预购2018年度动物疫病监测诊断试剂清单在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（21℃±5℃）。
试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。
1. 微孔板样品预稀释：1:40 倍195μL 样品稀释液 14 加入每孔。
5μL 用于检测样品加入对照不需要稀释加样：100μL 阴性对照（不需稀释）加入孔 A1 和 B1。
100μL 阳性对照（不需稀释）加入孔 C1 和 D1。
100μL 预稀释样品加入剩下孔内提示：加样后板震荡混匀（2min,200rpm）效果更佳且不会影响结果。
2. 21℃（±5℃）下孵育 30min±3min。
3. 用 300μL 左右的洗涤液洗涤每个板孔 5 次。
在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔变干。
4. 用样品稀释液 3 按照 1：10 的比例的稀释浓缩酶标结合物（10X）制备酶标结合物（1X）（1 份浓缩洗涤液加 9 份样品稀释液 3）。
5. 吸取 100μL 的酶标记结合物（1X）加入到每孔中。
6. 21℃（±5℃）下孵育 30min±3min。
7. 重复步骤 3。
8. 吸取 100μL 的底物溶液加入到每孔中。
9. 21℃（±5℃）下暗室内孵育 15min±2min。
10. 在每孔中加入 100μL 的终止液终止显色反应。
11. 在酶标仪的 450nm 波长读结果。
实验有效性：在下列情形下实验有效：阴性对照的平均 OD 小于等于 0.150. OD NC ≤≤ 0.150阳性对照与阴性对照平均 OD 值差值大于等于 0.150 OD PC - OD NC ≥ 0.150结果判定：对于每个样品，计算其 S/P 比值：每个样品得出一个（S/P）实验原理：微量滴定板已经用 E2 糖蛋白包被。
加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原-抗体复合物。
经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与没有结合抗体的点位结合，形成抗原-酶结合物复合体。
经过洗板，加入含底物 TMB 液。
呈色反应是与样本中抗体含量成反比；若没有抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。
抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。
在 450nm 波长检测 OD 值。
稀释缓冲液 18 加入血清稀释后会改变颜色试剂盒内容：试剂包被的微量滴定板酶结合物标准液（10X 浓缩）阳性对照阴性对照稀释缓冲液 8浓缩洗涤液（20X）稀释缓冲液 12底物溶液终止液（H 2 SO 4 0.5M）1. 酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在 5℃（±3℃）下贮存。
2. 其它试剂可放置+2℃～+26℃保存。
3. 洗涤液和样品稀释液可用于 ID VET 所有系列产品。
检测步骤：在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（21℃±5℃）。
试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。
1.血清1. 加样：50μL 8 号稀释液加入每孔。
50μL 阳性对照加入孔 A1 和 B1。
50μL 阴性对照加入孔 C1 和 D1。
50μL 待检测样品加入剩下其他孔内。
2. 2. 37℃℃（±±2℃℃））下孵育 45±4min（短时孵育）或在 21℃℃（±±5℃℃））下孵育 16-20 小时（过夜孵育）。
3. 甩干板中液体，用 300μL 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次。
在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩干后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。
在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。
4. 非常重要：10X 浓缩酶标记抗体用稀释缓冲液 12 进行 10 倍稀释（1 份浓缩液+9份稀释液）。
吸取稀释的 100μL 的酶标抗体加入到每孔中。
5. 21℃℃（±±5℃℃））下孵育 30±3min。
6. 甩干板中液体，用 300μL 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次，洗涤过程中避免孔壁变干。
7. 吸取 100μL 的底物溶液加入到每孔中。
8. 21℃℃（±±5℃℃）下暗室避光孵育 15min±2min。
9. 在每孔中加入 100μL 的终止液终止显色反应。
10. 在酶标仪的 450nm 波长读取 OD 值。
实验有效性：在下列情形下实验有效：阴性对照的平均 OD 大于 0.7 OD NC > 0.7阳性对照平均 OD 值小于阴性对照的 30% OD PC / OD NC ＜ 0.3结果判定：对于每个样品，计算其 S/N 百分比（S/N%）每个样品得出一个（S/N）短时孵育或过夜孵育的结果如下：值结果值结果S/N%≤50% 阳性S/N%≤50% 阳性50%＜S/N%≤60% 可疑50%＜S/N%≤60% 可疑S/N%＞60% 阴性S/N%＞60% 阴性2. 其它试剂可放置+2℃～+26℃保存。
3. 相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于 ID VET 所有系列产品。
