鳕鱼皮明胶的止血活性和机理研究
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鳕鱼皮胶原多肽护肤活性研究的开题报告
鳕鱼皮胶原多肽护肤活性研究的开题报告
开题报告：
一、选题背景
随着人们生活水平的不断提高，美容美肤已成为当今社会普遍关注
的话题。
特别是对于女性而言，护肤已成为日常生活中不可或缺的一部分。
在传统护肤方法中，胶原蛋白作为一种重要的成分，具有保湿、抗皱、紧致肌肤等功效。
而鳕鱼皮胶原肽，除具备传统胶原蛋白的功能外，更含有大量的多肽物质，具有更好的生物活性和更长时间的保湿效果。
因此，对鳕鱼皮胶原多肽护肤活性的研究具有重要的意义和应用前景。
二、研究目的
本课题旨在研究鳕鱼皮胶原多肽在化妆品领域的应用，探究其在保湿、抗皱、提升肤质等方面的护肤活性，为发掘海洋资源、研发高效护
肤品提供理论和实践支持。
三、研究内容
1. 鳕鱼皮胶原多肽的提取方法：通过酸、碱、加热等方法提取鳕鱼
皮中的胶原多肽，并对其成分组成和理化性质进行检测分析。
2. 护肤活性的评价：通过不同的体外和体内实验，比较鳕鱼皮胶原
多肽和传统胶原蛋白在保湿、抗皱、紧致肌肤等方面的差异，探究其在
肌肤护理中的活性作用和优势。
3. 加工制备：根据实验结果，研究鳕鱼皮胶原多肽在化妆品中的应
用及加工制备技术，并进行产品试制和评估。
四、研究意义
本课题的研究成果将在满足人们美丽需求的同时，挖掘海洋资源，
促进经济发展和生态保护。
同时，对于美容美肤行业的发展有重要促进
作用，促进企业实现技术升级和创新发展。
鳕鱼皮源医用复合止血敷料的制备及性能研究
鳕鱼皮源医用复合止血敷料的制备及性能研究宋雪;刘晗;李昭璇;李八方;侯虎【期刊名称】《南方水产科学》【年(卷),期】2022(18)2【摘要】以太平洋鳕(Gadus macrocephalus)鱼皮明胶为原料,通过复配海藻酸钠得到一种可吸收复合止血敷料,并对其机械性能、止血效果、止血机理和生物相容性进行评价。
结果表明,明胶质量浓度为10 mg·mL^(-1)时制备的止血敷料具有较高的机械强度。
体内止血评价结果显示,复合止血敷料对大鼠股动脉止血、肝创面止血和断尾止血模型均有良好的效果,止血时间分别为(64±9)、(108±4)和(230±25)s,与市售明胶海绵的止血效果相当。
复合止血敷料可缩短活化部分凝血活酶时间(Activated partial thromboplastin time,APTT)和凝血酶时间(Thrombin time,TT),激活内源性凝血系统和共同性凝血途径,以及促进血栓烷素B;(TXB;)、血小板第四因子(PF4)和P-选择素的释放,达到快速止血效果。
生物相容性实验结果证实,该复合敷料无急性毒性、无刺激性且溶血率小于5%,达到医用材料的行业标准。
该研究结果为开发新型医用敷料并实现鳕鱼皮高值化利用提供了参考和理论依据。
【总页数】8页(P66-73)【作者】宋雪;刘晗;李昭璇;李八方;侯虎【作者单位】中国海洋大学食品科学与工程学院;青岛海洋科学与技术试点国家实验室【正文语种】中文【中图分类】R318.08【相关文献】1.甲壳素/丝蛋白纤维复合医用生物敷料的制备及性能2.壳聚糖／黏胶／涤纶水刺复合医用敷料的制备及其吸湿性能的研究3.水凝胶基医用棉织物敷料的制备及抗菌性能研究4.海藻酸钙纤维制备新型医用止血敷料的评价研究5.海藻酸钙/聚乙烯醇复合医用敷料的制备和性能因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
动物源性生物敷料的研究进展
动物源性生物敷料的研究进展作者：颜艳军来源：《中国社区医师》2019年第08期摘要烧伤、创伤、溃疡等造成的皮肤损伤患者数量庞大，若创面不能及时覆盖，将造成体液丢失、感染、疼痛、伤口经久不愈，并可能形成严重疤痕乃至残疾。
随着科学技术的发展，人们对敷料的要求也不仅仅局限于对于伤口的覆盖，敷料更应该辅助伤口的愈合。
