化合物G004在大鼠体内的绝对生物利用度研究
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2 回归方程为 f = 015249 C - 010064 ( r = 019995 ) ,表
合物 G004, 给药结束后分别在 0、 2、 5、 8、 15、 30、 45
m in和 1、 2、 4、 8、 12 h 时采血分离血浆置于 - 20 ℃ 冰
箱中备用 。另外 6 只大鼠灌胃 5 mg ・ kg 化合物
ig 510 mg・kg 化合物 G004 后主要药代动力学参数 Tmax 、
-1
( 3133 ± Cm ax、 T1 、 AUC (0 - ∞) 、 M R T (0 - 12h) 分别为 0183 h、 0180)
2 -1 -1 -1 ( 1177 ± ( 10104 ± mg・L 、 0121 ) h、 2143 ) mg・L ・h 和
・698・
中国药理学通报 Ch inese Pha r m acolog ica l B u lletin 2006 Jun; 22 ( 6 ) : 698 ～701
化合物 G004 在大鼠体内的绝对生物利用度研究
李晓宇 ,王广基 ,巫冠中 ,谢海棠 ,孙建国 ,王 旋
1 1 2 1 1 1
215 mg・kg 化合物 G004 后主要药代动力学参数 T 1 、 CL s、
-1 2 -1 ( 0136 ± Vd、 AUC ( 02∞) 分别为 ( 1191 ± 0165 ) h、 0122 ) L ・h 、 -1 -1 -1 ( 0178 ± ( 9152 ± 0136 ) L ・kg 、 3153 ) mg・L ・h ; 大鼠
( 2175 ± 0131 ) h。经过剂量校正后求得的化合物 G004 在大
鼠体内的绝对生物利用度为 52169% 。结论 该法专属性 强 ,灵敏度高 ,可用于化合物 G004 的体内定量分析 。 关键词 : 化合物 G004; 液相色谱 - 电喷雾离子 - 质谱联用法
(LC 2ESI2 M S) ; 药代动力学 ; 绝对生物利用度
收稿日期 : 2006 - 02 - 05,修回日期 : 2006 - 04 - 12 基金项目 : 国家高技术研究发展计划 ( 863 计划 ) 基金资助项目 (No
2003AA2Z347A ) ; 江苏省药物代谢动力学重点实验室资
助项目 (No BM2001201) 作者简介 : 李晓宇 ( 1971 - ) ,男 ,博士生 ,研究方向 : 药代动力学 , Tel:
L 的系列血浆 , 按“ 血浆样品处理方法 ” 项下操作
- 1
食不禁水 ,实验时称重 ,其中 6 只 iv 215 m g・kg 化
- 1
并测定 , 分别记录峰面积 , 以化合物 G004 峰面积 (A s)对内标峰面积 ( A i) 比值 ( f) 为纵坐标 , 化合物
G004 浓度为横坐标 ( C ) 作线性回归 , 得标准曲线的
m l,振荡 3 m in, 14 000 r・m in
- 1
,离心 5 m in,取上层
- 1
有机相 018 m l,置离心浓缩装置中吹干 , 015 m l乙腈 溶解残渣 , 4 ℃下 14 000 r ・m in 高速离心 10 m in 后 ,取上清液 10 μl进样 ,用样品与内标峰面积比进 行定量分析 。
1. 9 数据分析 将所得的化合物 G004 在大鼠体
4℃ 避光保存备用 。临用时用乙腈稀释配制成 011、 0125、 015、 1、 215、 510、 1010、 2510 m g・L 浓度的标
- 1
内的血药浓度时间数据用 DAS软件程序处理 ,求算 其在大鼠体内的药代动力学参数及其绝对生物利用 度。
(中国药科大学 1. 药物代谢动力学重点实验室 、 2. 药理学教研室 ,江苏 南京 210038 )
中国图书分类号 : R 2 332; R 446111; R 97312; R 977115 文献标识码 : A 文章编号 : 1001 - 1978 ( 2006 ) 06 - 0698 - 04 摘要 : 目的 建立测定化合物 G004 血浆药物浓度的液相色 谱 - 电喷雾离子 - 质谱联用 (LC 2ESI2 M S) 的分析方法 ,探讨 其在大鼠体内的药代动力学和绝对生物利用度研究中的应 用 。方法 SD 大鼠 ig和 iv化合物 G004,剂量分别为 510 和
