显微镜的七种观察方式

2022年高考生物总复习：显微观察的方式1.显微观察的两种方式(1)原色观察：即观察材料不用染色，直接用显微镜观察即可。

相关实验有：使用高倍显微镜观察几种细胞、用高倍显微镜观察叶绿体、观察植物细胞的吸水和失水等。

(2)染色观察：即观察材料要经染色剂染色后才可用显微镜观察。

相关实验有：观察DNA和RNA在细胞中的分布、用高倍显微镜观察线粒体、观察细胞的有丝分裂或减数分裂等。

2.显微观察类实验的染色剂与材料选择3.显微观察3种临时装片的制作方法【高考例证】1.(2016·江苏卷，19)下列实验都需要使用光学显微镜进行观察，有关实验现象描述合理的是()A.实验①B.实验②C.实验③D.实验④解析观察植物细胞的质壁分离和复原时，紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞中液泡大，占据整体细胞体积的绝大部分，呈紫色，不同细胞的细胞液浓度大小不同，质壁分离的位置、程度并不一致，A正确；用光学显微镜观察多种多样的细胞时，不能观察到核糖体，B错误；洋葱根尖分生区细胞呈正方形，多数细胞处于分裂间期，观察不到染色体，C错误；线粒体需染色后才能观察到清晰的形态且酵母菌无大液泡，D错误。

答案A2.(2015·山东卷，3)下列有关生物学实验的叙述，正确的是()A.叶绿体色素滤液细线浸入层析液，可导致滤纸条上色素带重叠B.低温诱导大蒜根尖时间过短，可能导致难以观察到染色体加倍的细胞C.用显微镜观察洋葱根尖装片时，需保持细胞活性以便观察有丝分裂过程D.将洋葱表皮放入0.3 g/mL蔗糖溶液中，水分交换平衡后制成装片观察质壁分离过程解析色素分离时，若滤液细线浸入层析液，不能分离出各色素带，A错误；低温诱导染色体数目加倍实验中，若诱导大蒜根尖时间过短，染色体数目可能并未加倍，B正确；用显微镜观察洋葱根尖细胞装片时，细胞在解离时已死亡，不可能再继续分裂进程了，C错误；观察植物细胞质壁分离时，先制作装片，再观察细胞质壁分离状况，D错误。

显微镜观察方式比较：1.明场（Brightfield-BF/H）用于常规镜检，观察；病理或染色标本。

优点：1.应用广泛，操作简单；2.视野亮度高，均匀；3.价格相对较低；4.物镜适用于荧光观察。

缺点：1.对比度低（透明或未染色标本）；2.成像没有立体感。

2.相差（Phase Contrast-PH）最常规的活细胞观察方式，用于对无色透明的标本进行观察，尤其适用于培养的活细胞，组织观察。

优点：目前观测活细胞标本最经济，实用的方法。

缺点：1.需要特殊的相差物镜（Ph）；2.需要光强高；3.切片不能太厚；4.操作较麻烦；5.荧光效果不如明场物镜。

物镜上的相位板不同，可以分为正/负相差两种不同的观察效果，负相差多用于生殖医学中精子形态的观察。

（正负相差的区别在于一个背景更黑，一个样品更黑）原理：利用物体不同结构成分之间的折射率和厚度的差别，把通过物体不同部分的光程差转变为振幅（光强度）的差别，经过带有环状光阑的聚光镜和带有相位片的相差物镜实现观测的显微镜。

在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜4个特殊之处：1.环形光阑（annular diaphragm）位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。

2.相位板（annular phaseplate）在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。

分为两种：（1）A+相板：将直射光推迟1/4λ，两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标本结构比周围介质更加变亮，形成亮反差（或称负反差）。

（2）B+相板：将衍射光推迟1/4λ，两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（或称正反差），结构比周围介质更加变暗。

3.合轴调节望远镜：用于调节环状光阑的像与相板共轭面完全吻合。

3.微分干涉（Differential Interference Contrast-DIC）使被检物体产生三维立体浮雕感觉。

用于无色透明标本的形状轮廓、内部结构、运动情况等观测及显微操作等。

显微镜的七种观察方式一．明视野观察（Bright field BF）明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。

二．暗视野观察（Dark field DF）暗视野实际是暗场照明发。

它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。

因此，视场成为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的象。

暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的情况下，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。

若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了体积，为人眼可见。

m..m 暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。

它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。

暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02—0.004三．相差镜检法（Phase contrast PH）在光学显微镜的发展过程中，相差镜检术的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。

