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51 NY/T 1105-2006 肥料合理使用准则氮肥
52 NY 1106-2006 含腐植酸水溶肥料
53 NY 1107-2006 大量元素水溶肥料
54 NY/T 1108-2006 液体肥料包装技术要求
55 NY 1109-2006 微生物肥料生物安全通用技术准则
56 NY 1110-2006 水溶肥料汞、砷、镉、铅、铬的限量及其含量测定
57 NY/T 1111-2006 农业用硫酸锰
58 NY/T 1112-2006 配方肥料
59 NY/T 1113-2006 微生物肥料术语
60 NY/T 1114-2006 微生物肥料实验用培养基技术条件
61 NY/T 1115-2006 水溶肥料水不溶物含量的测定
62 NY/T 1116-2006 肥料中硝态氮含量的测定紫外分光光度法
63 NY/T 1117-2006 水溶肥料钙、镁、硫含量的测定
64 NY/T 1118-2006 测土配方施肥技术规范
65 NY/T 1119-2006 土壤监测规程
66 NY/T 1120-2006 耕地质量验收技术规范
67 NY/T 1121.1-2006 土壤检测第1部分：土壤样品的采集、处理和贮存。
农业部办公厅关于印发《农业部肥料登记评审委员会议定事项》的通知文章属性•【制定机关】农业部(已撤销)•【公布日期】2010.02.11•【文号】农办农[2010]12号•【施行日期】2010.02.11•【效力等级】部门规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】农业管理综合规定正文农业部办公厅关于印发《农业部肥料登记评审委员会议定事项》的通知（农办农〔2010〕12号）各省、自治区、直辖市农业（农牧）厅（委、局）：自《肥料登记管理办法》颁布施行以来，农业部肥料登记评审委员会按照相关法律法规和规章规定，本着科学、创新、公正、透明的原则，切实履行职责，严格把好肥料安全性、有效性和适宜性审核关，积极引导和推进肥料行业健康有序发展。
针对肥料的特殊性，研究确定了肥料登记申请、受理和评审的具体要求，汇总制定了《农业部肥料登记评审委员会议定事项》，以进一步规范肥料登记管理工作。
现将《农业部肥料登记评审委员会议定事项》印发给你们，请结合本地实际，认真贯彻落实。
对执行过程中发现的问题，请及时反馈我部种植业管理司。
附件：农业部肥料登记评审委员会议定事项二〇一〇年二月十一日附件：农业部肥料登记评审委员会议定事项（农业部肥料登记评审委员会）一、肥料登记申请和检验要求（一）关于法人声明内容。
申请肥料登记的企业法人应声明并承诺：所提供的肥料产品登记技术指标、原料和生产工艺不侵犯他人知识产权；没有隐瞒产品中含有可能危害人身健康、公共安全的成分；提供的申请登记资料真实可靠。
（二）关于境外产品代理机构。
境外企业申请肥料登记应委托经工商注册的代理机构或由在中华人民共和国设立的办事处办理登记手续。
代理机构应当具备进口、销售该企业肥料产品的授权。
其申请资料的产品标签应标明境外企业在华代理机构或办事处名称及联系方式。
（三）关于肥料登记证自动撤销后重新登记。
肥料登记证有效期满后方提出续展登记申请的企业，应重新办理肥料产品登记手续。
原省级肥料登记机构对该企业生产条件进行重新考核，对申请资料进行初审。
微生物肥料生物安全通用技术准则NY-1109-2006微生物肥料生物安全通用技术准则（NY 1109-2006）1 范围本标准规定了微生物肥料使用菌种安全性分级目录、不同菌种及产品选择毒理学试验的原则、程序、试验方法和结果评价方法。
本标准适用于中华人民共和国境内生产、销售的微生物肥料。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB 15193.3-2003 急性毒性试验GB/T 4789.28-2003 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1半数致死量 median lethal dose,LD50是经口给予受试物后，预期能够引起动物死亡率为50%的单一受试物剂量，该剂量为经过统计得出的估计值。