025 2 85391089, E 2 mai: xyllxb@ yahoo. com. cn;
大学 实 验 动 物 中 心 提 供 , 合 格 证 号 : SCXK2002 2 0011。 1. 4 色谱条件 色谱柱 : Kromasil C18 柱 , 315 μm , 210 mm × 150 mm ( Phenomenex, USA ) 。流动相为 乙腈 - 水 = 70 ∶ 30 ( V /V ) , 水相含体积分数为 0105 - 1 的冰醋酸 , pH 值约为 413, 流速为 012 m l ・m in , 柱温 40 ℃。 1. 5 质谱检测条件 检测模式为电喷雾离子化方 式 ( ESI) ,采用选择性离子检测 ( SI M ) , 检测离子为 负离子 ,化合物 G004: m / z = 558100, 格列苯脲 : m / z - 1 = 492125,雾化气流速 115 L ・m in , 反吹气流速 2 - 1 L ・m in ,曲形脱溶剂装置 ( CDL )温度 : 250 ℃,电压 25 V ,加热块 (B lock )温度 200 ℃,离子源电压 ( Probe
1. 8 实验方案 取 SD 大鼠 12 只 , 实验前 12 h 禁
ห้องสมุดไป่ตู้
大鼠空白血浆 40 μ l, 精密加入不同浓度的化合物 G004 标准工作液 10 μ l,制备成含化合物 G004 浓度 分别为 0102、 0105、 011、 012、 015、 110、 210、 510 m g・
Voltage ) 415 kV ,检测电压 1135 kV。 1. 6 标准工作液的配制 精密称取适量化合物 G004 标准品 ,用乙腈配制成 110 g ・L 贮备液 , 于
- 1
和 1、 2、 4、 6、 8、 12 h 采血分离血浆置冰箱中备用 。 实验时按“ 血浆样品处理方法 ” 项下提取测定 。
王广基 ( 1953 - ) ,男 ,博士 ,教授 , 博士生导师 , 研究方向 : 药 代 动 力 学 , 通 讯 作 者 , Tel: 025 2 83271544, Fax: 025 2
85306750, E 2 mail: gjwang@mailbox . cpu. edu. cn
中国药理学通报 Ch inese Pha r m acolog ica l B u lletin 2006 Jun; 22 ( 6 )
新型磺酰脲类化合物 G004 是运用拼合原理 , 以具有降糖活性的磺酰脲结构为母核连接抗血小板 聚集活性的化学基团设计而成 , 分子式为 C22 H28 B rN3 O5 S2 ,化学式为 1 2{ 4 2[ 2 2( 4 2 溴 苯磺酰胺基 ) 乙 基 ]苯磺酰 } 2 3 2(反 2 42 甲基环己基 ) 脲 。初步药理学 研究表明化合物 G004 及其同类物 G003 具有较好 [ 1, 2 ] 的抗实验性血栓形成和降血糖作用 。但其药代
1. 3 动物 SD 大鼠 ,体重 200 ～250 g,由中国药科
, 给药后不同时间点取血 , 分离血浆 , LC 2ESI2
M S法测定血浆中化合物 G004 的药物浓度 , 用 DAS软件计
算其药代动力学参数 ,求算化合物 G004 在大鼠体内的绝对 生物利用度 。结果 化合物 G004 在 0102 ～ 510 mg・L - 1浓 度范围内线性关系良好 ( r2 = 019995 ) ,样品在血浆中的提取 回收率大于 87% ,批内和批间的 RSD 均小于 15% 。大鼠 iv
mol・L 的 HC l 10 μ l,振荡 30 s,加入乙酸乙酯 110
- 1
品峰及内标峰的保留时间分别为 4134 和 3157 m in ( Fig 1 ) 。采用选择性离子检测方式专属性强 , 灵敏 度高 ,血浆中内源性物质不干扰样品和内标的测定 。
2. 2 化合物 G004 在大鼠血浆中的标准曲线 取
2 结果 2. 1 色谱行为 LC 2 M S法测定化合物 G004 时 , 样
准工作液备用 。另精密取格列苯脲适量 , 用乙腈溶 解并稀释成 310 mg・L 的溶液备用 。
- 1
1. 7 大鼠血浆样品的处理方法 自大鼠球后静脉