与其他材料敷料相比，动物源性生物敷料与创面相容性更好，能与创面紧密连接，保持湿润，缩短修复时间，促进伤口的修复。
本文就动物源性生物敷料，尤其是猪源性生物敷料分类、特点、应用及研究进展进行综述。
关键词创面愈合;动物源性生物敷料;组织工程生物敷料皮肤损伤可能由皮肤机械性创伤、手术、烧伤、血液循环不畅、老化引起。
全世界每年有>1100万严重烧伤患者，若创面不能及时覆盖将造成体液丢失、感染、疼痛、伤口经久不愈，并可能形成严重瘢痕乃至残疾。
早在远古时期，人们就已经懂得用植物的叶子、动物皮，甚至沙上、雪等覆盖人体创面，以起到止血和保护受伤部位的作用[1]。
随着对伤口愈合研究的不断深入，人们逐渐认识到覆盖创面的敷料不仅仅是为了物理保护，还必须能促进创面愈合。
随着材料科学的发展，可用作敷料的生物材料日益增多，敷料的种类划分方法也多种多样[2]，其根据材料可分为传统敷料和生物敷料。
传统敷料指惰性敷料，如纱布、棉垫、绷带等，虽然能够暂时覆盖创面，阻止细菌入侵，但是会粘连新生的肉芽组织，需要经常更换，且无法主动参与到伤口的修复中，给患者带来了巨大的痛苦。
牛物敷料是Winter在20世纪60年代初提出的创伤修复“湿润愈合”理论基础上发展起来的，主要从保持愈合环境湿润、低氧或无氧微酸环境、酶学清创功能、疼痛减轻4个方面促进伤口愈合，具有良好的组织相容性、可降解性、保湿性等优势;根据敷料材质来源可分为天然牛物敷料和人工合成敷料。
其中天然生物辅料又可细分为动物源性牛物敷料和非动物源性生物敷料[3]。
动物源性生物敷料能够更好地贴附在伤口上，保持伤口的湿润，促进伤口的愈合，主要包括各种动物皮肤基质敷料以及动物来源的组织工程敷料等。
新西兰鳕鱼皮明胶提取工艺的研究
新西兰鳕鱼皮明胶提取工艺的研究新西兰鳕鱼皮明胶是一种优质、珍稀的水产淀粉，具有营养价值高、水分低、易于提取等优点，可用于食品添加剂、保健产品和药物的生产和研发，因此引起了众多研究者的关注。
本文综述国内外新西兰鳕鱼皮明胶提取工艺的研究内容及最新进展，旨在深入探讨该项技术，为今后研究及开发提供参考。
一、新西兰鳕鱼皮明胶的分类以及性能新西兰鳕鱼皮明胶是以新西兰鳕鱼皮为原料加工得到的膨松明胶，主要成分为非晶态淀粉和聚合物组成的聚糖胶体。
新西兰鳕鱼皮明胶是一种混合性胶液，具有自控聚集、不易热稳定性高、膨松性好、水溶性好、低蠕变性和流变性等特点，广泛应用于食品添加剂、保健产品和药物的生产和研发。
二、新西兰鳕鱼皮明胶提取工艺的研究（1）化学提取工艺。
目前的新西兰鳕鱼皮明胶提取大多以化学方式完成，其基本思路是利用有机溶剂抑制了蛋白质和多糖、淀粉酶的活性，然后加入一定在碱溶剂，将蛋白质和多糖、淀粉酶解聚，增强糖分子的显示活性，使其能与有机溶剂混溶，进而从溶液中析出新西兰鳕鱼皮明胶。
常见的有机溶剂有苯、乙醇、乙醚、甲醇等，通常所采用的碱溶剂有氢氧化钠、氢氧化钾等。
（2）物理提取工艺。
物理提取的基本思路是利用机械作用、微波等方法，先把新西兰鳕鱼皮中的组织紊乱，然后利用酶作用，解析明胶中的淀粉和聚合物，最后经过细胞膜渗透和快速沉淀等步骤，从而提取出新西兰鳕鱼皮明胶。
物理提取的优点在于把握更小，不会造成化学伤害，而且可以有效的提高提取率，但其缺点则在于需要大量的设备，而且投入资金较大。
三、新西兰鳕鱼皮明胶提取工艺的进展（1）温度调控技术。
近些年来，研究者们发现，新西兰鳕鱼皮明胶提取过程中，温度变化会影响淀粉酶的活性，从而影响明胶最终产率，因此，研究者们开始研究和探讨一种新的温度调控技术，以期精准控制新西兰鳕鱼皮明胶的提取过程，同时降低提取成本，提高明胶的最终产率。
（2）新型酶催化技术。
新型酶催化技术是指利用新型的酶催化技术进行新西兰鳕鱼皮明胶提取，这种技术可以利用酶的特性进行有效的分解，有效减少新西兰鳕鱼皮明胶的提取时间，降低提取成本，同时保证产品质量。
水产动物明胶的研究进展