其单位是每千克体重所摄入受试物质的毫克数、克数或毫升数，即mg/kg体重、g/kg体重或mL/kg体重。
4选择毒理学试验的原则4.1生产用菌种微生物肥料生产用菌种分为四级管理，其安全分级目录见附录A。
未列入附录A中的菌种，除根瘤菌和乳杆菌(Lactobacillus）外，其余均需做毒理学试验。
4.1.1第一级（A.1）为免作毒理学试验的菌种。
4.1.2 第二级（A.2）为需做急性毒性试验的菌种。
4.1.3 第三级（A.3）为需做致病性试验的菌种。
4.1.4 第四级（A.4）为禁用菌种。
4.2产品4.2.1 除有机物料腐熟剂以外的固体微生物接种剂类产品均免做毒理学试验。
4.2.2 复合微生物肥料、生物有机肥和液体剂型微生物接种剂等需做急性毒性试验。
5 毒理学试验程序5.1 菌种毒理学试验程序5.1.1 应提供微生物肥料生产用菌种的鉴定资料，包括属及种的拉丁文学名和中文译名、形态、生理生化特性及鉴定依据、功能评价等资料。
HFHJQB哈尔滨肥黄金生物工程有限公司公司企业标准生物有机肥料技术标准发布日期：2014年10月18日实施日期：2014年10月18日哈尔滨肥黄金生物工程有限公司发布前言本标准的编写是按照GB/TL.I-1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规则》GB/T1.3-1997《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第3部分：产品标准编写规则》而制定的。
本标准的产品是：微生物有机肥是有机固体废物（包括、、畜禽粪便、饼粕、农副产品和食品加工产生的固体废物）经、除臭和完全腐熟后加工而成的有机肥料。
本标准字2014年10月18日起实施本标准由哈尔滨肥黄金生物工程有限公司提出并起草本标准主要起草人：沈志付赵守福周玉琢花似虎本标准有效期三年1 范围本标准规定了生物有机肥的要求、检验方法、检验规则、包装、标识、运输和贮存。
本标准适用于生物有机肥。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 8170—2008 数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/T 19524.1—2004 肥料中粪大肠菌群的测定GB/T 19524.2—2004 肥料中蛔虫卵死亡率的测定NY/T 1978—2010 肥料汞、砷、镉、铅、铬含量的测定NY 525—2012 有机肥料NY/T 798—2004 复合微生物肥料NY 1109—2006 微生物肥料生物安全通用技术准则HG/T 2843—1997 化肥产品化学分析常用标准滴定溶液、试剂溶液和指示剂溶液3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
生物有机肥 microbial organic fertilizers指特定功能微生物与主要以动植物残体（如畜禽粪便、农作物秸秆等）为来源并经无害化处理、腐熟的有机物料复合而成的一类兼具微生物肥料和有机肥效应的肥料。
农用微生物肥料标准农用微生物产品标识要求 NY 885—2004 1 范围本标准规定了农用微生物产品标识的基本原则、一般要求及标注内容等。
本标准适用于中华人民共和国境内生产、销售的农用微生物产品。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单,不包括勘误的内容,或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB 191-2000 包装储运图示标志GB 18382-2001 肥料标识内容和要求GB 15063-2001 复混肥料(复合肥料)NY 525-2002 有机肥料3 定义本标准采用下列定义3.1 农用微生物产品 microbial product in agriculture农用微生物产品是指在农业上应用的含有目标微生物的一类活体制品。
