2015高考生物(人教版)总复习作业：选修3 第1讲 基因工程

专题1 基因工程1.1 DNA重组技术的基本工具一、学习目标1.说出基因工程的概念。

2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。

3.说出DNA重组技术所需三种基本工具的作用。

二、学习重点和难点1.学习重点：DNA重组技术所需的三种基本工具的作用。

2.学习难点：基因工程载体需要具备的条件。

【自主预习】1、基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过______________和_______等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

由于基因工程是在__________水平上进行设计和施工的，因此又叫做______________。

2、培育转基因抗虫棉的操作过程至少需要三种工具，即_________________的“手术刀”、_______________________的“缝合针”、将体外重组好的DNA导入受体细胞的“_________”。

3、切割DNA的工具是________________，又称______。

这类酶主要是从________中分离纯化而来的。

它们能够________________________________________，并且使每一条链中特定部位的_________________的____________断开。

DNA分子经过限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——________和______。

4、将切割下来的DNA片段拼接成新的DNA分子，是靠____________来完成的。

根据酶的来源不同，可以将这些酶分为两类：一类是从________中分离得到的，称为E·coliDNA连接酶；另一类是从T4噬菌体中分离出来的，称为_____________。

这两类酶都可以恢复被限制酶切开了的____________________________。

5、质粒是一种裸露的、________、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并具有_________________的_______________分子。

生物选修三易考知识点背诵专题1 基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。

（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物（微生物）中分离纯化出来的。

（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。

（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端（中心轴线的两侧）和平末端（中心轴线）大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，SmaI识别CCCGGG序列:他们识别的核苷酸序列不同,但是切点都是在G↓C之间。

（4）比较有关的DNA酶（1）DNA水解酶：能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸，彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基（2）DNA解旋酶：能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链，作用的部位是碱基和碱基之间的氢键。

注意：使DNA解成两条长链的方法除用解旋酶以外，在适当的高温（如94℃）、重金属盐的作用下，也可使DNA 解旋。

（3）DNA聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链。

（4）DNA连接酶：是通过磷酸二酯键连接双链DNA的缺口。

注意比较DNA聚合酶和DNA连接酶的异同点。

2.“分子缝合针”——DNA连接酶(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。

②区别：E·coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来自T4噬菌体，能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。

(2)与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。

高中生物选修三专题1基因工程（含解析）一、单项选择题1.在DNA衔接酶的催化下构成的化学键和位置区分是〔〕A.氢键碱基与脱氧核糖之间B.氢键碱基与碱基之间C.磷酸二酯键磷酸与脱氧核糖之间D.磷酸二酯键脱氧核糖与碱基之间2.萤火虫的荧光素基因转入烟草植物细胞，取得了高水平的表达。

这一研讨效果说明〔〕①萤火虫与烟草植物的DNA结构基本相反②萤火虫与烟草植物共用一套遗传密码子③烟草植物体内分解了荧光素④萤火虫和烟草植物分解蛋白质的方式基本相反A.①③B.②③C.①④D.①②③④3.中国二胎政策的放开，使妥以后出现生育小高峰。

二胎孩子与头胎孩子往往在性状表现上既有相反又有差异，形成这种现象的主要缘由是A.基因突变B.自然选择C.基因重组D.染色体变异4.细菌抗药性基因存〔〕A.核DNAB.质粒C.RNAD.小的直线型DNA5.我国自主研制的复制型艾滋病疫苗，是把艾滋病病毒RNA的几个重要片段经某种处置后拔出天花病毒DNA中，构成重组病毒疫苗。

该疫苗在人体内具有复制才干，发生的抗原蛋白可以继续抚慰免疫系统，使人发生较强的免疫才干。

在该疫苗研制进程中①运用了逆转录酶②运用基因工程手腕，用质粒作载体③可应用培育的植物细胞培育天花病毒④表达了天花病毒的直接运用价值A.①②B.③④C.①③D.②④6.以下有关基因工程的表达，正确的选项是〔〕A.DNA衔接酶能将碱基对之间的氢键衔接起来B.目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发作基因突变C.限制性核酸内切酶识别序列越短，那么该序列在DNA中出现的几率就越大D.Taq 酶是PCR进程中常用的一种耐高温的DNA衔接酶7.以下有关生物工程的说法错误的选项是〔〕A.基因工程能打破物种界限,定向地改造生物性状B.蛋自质工程是应用己有的蛋自质组装成新的蛋白质C.应用植物体细胞杂交技术可培育出〝番茄一马铃薯〞D.单克隆抗体制备用到了植物细胞培育技术8.迷信家将—搅扰素基因停止定点突变导入大肠杆菌表达，使搅扰素第十七位的半胱氨酸改动成了丝氨酸，结果大大提高了—搅扰素的抗病活性，并且提高了贮存动摇性。