第33卷第3期明胶科学与技术2013年9月r11le sci ence鲫d T echno l o盯of G el a6n V01．33．N o．3 Sept．2013．水产动物明胶的研究进展张强王倩倩+陆剑锋吕顺叶应旺姜绍通林琳+合肥工业大学生物与食品工程学院，安徽合肥，230009摘要：根据近年来国内外水产动物明胶的研究现状，本文对水产动物明胶的提取工艺，水产动物明胶的胶凝特性、成膜性、乳化性及发泡性，以及水产动物明胶在食品、化妆品及生物医学领域中的应用进行了综述。
关键词：水产动物；明胶；提取；特性；应用一直以来，明胶(gel al i n)被广泛用于许多工业领域中，如食品、材料、医药、摄影。
明胶是胶原的变性产物，通常来源于猪或牛的骨和皮。
A．G W a r d这样定义明胶，即明胶是胶原经温和而不可逆断裂后的主要产物，是动物的结缔组织或表皮组织中的胶原经预处理转化，再经适当温度提取得到的水溶性、能凝冻的一类物质的总称¨J。
明胶具有一系列优异的理化性质及生理功能，它不仅来源广泛、功能独特、具有较强的凝胶和溶胶特性而且还具有低抗原性、可降解性以及突出的表面活性。
明胶分类方法有多种：按照处理方法不同，可分为酸法明胶(A型明胶)、碱法明胶(B 型明胶)和酶法明胶呤1；按照品质不同可以分为高档明胶(㈨n)，低档明胶和骨胶(国外将质量均较差的低档明胶和骨胶通称为G l ue)；按照用途不同可分为食用明胶、药用明胶、照相明胶和工业明胶等。
据报道，全球每年明胶的产量近32．6万吨，其中猪皮明胶产量最高，占明胶总产量的46％，其次是牛皮明胶，占29．4％，骨胶占23．1％，其它来源明胶占1．5％【3】。
然而近年来疯牛病及哺乳动物口蹄疫不断出现，给如医药、食品、化妆品等以明胶原料的产业带来了极大的恐慌和负面影响。
并且由于存在宗教信仰的差异和素食人群市场的逐渐扩大，国内外学者都开始探讨从鱼类加工下脚料中提取明胶蛋白，期望能够替代哺乳动物明胶应用于各种领域H J。
鳕鱼皮胶原蛋白肽的制备与活性研究进展
鳕鱼皮胶原蛋白肽的制备与活性研究进展沈楚仪;杨最素【摘要】鳕鱼皮富含胶原蛋白及胶原蛋白肽,经蛋白酶酶解获得的胶原蛋白肽,具有分子量小、易乳化、适热能力增加及易被肠道吸收等优势.主要阐述鳕鱼皮胶原蛋白肽的性质、功效等,以期为鳕鱼皮胶原蛋白肽的综合利用提供参考.%Cod skin is rich in collagen and collagen peptides.The collagen peptides obtained by protease hydrolysis have the advantages of small molecular weight,easy emulsification,increased thermal adaptability and easy absorption by intestinal tract.In this paper,the properties and efficacy of cod skin collagen peptide were mainly discussed,in order to provide reference for the comprehensive utilization of cod skin collagen peptide.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2018(046)001【总页数】3页(P16-17,51)【关键词】鳕鱼皮;胶原蛋白肽;制备;功效【作者】沈楚仪;杨最素【作者单位】浙江海洋大学东海科学技术学院,浙江舟山316000;浙江海洋大学食品与医药学院,浙江舟山316000【正文语种】中文【中图分类】TS201.2+1近年来，我国水产养殖、远洋捕捞及加工产业得到迅猛发展，鳕鱼作为世界上捕捞量较大的鱼品种之一，其在每年的加工过程中产生的鱼皮量约为4万t。
