制效果，可以通过观察培养基上是否有细菌生长、细菌数量的变化或测定抑菌圈直径等指标来评估。

抑菌机制抗菌物质对细菌的抑制作用主要通过以下几种机制发挥：1.破坏细胞壁：某些抗菌物质能够破坏细菌的细胞壁结构，导致其内容物外溢而死亡。

这类物质通常作用于革兰氏阳性细菌，因为它们具有较厚的层状结构。

琼脂打孔法（琼脂打孔抑菌圈实验）一、试验原理利用抑菌剂不断溶解经琼脂扩散形成不同浓度梯度，以显示其抑菌作用。

试验通过抑菌圈大小以判断其是否具有抑菌能力。

本试验适用于抑菌剂与溶出性抗（抑）菌产品的鉴定。

二、试验器材、化学试剂及菌种培养皿、试管、5uL～50uL 微量移液器，100uL～1000uL微量移液器以及配套的枪头、10mL离心管、游标卡尺、涂布棒、麦氏比浊管、电动混合器、水浴锅、超净工作台、高压灭菌锅、鼓风干燥箱、生化培养箱、电热炉营养琼脂培养基、PBS缓冲液、无菌水、95%乙醇。

菌种：溶血性链球菌、溶血性葡萄球菌、李斯特菌、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌、吸附性绿脓杆菌、大肠杆菌三、试验步骤1、实验工器具准备及灭菌在锥形瓶中配置营养琼脂培养基，用电热炉加热煮沸至澄清状态，盖好塞子，同PBS 缓冲液、无菌水、配套枪头、涂布棒、离心管一同放入高压灭菌锅中灭菌，121℃杀菌25min。

将培养皿用牛皮纸包好和试管一起放入鼓风干燥箱中灭菌，170℃杀菌2h。

实验前超净工作台及操作室使用前需用紫外灯杀菌30min以上。

2、倒培养皿将培养基及培养皿放置到60℃后开始倒培养皿，培养基使用前摇匀，每个培养皿倒15～20mL左右，倒好后水平静置至完全凝固。

3、菌悬液的制备从冰箱取出需要测试的菌种活化0.5h 后，加入5mL 的PBS缓冲液将斜面上，在手掌上轻轻振打80次，使菌株完全冲下，倒入试管中轻轻摇匀。

吸取1mL 的菌液加入到4mL 的PBS缓冲液中，再吸取1mL稀释的菌悬液依次进行5倍梯度稀释，选择108CFU/mL左右的菌悬液或106CFU/mL左右的孢子悬浮液（对比0.5麦氏比浊管），将选好的菌悬液十倍系列稀释后选第二支试管（即浓度约为106/CFU/mL左右的菌悬液或104CFU/mL左右的孢子悬浮液）进行试验。

4、试验菌的接种用移液枪吸取浓度为 106cfu/mL 试验菌悬液0.1mL ，将其接种到已经倒好的营养琼脂培养皿内，用涂布棒涂布均匀（注意涂布棒每次使用后在酒精灯下灭菌，涂布时动作轻不要刮破培养基），盖好培养皿。