其主要指标是制品中的目标微生物的活菌含量，且表现出其特定的功效。
农用微生物产品包括微生物菌剂和微生物肥料两大类。
微生物菌剂按产品中特定的微生物种类或作用机理又可分为若干个种类，如根瘤菌菌剂，固氮菌菌剂，解磷类微生物菌剂，硅酸盐微生物菌剂，光合细菌菌剂，有机物料腐熟剂，促生菌剂，菌根菌剂，土壤生物修复剂等。
微生物肥料类产品分为复合生物肥和生物有机肥。
3.2 标识 marking用于识别农用微生物产品及其质量、数量、特征和使用方法所做的各种表示的统称。
标识可以用文字、符号、图案以及其他说明物表示。
3.3 标签 label用以表示产品其主要性能及使用方法等而附以必要的纸片、塑料片或者包装袋等容器的印刷部分。
3.4 容器 container直接与产品相接触并可按其单位量运输或储存的密闭贮器,例如袋、瓶、桶等,。
3.5 总养分 total primary nutrient总氮,N,、有效五氧化二磷(PO)和氧化钾(KO)含量之和，以质量百分数计。
肥料标准汇总一、肥料基础标准与通用方法HG/T 2843-1997 化肥产品化学分析常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液GBT 6003.1-1997 金属丝编织网试验筛GB/T 6274-1997 肥料和土壤调理剂术语GB/T 6679-2003 固体化工产品采样通则GB/T 6680-2003 液体化工产品采样通则GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法GBT 8170-2008 数值修约规则与极限数值的表示和判定GB 8569-2009 固体化学肥料包装GB/T 9969-2008 工业产品使用说明书总则GB/T 13565-1992 肥料采样报告格式GB 18382-2001 肥料标识内容和要求二、产品标准GB 15063-2009 复混肥料(复合肥料)GB 21633-2008 掺混肥料（BB肥）GB 18877-2002 有机-无机复混肥料GB/T 23348-2009 缓释肥料NY 525-2002 有机肥料NY 227-1994 微生物肥料NY 884-2004 生物有机肥NY 411-2000 固氮菌肥料NY/T 797-2004 硅肥NY 1107-2010 大量元素水溶肥料NY 1428-2010 微量元素水溶肥料NY 1429-2010 含氨基酸水溶肥料NY 1106-2010 含腐植酸水溶肥料GB/T 17419-1998 含氨基酸叶面肥料GB/T 17420-1998 微量元素叶面肥料GB/T 17420-1998 微量元素叶面肥料第1号修改单GB/T 17419-1998 含氨基酸叶面肥料GB 2440-2001 尿素GB 535-1995 硫酸铵GB 535-1995 硫酸铵国家标准修改单GB 536-88 液体无水氨GB 6549-1996 氯化钾GB 10205-2009 磷酸一铵、磷酸二铵GB 3559-2001 农业用碳酸氢铵GB 2945-1989 硝酸铵GB/T 2946-2008 氯化铵GB/T 10510-2007 硝酸磷肥、硝酸磷钾肥GB 20406-2006 农业用硫酸钾GB_20406-2006《农业用硫酸钾》国家标准第1号修改单GB 20412-2006 钙镁磷肥GB 20413-2006 过磷酸钙GB/T 20937-2007 硫酸钾镁肥HG 2321-1992 磷酸二氢钾HG/T 3275-1999 肥料级磷酸氢钙HG 3277-2000 农业用硫酸锌HGT_3278-1987 腐殖酸钠HG/T 3790-2005 硝酸铵钙GB/T 8946-1998 塑料编织袋GB/T 8947-1998 复合塑料编织袋三、方法标准GB/T 8571-2008 复混肥料实验室样品制备GB 8572-2010 复混肥料中总含量测定蒸馏后滴定法GB 8573-2010 复混肥料中有效磷含量测定GB 