鳕鱼皮中含有大量的胶原蛋白，具有很好的营养价值，但鳕鱼皮作为水产企业在鳕鱼加工中的下脚料，常被废弃或用于制作鱼粉等低值产品，综合利用水平不高，造成大量蛋白质资源的浪费和环境压力。
鳕鱼胶的功效与作用
鳕鱼胶的功效与作用新西兰深海鱿鱼明胶是一种非常凝胶状的鱼明胶。
女性需要不断补充，因为随着年龄的增长，面部不再那么有弹性，药物不如辅食，汤，白开水，炖牛奶。
鳕鱼胶的功效与作用，人体补充剂、合成蛋白质的原料，易于吸收和利用。
能有效提高免疫力、对癌细胞的抑制作用、活化细胞、防止皮肤老化去除皱纹，活化骨骼和肌肉，减缓关节炎和酸痛，特别是血液补充剂、止血、滋阴、保湿等方面有更明显的效果一、鳕鱼胶的营养价值及功效新西兰深海鳕鱼胶是非常有胶质的一款鱼胶，女人需要不断的补充，因为随着年龄的增长，脸上不再那么有弹性，药补不如食补，煲靓汤，煮糖水，炖牛奶样样OK，总有一种适合你的口味。
鳕鱼含丰富蛋白质、维生素A、维生素D、钙、镁、硒等营养元素，营养丰富、肉味甘美;鱼肉中含有丰富的镁元素，对心血管系统有很好的保护作用，有利于预防高血压、心肌梗死等心血管疾病;肉：活血祛瘀;鳔：补血止血;骨：治脚气;肝油：敛疮清热消炎。
主治跌打损伤，瘀伤，脚气，火伤，溃疡等。
由于鱼胶含有大量胶汁，又具有活血、补血、止血、御寒祛湿等功效，所以能提高面利益，对于体质虚弱，真阴亏损、精神过劳的人士，作为进补更为合适。
此外，鱼胶对于外科手术病人伤口之恢复也有帮助，外科手术后15-20天，进食鱼胶，伤口会愈合得好些，鱼胶丰富的胶质，对身体具有滋补养颜，延年益寿的功效。
1、有助生长发育鳕鱼中富含丰富的蛋白质，肉质细滑容易消化，适合老人孩子食用，能有助于儿童青少年生长发育。
2、提高智力鳕鱼中含有丰富的DHA，DHA有促进脑部发育的作用，所以常吃鳕鱼能使人变得聪明，同时又能保护视力。
3、预防心血管疾病鳕鱼中含有丰富的镁元素等矿物质，这些能起到预防高血压、心肌梗死等疾病的作用，能很好的对心血管系统有起到保护作用。
鳕鱼皮胶原肽对大鼠胃黏膜损伤的保护作用及其机制
鳕鱼皮胶原肽对大鼠胃黏膜损伤的保护作用及其机制王志聪;倪鑫;侯虎;姜慧明;步琳;李八方【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2014(035)019【摘要】目的:探究不同分子质量段的鳕鱼皮胶原肽对酒精性胃黏膜损伤的保护效果及相关机理.方法:从鳕鱼皮中提取胶原蛋白并用复合酶酶解,制备不同分子质量段的胶原肽,采用高体积分数酒精诱导的大鼠急性胃黏膜损伤模型,观察统计胃黏膜损伤程度并对胃部组织及血清的生理生化指标进行检测.结果:与模型组相比,胶原肽能够减轻大鼠胃腺的出血损伤,降低胃组织中Ca2+含量及髓过氧化物酶活力(P＜0.05);其中,中分子质量胶原肽效果最好,该组大鼠胃黏膜损伤指数降至9.21％ (P＜0.01),损伤抑制率为57.16％;胶原肽能提高胃组织中糖蛋白含量(P＜0.05),降低胃组织中丙二醛含量,提高胃组织超氧化物歧化酶活力及血清中谷胱甘肽的含量(P＜0.05).结论:胶原肽能够通过增强大鼠胃黏膜屏障及机体抗自由基氧化水平,产生对急性胃黏膜损伤的保护作用.【总页数】5页(P255-259)【作者】王志聪;倪鑫;侯虎;姜慧明;步琳;李八方【作者单位】中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛 266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛 266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛 266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛 266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛 266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛266003【正文语种】中文【中图分类】TS254.9【相关文献】1.狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对大鼠关节炎模型中氧化应激和炎症因子的影响 [J], 孔德新;陈雪红;谢靖;王春波;韩彦弢2.狭鳕鱼皮胶原蛋白肽经由水通道蛋白质3信号分子对过氧化氢诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用 [J], 张艳;徐宏伟;韩彦弢;张德岩;苗德森;谢靖3.海蜇、牛骨和鳕鱼皮胶原肽的透皮吸收性能研究 [J], 刘楚怡;隋海松;车帅;于建伟;王长伟;邹鹏飞4.深海鳕鱼胶原蛋白肽敷料并维生素E对大鼠皮肤创面愈合影响 [J], 赵芬;李传玺;高洁;臧艳;夏玉军5.鳕鱼鳔胶原肽对H_(2)O_(2)诱导2BS细胞早期衰老的保护作用 [J], 李娜;马玉洁;刘楠;王珊珊;周德庆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鱼皮明胶在食品加工中的应用研究
１ 明胶 的简 介 明胶 是 一 种 通 过胶 原 蛋 白发 生 热 变性 形 成 的 水 溶 性 蛋 白质 。 明胶 的制 备 过 程 涉及 到 高级 结 构 的破 坏 ，蛋 白质 的二级 结构 转化成 胶 原蛋 白的一级 结
构 ，特别是部分水解 的胶原蛋 白来 源于皮肤 、白色 的结缔组织 和动物 的骨头等Ⅲ 。明胶是 一种高分 子 量的多肽和一个重要 的水状胶质 ，其在食 品加 工领 域 中能够被广泛使用 ，在很 大程度上是 因为其胶凝 性和增稠性 。明胶不 同于大多数多糖 的其他凝胶 ， 是一 种消化 蛋 白 （ 包 含除 色氨 酸外 所有 必需 氨基 酸『 ２ １ ） 。 近 年 来 ， 明胶 的 主 要 商 业 来 源 除 了猪 牛 骨 头 、皮 革 、皮 等 陆 生 动 物外 ，还 相 继 开 发 出鱼 和 昆 虫 来 源 的 明胶 ｆ ３ ＿ 。 鱼 明胶可 以从鱼的皮肤和骨头 中获得 。鱼在加 工处理后产生的废料 ，鱼皮 占废料总质量 ７ ５ ％，大 约３ ０ ％的废料 由于皮肤和骨头胶原蛋 白含量高 ，可 以用于生产鱼明胶 。从鱼 的皮肤 中提取明胶能够提 供一个 可接受 的、替 代来源犹太 和清真 （ 穆 斯林）
鱼皮 明胶在食 品加工 中的应 用研 究
张
（ １ ． 天津现代职业技术学院 ，天津
乐１ ， ２ ７ 刘 安 军
３ ０ ０ ４ ５ ７ ）
３ ０ ０ ３ ５ ０ ；２ ． 天津科技大学 食 品工 程与生物技术学 院 ，天津
摘要 ：明胶是一种重要 的功能性生物 聚合 物 ，不仅可 以从 陆地动物 的皮肤和骨 头中提取 ，还 可以从鱼类 和昆虫中获 得。现已广泛应用于食品加工 中 ，以提 高食 品 的弹性 、一致性 和稳 定性 。近年来 ，研究人员 已对 海洋资源 的明胶提
可食性狭鳕鱼皮明胶复合膜的制备、性质与应用研究的开题报告
可食性狭鳕鱼皮明胶复合膜的制备、性质与应用研究的开题报告一、研究背景明胶是一种非常常见的天然高分子材料，常用于制备食品、医药、化妆品等领域的添加剂或载体。
而狭鳕鱼皮则是一种被广泛浪费的资源，其含有大量的胶原蛋白和其他有用的生物活性物质。
因此，将这两种材料结合起来，制备出一种具有优异性能的复合膜，不仅可以有效利用资源，还可以满足人们对新型食品包装材料的需求。
二、研究内容和目的本次研究的内容主要是制备可食性狭鳕鱼皮明胶复合膜，并对其性质进行评估。
具体研究步骤包括：（1）提取狭鳕鱼皮中的胶原蛋白；（2）将提取的胶原蛋白与明胶混合，并制备复合膜；（3）对复合膜的物理、化学性质进行测试，并评估其可行性；（4）探究复合膜在食品包装领域的应用潜力和可行性。