丛取血约 150 μ l,分离血浆 ,精取血浆 50 μ l,加入格 - 1 列苯脲内标液 ( 3 mg ・L ) 10 μ l, 混匀后 , 加 012
215 mg ・ kg
-1
动力学特征如何 ? 与现有的第 2、 3 代磺酰脲类药物 在药代动力学特性上有何不同还未见报道 。本文利 用 LC 2 M S联用技术 ,建立了简便 、 快速 、 高灵敏的体 内分析方法 ,初步研究了大鼠 ig和 iv化合物 G004 后的药代动力学过程并评价了其在大鼠体内的绝对 生物利用度 。 1 材料与方法 1. 1 仪器与试剂 LC 2 M S 2010 型液相色谱 - 质谱 联用系统 : 包括双高压泵 , 在线真空脱气机 , LC 2 MS solution version 2104 Sul2 H3 工作站 , CTO 2 10 Avp 柱 温箱 , SI L 10 ADvp 自动进样器 , Thermo IEC 高速离 心机 (M icrom ax RF ) , Thermo Savant SPD 1010 离心 浓缩装置 , M illi2 Q Gradient A10 超纯水器 (M illipore Inc. USA ) , Votex2 800 型漩涡混匀器 。化合物 G004 及其标准品由中国药科大学新药研究中心提供 (批 号 : 050616 ) ,内标格列苯脲由中国药品生物制品鉴 定所提供 (批号 : 135 2 9402 ) 。乙腈为色谱纯 , 德国 M erck 公司产品 。乙酸乙酯 (特级纯 ) , 江苏汉邦科 技有限公司产品 , 其余试剂均为分析纯 。 1. 2 药液的配制 静脉注射用药 : 取化合物 G004 适量 ,用少量无水乙醇超声溶解后再用生理盐水稀 - 1 释成所需浓度 , 按 3 m l ・ kg 剂量由尾静脉给药 。 灌胃给药 : 取化合物 G004 适量 ,用质量分数为 0105 的 CMC 2 Na将其配成相应浓度的混悬液 ,按 10 m l・ - 1 kg 的剂量灌胃给药 。
合物 G004, 给药结束后分别在 0、 2、 5、 8、 15、 30、 45
m in和 1、 2、 4、 8、 12 h 时采血分离血浆置于 - 20 ℃ 冰
箱中备用 。另外 6 只大鼠灌胃 5 mg ・ kg 化合物
ig 510 mg・kg 化合物 G004 后主要药代动力学参数 Tmax 、
-1
( 3133 ± Cm ax、 T1 、 AUC (0 - ∞) 、 M R T (0 - 12h) 分别为 0183 h、 0180)
2 -1 -1 -1 ( 1177 ± ( 10104 ± mg・L 、 0121 ) h、 2143 ) mg・L ・h 和
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中国药理学通报 Ch inese Pha r m acolog ica l B u lletin 2006 Jun; 22 ( 6 ) : 698 ～701
化合物 G004 在大鼠体内的绝对生物利用度研究
李晓宇 ,王广基 ,巫冠中 ,谢海棠 ,孙建国 ,王 旋
1 1 2 1 1 1
215 mg・kg 化合物 G004 后主要药代动力学参数 T 1 、 CL s、
-1 2 -1 ( 0136 ± Vd、 AUC ( 02∞) 分别为 ( 1191 ± 0165 ) h、 0122 ) L ・h 、 -1 -1 -1 ( 0178 ± ( 9152 ± 0136 ) L ・kg 、 3153 ) mg・L ・h ; 大鼠
( 2175 ± 0131 ) h。经过剂量校正后求得的化合物 G004 在大
鼠体内的绝对生物利用度为 52169% 。结论 该法专属性 强 ,灵敏度高 ,可用于化合物 G004 的体内定量分析 。 关键词 : 化合物 G004; 液相色谱 - 电喷雾离子 - 质谱联用法
(LC 2ESI2 M S) ; 药代动力学 ; 绝对生物利用度
收稿日期 : 2006 - 02 - 05,修回日期 : 2006 - 04 - 12 基金项目 : 国家高技术研究发展计划 ( 863 计划 ) 基金资助项目 (No
2003AA2Z347A ) ; 江苏省药物代谢动力学重点实验室资