颗粒有金粉粒子或钨粉粒子。一些细胞能像表达自身基因
一样表达导入的外源DNA。
ห้องสมุดไป่ตู้
课堂互动探究
基因工程的基本操作工具
1.“分子手术刀 ”——限制性核酸内切酶 (限制酶),(1)存
在：主要存在于原核生物中。
(2)特性：一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 ，并且能在特定的切点上切割DNA分子。
(3)识别序列的特点：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱 基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如图，中轴线 GC 两侧的双链 DNA 上的碱基是反向对称重复排列的。如 CG GC CCAGG A 以中心线为轴，两侧碱基互补对称： 以 为轴， CG GGTCC T 两侧碱基互补对称。
(3)研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其
影响机理如图乙。据图分析，可从细胞中提取 ______进行 分子杂交，以直接检测 let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖
受到抑制，可能是由于细胞中________(填“RAS mRNA”
或“RAS蛋白”)含量减少引起的。
解析：(1)过程①为重组载体的构建过程，需要限制性
4 ． (2012·福建高考 ) 肺细胞中的 let-7基因表达减弱，
癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工
程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞 的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图甲。
请回答：
(1) 进行过程①时，需用 ________ 酶切开载体以插入 let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱 动let-7基因转录，该部位称为________。 (2)进行过程②时，需用________酶处理贴附在培养皿 壁上的细胞，以利于传代培养。

高中生物选修三现代生物技术专题全套教学案含单元检测专题一基因工程本专题包括基因工程的发展过程；DNA重组技术的基本工具；基因工程的基本操作程序；基因工程的应用；蛋白质工程的崛起等部分。

b5E2RGbCAP基因工程是一门20世纪70年代以来新兴的生物科学与工程技术相结合的科学。

也叫DNA重组技术。

它是按照人类的意愿，将某种基因有计划地转移到另一种生物中去的新技术。

现已成为生命科学中发展最快、最前沿的学科，有关生物工程的内容，己成为近几年生物高考的热点内容。

其中基因工程的操作工具和基因工程操作的基本步骤以及基因工程的成果及应用前景将是近年命题的新热点plEanqFDPw基因工程操作的三种基本工具，四项基本操作程序等内容将成为考查学生分析综合问题能力的材料；另外，针对生物工程在医药、食品、农林等高新技术产业中的应用，运用有关的生物知识指导生产和实践，对有关的生产方案、生产过程进行分析、综合评价，这也是高考的另一热点。

有关基因工程的备考，今后高考中可能涉及到本考题的热点问题，有如下几个方面：DXDiTa9E3d1•基因工程的基本步骤：目的基因的获取、基因表达运载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因表达的检测与鉴定几个步骤。

RTCrpUDGiT2•转基因技术的应用：（1）转基因动植物，如抗虫、抗病、抗逆、抗除草剂，抗倒伏的植物；产肉、产蛋量高、生长快、耐粗饲料的动物；此外，转基因动物为人类异体器官移植提供了可能。

（2）基因药物：如人造胰岛素、人造生长激素、溶血栓的尿激酶原等。

（3）基因治疗：美国对复合型免疫缺陷症的治疗；糖尿病的治疗：许多科学家希望利用基因工程手段将正常的合成胰岛素基因导入患者体内，并准确表达，以此来修复或替代失去正常功能的胰岛B细胞，从而维持机体血糖平衡。