8574-2010 复混肥料中钾含量的测定四苯硼酸钾重量法GB/T 8576-2010 复混肥料中游离水含量的测定真空烘箱法GB/T 8577-2010 复混肥料中游离水含量的测定卡尔·费休法GB/T 14540-2003 复混肥料中铜、铁、猛、锌、硼、钼含量的测定GB/T 19203-2003 复混肥料中钙、镁、硫含量的测定GB/T 24890-2010 复混肥料中氯离子含量的测定GB/T 24891-2010 复混肥料粒度的测定GB/T 22923 -2008 肥料中氮、磷、钾的自动分析仪测定法GB/T 22924 -2008 复混肥料（复合肥料）中缩二脲含量的测定GB/T 17767.1-2008 有机-无机复混肥料的测定方法第1部分：总氮含量GB/T 17767.2-2010 有机-无机复混肥料中总磷含量的测定GB/T 17767.3-2010 有机-无机复混肥料中总钾含量的测定GB/T610-2008 化学试剂砷测定通用方法GB/T 7686-2008 化工产品中砷含量测定的通用方法GB 7959-1987 粪便无害化卫生标准GB 8172-1987 城市垃圾农用控制标准GB/T 2441.1-2008 尿素的测定方法第1部分：总氮含量GB/T 2441.2-2010 尿素测定方法缩二脲含量的测定分光光度法GB/T 2441.3-2010 尿素测定方法水分测定卡尔费休法GB/T 2441.4-2010 尿素的测定方法第4部分：铁含量邻菲啰啉分光光度法GB/T 2441.5-2010 尿素的测定方法第5部分：碱度容量法GB/T 2441.6-2010 尿素的测定方法第6部分：水不溶物含量重量法GB/T 2441.7-2010 尿素的测定方法粒度的测定筛分法GB/T 2441.8-2010 尿素的测定方法第8部分：硫酸盐含量目视比浊法GB/T 2441.9-2010 尿素的测定方法亚甲基二脲含量的测定GB/T 10209.1-2008 磷酸一铵、磷酸二铵的测定方法第1部分：总氮含量GB/T 10209.2-2010 磷酸一铵、磷酸二铵的测定方法第2部分：磷含量GB/T 10209.3-2010 磷酸一铵、磷酸二铵的测定方法第3部分：水分GB/T 10209.4-2010 磷酸一铵、磷酸二铵的测定方法第4部分：粒度GB/T 10511-2008 硝酸磷肥中总氮含量的测定蒸馏后滴定法GB/T 10512-2008 硝酸磷肥中磷含量的测定磷钼酸喹啉重量法GB/T 10513-1987 硝酸磷肥中游离水含量的测定卡尔·费休法GB/T 10514-1989 硝酸磷肥中游离水含量的测定烘箱法GB/T 10515-1989 硝酸磷肥粒度测定GB/T 10516-1989 硝酸磷肥颗粒平均抗压强度测定GB/T 6276.1-2008 工业用碳酸氢铵的测定方法第1部分：碳酸氢铵含量酸碱滴定法GB/T 6276.2-2010 工业用碳酸氢铵的测定方法第2部分：氯化物含量电位滴定法GB/T 6276.3-2010 工业用碳酸氢铵的测定方法第3部分：硫化物含量目视比浊法GB/T 6276.4-2010 工业用碳酸氢铵的测定方法第4部分：硫酸盐含量目视比浊法GB/T 6276.5-2010 工业用碳酸氢铵的测定方法第5部分：灰分含量重量法GB/T 6276.6-2010 工业用碳酸氢铵的测定方法第6部分：铁含量邻菲啰啉分光光度法GB/T 6276.7-2010 工业用碳酸氢铵的测定方法第7部分：砷含量二乙基二硫代氨基甲酸银分光光度法GB/T 6276.8-2010 工业用碳酸氢铵的测定方法第8部分：砷含量砷斑法GB/T 6276.9-2010 工业用碳酸氢铵的测定方法第9部分：重金属含量目视比浊法HG/T 2220-1991 重过磷酸钙中磷含量的测定磷钼酸喹啉重量法HG/T 2221-1991 重过磷酸钙中游离酸含量的测定容量法HG/T 2222-1991 重过磷酸钙中游离水分的测定真空烘箱法HG/T 2223-1991 粒状重过磷酸钙的粒度测定HG/T 3276-1999 腐殖酸铵肥料分析方法NY 1110-2010 水溶肥料汞、砷、镉、铅、铬的限量要求NY 