助项目 (No BM2001201) 作者简介 : 李晓宇 ( 1971 - ) ,男 ,博士生 ,研究方向 : 药代动力学 , Tel:
L 的系列血浆 , 按“ 血浆样品处理方法 ” 项下操作
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食不禁水 ,实验时称重 ,其中 6 只 iv 215 m g・kg 化
- 1
并测定 , 分别记录峰面积 , 以化合物 G004 峰面积 (A s)对内标峰面积 ( A i) 比值 ( f) 为纵坐标 , 化合物
G004 浓度为横坐标 ( C ) 作线性回归 , 得标准曲线的
m l,振荡 3 m in, 14 000 r・m in
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,离心 5 m in,取上层
- 1
有机相 018 m l,置离心浓缩装置中吹干 , 015 m l乙腈 溶解残渣 , 4 ℃下 14 000 r ・m in 高速离心 10 m in 后 ,取上清液 10 μl进样 ,用样品与内标峰面积比进 行定量分析 。
1. 9 数据分析 将所得的化合物 G004 在大鼠体
4℃ 避光保存备用 。临用时用乙腈稀释配制成 011、 0125、 015、 1、 215、 510、 1010、 2510 m g・L 浓度的标
- 1
内的血药浓度时间数据用 DAS软件程序处理 ,求算 其在大鼠体内的药代动力学参数及其绝对生物利用 度。
(中国药科大学 1. 药物代谢动力学重点实验室 、 2. 药理学教研室 ,江苏 南京 210038 )
中国图书分类号 : R 2 332; R 446111; R 97312; R 977115 文献标识码 : A 文章编号 : 1001 - 1978 ( 2006 ) 06 - 0698 - 04 摘要 : 目的 建立测定化合物 G004 血浆药物浓度的液相色 谱 - 电喷雾离子 - 质谱联用 (LC 2ESI2 M S) 的分析方法 ,探讨 其在大鼠体内的药代动力学和绝对生物利用度研究中的应 用 。方法 SD 大鼠 ig和 iv化合物 G004,剂量分别为 510 和
025 2 85391089, E 2 mai: xyllxb@ yahoo. com. cn;
大学 实 验 动 物 中 心 提 供 , 合 格 证 号 : SCXK2002 2 0011。 1. 4 色谱条件 色谱柱 : Kromasil C18 柱 , 315 μm , 210 mm × 150 mm ( Phenomenex, USA ) 。流动相为 乙腈 - 水 = 70 ∶ 30 ( V /V ) , 水相含体积分数为 0105 - 1 的冰醋酸 , pH 值约为 413, 流速为 012 m l ・m in , 柱温 40 ℃。 1. 5 质谱检测条件 检测模式为电喷雾离子化方 式 ( ESI) ,采用选择性离子检测 ( SI M ) , 检测离子为 负离子 ,化合物 G004: m / z = 558100, 格列苯脲 : m / z - 1 = 492125,雾化气流速 115 L ・m in , 反吹气流速 2 - 1 L ・m in ,曲形脱溶剂装置 ( CDL )温度 : 250 ℃,电压 25 V ,加热块 (B lock )温度 200 ℃,离子源电压 ( Probe
1. 8 实验方案 取 SD 大鼠 12 只 , 实验前 12 h 禁
ห้องสมุดไป่ตู้
大鼠空白血浆 40 μ l, 精密加入不同浓度的化合物 G004 标准工作液 10 μ l,制备成含化合物 G004 浓度 分别为 0102、 0105、 011、 012、 015、 110、 210、 510 m g・
Voltage ) 415 kV ,检测电压 1135 kV。 1. 6 标准工作液的配制 精密称取适量化合物 G004 标准品 ,用乙腈配制成 110 g ・L 贮备液 , 于
- 1
和 1、 2、 4、 6、 8、 12 h 采血分离血浆置冰箱中备用 。 实验时按“ 血浆样品处理方法 ” 项下提取测定 。
王广基 ( 1953 - ) ,男 ,博士 ,教授 , 博士生导师 , 研究方向 : 药 代 动 力 学 , 通 讯 作 者 , Tel: 025 2 83271544, Fax: 025 2
