紫外分光光度法测定苯酚的含量
实验题目：紫外分光光度法测定苯酚的含量
一、实验目的
1、掌握紫外光谱法进行物质定性、定量分析的基本原理；
2、学习UV8500型紫外--可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理
含有苯环和共轭双键的有机化合物在紫外区有特征吸收。物质结构不同对紫外及可见光的吸收具有选择性。其中，最大吸收波长λ、摩尔吸收系数ε及吸收曲线的形状不同是进行物质定性分析的依据。
由于在λmax处吸光度A有最大值，在此波长下A随浓度的变化最为明显，方法的灵敏度最大，故在紫外分光光度计上作苯酚水溶液（试液）的吸收光谱曲线，再由曲线上找出λmax，据此对物质进行定量分析。
用紫外分光光度计进行定量分析时，若被分析物质浓度太低或太高，可使透光率的读数扩展10倍或缩小10倍，有利于低浓度或高浓度的分析，其方法原理是依据朗伯-比耳定律：A=εbc。
三、主要仪器与试剂
主要仪器：UV8500型紫外-可见分光光度计；1cm石英吸收池2个；50mL比色管5支；5mL、10mL移液管各1支；100mL、250mL烧杯各1个；吸耳球1个。
试剂：苯酚标准溶液：100mg/L；
样品溶液（未知浓度）
四、实验步骤
1、定性分析
(1)、分析溶液的配制
取5支50mL的比色管，用移液管分别准确加入1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL浓度为100mg/L的苯酚标准溶液，用去离子水稀释至25mL刻度，摇匀。实验数据记录于标准表中。
(2)、确定最大吸收波长 取稀释后浓度为8 mg/L的苯酚标准溶液，在UV8500型紫外-可见分光光度计上，用1cm石英吸收池，去离子水作参比溶液，在200~330nm波长范围内进行扫描，绘制苯酚的吸收曲线。在曲线上找出λmax1、λmax2。
2、 定量分析
(1)、标准曲线的制作
其4.1.1中各浓度的苯酚标准溶液，用1cm石英吸收池，去离子水作参比溶液，在选定的最大波长下，按顺序从低至高浓度依次测量各溶液的吸光度，实验数据记录于标准表中。以吸光度对浓度作图，作出标准工作曲线。
紫外分光光度法测定羟苯乙酯溶液的含量
羟苯乙酯溶液是含5%羟苯乙酯的乙醇溶液，用于液体制剂的防腐。中国医院制剂规范并没有对该制剂进行含量测定，为了在配制液体制剂时取用量的准确性，笔者采用紫外分光光度法测定羟苯乙酯溶液的含量，现报道如下。
1 仪器与试药
UV-2401PC型紫外分光光度计（日本岛津）；羟苯乙酯（广东省台山市新宇制药厂，含量为99.9%，批号为040602）；乙醇为分析纯；羟苯乙酯溶液（规格为500 ml：25 g，本院制剂室生产）。
2 方法与结果
2.1 测定波长的选择：精密称取60℃干燥至恒重的羟苯乙酯适量，用乙醇溶解并稀释成每1 ml中约含10 μg的羟苯乙酯溶液，以乙醇为空白，于200~400 nm波长范围内绘制羟苯乙酯的紫外吸收光谱图。结果羟苯乙酯在258 nm波长处有最大吸收。故选择258 nm作为羟苯乙酯的测定波长。
2.2 标准曲线的绘制：精密称取60℃干燥至恒重的羟苯乙酯10 mg，置100 ml量瓶中，用乙醇溶解稀释至刻度，摇匀。分别取稀释液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0
ml置100 ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。以乙醇为空白，分别在258 nm波长处测定吸收度，经计算得回归方程A=0.1035C+0.0041，r=0.9998（n=5），在2~10 μg·ml-1浓度范围内吸收度A与浓度C呈良好的线性关系。
2.3 回收率试验：分别精密称取80℃干燥至恒重的度米芬适量，按处方及工艺配制成度米芬溶液，按样品测定项下方法测定含量并计算回收率。结果见表1。
2.4 样品测定：取三个不同批号的样品，分别用乙醇稀释成含10 μg·ml-1的羟苯乙酯溶液，以乙醇位空白，分别在258 nm波长处测定吸收度。根据回归方程，计算含量，结果分别占标示量的98.01%、99.42%、101.65%。
3 讨论