1109-2006 微生物肥料生物安全通用技术准则NY 412-2000 磷细菌肥料NY 410-2000 根瘤菌肥料NY 413-2000 硅酸盐细菌肥料NY/T 1113-2006 微生物肥料术语NY/T 1112-2006 配方肥料NY/T 887-2010 液体肥料密度的测定NY/T 1108-2006 液体肥料包装技术要求NY 1110-2010 水溶肥料汞、砷、镉、铅、铬的限量要求NY/T 1115-2006 水溶肥料水不溶物含量的测定NY/T 1117-2010 水溶肥料钙、镁、硫、氯含量的测定。
天门冬无公害生产技术林文洪罗丽霞*叶志文傅炽栋陈燕红郑宇科姚坚（珠海市现代农业发展中心，广东珠海519000）摘要天门冬为天门冬科天门冬属多年生草本植物，是集药用、食用、观赏于一体的优良植物，经济价值很高。
天门冬非常适合华南地区种植，为进一步规范天门冬的无公害生产，本文总结了天门冬无公害生产技术，包括园地选择与规划、种苗繁殖、定植、中耕除草及搭架、合理施肥、水分管理、病虫害防治及采收等方面的内容，以期为天门冬的无公害生产提供参考。
关键词天门冬；无公害；生产技术中图分类号S567.23+9文献标识码B文章编号1007-5739（2023）11-0060-04DOI：10.3969/j.issn.1007-5739.2023.11.017开放科学（资源服务）标识码（OSID）：天门冬[Asparagus cochinchinensis（Lour.）Merr.]为天门冬科天门冬属多年生草本植物，果实成熟时为红色，种子黑色，花期7月，果期9月，果实熟后易脱落，需及时采收[1]。
天门冬食用部分为地下块状茎，呈纺锤形，是储藏养分的重要器官。
天门冬富含多种氨基酸（丝氨酸、苯丙氨酸等）、天冬素、多糖及皂苷等成分，具有养阴生津、润肺清心、镇咳平喘、抗肿瘤等作用。
特别是天冬素对人体增强抗病能力和免疫能力的作用明显[2]。
常食天门冬可改善身体的血液循环，增强新陈代谢功能，具有抗衰老、美容的作用[3]。
因此，天门冬是集药用、食用、观赏于一体的优良植物。
天门冬原产非洲，在我国分布广泛[4]。
根据珠海市现代农业发展中心的调查研究，天门冬非常适合华南地区种植。
近年来，天门冬的栽培面积日益扩大，其产品质量和栽培管理技术水平亟须得到同步提高。
为了进一步规范天门冬的无公害生产，保证天门冬产品的质量，提高市场竞争力，根据国家无公害产品的相关要求，在总结华南地区天门冬种植经验的基础上，广泛征求生产单位的意见，经科学分析总结了天门冬无公害生产技术，现将其介绍如下。
生物肥料生产技术验收规程1范围本标准（技术标准）规定了农业等领域生物肥料生产技术的验收标准。
本标准规定了（技术具体主要内容包括）：菌含量的检测方法，菌种分类鉴别方法，生物肥料生产所需设备，生物肥料所用原料种类2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件。
不注日期的引用文件，其最新版（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/T41728《微生物肥料质量安全评价通用准则》NY/T798《复合微生物肥料》NY/T2321《微生物肥料产品检验规程》NY/T1109《微生物肥料生物安全通用技术准则》T/GTM010-2022《复合微生物肥料保质技术规范》T/GTM008-2022《微生物肥料菌落识别技术规范》T/GTM003-2021《复合微生物肥料工业化生产标准》3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义3.1生物肥料生产验收指通过合理、规范的生产工艺，选取合适的原料，应用配套的生产设备，生产的生物肥料，通过运用对应的检测方法验收的过程。
4要求4.1菌种使用的微生物菌种应安全、有效，有明确来源和种名。
菌株安全性应符合NY1109的规定。
4.2外观（感官）颗粒产品应无明显机械杂质、大小均匀、无腐败味。