85306750, E 2 mail: gjwang@mailbox . cpu. edu. cn
中国药理学通报 Ch inese Pha r m acolog ica l B u lletin 2006 Jun; 22 ( 6 )
新型磺酰脲类化合物 G004 是运用拼合原理 , 以具有降糖活性的磺酰脲结构为母核连接抗血小板 聚集活性的化学基团设计而成 , 分子式为 C22 H28 B rN3 O5 S2 ,化学式为 1 2{ 4 2[ 2 2( 4 2 溴 苯磺酰胺基 ) 乙 基 ]苯磺酰 } 2 3 2(反 2 42 甲基环己基 ) 脲 。初步药理学 研究表明化合物 G004 及其同类物 G003 具有较好 [ 1, 2 ] 的抗实验性血栓形成和降血糖作用 。但其药代
1. 3 动物 SD 大鼠 ,体重 200 ～250 g,由中国药科
, 给药后不同时间点取血 , 分离血浆 , LC 2ESI2
M S法测定血浆中化合物 G004 的药物浓度 , 用 DAS软件计
算其药代动力学参数 ,求算化合物 G004 在大鼠体内的绝对 生物利用度 。结果 化合物 G004 在 0102 ～ 510 mg・L - 1浓 度范围内线性关系良好 ( r2 = 019995 ) ,样品在血浆中的提取 回收率大于 87% ,批内和批间的 RSD 均小于 15% 。大鼠 iv
mol・L 的 HC l 10 μ l,振荡 30 s,加入乙酸乙酯 110
- 1
品峰及内标峰的保留时间分别为 4134 和 3157 m in ( Fig 1 ) 。采用选择性离子检测方式专属性强 , 灵敏 度高 ,血浆中内源性物质不干扰样品和内标的测定 。
2. 2 化合物 G004 在大鼠血浆中的标准曲线 取
2 结果 2. 1 色谱行为 LC 2 M S法测定化合物 G004 时 , 样
准工作液备用 。另精密取格列苯脲适量 , 用乙腈溶 解并稀释成 310 mg・L 的溶液备用 。
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1. 7 大鼠血浆样品的处理方法 自大鼠球后静脉
丛取血约 150 μ l,分离血浆 ,精取血浆 50 μ l,加入格 - 1 列苯脲内标液 ( 3 mg ・L ) 10 μ l, 混匀后 , 加 012
215 mg ・ kg
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动力学特征如何 ? 与现有的第 2、 3 代磺酰脲类药物 在药代动力学特性上有何不同还未见报道 。本文利 用 LC 2 M S联用技术 ,建立了简便 、 快速 、 高灵敏的体 内分析方法 ,初步研究了大鼠 ig和 iv化合物 G004 后的药代动力学过程并评价了其在大鼠体内的绝对 生物利用度 。 1 材料与方法 1. 1 仪器与试剂 LC 2 M S 2010 型液相色谱 - 质谱 联用系统 : 包括双高压泵 , 在线真空脱气机 , LC 2 MS solution version 2104 Sul2 H3 工作站 , CTO 2 10 Avp 柱 温箱 , SI L 10 ADvp 自动进样器 , Thermo IEC 高速离 心机 (M icrom ax RF ) , Thermo Savant SPD 1010 离心 浓缩装置 , M illi2 Q Gradient A10 超纯水器 (M illipore Inc. USA ) , Votex2 800 型漩涡混匀器 。化合物 G004 及其标准品由中国药科大学新药研究中心提供 (批 号 : 050616 ) ,内标格列苯脲由中国药品生物制品鉴 定所提供 (批号 : 135 2 9402 ) 。乙腈为色谱纯 , 德国 M erck 公司产品 。乙酸乙酯 (特级纯 ) , 江苏汉邦科 技有限公司产品 , 其余试剂均为分析纯 。 1. 2 药液的配制 静脉注射用药 : 取化合物 G004 适量 ,用少量无水乙醇超声溶解后再用生理盐水稀 - 1 释成所需浓度 , 按 3 m l ・ kg 剂量由尾静脉给药 。 灌胃给药 : 取化合物 G004 适量 ,用质量分数为 0105 的 CMC 2 Na将其配成相应浓度的混悬液 ,按 10 m l・ - 1 kg 的剂量灌胃给药 。