我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本.相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。

这大大便利了活体细胞的观察，因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。

相差图片相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。

光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ（波长），如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减下，提高反差。

在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处：1. 环形光阑（annular diaphragm）位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。

显微镜的七种观察方法发布时间：2013-1-7一．明视野观察（Brightfield）明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。

二．暗视野观察（Darkfield）暗视野实际是暗场照明发。

它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。

因此，视场成为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的象。

暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的情况下，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。

若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了体积，为人眼可见。

暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。

它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。

暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02—0.004三．相差镜检法（Phasecontrast）在光学显微镜的发展过程中，相差镜检术的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。

我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本.相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。

这大大便利了活体细胞的观察，因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。

1相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。

光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ（波长），如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减下，提高反差。

在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处：1.环形光阑（annulardiaphragm）位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。

显微镜七种观察方式
一、透射显微镜：
这种显微镜通过高倍透射光学系统将物体表层的透射光照射到放大镜
片上，使物体被放大，从而观察它的微观结构。

此外，可以通过涂抹不同
厚度的染料、加入使用紫外线源、加入高倍镜片、低倍玻璃、把它放进腔
体或把它和它的二维或三维图像连接在一起等方式来改变显微图像的效果。

二、扫描电镜：
它是一种计算机驱动的扫描技术，由一条直线扫描物体的表面，通过
把物体的表面反射光线映射到一个探测器上，从而获得一系列电学信号，
从而计算物体表面的细微结构和形状，以及由此推断物体的性质和状态。

三、后焦透镜：
它是一种原理类似于荧光显微镜的显微技术，使用荧光发射光束去照
亮物体，然后使用镜头聚焦到检测器，检测器将获得的物体图像转变为电
子信号，以方便计算机进一步处理。

四、激光扫描显微镜：
它是一种高精度的实时显微技术，使用激光照射物体表面，然后使用
透镜聚焦到检测器，检测器将获得的物体图像转变为电子信号，以方便计
算机进一步处理。

五、荧光显微镜：
它是一种放大微小物体的显微技术，其基本原理是使用一个荧光检测
器来检测物体上发出的不同波长的荧光。

使用显微镜的7个步骤1安放：显微镜应放在体前偏左，镜筒在前镜臂在后的方向安放好。

2对光：用低倍镜、较大光圈(遮光器上调);眼看目镜，同时调节反光镜;使视野变得明亮。

3放片：观测对象必须正对物镜的孔，将玻片缠不好之后再调焦。

4调焦：先用低倍镜寻找物象，先降镜筒后升高镜筒，降低镜筒时要在侧面观察是否压片，升高镜筒时正对着目镜寻找物象。

把物像移到视野中心，换用高倍镜观察只调节细准焦螺旋，使物象变得清晰。

5观测：两眼睁开，用左眼观测，用右眼画图。

注意事项：1.必须熟练掌握并严格执行采用规程。

2.取送显微镜时一定要一手握住镜臂，另一手托住底座。

显微镜不能倾斜，以免目镜从镜筒上端滑出。

取送显微镜时要轻拿轻放。

1.实验时必须把显微镜放到桌面上，镜座应当距桌沿6～7cm左右，关上底光源控制器。

2.转动转换器，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。

然后用双眼注视目镜内，调整光源强度，把聚光镜上升，把虹彩光圈调至最大，使光线反射到镜简内，这时视野内呈明亮的状态。

3.将所要观测的装片放到载物台上，并使被观测的部分坐落于通光孔的也已中央。

4.先用低倍镜观察(物镜10×、目镜10×)。

观察之前，先转动粗准焦螺旋，使载物台上升，使物镜逐渐接近切片。

需要注意，不能使物镜触及玻片，以防镜头将玻片压碎。

并转动粗准焦螺旋，使载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。

5.如果在视野内看见的物像不合乎实验建议(物像偏移视野)，可以慢慢移动左右移动尺。

移动时应特别注意玻片移动的方向与视野中看见的物像移动的方向刚好恰好相反。

如果物像不甚准确，可以调节细准焦螺旋，直到物像准确年才。

6.如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央(将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小了很多)。

一般具有正常功能的显微镜，低倍物镜和高倍物镜基本齐焦，在用低倍物镜观察清晰时，换高信物镜应该可以见到物像，但物像不一定很清晰，可以转动细准焦螺旋进行调节。