检测步骤：在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（21℃±5℃）。
试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。
1.血清1.1 短时间孵育1. 加样：每孔加入 50μL 样品稀释液 4。
孔 A1 和 B1 分别加入 50μL 阳性对照。
孔 C1 和 D1 分别加入 50μL 阴性对照。
剩下其他孔内加入 50μL 待检测样品2. 37℃（±2℃）下孵育 45min±4min。
1.2 过夜孵育1. 加样：每孔加入 75μL 样品稀释液 4。
孔 A1 和 B1 分别加入 25μL 阳性对照。
孔 C1 和 D1 分别加入 25μL 阴性对照。
剩下其他孔内加入 25μL 待检测样品2. 21℃（±5℃）下过夜孵育 16-20 小时。
1.3 不过过夜孵育或是短时间孵育，以下 1-9 步骤相同1. 甩干板中液体，用 300μL 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次。
在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩干后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。
在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。
2. 用稀释液缓冲液 3 按照 1：10 的比例的稀释浓缩酶标结合物（10X）制备酶标结合物（1X）（1 份浓缩洗涤液加9 份样品稀释液）。
3. 吸取 100μL 的酶标记结合物（1X）加入到每孔中。
4. 37℃（±2℃）下孵育 30min。
5. 甩干板中液体，用 300μL 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次，洗涤过程中避免孔壁变干。
6. 吸取 100μL 的底物溶液加入到每孔中。
7. 21℃（±5℃）下暗室避光孵育 15min。
8. 在每孔中加入 100μL 的终止液终止显色反应。
9. 在酶标仪的 450nm 波长读结果。
实验有效性：在下列情形下实验有效：阴性对照的平均 OD 大于 0.7 OD NC > 0.7阳性对照平均 OD 值小于阴性对照的 30% OD PC / OD NC ＜ 0.3结果判定：对于每个样品，计算其 S/N 百分比（S/N）每个样品得出一个（S/N）实验原理：微量滴定板已经用伪狂犬病毒抗原包被。
加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原合物。
经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与伪狂犬 gE 抗原的剩余位点结合，形成抗原酶结合物标准液（直接使用）阳性对照阴性对照稀释缓冲液 13浓缩洗涤液（20X）底物溶液终止液（H 2 SO 4 0.5M试剂1. 酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在 5℃（±3℃）下贮存。
2. 其它试剂可放置+2℃～+26℃保存。
3. 相同名称的洗涤液和样品稀释液可用于 ID VET 所有系列产品。
检测步骤：在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（21℃±5℃）。
试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。
1.血清1.1 短时间孵育1. 加样：每孔加入 20μL 样品稀释液 13。
孔 A1 和 B1 分别加入 50μL 阳性对照。
孔 C1 和 D1 分别加入 50μL 阴性对照。
剩下其他孔内加入 50μL 待检测样品。
2. 37℃（±2℃）下孵育 1h30±6min。
1.2 过夜孵育( 可以提高检测能力)1. 加样：每孔加入 80μL 样品稀释液 4。
孔 A1 和 B1 分别加入 20μL 阳性对照。
孔 C1 和 D1 分别加入 20μL 阴性对照。
剩下其他孔内加入 20μL 待检测样品。
2. 21℃（±5℃）下过夜孵育（16-20 小时）。
1.3 不管过夜孵育或是短时间孵育，以下 1-8 步骤相同1. 甩干板中液体，用 300μL 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次。
在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩干后，在吸干材料上用力扣板，吸去剩余的液体。
在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。
2. 吸取 100μL 的酶标记结合物（直接使用）加入到每孔中。
3. 21℃（±5℃）下孵育 30±3min。
4. 甩干板中液体，用 300μL 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次，洗涤过程中避免孔壁变干。
5. 吸取 100μL 的底物溶液加入到每孔中。
6. 21℃（±5℃）下暗室避光孵育 15min±2min。
7. 在每孔中加入 100μL 的终止液终止显色反应。
8. 在酶标仪的 450nm 波长读结果。
实验有效性：在下列情形下实验有效：阴性对照的平均 OD 大于 0.7 OD NC > 0.7阳性对照平均 OD 值小于阴性对照的 30% OD PC / OD NC ＜ 0.3结果判定：对于每个样品，计算其 S/N 百分比（S/N）每个样品得出一个（S/N）短时孵育或过夜孵育的结果如下：值结果值结果S/N≤60% 阳性S/N≤60% 阳性60＜S/N≤70% 可疑60＜S/N≤70% 可疑。