本研究旨在利用狭鳕鱼皮这一常见的废弃资源，制备出具有生物可降解性和生物相容性的食品包装材料，为环境保护和可持续发展做出贡献。
三、研究方法本次研究将采用以下方法：（1）狭鳕鱼皮提取胶原蛋白：将狭鳕鱼皮清洗干净后，经过酸碱处理和离心分离等步骤，提取出胶原蛋白。
（2）复合膜的制备：将提取的胶原蛋白与明胶按照一定比例混合，加入适量的交联剂和其它添加剂，搅拌均匀后，通过浇铸或者压延工艺制备出复合膜。
（3）复合膜性能的测试：包括厚度、透明度、拉伸强度、断裂延展率、抗菌性等性质测试。
（4）应用研究：将制备好的复合膜应用于食品包装领域，比如用来包装一些易氧化、易变质的食品，探究其保鲜效果和可行性。
四、研究意义当前，环境保护和可持续发展已经成为人们关注的热点。
而传统的食品包装材料，如塑料、纸张等，存在逐渐加剧的浪费和资源短缺问题。
因此，开发一种新型的、可降解、可回收的食品包装材料变得尤为重要。
本研究将以狭鳕鱼皮作为原材料，结合明胶等天然高分子材料，制备出具有优异性能的复合膜，可以在一定程度上缓解传统食品包装材料的资源短缺和污染环境的问题。
其应用前景也非常广泛，可以满足人们日益增长的环保、健康、安全、便利等多层需求。
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鳕鱼皮明胶的止血活性和机理研究张姝妹，侯虎，李八方（中国海洋大学食品科学与工程学院，山东青岛 266003）摘要：为了提高水产加工废料的高值化利用，为明胶作为止血产品开发的原料提供依据，研究了明胶的分子量与止血活性之间的关系以及明胶的止血机理。
本研究在65 ℃下采用热水法提取鳕鱼皮明胶，通过SDS-PAGE 电泳测定明胶的分子量分布情况。
使用100 ku 和50 ku 的超滤膜对明胶进行超滤处理得到高、中、低三个分子量范围的样品。
大鼠断尾止血实验、股动脉止血实验和肝创面止血实验结果表明高分子量组（Mr>100 ku)的出血时间最短，分别为4.54 min 、2.30 min 和1.91 min 。
说明提取的鳕鱼皮明胶样品与自然止血组相比具有止血效果，并且随着明胶分子量的上升，出血时间和出血量均下降，且高分子量明胶样品止血效果较好。
APTT 测定结果表明明胶可以明显缩短APTT 时间，主要对内源性凝血途径起作用，并且可以促进血小板的聚集，还可以增加血小板活性因子PF4、P-选择素和TXB2的释放量从而缩短出血时间，起到快速止血的作用。
关键词：鳕鱼皮；明胶；分子量；止血活性；止血机理文章篇号：1673-9078(2016)3-18-23 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.3.004Hemostatic Activity of Pollock Gelatin and the Underlying MechanismZHANG Shu-mei, HOU Hu, LI Ba-fang(College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao 266003, China)Abstract: To improve the utilization of aquatic byproducts and provide a basis for the development of gelatin as a hemostatic product, the relationship of the molecular weight of gelatin to its hemostatic activities and mechanisms was studied. Pollock skin gelatin was extracted using the hot water method