（4）利用遗传工程培养转基因固氮绿色植物的展望。

地球上的固氮途径有三条：生物固氮、工业固氮、高能固氮。

其中，生物固氮是植物可利用氮的主要来源。

• 解析 (1)①依据图解特点，第四轮循环产物中可以得 到16个DNA分子，其中有16个含引物B的单链、15个 含引物A的单链，以及一个不含引物A的模板链。②从 图解原DNA的引物A、B的比例关系分析，经三次复制 后开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。(2)比 较第一组引物的碱基顺序，可以发现引物Ⅰ与引物Ⅱ 有两对碱基能发生互补配对，形成局部双链结构而失 效；而第二组引物中，引物Ⅰ′折叠后会发生碱基互 补配对而导致失效。(3)在PCR反应体系中，引物首先 与模板DNA单链互补配对形成局部双链DNA片段，然 后在DNA聚合酶的作用下将单个脱氧核苷酸依次连接 到引物链上。(4)分析本小题中图解可知，用EcoR V切 割
• 考情分析 基因工程是高考中的一个常考考点，主要 考查工具酶和载体的功能、基因工程操作的基本步骤 和各个步骤中的一些关键操作、基因工程的应用等。 考查基因工程，既可以单独考查，也可以与遗传、变 异和蛋白质工程等知识结合起来综合考查。考题中有 时会出现基因工程的相关图解，可以是基因工程的整 个操作过程示意图，也可以只是基因工程中某个操作 步骤的示意图。对图解的识别是解答这类试题的关键 之一。
• 三、听英语课要注重实践
• 英语课老师往往讲得不太多，在大部分的时间里，进行的师生之间、学生之间的大量语言实践练习。因此，要上好英语课，就应积极参加语言实践活 动，珍惜课堂上的每一个练习机会。
2019/7/31
最新中小学教学课件
22
thank
you!
2019/7/31
最新中小学教学课件
23
合成的药物蛋白与天 基因表达
然蛋白质相同
受体细胞
动物的受精卵
工程菌 细菌或酵母菌等生物基因 的结构与人类基因的结构 有较大差异 细菌细胞内没有内质网、 高尔基体等细胞器，产生 的药物蛋白可能没有活性

基因工程1．(2015·新课标全国卷Ⅱ)已知生物体内有一种蛋白质(P)，该蛋白质是一种转运蛋白，由305个氨基酸组成。

如果将P分子中158位的丝氨酸变成亮氨酸，240位的谷氨酰胺变成苯丙氨酸，改变后的蛋白质(P1)不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性。

回答下列问题。

(1)从上述资料可知，若要改变蛋白质的功能，可以考虑对蛋白质的________进行改造。

(2)以P基因序列为基础，获得P1基因的途径有修饰________基因或合成________基因。

所获得的基因表达时是遵循中心法则的，中心法则的全部内容包括____________的复制；以及遗传信息在不同分子之间的流动，即：________________________。

(3)蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过____________和____________，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质，之后还需要对蛋白质的生物________进行鉴定。

[解析](1)蛋白质的功能与结构相关，若要改变蛋白质的功能，需要对其结构进行改造。

(2)确定目的基因的碱基序列后，可通过对现有基因进行改造或者重新合成来获得目的基因。

中心法则的内容包括遗传信息的复制、转录、逆转录和翻译。

(3)蛋白质工程的基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过设计蛋白质的结构和推测氨基酸序列，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列。

获得蛋白质之后要对蛋白质的生物功能进行鉴定。

[答案](1)氨基酸序列(或结构)(2)P P1DNA和RNA(或遗传物质) DNA→RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白质(或转录、逆转录、翻译)(3)设计蛋白质的结构推测氨基酸序列功能2．(2015·天津河西一模)萤火虫发光是体内荧光素酶催化一系列反应所产生的现象。

如果荧光素酶存在于植物体内，也可使植物体发光。

一直以来荧光素酶的唯一来源是从萤火虫腹部提取。

选修3 现代生物科技专题第1讲 基因工程考点一| 基因工程的基本工具1．基因工程的概念及优点(1)概念：按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA 重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

(2)优点①与杂交育种相比：克服了远缘杂交不亲和的障碍。

②与诱变育种相比：定向改造生物的遗传性状。

2．基因工程的基本工具(1)限制性核酸内切酶(简称：限制酶)①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。

②作用：识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并切开特定两个核苷酸之间的磷酸二酯键。

③结果：产生黏性末端或平末端。

(2)DNA 连接酶(3)载体①——质粒常用载体有特殊的标记基因有一个至多个限制酶切割位点 ②其他载体：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。

(1)切割目的基因和载体时用同一种限制酶的目的是产生相同的黏性末端。

(2)将一个基因从DNA 分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个黏性末端。

1．限制酶(1)识别序列的特点：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如，以中心线为轴，两侧碱基互补对称；CCAGG 以A 为轴，两侧碱基互补对称。

(2)切割后末端的种类2．限制酶和DNA连接酶的关系(1)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。