4.3技术指标颗粒生物有机肥产品的各项技术指标应符合表1的要求表1颗粒生物有机肥产品技术指标要求项目技术指标总有效活菌数（cfu），亿/g≥0.50主有效活菌数（cfu），亿/g≥0.30有机质（以干基计），%≥40.0水分，%≤15.0pH 5.5-8.5颗粒平均抗压碎力，N≥8粪大肠菌群数，个/g≤100蛔虫卵死亡率，%≥95有效期，月≥6粒度（2-4.75mm），%≥904.4颗粒生物有机肥产品中5种重金属限量指标应符合表2的要求表2颗粒生物有机肥产品中5种重金属限量技术要求单位：mg/kg 项目限量指标总汞（Hg）（以干基计）≤2总镉（Cd）（以干基计）≤3总铬（Cr）（以干基计）≤150总砷（As）（以干基计）≤15总铅（Pd）（以干基计）≤504.5农用微生物菌剂产品的各项技术指标应符合表3的要求表3农用微生物菌剂产品技术指标剂型项目液体粉剂颗粒有效活菌数（cfu），亿/g或亿/ml≥ 2.0 2.0 1.0有机质a（以干基计），%≥20.020.020.0杂菌率，%≤10.020.030.0水分，%≤-35.020.0霉菌杂菌数（个/g）≤ 3.0×106 3.0×106 3.0×106细度，%≥-8080PH 5.5-8.0 5.5-8.5 5.5-8.5有效期b，月≥366 a包装容器上标明有机质含量时检测本项目。
微生物肥料生物安全通用技术准则（NY 1109-2006）1 范围本标准规定了微生物肥料使用菌种安全性分级目录、不同菌种及产品选择毒理学试验的原则、程序、试验方法和结果评价方法。
本标准适用于中华人民共和国境内生产、销售的微生物肥料。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB 15193.3-2003 急性毒性试验GB/T 4789.28-2003 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1半数致死量 median lethal dose,LD50是经口给予受试物后，预期能够引起动物死亡率为50%的单一受试物剂量，该剂量为经过统计得出的估计值。
其单位是每千克体重所摄入受试物质的毫克数、克数或毫升数，即mg/kg体重、g/kg体重或mL/kg体重。
4 选择毒理学试验的原则4.1 生产用菌种微生物肥料生产用菌种分为四级管理，其安全分级目录见附录A。
未列入附录A中的菌种，除根瘤菌和乳杆菌(Lactobacillus）外，其余均需做毒理学试验。
4.1.1第一级（A.1）为免作毒理学试验的菌种。
4.1.2 第二级（A.2）为需做急性毒性试验的菌种。
4.1.3 第三级（A.3）为需做致病性试验的菌种。
4.1.4 第四级（A.4）为禁用菌种。
4.2 产品4.2.1 除有机物料腐熟剂以外的固体微生物接种剂类产品均免做毒理学试验。
4.2.2 复合微生物肥料、生物有机肥和液体剂型微生物接种剂等需做急性毒性试验。
5 毒理学试验程序5.1 菌种毒理学试验程序5.1.1 应提供微生物肥料生产用菌种的鉴定资料，包括属及种的拉丁文学名和中文译名、形态、生理生化特性及鉴定依据、功能评价等资料。
5.1.2 根据产品所含菌种的鉴定资料，依据附录A之规定，确定菌种安全级别、是否做毒理学试验及毒理学检测项目。
5.1.3 对于需要做毒理学试验的菌种，生产者需提供试验用纯菌种斜面，经复核确认与该菌种鉴定资料相符且无杂菌污染后，进行毒理学试验。
5.2 产品毒理学程序需对送检产品进行菌种和载体物料的真实性确认后，进行毒理学试验。
6 试验方法6.1受试物的准备6.1.1 菌种受试物将试验菌种接种于适宜的培养基中，在适宜的条件下培养一定时间，用生理盐水调整菌液浓度至2.0×108～2.0×109cfu/mL，该溶液为菌种受试物。
6.1.2 产品受试物固体产品根据试验要求，配制所需浓度，溶剂首选去离子水，也可选用羧甲基纤维素、明胶、淀粉等。
液体产品不可稀释，直接使用。
6.2 急性毒性试验按GB 15193.3-2003执行。
6.3 致病性试验致病性试验包括以下项目。
6.3.1 急性毒性试验方法同5.2。
6.3.2 一次破损皮肤刺激试验6.3.2.1 目的检测受试物对实验动物皮肤的刺激/腐蚀作用和强度。