at 65 ℃, and its molecular weight distribution was measured by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). High, medium, and low molecular weight gelatin samples were obtained though ultrafiltration using 100 ku and 50 ku membranes. Rat tail cutting, femoral artery cutting, and liver cutting experiments showed that high molecular weight gelatin resulted in the shortest bleeding times, which were 4.54 min, 2.30 min and 1.91 min, respectively. Pollock gelatin exhibited hemostatic activity as compared to the control group. Bleeding time and the amount of bleeding declined with increasing gelatin molecular weight. Thus, gelatin with a high molecular weight exhibited a relatively good hemostatic effect. An activated partial thromboplastin time (APTT) test indicated that gelatin significantly reduced APTT and affected the endogenous coagulation pathways. It also promoted platelet aggregation and increased the release of platelet active factors platelet factor 4 (PF4), P-selectin, and thromboxane B2 (TXB2), thereby shortening bleeding time and showing a hemostatic effect.Key words: pollock skin; gelatin; molecular weight; hemostatic activity; hemostatic mechanism胶原是动物体中含量丰富的一类蛋白质，广泛应用于食品、化妆品、医药领域等，具有降血压、抗氧化、美容护肤等功效[1]。
明胶是胶原蛋白在高温作用下发生变性作用的产物，把胶原蛋白经温和而不可逆的断裂后的主要产物称做明胶。
我国对明胶的需求量巨大，明胶产量约占世界的三分之二[2]。
明胶的组成18收稿日期：2015-04-18基金项目：国家自然科学基金（31401476，31471606）；教育部博士点基金（20130132120024）作者简介：张姝妹(1990-)，女，硕士研究生，研究方向食品加工与功能食品通讯作者：李八方(1953-)，男，教授，博士生导师，研究方向海洋活性物质与功能性食品复杂，是非均一的胶原蛋白水解产物，相对分子量的分布范围较宽。
明胶在性质上拥有其独特的特点，亲水性较强，能够在水中形成粘度较高的溶液，冷却后可以形成凝胶，明胶的成膜性好，化学性质比较活泼等。
水产明胶一般采用热水提取法，在加热的过程中使胶原的氢键断裂，释放明胶，得到澄清的明胶水溶液，明胶的提取温度一般在40~90 ℃不等，通过控制温度和提取时间，可以得到分子量范围不同的明胶产品[3]。