(2)限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

(3)DNA连接酶起作用时，不需要模板。

3．载体的作用(1)目的①目的基因稳定存在且数量可扩大。

②可携带多个或多种外源基因。

③便于重组DNA的鉴定和选择。

(2)作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。

(3)利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。

视角 1 结合基因工程的过程考查三种操作工具1．(2016·全国丙卷)图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了Eco R Ⅰ、Bam H Ⅰ和Sau3A Ⅰ三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图(b)为某种表达载体的示意图(载体上的Eco RⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的)。

_花__粉__管__通___道__法__；
②导入动物细胞的常用方法：□33 _显__微__注__射__技__术_；
③导入微生物细胞的常用方法：□34 __C_a_2_＋_处__理__法__。
3．将目的基因导入受体细胞
(1) 转 化 ： 目 的 基 因 进 入 受 体 细 胞 内 ， 并 且 在 受 体 细 胞 内 维 持 □30
分子设计。 3．操作手段：基因修饰或基因合成。
4．设计流程：预期蛋白质功能→设计预期蛋白质结构→推测应有的□41 _氨__基__酸_______序列→找到对应的□42 __脱__氧__核__苷__酸__序列(基因)。
基础自测
• 1．限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒是基因工程中常用的三种工 具酶。( )
• 2．E·coliDNA连接酶既可连接平末端，又可连接黏性末端。( ) • 3．目的基因导入双子叶植物一般采用农杆菌转化法。( ) • 4．为培育抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵
为受体。( ) • 5．检测目的基因是否导入受体细胞可用抗原—抗体杂交技术。( ) • 6．蛋白质工程的目的是改造或合成人类需要的蛋白质。( ) • 7．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变
常利用质粒作为运载体，另外噬菌体和动植物病毒也可作 为运载体。(6)大肠杆菌作为受体细胞时，常用Ca2＋处理， 使之成为能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞。
微考点二 基因工程的操作过程
• 1.目的基因的获取 • (1)直接分离：从因的常用方法：
答案：B
• 对点微练1 限制性核酸内切酶MunⅠ和限制性核酸内切酶 EcoRⅠ的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和— G↓AATTC—。如图表示四种质粒和目的基因，其中箭头所

选修三现代生物科技专题第1讲基因工程及其安全性(含生物武器)1．利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需的产品。

下列选项中能说明目的基因完成表达的是() A．棉花细胞中检测到载体上的标记基因B．山羊乳腺细胞中检测到人的生长激素基因C．大肠杆菌中检测到人的胰岛素基因转录出的mRNAD．酵母菌细胞中提取到人的干扰素解析目的基因完成表达是指目的基因在细胞中合成相应的蛋白质，在酵母菌细胞中提取到人的干扰素，说明导入酵母菌中的人的干扰素基因完成了表达。

答案 D2．对转基因生物的安全性发生争论，与科学发展水平的限制有密切关系。

下面关于基因的相关知识中，不可能是争论的原因的是() A．对基因的结构和调控机制等的了解仍相当有限B．所转移的基因有不少是异种生物之间的基因转移C．外源基因插入宿主基因组的部位往往是随机的D．DNA重组技术需要有精心设计的“分子工具”解析在DNA重组技术中使用的“分子工具”包括限制性内切酶、DNA连接酶和运载体，人们可以根据需要选择使用，不可能是争论的原因。

答案 D3．基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。

已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。

根据图判断下列操作正确的是()A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割解析目的基因若用限制酶Ⅰ切割时，只能在目的基因的一侧切开，而不能将其切下；质粒若用限制酶Ⅱ切割，两种标记基因均将被破坏，所以只能用限制酶Ⅰ切割质粒。

答案 D4．将人的干扰素基因通过基因定点突变，使干扰素第17位的半胱氨酸改变成丝氨酸，改造后的干扰素比天然干扰素的抗病毒活性和稳定性显著提高，此项技术属于() A．蛋白质工程B．细胞工程C．胚胎工程D．生态工程解析蛋白质工程是利用基因工程手段，包括基因的定点突变和基因表达对蛋白质进行改造，以期获得性质和功能更加完善的蛋白质分子。

【人教版】生物选修三：1.3《基因工程的应用》课后习题(含答案)(word版可编辑修改)【人教版】生物选修三：1.3《基因工程的应用》课后习题(含答案)(word版可编辑修改)编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（【人教版】生物选修三：1.3《基因工程的应用》课后习题(含答案)(word版可编辑修改)）的内容能够给您的工作和学习带来便利。