6.3.2.2 实验动物每次实验至少需要3只皮肤完好的白色健康家兔或豚鼠。
6.3.2.3 操作程序a)涂受试物前，将家兔或豚鼠背部脊柱两侧的毛去掉，去毛范围约2.5cm×2.5cm，用75%酒精清洁、消毒暴露皮肤，待酒精挥发后，用灭菌刀片或注射针头分别在两块皮区内划一个“＃”形的破损伤口。
注意皮肤破损仅达表皮，不要伤及真皮。
b)将受试物0.5mL直接滴于破损皮肤上，或滴于同样大小的2层～4层纱布上并敷贴于破损皮肤表面，然后用一层无刺激塑料膜或油纸覆盖，再用无刺激胶布固定。
另一侧去毛破损皮肤作为空白对照（或溶剂对照），敷贴时间为4h。
试验结束后，用温水或无刺激性溶剂除去残留受试物。
c)分别于去除受试物后1h、24h和48h观察皮肤局部反应，并按表1进行刺激反应评分。
注意鉴别感染和原发性刺激反应的区别，若有感染可疑，应进行重复测试。
6.3.2.4 评价规定在各个观察时间点，按照表1对动物的皮肤红斑与水肿形成情况进行评分，并按时间点将3只动物的评分相加，除以动物数，获得不同时间点的皮肤刺激反应积分均值（刺激指数）。
取其中最高皮肤刺激指数，按表2评定该受试物对动物皮肤刺激强度的级别。
表1 皮肤刺激反应的评分标准皮肤刺激反应皮肤刺激反应评分红斑形成：无0勉强可见1明显红斑2中等～严重红斑3紫红色红斑并有焦痂形成4水肿形成：无0勉强可见1皮肤隆起，轮廓清楚2水肿隆起约1mm3水肿隆起超过1mm 4表2 皮肤刺激强度分级皮肤刺激指数刺激强度级别0～＜0.5无刺激性0.5～＜2.0轻刺激性2.0～＜6.0中等刺激性6.0～8.0强刺激性6.3.3溶血试验6.3.3.1 目的检测受试物是否具有溶血特性。
6.3.3.2 操作程序用无菌棉拭子蘸取菌种受试物,以蛇形线接种于血琼脂平板(按GB/T4789.28-2003中4.6规定),置36℃±1℃培养箱中培养, 24h后观察有无溶血环产生。
同时用已知阳性菌株金黄色葡萄球菌等作为对照。
6.3.3.3 试验结果菌落周围有溶血环的，则溶血试验阳性；否则为阴性。
6.3.4 抗菌药物敏感试验质控菌株可选用大肠杆菌ATCC25922等标准菌株。
6.3.4.1 目的检测受试物对抗生素的敏感性强度。
6.3.4.2 试验用抗生素可选用头孢哌酮（CFP）、四环素（TE）、头孢唑啉（CZ）、链霉素（S）、俐特灵（FR）、环丙沙星（CIP）、复方新诺明（SXT）、氯霉素（C）、氨苄青霉素（AM）、庆大霉素（GM）、强力霉素（DO）、丁胺卡那霉素（AN）、甲氟哌酸（PEF）、氟啶酸（ENO）、多西环素(DO)、依诺沙星(ENO)、阿米卡星(AN)等中的几种。
6.3.4.3 操作程序a)用无菌棉拭子将受试物均匀涂抹于营养琼脂平板表面，共涂抹3次。
每涂抹1次，平板应转动60º，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。
盖好平皿,置室温干燥5min。
b）用无菌棉拭子蘸取浓度为2.0×108～2.0×109cfu/mL质控菌株菌悬液，均匀涂抹于营养琼脂平板表面，具体方法同上，作为对照试验。
c)以无菌操作取出抗生素纸片分别贴在涂有受试物和质控菌株菌悬液的平板培养基表面，每个平板放4个纸片。
然后将平板置于36℃±1℃恒温培养箱中培养18h后观察抗生素纸片周围有无抑菌环，量取并记录其直径（包括纸片直径）大小，单位mm。
试验应做3个平行，取其均值。
d)质控菌抑菌环应均在质控范围内，说明试验方法准确可靠，否则试验无效。
6.3.5 急性腹腔注射致病性试验6.3.5.1 目的检测受试物的急性致病性。
6.3.5.2 试验动物清洁级健康成年小鼠，体重18～20g。
a）选健康成年小鼠40只,体重18～20g，雌、雄各半，剂量为500mg/kgBW，按0.1mL/10gBW 经腹腔注射受试物。
b）于腹腔注射后第3d、7d分别取存活的实验动物雌、雄各5只解剖，并做大体病理学观察。
c)腹腔注射后第14d将剩余实验动物处死、解剖并做大体病理学观察。