早在1953年，人们就已经发现胶原蛋白具有止血效果。
胶原的止血效果主要是作用于血小板，胶原蛋白可以激活内源性凝血过程，还可以引起血小板的聚集从而形成血栓，并且可以刺激血小板释放一些能够19促进止血进程的亚细胞颗粒和分泌物，比如各种凝血因子，凝血因子可以粘附和填塞受伤的血管，从而达到止血的目的。
已经利用胶原良好的止血效果制备出一系列止血产品，如Seung Huuk Baik 等[4]制备出一种新型胶原基止血剂，不仅具有良好的止血效果还具有较强的粘附性；Biering Wolfgang [5]发明了一种含有胶原蛋白凝胶的止血颗粒可应用于各种手术治疗；Maryam Kabiri 等[6]以明胶为原料，以EDC 为交联剂在-25 ℃下进行反应制备可吸收的手术用明胶海绵。
本研究采用热水法提取鳕鱼皮明胶，分析其氨基酸组成和分子量分布，通过超滤处理对不同分子量的明胶进行分离，研究明胶分子量与止血效果之间的关系，并进一步研究明胶的止血机理，为明胶作为止血产品开发的原料提供了依据。
1 材料与方法 1.1 原料市售鳕鱼，1000~1500 g （购于青岛团岛市场），取鱼皮剔除皮下组织，清洗干净后于-18 ℃冷冻备用；wistar 雄性大鼠（许可证号SCXK （鲁）2013 0001），体重200g 左右（山东鲁抗医药质检中心实验室动物中心提供）。
1.2 试剂与仪器氧化钠、浓硫酸、冰醋酸、甲酸、乌来糖均为分析纯；二烷基硫酸钠（SDS ）、丙烯酰胺、N ，N ，-双丙烯酰胺、过硫酸铵、Tris 、TEMED 、考马斯亮蓝R-250、蛋白Marker （43~220 ku)、5×样品缓冲液等为Sigma 进口分装；APTT 试剂盒、PT 试剂盒、TT 试剂盒：南京建成生物工程研究所有限公司；大鼠PF4、大鼠P-选择素、大鼠TXB2 ELISA 试剂盒（进口分装）；云南白药止血粉：云南白药集团股份有限公司。
恒温振荡器：常州国华电器有限公司；Alphal -4LD 型冷冻干燥机：德国Christ 公司；Hitachi835-50氨基酸自动分析仪：日本日立公司；DYY -6C 电泳仪：北京市六一仪器厂；超滤杯、超滤膜：上海摩速科学仪器有限公司；超微粉碎机：天津泰斯特仪器有限公司；半自动凝血仪：济南森蓝科贸有限公司；酶标仪：基因有限公司。
1.3 实验方法1.3.1 鳕鱼皮明胶的提取取一定量的鳕鱼皮，室温下解冻，清洗后去掉残留的脂肪和鱼肉，剪成约2 cm×2 cm 大小的小块，用0.05 mol/L NaOH 浸泡45 min ，物料比1:30（m/V ），鱼皮充分溶胀后水洗至中性。
用0.1 mol/L H 2SO 4浸泡30 min 后水洗至中性。
加入蒸馏水，于65 ℃摇床中提取5 h ，物料比为1:10（m/V )，绢纱过滤去除鱼皮，抽滤后得到淡黄色透明的明胶溶液[7]。
1.3.2 鳕鱼皮明胶分子量的测定将鳕鱼皮明胶冻干样品配制成2 mg/mL 的溶液，用NaOH 调节pH 为中性。
加入样品缓冲液（两者比例为15 μL 样品/5 μL 缓冲液），在一个Eppendorf 管中混合，100 ℃下煮沸7 min ，离心5 min 后，用微量注射针取20 μL 上样，分离胶浓度为7.5%，浓缩胶浓度为5%，采用直流恒压电源，电泳电压为80 V ，电泳时间2~3 h ，用考马斯亮蓝染色液染色30 min 后脱色[8]。
1.3.3 不同分子量鳕鱼皮明胶的制备鳕鱼皮明胶溶液稀释为浓度约5 mg/mL 的溶液，依次用截留分子量为100 ku 和50 ku 的超滤膜进行超滤处理，用0.2 MPa 氮气加压，超滤过程在4 ℃冰箱中进行，以免样品变质。
旋转蒸发浓缩后冷冻干燥，超微粉碎机粉碎成粉末状，即分离得到三个分子量范围的鳕鱼皮明胶样品，分别为高分子量组（Mr>100 ku ）、中分子量组（50 ku<Mr<100 ku ）和低分子量组（Mr<50 ku ）的鳕鱼皮明胶样品。