该制剂采用紫外分光光度法测定羟苯乙酯的含量，具有操作简单，结果准确、可靠等优点，适合于医院制剂室对其进行质量控制。
1 / 3 紫外吸收光谱法测定苯酚含量
一、实验目的
1、了解紫外可见分光光度计的结构、性能与使用方法
2、熟悉定性、定量测定的方法
二、实验原理
紫外分光光度法，又称紫外吸收光谱法，它是研究分子吸收200.0~800.0nm波长范围内的吸收光谱。紫外吸收光谱主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，是研究物质电子光谱的分析方法。通过测定分子对紫外光的吸收，可以对大量的无机物和有机物进行定性和定量测定。
苯酚已经被列入有机污染物的黑名单。但在一些药品、食品添加剂、消毒液等产品中均含有一定量的苯酚。如果其含量超标，就会产生很大的毒害作用。苯酚在紫外光区的最大吸收波长λmax=270nm。对苯酚溶液进行扫描时，在270nm处有较强的吸收峰。
定性分析时，可在相同的条件下，对标准样品和未知样品进行波长扫描，通过比较未知样品和标准样品的光谱图对未知样进行鉴定。在没有标准样品的情况下，可根据标准谱图或有关的电子光谱数据表进行比较。
定量分析是在270nm处测定不同浓度苯酚的标准样品的吸光值，并绘制标准曲线。再在相同的条件下测定未知样品的吸光度值，根据标准曲线可得出未知样中苯酚的含量。
三、仪器与试剂
1．紫外可见分光光度计
2．容量瓶（1000ml、250ml、50ml）
3．吸量管（5ml、10ml）
4．苯酚（AR）
于5支50ml的容量瓶中，用吸量管分别加入0.5 ml、2ml、5ml、10ml、20ml的10ug/ml苯酚标准溶液，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
四、最大吸收波长的选择
在标准系列溶液中任取一种，以水为参比，分别在波长200~300nm之间以10为间隔测定其吸光度，在吸光度最大值附近以间隔2nm为单位测定，直至找到最大吸收波长。
五、数据记录与结果分析
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(1)、标准表
标准溶液编号 250nm 260 nm 270nm 280nm 290
水中挥发酚的测定
一、实验目的和要求
（1）了解酚污染对水环境的影响
（2）掌握用蒸馏法预处理水样的方法和用分光光度法测定挥发酚的实验技术
（3）简单阐述测定方法原理，分析影响实验测定准确度的因素
二、实验原理
酚是水体中的重要污染物，会影响水生生物的正常生长，使水产品发臭。水中酚含量超过0.3毫克/升时，可引起鱼类的回避。水体中酚的种类较多，部分酚可以挥发，本实验仅测定可被蒸馏的挥发酚。
在碱性条件和氧化剂铁氰化钾作用下，酚类与4-氨基安替比林反应，生成桔红色的吲哚酚安替比林染料，在510nm处有最大吸收。若用氯仿萃取此染料，可以增加颜色的稳定性，提高灵敏度，在460nm处有最大吸收。
该方法可测定苯酚及邻、间位取代的酚，但不能测定对位有取代基的酚。由于样品中各种酚的相对含量不同，因而不能提供一个含混合酚的通用标准。通常选用苯酚作标准，任何其它酚在反应中产生的颜色都看作苯酚的结果。取代酚一般会降低响应值，因此，用该方法测出的值仅代表水样中挥发酚的最低浓度。
三、实验仪器和试剂
1、 实验仪器
500ml全玻璃蒸馏器、1cm和3cm比色皿、722型分光光度计
2、 实验试剂
无酚水、硫酸铜溶液、磷酸溶液、0.02mol/L溴酸钾-溴化钾溶液
0.025mol/L硫代硫酸钠标准溶液
NH3·H2O- NH4Cl缓冲溶液pH=9.8、
4-氨基安替比林溶液、酚标准储备液、
酚标准中间液、酚标准使用液、铁氰化钾溶液、
4-氨基安替比林溶液、氯仿、
Na2S2O3·5H2O、Na2CO3、KIO3溶液 四、实验步骤
1、 预蒸馏
量取250ml待测水样于500ml蒸馏瓶中，加入2滴甲基橙指示剂。用磷酸溶液将水样调至呈橙红色，此时pH约等于4，加入5.0ml硫酸铜溶液及数粒玻璃珠，加热蒸馏，以250ml量筒或容量瓶收集馏出液，待蒸馏出约225ml液体后，停止加热，液面静止后，往蒸馏瓶中加入25ml蒸馏水，继续蒸馏到馏出液250ml