同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。

本文可编辑可修改，如果觉得对您有帮助请收藏以便随时查阅，最后祝您生活愉快业绩进步，以下为【人教版】生物选修三：1.3《基因工程的应用》课后习题(含答案)(word版可编辑修改)的全部内容。

【人教版】生物选修三：1.3《基因工程的应用》课后习题(含答案)(word版可编辑修改)【优化设计】2018-2019学年高中生物 1。

3基因工程的应用课后习题新人教版选修3课时演练·促提升A。

黑麦与六倍体普通小麦杂交,杂种通过秋水仙素或低温处理得到八倍体小黑麦B.将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌,获得能产生人干扰素的菌株C.用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变,通过筛选获得青霉素高产菌株D。

自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上解析:A选项八倍体小黑麦的培育利用的是染色体变异。

C选项利用的原理是基因突变。

D选项属于基因重组，但是发生在自然条件下，不符合基因工程“按照人们的愿望,进行严格的设计”的概念。

答案：B2。

下列关于基因工程的说法中,正确的是( ）A.基因工程的设计和施工是在细胞水平上进行的B。

基因工程都是在生物体外完成的C。

基因工程是对蛋白质进行的操作D。

基因工程能打破物种间的界限,定向改造生物性状解析:基因工程是DNA分子水平上进行设计和施工的。

(3)将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植 物________的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。 要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再 生植株中该基因的________，如果检测结果呈阳性，再在田 间试验中检测植株的________是否得到提高。 (4)假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与 不耐旱植株的数量比为 3∶1 时，则可推测该耐旱基因整合 到了________________________________________________ (填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”)。
受体细胞
体细胞
受精卵
பைடு நூலகம்
原核细胞
转化 过程
将目的基因插入 将含有目的基因
到Ti质粒的T—
的表达载体提纯 Ca2＋处理细胞 →感受态细胞→
DNA上→农杆 →取卵(受精
重组表达载体与
菌→导入植物细 卵)→显微注射 感受态细胞混合
胞→整合到受体 →受精卵发育→
→感受态细胞吸
细胞的染色体 获得具有新性状
DNA上→表达 的动物
化学合成法：针对已知核苷酸序列的较小基因 (2)人工合成 反转录法：以 RNA 为模板，在反转录酶的作
用下人工合成
2．基因表达载体的构建 (1)基因表达载体的组成及作用：
(2)构建过程：
3．将目的基因导入受体细胞
生物种类 植物细胞
动物细胞
微生物细胞
常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 感受态细胞法
(4)若将图 2 中质粒和目的基因 D 通过同种限制酶处理后进行连 接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是________。在导入重 组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加 ________的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠 杆菌菌株中目的基因 D 不能正确表达，其最可能的原因是 ______________________________________________________。

基因工程的基本操作程序
1．目的基因的获取。 (1)直接分常用方法：
①已知核苷酸序列的较小基因，直接利用 DNA 合成仪
用化学方法合成，不需要模板。
②以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成。
(3)PCR技术与DNA复制的比较： 比较项目 原理 PCR技术 DNA复制
遗传物质相对较少。
(4)一般情况下，用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因 的片段，但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这 样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的连接。
(5)目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定 和表达的过程，称为转化。转化的实质是目的基因整合到受体 细胞染色体基因组中。 (6)不熟悉标记基因的种类和作用：标记基因的作用 ——筛 选、检测目的基因是否导入受体细胞，常见的有抗生素抗性基 因、发光基因(表达产物为带颜色的物质)等。
(2)具备的条件：
①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。
②有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。
③具有特殊的标记基因，以便进行筛选。
(3)种类： ①质粒：一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA 之外，能够自我复制的很小的双链环状DNA分子。 ②λ噬菌体的衍生物。 ③动植物病毒。
♨特别提醒：
基 因 工 程
基因工程的工具 1．与DNA分子相关的酶。 (1)几种酶的比较： 项目 种类
作用底物 DNA分子 DNA分子片 段
作用部位 磷酸二酯键 磷酸二酯键
作用结果
形成黏性末端 或平末端
限制酶 DNA连接酶
形成重组 DNA分子
DNA聚合酶
脱氧核苷酸
磷酸二酯键
形成新的 DNA分子
DNA(水解)酶
巧辨基因工程操Leabharlann 工具的8个易错点(1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。