6.3.5.4 结果观察、评价根据试验周期内动物有无死亡及出现的中毒体症、大体病理学观察及病理组织学检查发现病变的程度进行分级判定（见表3）。
表3急性致病性判定标准级别判定依据动物出现死亡，死亡动物及24h以上存活动物在第3d、7d经解剖肉眼检查或强致病性病理组织学检查即可发现脏器的明显病变。
动物有中毒体症无死亡，动物第14d经解剖肉眼检查或病理组织学检查可发弱致病性现脏器的明显病变。
动物无中毒体症无死亡，动物第14d解剖肉眼检查或病理组织学检查均未发无致病性现脏器的明显病变。
6.3.6 急性眼刺激试验6.3.6 .1 目的检测受试物对实验动物眼睛的急性刺激和腐蚀作用。
6.3.6.2 实验动物3只家兔，试验前检查家兔双眼，有异常者不能用于试验。
a）吸取受试物0.1mL,滴入家兔一侧眼结膜囊内，另一侧眼以生理盐水作为正常对照。
b）滴受试物后，将眼被动闭合4s,30s后用生理盐水冲洗。
于滴眼后1h、24h、48h、72h、7d、14d和21d，肉眼观察家兔眼结膜、虹膜和角膜的损伤与恢复情况。
如果72h内未出现刺激反应，或第7d或第14d，眼睛刺激反应完全恢复，即可提前终止试验。
必要时，用2%荧光素钠溶液或裂隙灯、放大镜检查角膜及虹膜变化。
6.3.6.4 评价规定按表4对家兔眼角膜、虹膜和结膜的急性刺激反应进行评分，并分别计算每只动物在三个不同观察时间（24h、48h和72h）角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四方面的“平均评分”（即每只动物的24h、48h和72h评分之和除以观察数3）。
分别以动物眼角膜、虹膜和结膜充血、水肿的平均评分和恢复时间进行评分，按表5或表6眼刺激反应分级标准判定受试物对眼睛的刺激强度。
表4 急性眼刺激反应的评分标准眼损害表现评分角膜损害：无溃疡形成或混浊散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见半透明区易分辨，虹膜模糊不清出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，瞳孔大小勉强可见角膜不透明，混浊，虹膜无法辨认0 1 2 3 4虹膜损害：正常皱褶明显加深，充血，肿胀，角膜周围有中度充血，瞳孔对光仍有反应出血、肉眼可见破坏，或瞳孔对光无反应0 1 2结膜（睑结膜、球结膜）充血：血管正常血管充血呈鲜红色血管充血呈深红色，血管不易分辨弥漫性充血呈紫红色0 1 2 3结膜（睑结膜、球结膜）水肿：无水肿轻微水肿（包括瞬膜）明显水肿，伴有部分眼睑外翻水肿至眼睑近半闭合水肿至眼睑大半闭合1234 表5 眼刺激反应分级标准级别判定依据可逆无刺激性3只动物的平均评分：角膜损害<1、虹膜损害<1、结膜充血<2和结膜水肿<2；或3只动物中至少有2只动物的平均评分符合上述标准，另外1只动物的刺激反应在21d内完全恢复。
性损伤轻刺激性3只动物中有2只动物的平均评分：角膜损害≥1；虹膜损害≥1；结膜充血≥2；结膜水肿≥2，且7d内全部动物的刺激反应完全恢复。
刺激性a3只动物中有2只动物的平均评分：角膜损害≥1；虹膜损害≥1；结膜充血≥2；结膜水肿≥2，且21d内全部动物的刺激反应完全恢复。
不可逆性损伤腐蚀性b至少有1只动物的角膜、虹膜或结膜的刺激反应在21d的观察期内未完全恢复或/和在3只动物中有2只动物的平均评分：角膜损害≥3；虹膜损害≥1.5。
注：完全恢复是指动物的眼刺激反应评分：角膜损害=0，虹膜损害=0，结膜充血=0或1，结膜水肿=0或1。
a 接触受试物后所产生的可逆性炎性反应。
b 接触受试物后所产生的不可逆性组织损伤。
表6 眼刺激性反应分级标准平均评分动物数（只）恢复时间（d）a损伤类型角膜损害<1和虹膜损害<1和结膜充血<2和结膜水肿<2≥2≤21无刺激性角膜损害≥1或≥2≤7轻刺激性虹膜损害≥1或结膜充血≥2或≤21刺激性结膜水肿≥2角膜损害≥3或≥2虹膜损害≥1.5角膜损害≥1或腐蚀性b虹膜损害≥1或≥1>21结膜充血≥1或结膜水肿≥1a 为动物刺激反应评分恢复至角膜损害=0，虹膜损害=0，结膜充血=0或1，结膜水肿=0或1的时间。
